3所示。
[0117] 菌株TR2的gyrA基因序列如序列表中序列4所示。
[0118] 菌株DJ1的gyrA基因序列如序列表中序列5所示。
[0119] 菌株ZT4-2的gyrA基因序列如序列表中序列6所示。
[0120] 菌株TR2的鞭毛蛋白基因序列如序列表中序列7所不。
[0121] 菌株DJ1的鞭毛蛋白基因序列如序列表中序列8所不。
[0122] 菌株ZT4-2的鞭毛蛋白基因序列如序列表中序列9所示。
[0123] 将3株菌株（ZT4-2、DJ1、TR2) 16S rDNA和gyrA基因 PCR产物测序后将所得序列 于NCBI的数据库中进行BLAST分析，比对结果见表2。
[0124] 由表2可知，3株菌株与多个公开发表的芽孢杆菌属细菌的16SrDNA序列相 似度为99%，其中，与菌株TR2、DJ1的16SrDNA序列相似度为99%的种有解淀粉芽 孢杆菌（B. amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌（B. subtilis)、甲基营养型芽孢杆菌 (B. methylotrophicus)，与菌株ZT4-2的16SrDNA序列相似度为99%的种有枯草芽孢杆菌 (B.subtilis)，地衣芽抱杆菌（B.licheniformis)，龙舌兰芽抱杆菌（B.tequilensis)。根 据结果可知，根据16SrDNA序列，不能确定这三个菌株的分类地位，将其初步鉴定为枯草芽 孢杆菌近缘种群菌株。
[0125] 由表2可知，菌株DJ1与解淀粉芽孢杆菌亚种（B. amyloliquefaciens subsp. plantarum)UCMB5036的gyrA基因序列的序列相似度为99% ;菌株TR2与解淀粉芽孢杆菌 (B. amyloliquefaciens) CC178的gyrA基因序列的序列相似度为99% ;菌株ZT4-2与枯草 芽孢杆菌（B. subtil is)株系H1的gyrA基因序列相似度为99%。
[0126] 由表2可知，菌株DJ1与解淀粉芽孢杆菌亚种（B. amyloliquefaciens subsp. plantarum)UCMB5036的鞭毛蛋白基因基因序列的序列相似度为99%;菌株丁1?2与解淀粉芽 抱杆菌亚种（B. amyloliquefaciens subsp. plantarum)NJN_6的鞭毛蛋白基因序列的序列 相似度为99%;菌株ZT4-2与枯草芽抱杆菌亚种（B. subtilis subsp. subtilis)R〇-NN_l的 鞭毛蛋白基因序列相似度为99%。
[0127] 根据三种基因的相似性，将菌株ZT4-2鉴定为枯草芽孢杆菌（B. subtilis)，将菌 株DJ1和TR2鉴定为解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens)。
[0128] 表2 3株芽孢杆菌属细菌分子鉴定
[0130] 注：表中菌株号为与待测菌株基因序列相似性在99%及以上的菌株。
[0131] 菌株ZT4-2,其分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)，保藏于中国普通 微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研 究所），保藏日期2014年10月30日，保藏编号为CGMCC No. 9874。
[0132] 菌株TR2,其分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)，保藏于 中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院 微生物研究所），保藏日期2014年10月30日，保藏编号为CGMCC No. 9875。
[0133] 菌株DJ1，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)，保藏于 中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院 微生物研究所），保藏日期2014年10月30日，保藏编号为CGMCC No. 9876。
[0134] 实施例 2.菌株 ZT4-2 CGMCC No. 9874、DJI CGMCC No. 9876、TR2 CGMCC No. 9875 的抑菌活性测定
[0135] 采用对峙培养法，以11种植物病原真菌（11种植物病原真菌见表3,由北京农学院 植物病理学实验室提供，按照形态学及分子鉴定方法和柯赫氏法则进行鉴定）为靶标菌， 分别测定菌株 ZT4-2 CGMCC No. 9874、DJI CGMCC No. 9876、TR2 CGMCC No. 9875 的拮抗活 性。
[0136] 取PDA平板上扩大培养的真菌菌饼（d = 8mm)接入PDA平板中央，在其四周等距 离处接入细菌，以不接任何细菌的培养为对照（CK)，每处理重复3次，27°C恒温培养7d后， 观察细菌对不同病原真菌生长的抑制情况，并测量抑菌带宽度。
[0137] 表3. 11种植物病原真菌
