层琼脂培养基中，迅速充分混匀并倾倒到添加含有终浓度为20 μ g/mL四环素、100 μ g/mL氨苄青霉素和10 μΜ C4-AHL、1.5wt.%琼脂粉的IPTG/X-gal LB下层琼脂培养基平板上;等待上层琼脂充分凝固后，倒置放入37 °e培养箱中静置培养12-16 h;
(3)利用化学发光成像技术，将过夜平板分别在可见光、白光和生物发光光源下拍照比对，分析比较存在差异的噬菌斑个体；
(4)选取在可见光中呈蓝色，白光中可见而在生物发光中不发光或者明显变暗的克隆以及对照，培养在添加有LB液体培养基中，37 °e、250 rpm振荡过夜;然后在添加有20 pg/mL四环素、100 μ g/mL氨苄青霉素和10 μΜ C4-AHL的IPTG/X-gal LB固体培养基上划线，37 °e培养箱中静置培养12-16 h，进行进一步验证;最后，将目的菌斑失活后，测序获得目标物。
[0012]所述的IPTG/X-galLB下层琼脂培养基或IPTG/X-gal LB固体培养基配方为:将1.25 g IPTGU g X-gal溶于25 mL二甲基甲酰胺的母液按0.1 %添加至已融化的含有1.5wt.%琼脂粉的LB培养基中。
[0013]所述的上层琼脂培养基为LB培养基中添加0.7wt.%琼脂粉，LB培养基为5 g酵母粉，10 g蛋白胨，10 g 氯化钠，pH =7.4-7.6,1000 mL。
[0014]本发明的优点在于:本发明中使用的方法在原理上与现有筛选QSI的策略几乎完全不同，首先它利用随机文库筛选获得特异性多肽序列，在实验室中就可以获得结果，不需要从自然界的众多生物中去筛选，这样就省去了选材盲目、样品处理步骤繁琐、结果无法预知、最终抑制物的结构和性质很难分离鉴定等问题;其次，和目前仅有的利用噬菌体抗体文库筛选群体感应抑制多肽的方法相比，也有很大的不同。目前的文库筛选方法，是先用QS分子化学修饰生成半抗原，然后免疫动物并构建特异性抗体噬菌体文库，最后进行传统的生物淘洗方法寻找特异性抗体。该方法需要复杂的化学结构背景，半抗原的构建还取决于QS分子自身的化学结构。而本发明适用于任何已知道基因调控背景的A1-1类型QS元件。同时，以往方法共有的问题是，步骤繁琐，耗时长，需找一个QSI至少需要花费I个月至半年以上的时间。本发明步骤简单，只需要3天至一周左右的时间，就可以获得多个QSI候选多肽，因此具有非常明显的优势。
【附图说明】
[0015]图1.本专利中筛选细菌群体感应抑制剂(QSI)多肽的原理示意图。
[0016]图2.本专利中筛选细菌群体感应抑制剂(QSI)多肽的试验流程图。
[0017]图3.以C4-AHL QSI分子筛选为例，图示筛选结果。(A)和(B) C7C噬菌体肽表达文库与携带PSB536的ER2738侵染后在自然光(A)、白光(B)和生物发光(C)下差异比较，筛选到的命名为YlO的感染噬菌体的细菌在添加QS分子培养皿中，在自然光下正常生长，但在激发光下不发生物焚光。
[0018]图4.所筛选噬菌斑的进一步验证。非特异性对照噬菌斑Y60和筛选的特异性噬菌斑YlO接菌过夜后，在添加相应抗生素、IPTG和C4-AHL分子的固体培养基中划线，37°C孵育过夜后，在白光(A)和生物发光(B)照射下的变化情况。序号1-4分别是携带pSB536质粒的大肠杆菌JM109、携带pSB536质粒的大肠杆菌ER2738、携带pSB536质粒的大肠杆菌ER2738被选择的特异噬菌体(编号为Y10)感染、携带pSB536质粒的大肠杆菌ER2738被非特异噬菌体(编号为Y60)感染后的生长情况。
【具体实施方式】
[0019]具体方法包括如下:
pSB536质粒由诺丁汉大学Matthew Fletcher教授馈赠而来并于本实验室保存，热激转化于大肠杆菌ER2738感受态细胞中，验证后保存并命名为ER536。
