本发明涉及植物培养技术领域，具体地说，涉及一种利用气生根诱导绿萝愈伤组织的方法。
背景技术：
绿萝(学名：epipremnumaureum)，属于麒麟叶属植物，大型常绿藤本，生长于热带地区，常攀援生长在雨林的岩石和树干上，其缠绕性强，气根发达，可以水培种植。成熟枝上叶柄粗壮，长30-40厘米，基部稍扩大，上部关节长2.5-3厘米、稍肥厚，腹面具宽槽，叶鞘长，叶片薄革质，翠绿色，通常(特别是叶面)有多数不规则的纯黄色斑块，全缘，不等侧的卵形或卵状长圆形，先端短渐尖，基部深心形，稍粗，两面略隆起。
绿萝原产地在印度尼西亚所罗门群岛的热带雨林中，性喜温暖、潮湿环境，要求土壤疏松肥沃、排水良好。在热带地区常攀援生长于岩石和树干上，成为巨大的观赏藤本植物，我国南方各地均有栽植。绿萝耐阴性强，终年常绿，叶面有较厚的角质层，能适应室内干燥的环境条件，是优良的室内观叶植物。此外，还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，是天然的“空气净化器”，具有较大的市场前景。
绿萝的繁殖目前是通过扦插进行繁殖，由于绿萝生长环境高温高湿，扦插繁殖的后代极易感病菌，生产中经常出现大规模茎腐、根腐现象，给绿萝的培育造成一定的经济损失。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于克服绿萝的繁殖目前是通过扦插进行繁殖，由于绿萝生长环境高温高湿，扦插繁殖的后代极易感病菌，生产中经常出现大规模茎腐、根腐现象，给绿萝的培育造成一定的经济损失的缺陷。
为解决上述问题，本发明提供一种利用气生根诱导绿萝愈伤组织的方法，包括以下步骤：
选取母株，经预处理后取气生根；
将所述气生根进行机械损伤，并分别接种至愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号中，得愈伤组织；
将所述愈伤组织转接至继代培养基中培养，即得；
所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下成分：
改良ms培养基1号、6-苄氨基腺嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、吲哚-3-乙酸、d丁酯、蔗糖、椰子水和琼脂粉；
所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下成分：
改良ms培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚-3-乙酸、蔗糖、椰子水和琼脂粉。
优选地，所述选取母株，经预处理后取气生根，包括：
选取母株运用多菌灵灌根；
取所述母株生长点处茎段；
将所述茎段消毒，得气生根外植体。
优选地，所述选取母株运用多菌灵灌根，包括：
选取母株使用80％多菌灵1000倍溶液进行灌根30天，每10天1次。
优选地，所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号；
所述将所述气生根进行机械损伤，并接种至愈伤组织诱导培养基中，得愈伤组织，包括：
将所述气生根修剪后，得修剪茎段；
将所述修剪茎段进行机械损伤；
将所述机械损伤的修剪茎段接种至愈伤组织诱导培养基1号中，在温度25℃-28℃和湿度50％-65％的条件下进行培养，得第一愈伤组织；
将所述第一愈伤组织转入愈伤组织诱导培养基2号中，在温度25-28℃，湿度为50-65％的条件下进行培养，获得第二愈伤组织。
优选地，所述愈伤组织诱导培养基1按如下方法配置：
在改良ms培养基1号中，按照浓度加入5.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的吲哚-3-乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖、100ml/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得；
所述愈伤组织诱导培养基2按如下方法配置：
在改良ms培养基2号中，按照浓度加入1.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚-3-乙酸、蔗糖、30g/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
优选地，所述改良ms培养基1号按如下方法配置：
以ms培养基为基础，还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：1-5mg/l；
盐酸硫胺素：3-6mg/l；
盐酸吡哆醇：0.5-2mg/l；
烟酸：0.5-3mg/l；
精氨酸：50mg/l；
天冬氨酸：100mg/l；
谷氨酸：150mg/l。
优选地，所述将所述愈伤组织转接至继代培养基中培养，即得，包括：
将所述愈伤组织转接至亟待培养基中在预设培养条件下进行培养；
每40天继代一次，即得。
优选地，所述预设培养条件，包括：
光照强度：1500-20001x；
光照时间：12小时/日；
温度：25℃-28℃；
湿度：50％-65％。
优选地，所述继代培养基包括如下组分：
改良ms培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸、蔗糖、琼脂粉。
优选地，所述继代培养基，按如下方法进行配制：
制备改良ms培养基2号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；还包括以下成分，并调整含量为：肌醇：1-5mg/l、盐酸硫胺素：3-6mg/l、盐酸吡哆醇：0.5-2mg/l、烟酸：0.5-3mg/l、精氨酸：100mg/l、天冬氨酸：50mg/l和谷氨酸：200mg/l；
