酸苯酯(化合物6)，溶解于100mL正丁醇，加三氟乙酸O.OlmL，置 于250mL圆底烧瓶中，75°C油浴搅拌1.5小时。冰浴冷却至室温，滴加碳酸钠溶液调整pH到9， 反应液用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗3次。分出有机层在250mL三 角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析得到3.5g(产率 51%)化合物7,为棕色粉末。
[0048] 实施例8制备4-{4-[ (7-甲氧基)-6-(2-吡咯烷-1-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基 苯基氨基甲基苯酚(化合物8，即LU1507)。
[0049] 将l.lg 4-{4-[(7_甲氧基)-6-(2-吡咯烷-1-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基 氨基甲基乙酸苯酯(化合物7)，溶解于30mL四氢咲喃，加15mL氨水，置于100mL圆底烧瓶中， 室温搅拌过夜，反应液加30mL水稀释，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液 洗4次。分出有机层在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩 至干，经柱层析得到0.8051g(产率80%)化合物8,为浅绿色粉末。
[0050] 对制备的化合物8进行ESI-MS^H-NMR标准，结果如下：
[0051 ] ESI -MS (m/z): 486 [M+H] VH-匪R( 300MHz，DMS〇-d6，ppm): δ9 · 25 (s，1H)，9 · 20 (s， 1H)，8·30(s，1H)，7.79(s，1H)，7.31-7.28(d，J = 8.7Hz，2H)，7.19-7.16(d，J = 8.7Hz，2H)， 7.12(s，lH)，6.72-6.70(d，J = 8.4Hz，2H)，6.61-6.58(d，J = 8.7Hz，2H)，6.04-6.01(t，J = 5.4Hz，lH)，4.22-4.18(t，J = 5.7Hz，2H)，4.15-4.13(d，J = 5.7Hz，2H)，3.90(s，3H)，2.91-2.88(t，J = 5.7Hz，2H)，2.57(m，4H)，1.70(m，4H)。
[0052]实验例9化合物8抗肿瘤细胞增殖活性评价。
[0053] (1)受试样品：
[0054]本发明的化合物8均用含0.1%DMS0的培养基配制成所需浓度。
[0055] (2)细胞株：
[0056] MCF-7 (人乳腺癌细胞，ATCC: HTB-22)、SK-BR-3 (人乳腺癌细胞，ATCC: HTB-30)、 A549(人非小细胞肺癌细胞，ATCC: CRM-CCL-185)、HCT 116(人结肠癌细胞，ATCC: CCL-247)、 1]-871?；(人脑星形胶质母细胞瘤41'(：(：:册8-14)、4172(人胶质母细胞瘤细胞41'(：(： :0^-1620)6株肿瘤细胞均购自美国标准菌种收藏所(ATCC)。
[0057] (3)主要仪器及材料
[0058] 超纯水仪:MILLIPORE Direct-Q 3;
[0059] 高压灭菌锅:HVE-50，Hirayama公司；
[0060] 数显恒温水浴锅:HH-4,国华电器有限公司；
[0061 ]超净台:VS-1300-U洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；
[0062] 细胞孵育箱:HF151UVC02培养箱，上海力申公司；
[0063]低温离心机:上海安亭科学仪器厂
[0064]酶标仪:ELx800，Biotek 公司
[0065]平板振荡器:ZD-9556，太仓市科教器材厂；
[0066] 96孔细胞培养板、25cm2培养瓶:Corning Costar公司；
[0067] 2mL冻存管：Corning Costar公司；
[0068] (4)主要试剂
[0069] RPMI-1640培养基:Gibco 公司；
[0070] DMEM 培养基:Gibco公司；
[0071] McCoy's 5A培养基:Gibco公司；
[0072] MEM 培养基:Gibco公司；
[0073] PBS 缓冲液:Gibco 公司；
