6-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-N2-(2-(三氟甲基）吡啶-4-基)-1,3,5-三 嗪-2，4-二胺(化合物378)的制备
[0260]
冋謝3的THm〇%，15ml)中加人4-鼠-6-(6-(三m甲基）啦啶-2-基）-N-(2_(三氟 甲基）吡啶-4-基)-1，3,5_三嗪-2-胺(2.(^，4.76111111〇1)，同时形成沉淀。在另搅拌2小时后， 固体经过滤，干燥，得到所需产物1 · 6g (收率:82 % )。MW(402 · 2，M+1)。4 NMR(400MHz，MeOH- d)5：8.71(d ,J = 7.8Hz,lH),8.52(d ,J = 5.1Hz,lH) ,8.38(br.s. , 1H), 8.24(t ,J = 7.5Hz , lH),8.18(br.s. ,lH),8.01(d,J = 7.8Hz,lH)〇
[0262] 实施例A.酶和细胞测定法。
[0263] 酶测定法。通过辅因子耗尽测定法，针对IDH2R172K抑制活性对化合物进行测定。 将化合物与酶一起预温育，然后通过加入NADPH和α-KG开始反应，允许在之前证实的相对于 辅因子和底物消耗两者时间为线性的条件下进行60分钟。通过加入第二种酶即心肌黄酶和 相应的底物即刃天青终止反应。心肌黄酶将刃天青还原为高荧光的试卤灵，同时NADPH氧化 成NADP，两者通过耗尽可用的辅因子库终止IDH2反应，并且在通过易检测荧光团定量产生 一定时间后促进剩余辅因子的量的测定。
[0264] 具体地说，向384孔板的12孔每个中加入ΙμL ΙΟΟχ化合物稀释系列，接着加入40μ1 含有 1.25μg/ml IDH2R172K的缓冲液（50mM磷酸钾（K2HP〇4)，pH 7.5;150mM NaCl、10mM MgCl2、10 %甘油、0.05 %牛血清白蛋白、2mMi3-巯基乙醇）。然后使试验化合物在室温下与酶 一起温育1小时之后，在上述缓冲液中加入1〇μ1含有50μΜ NADPH和6.3mMa-KG的底物混合物 开始IDH2反应。在室温下再1小时后，终止反应，并通过加入25μ1终止混合物(36μg/ml心肌 黄酶和60μΜ刃天青;缓冲液中），通过刃天青转化成试卤灵，测量剩余的NADPH。在1分钟温育 后，将板在读板仪中以Ex544/Em590读数。
[0265] 为了在与上述类似的测定方式中测量化合物针对IDH2 R140Q的抑制效能，进行了 类似的程序，不同的是最终的测试浓度为〇.25μg/ml IDH2 R140Q蛋白、4μΜ NADPH和1.6mM a-KG，且预温育时间为1小时或16小时。
[0266] 为了以高通量筛选方式测量化合物针对IDH2 R140Q的抑制效能，进行了类似程 序，不同的是在预温育步骤中使用〇.25μg/ml IDH2 R140Q蛋白，并且通过加入4μΜ NADPH和 8yMa-KG开始反应。
[0267] 基于U87MG pLVX-IDH2R140Q-neo细胞的测定法。使U87MG pLVX-IDH2R140Q-neo细 胞在125培养瓶在含有10%FBS、lx青霉素/链霉素和500yg/mL G418的DMEM中生长。通过胰 蛋白酶收获细胞，以5000细胞个/孔的密度按1 OOyl /孔接种在96孔白底板中的含10 % FBS的 DMEM中。不将细胞接种在1和12列中。使细胞在37°C、5%C02下温育过夜。次日以2χ浓度配制 化合物，将l〇〇ul加入各细胞孔中。DMS0的终浓度为0.2%，将DMS0对照孔加入G排。然后将板 置于培养箱中48小时。48小时时，从各孔中取出100ul培养基，通过LC-MS分析2-HG浓度。将 细胞板放回培养箱中再持续24小时。在加入化合物后72小时，使10mL/板的Promega Cell Titer Glo试剂融化并混合。从培养箱中取出细胞板，允许平衡至室温。然后将100ul试剂加 入各孔的培养基中。然后将细胞板置于定轨摇床中10分钟，然后允许在室温下静置20分钟。 然后以500ms的积分时间针对发光读板测定化合物对生长抑制的作用。
[0268] 如前所述或与之类似，在R140Q酶测定法（16小时预温育时间）和基于R140Q细胞的 测定法中测试了代表性化合物378,两种测定法中的IC50小于50nM。
[0269] 在此已描述了若干实施方案的若干方面，要认识到本领域技术人员可容易地想到 不同的改变、修改和改进。所述改变、修改和改进欲成为本公开内容的一部分，并且预期在 本发明的精神和范围内。因此，前面的描述和附图仅仅通过实例说明。
【主权项】
