锅。
[0054] 3测定步骤：
[0055] 3. 1试样溶液的制备：
[0056] 称取酸化剂样品lg (精确到0.0 OOlg)于250ml的锥形瓶中，加入30~40ml的水， 再加入1. OOmL 10mol/L NaOH，将锥形瓶放在95°C的恒温水浴锅中加热30min，取出放置冷 却到常温后，用20%硫酸溶液（1. 10)及10m〇l/L NaOH溶液调节pH为2. 10~2. 30。将溶 液转移至l〇〇mL容量瓶中，定容后摇匀。取部分溶液过0. 45 y m滤膜后作为样品液，供HPLC 测定使用。
[0057] 3. 2 测定
[0058] 3. 2. 1色谱条件：
[0059] a)色谱柱：C18柱，长250mm,内径4. 6mm，粒度5 y m(极性色谱柱）；
[0060] b)流动相：乙腈 +順41切04溶液（1. 8) = 2. 5+97. 5
[0061] c)流速：lml/min ;
[0062] d)检测波长：210nm ;
[0063] e)色谱柱温度：25±1°C ;
[0064] f)进样体积：20 y L。
[0065] 3. 2. 2色谱测定：
[0066] 分别取L-乳酸标准工作液和试样溶液，按3. 2. 1的色谱条件进行色谱分析测定。 以L-乳酸标准工作液作多点校准，并用色谱峰面积分值定量。
[0067] 3. 2. 3结果计算与表述
[0068] 试样中乳酸的含量X，以质量分数表示，按下式计算：
[0069]
[0070] 式中C一由标准曲线得出的试样中乳酸的浓度；（y g/ml)
[0071] V一试样液总体积；(ml)
[0072] n-稀释倍数；
[0073] m一试样的质量；（g)
[0074] 测定结果用平行测定的算术平均值表示，修约至小数点后2位。
[0075] 4饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，该方法包括如下步骤：（1)待测样品溶液的 制备步骤；（2)样品检测步骤；和（3)结果分析步骤。
[0076] (1)待测样品溶液的制备步骤：称量0? 1~2g饲料酸化剂，加入1~10mL 10mol/ L NaOH，并在70~95°C水浴中皂化0. 5~lh，以使酸化剂中的聚合物（包括酸酐和酯）充 分解聚，取出冷却后调节pH值为2. 1~3. 5,以保证酸化剂中的有机酸充分质子化。将溶液 过0. 4~0. 5 y m有机滤膜。
[0077] (2)样品检测包括如下具体步骤：
[0078] (a)制作用液相色谱法测得的乳酸标准品浓度与峰面积的对应关系标准曲线：配 置至少5个浓度梯度在0. 2~10mg/mL之间的乳酸标准工作液，过一次性有机滤膜。
[0079] (b)用液相色谱-紫外检测器（VWD)测定待测样品溶液和标准溶液。检测方法为 外标法，仪器参考条件如下：
[0080] 色谱柱：C18 柱（250mmX4. 6mm，5ym);流动相：A 为乙腈，B 为 pH 2. 4 ~2. 7 的0. 01mol/L磷酸二氢铵水溶液，A+B = 2. 5+97. 5 ;流速：lmL/min ;柱温：25°C ;进样量： 20 y L ;VWD检测器检测波长：210nm。
[0081] (c)将乳酸标准工作液进样在（b)的色谱条件下进样分析，根据各浓度所测乳酸 峰面积的大小与浓度的对应关系做标准曲线，要求相关系数大于0. 9999。
[0082] d)取第⑴步所得滤液，在（b)的色谱条件下进样分析，测得滤液中乳酸的峰面 积；
[0083] (3)结果分析步骤如下：根据步骤（2)中（c)制作的乳酸浓度与峰面积的对应关 系标准曲线，再结合步骤（2)中（d)得到的滤液中乳酸的峰面积，计算滤液中乳酸的浓度， 由此计算出待检测样品中乳酸含量。
[0084] 5测试结果
[0085] 精密度试验测定结果见表1 ;准确度试验：在已知乳酸含量的酸化剂试样中，加入 不同量的80%乳酸原料，配成6个已知样，在相同的色谱操作条件下，定量分析、计算，测得 乳酸原料的平均回收率为99. 50%，准确度试验测定结果见表2。
[0086] 表1 :精密度试验测定结果
[0087]
[0088] 表2:准确度试验测定结果
[0089]
[0090] 本发明用于对以二氧化硅和/或石粉为载体的混合型饲料添加剂，特别是酸化剂 中乳酸含量的液相色谱定量分析方法，先利用强碱将聚乳酸解离，再调节pH保证酸性条件 下充分质子化，而后定容，过有机滤膜，最后取滤液进样检测，酸化剂样品的皂化解聚的前 处理过程，使得试样在充分的解聚后再用液相色谱进行检测，保证结果的高准确性。本方法 结合乳酸的化学性质，进行特殊化前处理，大大提高了检测结果的准确度和精密度，操作过 程简单，所用试剂安全无毒，检测人员安全性高，结果准确稳定，所用设备常见易得，是一种 非常理想的乳酸液相色谱检测方法，适合大规模推广使用。