在改良ms培养基2号中，按照浓度加入2.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
本发明提供一种利用气生根诱导绿萝愈伤组织的方法，包括选取母株，经预处理后取气生根；将所述气生根进行机械损伤，并接种至愈伤组织诱导培养基中，得愈伤组织；将所述愈伤组织转接至继代培养基中培养，即得。本发明通过绿萝组织培养技术培育的绿萝气生根的无菌苗，可缩短生长周期，避免或减小外界不良因素引起的大规模茎腐、根腐所带来的损失，避免了目前对绿萝通过扦插进行繁殖，扦插繁殖的后代极易感病菌，生产中经常出现大规模茎腐、根腐现象，给绿萝的培育造成一定的经济损失的问题。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明的权利要求做进一步的详细说明，可以理解的是，以下仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求范围之内。
为解决上述问题，本发明提供一种利用气生根诱导绿萝愈伤组织的方法，包括以下步骤：
选取母株，经预处理后取气生根；
将所述气生根进行机械损伤，并接种至愈伤组织诱导培养基中，得愈伤组织；
将所述愈伤组织转接至继代培养基中培养，即得；
所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下成分：
改良ms培养基1号、6-苄氨基腺嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、吲哚-3-乙酸、d丁酯、蔗糖、椰子水和琼脂粉；
所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下成分：
改良ms培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚-3-乙酸、蔗糖、椰子水和琼脂粉。
绿萝原产地在印度尼西亚所罗门群岛的热带雨林中，性喜温暖、潮湿环境，要求土壤疏松肥沃、排水良好。在热带地区常攀援生长于岩石和树干上，成为巨大的观赏藤本植物，我国南方各地均有栽植。绿萝耐阴性强，终年常绿，叶面有较厚的角质层，能适应室内干燥的环境条件，是优良的室内观叶植物。此外，还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，是天然的“空气净化器”，具有较大的市场前景。
本发明提供一种利用气生根诱导绿萝愈伤组织的方法，包括选取母株，经预处理后取气生根；将所述气生根进行机械损伤，并接种至愈伤组织诱导培养基中，得愈伤组织；将所述愈伤组织转接至继代培养基中培养，即得。本发明通过绿萝组织培养技术培育的绿萝气生根的无菌苗，可缩短生长周期，避免或减小外界不良因素引起的大规模茎腐、根腐所带来的损失，避免了目前对绿萝通过扦插进行繁殖，扦插繁殖的后代极易感病菌，生产中经常出现大规模茎腐、根腐现象，给绿萝的培育造成一定的经济损失的问题。
优选地，所述选取母株，经预处理后取气生根，包括：
选取母株运用多菌灵灌根；
取所述母株生长点处茎段；
将所述茎段消毒，得气生根外植体。
上述，选取形态正常、生长旺盛的健壮母株预处理(使用80％多菌灵可湿性粉剂1000倍液灌根，每10天一次)30天后，切取距茎生长点处10～15cm茎段，使用80％多菌灵可湿性粉剂1000倍液浸泡1min后，水培10～15天(每天更换清水)获得3～5cm新生气生根，在气生根生长位置点上下1cm茎处切取带有气生根的茎段，经表面除杂、清洗后转入超净工作台进行消毒处理，得到无菌的绿萝气生根外植体。绿萝母株的切面在外植体采集后，对切面进行防护处理，待恢复生长后可以重新取样。
优选地，所述选取母株运用多菌灵灌根，包括：
选取母株使用80％多菌灵1000倍溶液进行灌根30天，每10天1次。
优选地，所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号；
所述将所述气生根进行机械损伤，并接种至愈伤组织诱导培养基中，得愈伤组织，包括：
将所述气生根修剪后，得修剪茎段；
将所述修剪茎段进行机械损伤；
将所述机械损伤的修剪茎段接种至愈伤组织诱导培养基1号中，在温度25℃-28℃和湿度50％-65％的条件下进行培养，得第一愈伤组织；
将所述第一愈伤组织转入愈伤组织诱导培养基2号中，在温度25-28℃，湿度为50-65％的条件下进行培养，获得第二愈伤组织。
上述，修剪茎段的获得是通过将绿萝气生根所在的茎段上下各修剪0.5cm得到。
上述，将所述修剪茎段进行机械损伤是通过将气生根顶端进行纵切刻伤。
上述，将刻伤后的茎段接种到愈伤组织诱导培养基1号得到第一愈伤组织中，在温度为25-28℃，湿度为50-65％的条件下进行暗培养，直至气生根刻伤出产生淡黄色的愈伤组织中间体或刻伤前部气生根膨大，即得第一愈伤组织；将得到的淡黄色愈伤组织中间体或膨大气生根(第一愈伤组织)纵切后转接入愈伤组织诱导培养基2号，在温度为25-28℃，湿度为50-65％的条件下暗培养，获得第二愈伤组织。
优选地，所述愈伤组织诱导培养基1按如下方法配置：
在改良ms培养基1号中，按照浓度加入5.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的吲哚-3-乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖、100ml/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得；
所述愈伤组织诱导培养基2按如下方法配置：
在改良ms培养基2号中，按照浓度加入1.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚-3-乙酸、蔗糖、30g/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
