快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法与流程

文档序号:12714430阅读:来源:国知局

技术特征:

1.快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤一,胶体碳的制备;

步骤二,适合PH值条件下胶体碳标记抗体的制备;

步骤三,抗体包被至反应膜作为T线及二抗包被至反应膜的C线;

步骤四,胶体碳试纸条的制备;

步骤五,从待检植物中提取蛋白,制备蛋白提取液;

步骤六,将检测试纸条插入蛋白提取液中反应;

步骤七,适当反应时间后,进行肉眼判断结果。

2.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤二中所述抗体为兔抗CP4-EPSPS多克隆抗体;步骤二中PH值为8~10,最优选的PH值为9.0。

3.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤三中所述抗体亦为兔抗CP4-EPSPS多克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤三中所述二抗为羊抗兔IgG抗体。

5.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤三中抗体包被量为100ug/1ml碳。

6.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤七中所述反应时间为3-15分钟。

7.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤六中所述反应温度为10℃~30℃。

8.根据权利要求2所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法,其特征在于,步骤二适合PH值条件下胶体碳标记抗体的制备具体方法为:

一、胶体碳最适PH值确定:

向一系列不同PH值梯度的硼酸盐缓冲液中先后加入0.1%纳米碳悬液及0.1%TritonX-100,超声处理其混合液后,200rpm离心10分钟,收集上清并静 置24小时后,观察无沉淀者即为最适PH值;

二、多克隆抗体的胶体碳标记:

在步骤一判定的最适PH值条件下,向800ul 0.02M硼酸缓冲液中加入200ul抗CP4-EPSPS多克隆抗体E01,涡旋振荡混匀,在制得的混合液中加入20ul质量体积比为1.5%的EDC溶液,于室温条件下旋转震荡20分钟之后加入200ul胶体碳纳米颗粒,于恒温摇床中300转,25℃放置2小时之后加入100ul含20%BSA的硼酸缓冲液,继续于恒温摇床中300转,25℃放置5小时;于12000g离心20分钟,留取沉淀,0.02M硼酸缓冲液反复重悬、离心,洗涤4次;最终,1ml 0.02M硼酸盐缓冲液重悬沉淀并于超声破碎仪中,超声分散输出功率60%,超声开时3秒,关时3秒,总时长5分钟;即得胶体碳标记的CP4-EPSPS抗体。

9.一种CP4-EPSPS胶体碳快速检测试纸条,包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、吸水滤纸,PVC底板一侧设有样品垫,另一侧设有吸水滤纸;样品垫和吸水滤纸之间设有硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜右侧卡接在吸水滤纸中;所述硝酸纤维素膜中部设有检测线和质控线,检测线靠近样品垫,其特征在于,还包括胶体碳垫,所述胶体碳垫为包被兔多克隆抗体E01的胶体碳垫,样品垫右端与胶体碳垫搭接相连,胶体碳垫右侧与硝酸纤维素膜搭接相连。

10.根据权利要求8所述的CP4-EPSPS胶体碳快速检测试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

一、制备用胶体碳标记的CP4-EPSPS抗体;

二、碳标垫及反应膜的制备:

按照1∶100比例稀释胶体碳标记的兔抗CP4-EPSPS多克隆抗体E01,喷涂于胶体碳垫上,干燥后备用;按照1∶8000比例稀释多克隆抗体E01及1∶10000比例稀释羊抗兔IgG后将其二者分别包被于硝酸纤维素膜的T线及C线位置,干燥后备用;

三、贴膜及切膜:

从左向右依次将样品垫,胶体碳垫,硝酸纤维素膜,吸水滤纸依次贴附于PVC底板上且相互之间依附搭接相连,完成之后将试纸切割成宽3mm的试纸条成品。

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