[0091] 在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出 各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的 而非限制性的。
【主权项】
1. 一种饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括： (1) 待测样品制备步骤：将待测样品加入强碱中以解聚乳酸酐，稀释后过滤； (2) 样品检测步骤： (a) 制作用液相色谱法测得的乳酸标准品浓度与峰面积的对应关系标准曲线； (b) 用液相色谱-紫外检测器测定待测样品溶液和标准溶液； (c) 将乳酸标准工作液进样在（b)的色谱条件下进样分析，根据各浓度所测乳酸峰面 积的大小与浓度的对应关系做标准曲线； (d) 去所述的待测样品的过滤液，进行色谱分析，测得滤液中乳酸的峰面积。2. 根据权利要求1所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的待 测样品制备步骤具体为： 称量饲料酸化剂，加入1~IOmL10mol/LNaOH并在70~95°C下水浴加热，以使酸化 剂中的酸酐和酯充分解聚，取出冷却后调节pH值为2. 1~3. 5,以使得酸化剂中的有机酸充 分离子化，将溶液稀释到固定的倍数，并过一次性有机滤膜。3. 根据权利要求2所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的待 测样品制备步骤中，加入NaOH后，溶液pH为强碱性，pH值彡12,且水浴时间不少于0. 5h。4. 根据权利要求1所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的步 骤（a)具体为： 制作用液相色谱法测得的乳酸标准品浓度与峰面积的对应关系标准曲线：配置至少5 个浓度梯度在〇. 2~lOmg/mL之间的乳酸标准工作液，过一次性有机滤膜。5. 根据权利要求1所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的步 骤（b)具体为： 用液相色谱-紫外检测器VWD测定待测样品溶液和标准溶液，使用外标法检测，测试条 件及仪器参考条件如下： 色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18 柱，250mmX4.6mm，5iim;流动相：A为乙 腈，B为pH2. 4的0. 01mol/L磷酸二氢铵水溶液，A:B= 2. 5:97. 5 ;流速：lmL/min;柱温： 25°C;进样量：20yL;VWD检测器检测波长为210nm〇6. 根据权利要求1所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的样 品检测步骤（c)中的标准曲线，其中相关系数大于0.9999。7. 根据权利要求1所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的检 测方法在样品检测步骤（2)之后，还包括结果分析步骤：根据步骤（2)中（c)制作的乳酸浓 度与峰面积的对应关系标准曲线，再结合步骤（2)中（d)得到的滤液中乳酸的峰面积，计算 滤液中乳酸的浓度，由此计算出待检测样品中乳酸含量。8. 根据权利要求1所述的饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其特征在于，所述的有 机滤膜孔径为0. 4~0. 5ym。
【专利摘要】本发明涉及一种饲料酸化剂中乳酸含量的检测方法，其中所述的检测方法包括：待测样品制备步骤：将待测样品加入强碱中以解聚乳酸酐，稀释后过滤；样品检测步骤；结果分析步骤。本发明用于对以二氧化硅和/或石粉为载体的混合型饲料添加剂，特别是酸化剂中乳酸含量的液相色谱定量分析方法，先利用强碱将聚乳酸解离，再调节pH保证酸性条件下充分质子化，而后定容，过有机滤膜，最后取滤液进样检测。本方法结合乳酸的化学性质，进行特殊化前处理，大大提高了检测结果的准确度和精密度，操作过程简单，所用试剂安全无毒，检测人员安全性高，结果准确稳定，所用设备常见易得，是一种非常理想的乳酸液相色谱检测方法，适合大规模推广使用。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105203665
【申请号】CN201510618337
【发明人】林美新, 刘惠芳
【申请人】上海美农生物科技股份有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月25日