[0140]通过对峙培养法，分别测得菌株 ZT4-2 CGMCC No. 9874、DJI CGMCC No. 9876、TR2 CGMCC No. 9875对11种植物病原真菌的抑菌活性，测定结果如表4所示。由实验结果可知， 菌株2了4-2 061〇：吣.9874、011061〇：吣.9876、了1?2 061〇：吣.9875 都具有不同程度的 抑菌活性，最大抑菌圈直径可达12. 1mm。菌株ZT4-2 CGMCC No. 9874、DJ1 CGMCC No. 9876、 丁尺2 061\0^1^〇.9875对林栖腐霉菌？71:11；[11111871￥&1:;[0111]1均无抑菌活性，对巴西毛壳菌 (Chaetomium brasiliense)菌落生长的抑菌效果和其他真菌不同，虽有抑菌带产生，但抑 菌圈区域内基质菌丝能够继续生长，菌落塌陷。
[0141] 从抑菌谱来看，菌株 ZT4-2 CGMCC No. 9874、DJI CGMCC No. 9876、TR2 CGMCC No. 9875都有较宽的抑菌谱，DJI CGMCC No. 9876、TR2 CGMCC No. 9875对供试的除林栖腐 霉菌和巴西毛壳菌之外的9种植物病原真菌表现出不同程度的抑菌活性，其中TR2 CGMCC No. 9875为抑菌活性较强的菌株，对9种植物病原菌的抑菌作用与其他菌株相比都有显著 差异。ZT4-2 CGMCC No. 9874的抑菌谱次之，对供试的8种植物病原真菌表现出不同程度的 抑菌活性。
[0142] 表4.对植物病原真菌的抑菌活性的测定结果
[0145] 注：B类指有抑菌圈存在，但真菌菌丝生长仅有塌陷产生，存在继续生长情况；C类 指无明显抑菌圈，菌丝塌陷不明显。表中值为抑菌带平均值土标准偏差，同列数字后面标 有的不同小写字母表示同种菌株对不同植物病原菌抑菌带宽度的差异显著性。
[0146] 以上说明对本发明而言只是说明性的，而非限制性的，本领域普通技术人员理解， 在不脱离所附权利要求所限定的精神和范围的情况下，可做出许多修改、变化或等效，但都 将落入本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一株解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.9875〇2. 根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌具有针 对植物病原真菌的抑菌活性。3. 根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述植物病原真菌为立枯丝 核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡 萄座腔菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。4. 解淀粉芽孢杆菌在制备针对植物病原真菌的生防菌剂或微生物菌肥中的应用，其特 征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo. 9875。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰 刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔菌、茄 病镰孢菌、芸薹链格孢菌。6. -种针对植物病原真菌的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂的活性成分为解淀 粉芽孢杆菌CGMCCNo. 9875。7. 根据权利要求6所述的生防菌剂，其特征在于，所述植物病原真菌为立枯丝核菌、 尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔 菌、前病镰孢菌、芸薹链格孢菌。8. -种针对植物土传病害的微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥的活性成分为 解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo. 9875。9. 根据权利要求8所述的微生物菌肥，其特征在于，导致所述植物土传病害的植物病 原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、富克葡萄孢盘菌、茄病镰孢 菌、芸薹链格孢菌。
【专利摘要】本发明提供了一株生防用解淀粉芽孢杆菌及其应用。本发明的解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC？No.9875。本发明的解淀粉芽孢杆菌可用于制备针对植物病原真菌的生防菌剂和微生物菌肥。本发明的解淀粉芽孢杆菌具有对植物病原真菌的抑菌活性并且具有较宽的抑菌谱。CGMCC No.987520141030
【IPC分类】A01N63/00, A01P3/00, C12R1/07, C12N1/20, C05F11/08
【公开号】CN105316265
【申请号】CN201510887410
【发明人】赵晓燕, 魏艳敏, 刘兴华, 刘正坪, 尚巧霞
【申请人】北京农学院
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2015年12月4日