[0074] 胎牛血清:Gibco公司；
[0075] 0.25% 胰酶溶液:Hyclone 公司；
[0076] MTT(四噻唑蓝）：Sigma公司，溶于roS溶液中，制成5mg/mL的溶液，过滤除菌后使 用，避光保存；
[0077]阿霉素(ADR):北京华丰联合技术有限公司。
[0078] DMS0:二甲基亚柄，Sigma 公司；
[0079] (5)试验方法
[0080] MCF-7、A172细胞选用DMEM培养基，U-87MG细胞选用MEM培养基、HCT 116细胞选用 McCoy ' s 5A培养基，其他细胞选用RPMI-1640培养基。培养基中均含10%灭火的胎牛血清和 80U · ml/1青霉素和0.08mg · ml/1链霉素。
[0081 ] 将生长状态良好、处于对数生长期的MCF-7、SK-BR-3、A549、HCT 116、U-87MG、A172 细胞按1\104个>1^的密度接种于96孔板，每孔10(^1。置于37°(3、5%〇)2培养箱中培养12小 时待贴壁。加药细胞孔按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的溶于培养基的化合物8， 每孔200μ1，空白细胞孔加入等体积的培养基，对照细胞孔按预设的浓度梯度加入等体积溶 于培养基的阿霉素(ADR)，平行6孔。在37°C、5%⑶2培养箱中培养48小时后，每孔加入ΙΟμΙ 浓度为5mg/mL的ΜΤΤ溶液，继续置于37°C、5 %⑶2培养箱中培养4小时。小心吸出上清液，每 孔加入150μ1 DMSO溶解紫色残留物（甲瓒），平板振荡10分钟使沉淀全部溶解，于酶标仪上 测定O.D.值(吸光度），波长570nm〇
[0082] 按照公式"相对生存率=(0含药-0空白）/(0对照_0空白）\100%"计算每一个样 品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率。
[0083] 实验平行重复3次，以抑制率对化合物浓度作图，计算本发明化合物8的IC5〇(半数 有效抑制浓度)值。同时采用阿霉素(ADR)作为阳性对照药物。
[0084] (6)实验结果
[0085] 表1化合物8LU1507抗肿瘤细胞增殖活性（IC5〇土SDyM)
[0087]如表1所示，给出了化合物8抗肿瘤细胞增殖活性的测试结果，结果表明所制备的 新型喹唑啉衍生物对上述肿瘤细胞具有抑制作用，可用于制备抗肿瘤制剂。
【主权项】
1. 一种新型喹唑啉衍生物LU1507,其化学命名为4-{4-[(7-甲氧基)-6-(2-吡咯烷-1-基)羟乙基]喹唑啉_4_基}氨基苯基氨基甲基苯酚，及该化合物的药学上可接受的盐、溶剂 化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物。2. 权利要求1所述的新型喹唑啉衍生物LU1507的制备方法，其特征在于，包括如下步 骤： S1:在氮气保护下，向SOC12中缓慢滴加 DMF催化，然后加入7-甲氧基-4-氧-3，4-二氢喹 唑啉-6-基乙酸酯，60~100°C加热3~6小时，反应生成化合物（1)，即4-氯-7-甲氧基喹唑 啉-6-基乙酸酯； S2:将化合物（1)在冰浴下边搅拌边缓慢滴加氨甲醇溶液，反应液在10°C以下，边搅拌 边反应30分钟以上，过滤，滤渣用乙醚洗涤，得到还原产物化合物（2)，即4-氯-7-甲氧基喹 唑啉-6-醇； S3:在氮气保护下，将化合物(2)与N-(2-羟乙基)啦咯烷、PPh3溶解于四氢呋喃，在冰浴 下边搅拌边分批加入DTAD，反应6小时以上，生成化合物(3)，即4-氯-7-甲氧基-6-[(2-吡咯 烷-1-基)羟乙基]喹唑啉； S4:氮气保护下，将4-羟甲基苯酚和三乙胺用乙酸乙酯溶解，0~10°C缓慢滴加乙酰氯， 搅拌反应4~12小时，生成化合物(4)，即4-羟甲基乙酸苯酯； S5:在氮气保护下，将化合物(4)溶于乙醚，加入四溴化碳，在冰浴条件下分批加入Ph3P， 搅拌反应4~12小时，生成化合物(5)，即4-溴甲基乙酸苯酯； S6:将化合物(5)、苯-1，4-二胺、碳酸钾溶于四氢呋喃，20~100°C搅拌反应1~6小时， 生成化合物(6)，即4-[ (4-氨基苯基)氨基]甲基乙酸苯酯； S7:将化合物(6)与化合物（3)溶于正丁醇，加三氟乙酸，在60~100°C搅拌反应1~6小 时，生成化合物(7)，即4-{4-[ (7-甲氧基)-6-(2-吡咯烷-1-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基 苯基氨基甲基乙酸苯酯； S8:将化合物(7)溶于四氢呋喃，加氨水，25~60°C下搅拌1~12小时，生成化合物(8)， 艮口4-{4-[ (7-甲氧基)-6-(2-吡咯烷-1-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚。3. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 0 7的制备方法，其特征在于，步骤S1 中，DMF的滴速为2~31111/1^11，30(：12、01^、7-甲氧基-4-氧-3,4-二氢喹唑啉-6-基乙酸酯的 用量比为500~1000mL: 10~20mL: 100~150g;步骤S2中，所述氨甲醇溶液的浓度为7M，氨甲 醇溶液的滴速为3~10ml/min，氨甲醇溶液的用量为每克化合物（1)加入10~20ml。4. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 0 7的制备方法，其特征在于，步骤S 3 中，所述的DTAD分3~6批加入，间隔2~4小时/次，其中，N-(2-羟乙基）吡咯烷、PPh3、DTAD、 化合物(2)的摩尔用量比为1:1:1:0.8~1.4。5. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 0 7的制备方法，其特征在于，步骤S 4 中，4-羟甲基苯酚、三乙胺、乙酰氯的用量比为10~20g:10~20mL:5~10g。6. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 0 7的制备方法，其特征在于，步骤S 5 中，所述的Ph3P分3~6批加入，间隔5~10分钟/次，其中，化合物(4)、四溴化碳与Ph 3P的摩尔 用量比为0.6~1.2:1:1。7. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 0 7的制备方法，其特征在于，步骤S 6 中，化合物(5)、苯-1，4-二胺与碳酸钾的摩尔用量比为0.5~1.5:1:1。8. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 Ο 7的制备方法，其特征在于，步骤S 7 中，化合物(6)、化合物(3)、三氟乙酸的摩尔用量比为1:1:0.01~0.2。9. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L U15 0 7的制备方法，其特征在于，步骤S 8 中，所述的氨水用量为每1 g化合物(7)加氨水5~20mL。10. -种药物组合物，包括上述权利要求1中所述的化合物和药学上可接受的载体。11. 权利要求1所述的化合物，或者权利要求10所述的药物组合物在制备药剂中的用 途。12. 权利要求1所述的新型喹唑啉衍生物LU1507或者该化合物的药学上可接受的盐、溶 剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物在制备抗肿瘤剂中的应 用。13. 权利要求1所述的新型喹唑啉衍生物LU1507或者该化合物的药学上可接受的盐、溶 剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物与一种或多种抗癌药剂 结合在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种新型喹唑啉衍生物LU1507及其制备方法，其化学命名为4-{4-[(7-甲氧基)-6-(2-吡咯烷-1-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚。本发明的喹唑啉衍生物及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物对MCF-7、SK-BR-3、A549、HCT？116、A172、U-87？MG具有优秀的抗肿瘤体内外活性，在制备抗肿瘤药物上具有较好的应用前景。
【IPC分类】A61P35/00, C07D239/94
【公开号】CN105503747
【申请号】CN201510874671
【发明人】卢光明, 张卓立, 潘璟
【申请人】中国人民解放军南京军区南京总医院
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月3日