[0020](I)将QS分子C4-AHL感应质粒pSB536转导入大肠杆菌ER2738菌株，获得ER536菌株，从划线平板中挑取该单菌落并接种到到5 ml添加有20 yg/mL四环素和100 pg/mL氨苄青霉素的LB培养基中，37 0C,250 rpm振荡过夜，以2 %接种量转接到LB培养基中，然后在200 rpm条件下振荡至对数生长中期并以1:10000稀释于液体LB培养基中待用；
(2)将噬菌体肽库放置冰上化冻，取10nL稀释到990 HL无菌水中，再分别将步骤⑴中待用的200 UL菌液与10 UL噬菌体肽库轻轻混匀，在室温条件下孵育2-5 min;吸取上述所有预混液加入3 mL、45 °C温浴已融化的含有0.7 wt.%琼脂粉的上层琼脂培养基中，迅速充分混匀并倾倒到添加含有终浓度为20 μ g/mL四环素、100 μ g/mL氨苄青霉素和10 μΜ C4-AHL、1.5wt.%琼脂粉的IPTG/X-gal LB下层琼脂培养基平板上;等待上层琼脂充分凝固后，倒置放入37 °e培养箱中静置培养12-16 h;
(3)利用化学发光成像技术，将过夜平板分别在可见光、白光和生物发光光源下拍照比对，分析比较存在差异的噬菌斑个体；
(4)选取在可见光中呈蓝色，白光中可见而在生物发光中不发光或者明显变暗的克隆以及对照，培养在添加有LB液体培养基中，37 °e、250 rpm振荡过夜;然后在添加有20 pg/mL四环素、100 μ g/mL氨苄青霉素和10 μΜ C4-AHL的IPTG/X-gal LB固体培养基上划线，37 °e培养箱中静置培养12-16 h，进行进一步验证;最后，将目的菌斑失活后，测序获得目标物。
[0021 ]所述的IPTG/X-gal LB下层琼脂培养基或IPTG/X-gal LB固体培养基配方为:将
1.25g IPTGU g X-gal溶于25 mL二甲基甲酰胺的母液按0.1 %添加至已融化的含有1.5wt.%琼脂粉的LB培养基中。
[0022]所述的上层琼脂培养基为LB培养基中添加0.7wt.%琼脂粉，LB培养基为5 g酵母粉，10 g蛋白胨，10 g 氯化钠，pH =7.4-7.6,1000 mL。
[0023]实施例1
1.材料方法
实验材料 Quorum Sensing 检测质粒pSB536和E.coli JMl09(SIMON SWIFT et，1997)宿主菌为本实验室保存，ER2738宿主菌、噬菌体环7肽库Ph.D.-C7C?Phage DisplayPeptide Library Kit购自美国New England B1labs纽英伦生物技术有限公司；抗生素四环素、氨苄青霉素购于Sigma公司，其他的相关试剂及培养基分别购于中国国药集团化学有限公司与英国OXOID公司。引物合成和序列测定由上海立菲生物技术有限公司完成;C4-AHL分子购自Cayman公司，货号 10007898，N-butyryl-L-Homoserine lactone,50 mg。
[0024]IPTG/X-gal下层琼脂LB培养基或IPTG/X-gal LB固体培养基制备方法为:称取
1.25g IPTGa g x-gal溶于25 mL二甲基甲酰胺为母液，然后用时按体积分数为0.1 %添加到LB培养基中；所述LB培养基:5 g酵母粉，10 g蛋白胨，10 g氯化钠，pH=7.5 ,1000 mL。
[0025]实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0026]实验步骤
(1)首先，将实验室所保存的含有PSB536质粒菌株利用碱裂解法提取该质粒，经琼脂糖凝胶电泳以及核酸浓度、纯度检测后保存于-20 °C备用