1. 具有下式I的化合物或其药学上可接受的盐或水合物：其中： 环A为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中： a. 环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基； b. 当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代的苯 基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(0H)CH 3、C1、Br、SH和CF3; c. 当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯基:F、 C1、S02CH 3、C(0)0CH3、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、0-苯基、CF3、0H和NO 2; d. 当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基； e. 化合物不是： (I )N2-2-吡啶基-6-(3-吡啶基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (2) 6- (6-甲氧基-3-吡啶基)-N2- (4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (3) 6- (2-甲氧基-3-吡啶基)-N2- (4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (4) N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3,5_ 三嗪-2,4-二胺； (5) 3-[[4-[4_氨基-6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1-丙 醇； (6) N-[3-[ [4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基)-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯基]_ N'-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲； (7) N4，N4'_二苯基 _[2,2'_二-1，3,5-三嗪]-4,4'，6,6'-四胺； (8) 6,6'-(2,6-吡啶二基)双[^苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或 (9) 6,6'-(2,3-吡嗪二基)双[^苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺。2. 权利要求1的化合物，其中环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、 吡嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-C 1-C4烷基、_ Ci_C4卤代烷基、-Ci-C4羟基烷基、-NH -S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、_S (0) 2NH(Ci-C4烷基）、_CN、-S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、Ci-C4烷氧基、-NH(Ci-C4烷基）、 _0H、-CN和-順2 〇3. 权利要求1的化合物，其中环B选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、 嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，其中环B被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-C 1-C4 烷基、_C2_C4炔基、_Cl-C4[ii代烷基、 -Cl-C4羟基烷基、C3_C6环烷基、_ ( C〇-C2亚烷基)_0_Cl-C4 烷基、 _〇_ (Ci-C4亚烷基）_C3_C6环烷基、-NH -S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、_S (0) 2NH(Ci-C4烷基）、_S (0)2_NH-(C3 _C6环烷基）、_S(0)2_(饱和杂环基）、_CN、 -S(0) 2_(Ci-C4烷基）、_NH(Ci-C4烧 基）、-N(C 1-C4烷基)2、-OH、C(0) -ο-(C1-C4烷基）、饱和杂环基和-NH2。4. 具有结构式II的化合物或其药学上可接受的盐：其中： 环A '选自苯基和吡啶-2-基，其中环A '被一个或两个独立选自以下的取代基任选取代： 氯、氟、-CF3、-CHF2、-CH3、-CH2CH 3、-CF2CH3、-OH、-OCH3、-OCH 2CH3、-NH2、-NH (CH3)和 _N( CH3) 2; 环B '选自吡啶-3-基、吡啶-4-基、异噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻唑-5-基、嘧啶-5-基和 吡唑-4-基，其中环B '被1 -2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素;-CN; -OH;被卤素、CN 或-OH 任选取代的 C1-C4 烷基;-S (0) 2-&-C4 烷基；-S (0) -C1-C4 烷基；-S (0) 2-NH-&-C4 烷基;-S (0)2-Ν(&-〇4 烷基)2; -S(O)2-氮杂环丁烷-1-基;-O-C1-C4 烷基;-CH2-O-CH3;吗啉-4-基;环丙 基;-S (0) 2-ΝΗ-环丙基;-C (0) -O-CH3;和 -C(Rla) (R2a) (R3a)选自被卤素或-OH任选取代的C1-C6烷基;-(Co-C 1亚烷基)-环烷基，其 中亚烷基被甲基任选取代，环烷基被以下任选取代：卤素、-OCH3或甲基;被卤素或甲基任选 取代的饱和杂环基; _C( 0) -〇-Ci_C6烷基;-C (0) - ( Cq-Ci亚烷基)-环丙基和C (0)-苄基。