优选地，所述改良ms培养基1号按如下方法配置：
以ms培养基为基础，还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：1-5mg/l；
盐酸硫胺素：3-6mg/l；
盐酸吡哆醇：0.5-2mg/l；
烟酸：0.5-3mg/l；
精氨酸：50mg/l；
天冬氨酸：100mg/l；
谷氨酸：150mg/l。
上述，需要理解的是，ms培养基是murashige和skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此，这种培养基就用他们的名字来命名。其配方如表所示。
表1ms培养基配方表
优选地，所述将所述愈伤组织转接至继代培养基中培养，即得，包括：
将所述愈伤组织转接至亟待培养基中在预设培养条件下进行培养；
每40天继代一次，即得。
优选地，所述预设培养条件，包括：
光照强度：1500-20001x；
光照时间：12小时/日；
温度：25℃-28℃；
湿度：50％-65％。
优选地，所述继代培养基包括如下组分：
改良ms培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸、蔗糖、琼脂粉。
优选地，所述继代培养基包括如下组分：
改良ms培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸、蔗糖、琼脂粉。
优选地，所述继代培养基，按如下方法进行配制：
制备改良ms培养基2号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；还包括以下成分，并调整含量为：肌醇：1-5mg/l、盐酸硫胺素：3-6mg/l、盐酸吡哆醇：0.5-2mg/l、烟酸：0.5-3mg/l、精氨酸：100mg/l、天冬氨酸：50mg/l和谷氨酸：200mg/l；
在改良ms培养基2号中，按照浓度加入2.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
实施例1：
步骤1，选取母株使用80％多菌灵1000倍溶液进行灌根30天，每10天1次；
步骤2，取所述母株生长点处茎段；
步骤3，将所述茎段消毒，得气生根外植体；
步骤4，将所述气生根修剪后，得修剪茎段；
步骤5，将所述修剪茎段进行机械损伤；
步骤6，将所述机械损伤的修剪茎段接种至愈伤组织诱导培养基1号中，在温度25℃-28℃和湿度50％-65％的条件下进行培养，得第一愈伤组织；
步骤7，将所述第一愈伤组织转入愈伤组织诱导培养基2号中，在温度25-28℃，湿度为50-65％的条件下进行培养，获得第二愈伤组织；
步骤8，将所述愈伤组织转接至亟待培养基中在光照强度：1500-20001x、光照时间：12小时/日、温度：25℃-28℃、湿度：50％-65％的条件下进行培养；每40天继代一次，即得。
按照如下方法配制愈伤组织诱导培养基1号：
1、配制改良ms培养基1号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/4，微量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；
还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：1mg/l；
盐酸硫胺素：3mg/l；
盐酸吡哆醇：0.5mg/l；
烟酸：0.5mg/l；
精氨酸：50mg/l；
天冬氨酸：100mg/l；
谷氨酸：150mg/l。
2、在改良ms培养基1号中，按照浓度加入5.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的吲哚-3-乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖、100ml/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
按照如下方法配制愈伤组织诱导培养基2号：
1、制备改良ms培养基2号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：1mg/l；
盐酸硫胺素：3mg/l；
盐酸吡哆醇：0.5mg/l；
烟酸：0.5mg/l；
精氨酸：100mg/l；
天冬氨酸：50mg/l；
谷氨酸：200mg/l。
2、在改良ms培养基2号中，按照浓度加入1.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
按照如下方法配制继代培养基：
1、制备改良ms培养基2号：参考上述愈伤组织诱导培养基2号中配制改良ms培养基2号的方法。
2、在改良ms培养基2号中，按照浓度加入2.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
实施例2：
步骤1，选取母株使用80％多菌灵1000倍溶液进行灌根30天，每10天1次；
步骤2，取所述母株生长点处茎段；
步骤3，将所述茎段消毒，得气生根外植体；
步骤4，将所述气生根修剪后，得修剪茎段；
步骤5，将所述修剪茎段进行机械损伤；
步骤6，将所述机械损伤的修剪茎段接种至愈伤组织诱导培养基1号中，在温度25℃-28℃和湿度50％-65％的条件下进行培养，得第一愈伤组织；
步骤7，将所述第一愈伤组织转入愈伤组织诱导培养基2号中，在温度25-28℃，湿度为50-65％的条件下进行培养，获得第二愈伤组织；
步骤8，将所述愈伤组织转接至亟待培养基中在光照强度：1500-20001x、光照时间：12小时/日、温度：25℃-28℃、湿度：50％-65％的条件下进行培养；每40天继代一次，即得。
