对照组、C:空间给药组（喂食实 施例1产品），D:空间阳性给药组，观察大鼠的血液系统各项指标变化。
[0063] 试验结果如下：
[0064] (一)Diosmin对尾吊大鼠耳廓微循环的影响
[0065] 得到实施例1制备的Diosmin (香叶木巧)对耳廓细静脉的影响结果如表5所示。得 到制备的D i O Sm i n (香叶木巧)对毛细血管开放的影响结果如表6所示。
[0066] 表5对耳廓细静脉的作用(皿）（x±s) n = 10
[0067]
[0068] p<0.05,与 B组比较
[0069] 表6对毛细血管开放的作用(mm) (x±s)n = 10
[0070]
[0071] p<0.05,与B组相比较
[0072] 结论:C组、D组大鼠耳廓细动脉和细静脉血管口径增大，血流速度加快，尤其静脉 血流速度加快明显，毛细血管开放量增多，与B组有显著差异，表明Diosmin具有明显改善尾 吊大鼠耳廓微循环的作用。
[0073] (二)Diosmin尾吊大鼠体外血栓形成的影响
[0074] 得到实施例1制备的Diosmin(香叶木巧)对抗血栓的影响结果如表7所示。
[00"75]表7 Diosmin的抗血栓作用(mm) (x±s)n = 10
[0076]
[0077] p<0.05,与 B组比较
[0078] 结论:C组、D组大鼠体外血栓形成的长度和干湿重与B组有显著差异，表明Diosmin 可显著减少血栓长度，显著降低血栓的干重和湿重。对血栓形成影响试验证明香叶木巧对 于静脉有特异的亲和性，可W从动脉和静脉系统双向作用于微重力环境血液系统，弥补了 血液系统药物只是作用于动脉系统的不足，特别适合于载人航天环境下宇航员动静脉系统 的双向调节。
[0079] (S)Diosmin对尾吊大鼠循环内皮细胞的影响
[0080] 得到实施例1制备的Diosmin (香叶木巧)对大鼠新鲜脱落内皮细胞数量影响结果 如表8所示。
[0081] 表8对大鼠新鲜脱落内皮细胞数量影响（x±s)n = 10
[0082]
[0083] p<0.05,与 B组比较
[0084] 结论:C组、D组大鼠新鲜脱落内皮细胞数量较B组差异显著。
[0085] (四)Diosmin对尾吊大鼠椎动脉恒速灌流脑血管阻力的影响
[0086] 得到实施例1制备的Diosmin(香叶木巧)对大鼠血压和脑血管阻力影响结果如表9 所示。
[0087] 表9对大鼠血压和脑血管阻力影响（x±s)n = 10 r00881 L0089」 p<0.05,与B组相比较
[0090] 结论:C组、D组大鼠血压和脑血管阻力较B组有明显改善，差异显著。
[0091] 综上所述，空间对照组大鼠的各项生理指标变化明显，空间给药组大鼠的各项生 理指标与空间对照组比较差异显著。Diosmin具有预防和治疗微重力条件下对血液系统损 伤的作用。
【主权项】
1. 一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行： 一、 样品预处理:取干燥的蓬子菜，用浓度为70%的乙醇溶液回流提取2次，每次1.5h~ 2.5h，第一次提取的料液比为1:10，第二次提取的料液比为1:8，将2次的提取液过滤，减压 浓缩回收乙醇溶液，得到浸膏； 二、 一次分离纯化:将步骤二得到的浸膏溶于水，得到一次上样液，所述的一次上样液 中浸膏的浓度为800mg/L~900mg/L，用一次上样液对AB-8大孔吸附树脂柱进行上样吸附， 吸附条件为:温度为15~25°C，流速为1.5BV/h~2.5BV/h，一次上样液的量为8BV~10BV，完 成吸附；完成吸附后进行脱附，脱附条件为：以浓度为50%的乙醇溶液为脱附剂，流速为 0.8BV/h~1.2BV/h，脱附剂的量为4BV~6BV，完成脱附，得到Diosmin-次纯化液； 三、 二次分离纯化处理:将步骤二得到的Diosmin-次纯化液加水稀释，得到二次上样 液，所述的二次上样液中步骤二得到的Diosmin-次纯化液的浓度为1150mg/L~1250mg/L， 然后用二次上样液对聚酰胺柱进行上样吸附，吸附条件为:温度为15~25°C，流速为3.5BV/ h~4.5BV/h，二次上样液的量为8BV~10BV，完成吸附；完成吸附后进行脱附，脱附条件为： 以浓度为30 %的乙醇溶液为脱附剂，流速为0.8BV/h~1.2BV/h，脱附剂的量为4BV~6BV，完 成脱附，得到Diosmin。2. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤一中取干 燥的蓬子菜，用浓度为70%的乙醇溶液回流提取2次，每次2h。3. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤二中所述 的AB-8大孔吸附树脂柱制备方法如下:①取AB-8大孔吸附树脂用浓度为95%的乙醇溶液浸 泡24h进行溶胀，然后将溶胀后的AB-8大孔吸附树脂置于圆底烧瓶内，用浓度为95%的乙醇 溶液回流洗脱4h~6h，然后进行湿法装柱;②装柱后用浓度为95 %的乙醇溶液以1.5BV/h~ 2.5BV/h的流速通过树脂层至流出液加水不变白色混浊为止;③用水以2BV/h的流速通过树 脂层洗尽乙醇溶液;④用浓度为5 %的HC1溶液以4BV~6BV体积和4BV/h~6BV/h流速淋洗， 然后用蒸馏水洗至流出液pH值为6~7;⑤用浓度为2%的NaCl溶液以4BV~6BV体积和4BV/h ~6BV/h流速淋洗，然后用蒸馏水洗至流出液pH值为7~8，得到AB-8大孔吸附树脂柱。4. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤二中所述 的一次上样液中浸膏的浓度为850mg/L。5. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤二中所述 的吸附条件为:温度为20°C，流速为2BV/h，一次上样液的量为9BV，完成吸附。6. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤二中所述 的脱附条件为：以浓度为50 %的乙醇溶液为脱附剂，流速为lBV/h，脱附剂的量为5BV，完成 脱附。7. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤三中所述 的聚酰胺柱制备方法如下:①取聚酰胺用浓度为95%的乙醇溶液浸泡24h进行溶胀，然后将 溶胀后的聚酰胺置于圆底烧瓶内，用浓度为95%的乙醇溶液回流洗脱4h~6h，然后进行湿 法装柱;②装柱后用浓度为95%的乙醇溶液以38￥~48￥体积和38￥/11~48￥/11的流速通过聚 酰胺层至流出液蒸干后无残渣为止;③用浓度为5 %的NaOH溶液以2BV~2.5BV体积和2BV/h ~2.5BV/h的流速通过聚酰胺层进行洗脱;④用蒸馏水以1BV体积和lBV/h的流速通过聚酰 胺层进行洗脱;④用浓度为10 %的醋酸水溶液以2BV~2.5BV体积和2BV/h~2.5BV/h流速淋 洗，然后用蒸馏水洗至流出液pH值为中性;得到聚酰胺柱。8. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤三中所述 的二次上样液中步骤二得到的Diosmin-次纯化液的浓度为1200mg/L。9. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤三中所述 的吸附条件为:温度为20°C，流速为4BV/h，一次上样液的量为9BV，完成吸附。10. 根据权利要求1所述的一种高效分离纯化Diosmin的方法，其特征在于步骤三中所 述的脱附条件为：以浓度为30 %的乙醇溶液为脱附剂，流速为lBV/h，脱附剂的量为5BV，完 成脱附。
【专利摘要】一种高效分离纯化Diosmin的方法。本发明涉及一种高效分离纯化Diosmin的方法。本发明目的是为了解决现有Diosmin分离纯度低，进口价格昂贵的问题。方法：一、样品预处理；二、一次分离纯化；三、二次分离纯化处理。本发明利用大孔树脂在蓬子菜中首次富集、分离、并纯化了含量较大、纯度较高的Diosmin(香叶木苷)，工艺路线成熟，成本低，溶剂毒副作用小，回收率高，适于工业化生产。
【IPC分类】C07H1/08, A61P7/04, C07H17/07
【公开号】CN105693792
【申请号】CN201610217881
【发明人】卢卫红, 张红
【申请人】哈尔滨工业大学
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2016年4月8日