5. 权利要求4的化合物，其中环A '选自2-氯苯基、2-氟苯基、2-甲氧基苯基、3-羟基苯 基、6_氛基啦啶_2_基、6_氣啦啶_2_基、6_二氣甲基啦啶_2_基和苯基。6. 权利要求4的化合物，其中环B'选自2-(吗啉-4-基）吡啶-4-基、2-二甲基氨基吡啶-4_基、3_ (2_甲氧基乙基)苯基、3，5_二氣苯基、3_氣苯基、3_氛基甲基苯基、3_氛基苯基、3_ 环丙基氨基磺酰基苯基、3-二甲基氨基磺酰基苯基、3-乙基磺酰基苯基、3-氟苯基、3-甲基 横酰基苯基、4-氣苯基、5-氯啦啶_3_基、5-氛基啦啶_3_基、5-氛基啦啶_3_基、5-氛基P比啶-4-基、5-氟吡啶-3-基、5-三氟甲基吡啶-3-基、6-氯吡啶-4-基、6-氰基吡啶-4-基、6-环丙基 吡啶-4-基、6-乙氧基吡啶-4-基、6-氟吡啶-3-基、6-氟吡啶-4-基、6-甲基吡啶-4-基、6-三 氟甲基吡啶-4-基、异噁唑-4-基、苯基、吡啶-4-基和噻唑-5-基。7. 药物组合物，其包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。8. 权利要求7的组合物，其还包含用于治疗癌症的第二治疗剂。9. 治疗特征在于存在IDH2突变的癌症的方法，其中所述IDH2突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力，所述方法包括将权利要求7 的组合物给予有需要的患者的步骤。10. 权利要求9的方法，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q或R172K突变。11. 权利要求10的方法，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q突变。12. 权利要求9的方法，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤(或神经胶质瘤）、骨髓增生异 常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非小细胞肺 癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。13. 权利要求9的方法，所述方法还包括将可用于治疗癌症的第二治疗剂给予有需要的 患者。14. 权利要求7的组合物在治疗特征在于存在IDH2突变的癌症中的用途，其中所述IDH2 突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力。15. 权利要求14的用途的组合物，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q或R172K突变。16. 权利要求15的用途的组合物，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q突变。17. 权利要求14的用途的组合物，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤(或神经胶质瘤）、骨 髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非 小细胞肺癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。18. 权利要求14的用途的组合物，所述组合物还包含用于治疗癌症的第二治疗剂。
【专利摘要】提供式(I)的化合物，其中：环A和环B各自独立地为任选取代的5-6元单环芳基或杂芳基。所述化合物是可用于治疗癌症的异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)突变体的抑制剂。
【IPC分类】C07D403/04, C07D403/12, C07D401/14, C07D251/18, C07D413/12, A61P35/00, A61K31/53, C07D417/14, C07D401/12, C07D417/12, C07D401/04
【公开号】CN105492435
【申请号】CN201480047026
【发明人】J·特维斯, 卢克·乌特里
【申请人】安吉奥斯医药品有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月10日
【公告号】CA2917592A1, EP3019490A1, US20160158241, WO2015006592A1