按照如下方法配制愈伤组织诱导培养基1号：
1、配制改良ms培养基1号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/4，微量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；
还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：2mg/l；
盐酸硫胺素：4mg/l；
盐酸吡哆醇：1mg/l；
烟酸：1mg/l；
精氨酸：50mg/l；
天冬氨酸：100mg/l；
谷氨酸：150mg/l。
2、在改良ms培养基1号中，按照浓度加入5.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的吲哚-3-乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖、100ml/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
按照如下方法配制愈伤组织诱导培养基2号：
1、制备改良ms培养基2号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：2mg/l；
盐酸硫胺素：4mg/l；
盐酸吡哆醇：1mg/l；
烟酸：1mg/l；
精氨酸：100mg/l；
天冬氨酸：50mg/l；
谷氨酸：200mg/l。
2、在改良ms培养基2号中，按照浓度加入1.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
按照如下方法配制继代培养基：
1、制备改良ms培养基2号：参考上述愈伤组织诱导培养基2号中配制改良ms培养基2号的方法。
2、在改良ms培养基2号中，按照浓度加入2.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
实施例3：
步骤1，选取母株使用80％多菌灵1000倍溶液进行灌根30天，每10天1次；
步骤2，取所述母株生长点处茎段；
步骤3，将所述茎段消毒，得气生根外植体；
步骤4，将所述气生根修剪后，得修剪茎段；
步骤5，将所述修剪茎段进行机械损伤；
步骤6，将所述机械损伤的修剪茎段接种至愈伤组织诱导培养基1号中，在温度25℃-28℃和湿度50％-65％的条件下进行培养，得第一愈伤组织；
步骤7，将所述第一愈伤组织转入愈伤组织诱导培养基2号中，在温度25-28℃，湿度为50-65％的条件下进行培养，获得第二愈伤组织；
步骤8，将所述愈伤组织转接至亟待培养基中在光照强度：1500-20001x、光照时间：12小时/日、温度：25℃-28℃、湿度：50％-65％的条件下进行培养；每40天继代一次，即得。
按照如下方法配制愈伤组织诱导培养基1号：
1、配制改良ms培养基1号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/4，微量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；
还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：5mg/l；
盐酸硫胺素：6mg/l；
盐酸吡哆醇：2mg/l；
烟酸：3mg/l；
精氨酸：50mg/l；
天冬氨酸：100mg/l；
谷氨酸：150mg/l。
2、在改良ms培养基1号中，按照浓度加入5.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的吲哚-3-乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖、100ml/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
按照如下方法配制愈伤组织诱导培养基2号：
1、制备改良ms培养基2号：以ms培养基为基础，调整其中大量元素为所述ms培养基原有含量的1/2；还包括以下成分，并调整含量为：
肌醇：5mg/l；
盐酸硫胺素：6mg/l；
盐酸吡哆醇：2mg/l；
烟酸：3mg/l；
精氨酸：100mg/l；
天冬氨酸：50mg/l；
谷氨酸：200mg/l。
2、在改良ms培养基2号中，按照浓度加入1.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/l的6-糖基氨基嘌呤、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的椰子水和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
按照如下方法配制继代培养基：
1、制备改良ms培养基2号：参考上述愈伤组织诱导培养基2号中配制改良ms培养基2号的方法。
2、在改良ms培养基2号中，按照浓度加入2.0mg/l的6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的琼脂粉，调节ph值至5.6-5.8，即得。
应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施方式中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
发明人声明，本发明通过上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程。并且即不意味着本发明应依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。