(m),824(m),787(s),727(w),681(s),642(w),615(w), 530(m).^H NMR(400MHz,DMS0,25°C,TMS,ppm)：5l2.10(s,2H),8.89(s,2H),7.68(s,2H), 7.55(t，J = 細z，2H)，7.50(s，2H)，7.43(t，J = 細z，4H)，7.07(d，J = 4Hz，2H)，6.90(dd，J = 8,8监2H)，6.82(d，J = 細z，2H)，3.79(s，4H)，2.41(s，3H).l3CNMR(100MHz，CDCl3):S 186.46，163.90，153.05，149.67，149.03，135.85，1：M.35，134.23，129.79，128.30，123.19， 122.35,121.35,119.30,117.23,116.85,56.28,45.25.Elemental analysis(%) caled.for C34H29N3O己：C 72.97，H5.22，N 7.51;Found:C 72.95，H 5.20，N 7.50.
[0034] 实施例5
[0035] N-甲基-3,5-二(3-(2,3,4-S径基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-赃晚酬(D)
[0036] 将O.OOlmol N-甲基-3,5-二（3-氨基苯亚甲基）-4-赃晚酬和0.004mol 2,3,4-S 径基苯甲醒溶于35mL异丙醇中，滴加2滴甲酸，常溫揽拌反应化，通过薄层色谱法(TLC)分析 确定反应终点。沉淀抽滤，用异丙醇洗涂，真空干燥得红色粉末N-甲基-3,5-二(3-(2,3,4-S径基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-赃晚酬(D)0.3576g，产率64%。
[0037] IR(CHfi):3061(br)，1613(m)，1578(m)，1516(w)，1452(w)，1276(w)，1207(m)，1169 (m),1082(m),1057(w),979(m),935(w),875(w),771(w),681(w),606(w),592(w),573(m), 564(m)，553(m)，538(w)，532(w).iHMffi(400MHz，DMS0,25°C，TMS，wm):SSl3.47(s，2H), 9.79(s，2H)，8.83(s，2H)，8.54(s，2H)，7.68(s，2H)，7.54(t，J = Wz，2H)，7.48(s，2H), 7.45-7.35(m，4H)，6.98(d，J = 細z，2H)，6.46(d，J = 細z，2H)，3.82(s，4H)，2.43(s，3H).l3c 醒R(100MHz，CDCl3) :193.04,163.97,151.30,150.54,148.33,135.81,132.39,129.83， 127.83,124.26,123.04,121.98,112.33,107.89,56.17,45.14.Elemental analysis(%) caled.for C34H29N307:C69.03，H 4.94，N 7.10;Found:C 69.00，H 4.95，N 7.12.
[0038] 抗肿瘤活性评价
[0039] 本发明的3,5-二(3-(2-?苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物的抗肿瘤活 性评价。
[0040] 本发明中抗肿瘤活性评价采用MTT法。
[0041] 本发明中共使用5种细胞系，分别是人正常肝细胞细胞系L02、人宫颈癌细胞系 Hela、人肝癌细胞系化pG2、人白血病细胞系K562和人单核粒细胞白血病细胞系THP-1，一个 正常细胞系四个肿瘤细胞系，全部来自于中国协和医科大学。细胞用10 %胎牛血清的RPMI-1640培养液在37 °C、5 % C〇2、饱和湿度的培养箱中培养。
[0042] 取对数生长期的细胞配制成4X IO4个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔 加20化L，培养24小时后加入20化不同浓度的合成化合物，继续培养24小时后，向每孔加入 20化的MTT试剂，37 °C解育4小时后，弃上清液，每孔加15化L DMSO，振荡IOmin充分溶解结 晶，用酶标仪测定在570nm处的吸光度，计算ICsQ。所用化合物的浓度分别是lOjig/mL、化g/ mL、扣g/血、3]ig/mL、化g/mL、1.5]ig/mL、：Liig/血、0.5]ig/mL、0. lug/mL，用阿霉素（DOX)做阳性 对照，所用的浓度分别是祉 g/mL、化g/mL、扣g/mL、3iig/mL、1.5iig/mL、化g/mL、0.祉g/mL、0.5 yg/mL、0.化g/mL，每个浓度设6个复孔。
[0043] 表1 .A、B、C、D四个药物的半数抑制浓度ICso
[0044]
[004
[0046] 从表中可W看出A、B、C、D四个化合物对4个肿瘤细胞系的ICso值均低于扣M，且对正 常细胞的毒性较肿瘤细胞小，特别是D的抗肿瘤活性较好。
[0047] 参考文献：
[004引[1 ]Pati H N,Das U, Sakagami H, et al. 1,3-diaryl-2-p;ropenones and 2-benzylidene-1,3-indandiones:a quest for compounds displaying greater toxicity to neoplasms than normal cells.[J].Archiv Der Pharmazie,2010,343(9):535-541.
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【主权项】
1. 具有抗肿瘤活性的N-甲基-3，5_二（3-(2-羟基苯亚甲基氨基）苯亚甲基)-4-哌啶酮 衍生物，分别命名为N-甲基-3,5-二(3-(2,3_二羟基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-哌啶酮A、 N-甲基-3,5-二(3-(2,4-二羟基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-哌啶酮B、N-甲基-3,5-二(3-(2，5_二羟基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-哌啶酮C和N-甲基-3,5-二(3-(2,3，4_三羟基苯 亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-哌啶酮D;特征在于，其结构式如下：2. 具有抗肿瘤活性的N-甲基-3，5_二（3-(2-羟基苯亚甲基氨基）苯亚甲基)-4-哌啶酮 衍生物的制备方法，特征在于，包括如下步骤： 用羟基苯甲醛系列原料与N-甲基-3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-哌啶酮原料，在醇水溶 液中混合，添加催化剂，常温搅拌反应一段时间，沉淀抽滤，得到发明产物N-甲基-3,5-二 (3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-哌啶酮衍生物A~D;并通过核磁共振、红外光谱验 证其结构的正确性。3. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的N-甲基-3,5-二(3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯 亚甲基)-4-哌啶酮衍生物的制备方法，特征在于 所述羟基苯甲醛系列原料采用的是2,3_二羟基苯甲醛、2,4_二羟基苯甲醛、2,5_二羟 基苯甲醛或2，3，4-三羟基苯甲醛。4. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的N-甲基-3,5-二(3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯 亚甲基)-4-哌啶酮衍生物的制备方法，特征在于 所述醇水溶液的醇为甲醇、乙醇、异丙醇中的任意一种。5. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的N-甲基-3,5-二(3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯 亚甲基)-4-哌啶酮衍生物的制备方法，特征在于 所述催化剂为甲酸，乙酸中的任意一种，质量浓度为0.1%~2%。6. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的N-甲基-3,5-二(3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯 亚甲基)-4-哌啶酮衍生物的制备方法，特征在于 所述羟基苯甲醛系列原料与N-甲基-3，5_二(3-氨基苯亚甲基)-4-哌啶酮原料的摩尔 比为2:1~5:1。7. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的N-甲基-3,5-二(3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯 亚甲基)-4-哌啶酮衍生物的制备方法，特征在于 一段时间是指2~18小时。8. 权利要求1-7任一权利要求所述的N-甲基-3,5-二（3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯亚甲 基)-4-哌啶酮衍生物A~D在制备新型抗肿瘤药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及四种具有抗肿瘤活性的N-甲基-3,5-二(3-(2-羟基苯亚甲基氨基)苯亚甲基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法，属于抗肿瘤药物及其制备方法技术领域。其制备方法是N-甲基-3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-哌啶酮与羟基苯甲醛系列化合物经过Schiff-base缩合反应得到发明产物A～D。该衍生物抗肿瘤活性好，可避免现在使用的抗肿瘤药的基因毒性，靶向性明确。制备方法简便，反应条件温和，合成产率高，利于其在抗肿瘤领域的广泛推广。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/45, C07D213/68
【公开号】CN105669536
【申请号】CN201610134780
【发明人】侯桂革, 孙居锋, 王春华, 陈琴, 李宁
【申请人】滨州医学院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月10日