专利名称：血管紧张素ii 2型受体基因与原发性高血压的相关性的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及人血管紧张素II2型受体基因(Angiotensin II type 2 receptor gene，AT2R)的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)及其与原发性高血压的相关性。本发明还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。
背景技术：
原发性高血压(essential hypertension，EH)是最常见的心血管疾病，其发病率逐年上升，并可引起严重的心、脑、肾并发症，是脑卒中和冠心病的主要危险因素。EH是一种由遗传因素和环境因素相互作用而发病的多基因病，寻找EH相关基因进而阐明高血压发病的遗传机制已经成为目前研究的热点(HarrapSB.Hypertensiongenes versus environment.Lancet，1994，344169-171)。
肾素-血管紧张素(RAS)系统是体内调节血压和水盐代谢的重要系统。血管紧张素II(AngII)作为系统中的关键环节，主要通过两种受体，即1型受体(AT1R)和2型受体(AT2R)来发挥作用(Clin AT，Herblin WF，McCall DE etal.Identification of angiotensin II receptor subtypes.Biochem BiophysRes Commun.1989；165196-203)。研究表明AT1R能介导AngII的血管收缩、醛固酮分泌、钠吸收和血管细胞增生等功能。(Timmermans PB，Wong PC，ChiuAT et al.Angiotensin II receptors and angiotensin II receptorantagonists.Pharmacol Rev 1993；45205-51)，而AT2R能拮抗这些功能发挥保护作用(Carey RM，Wang ZQ，Siragy HM.Role of the Angiotensin type2 receptor in the regulation of blood pressure and renal function.Hypertension 2000；35[part2]155-163；Carey RM，Howell NL，Jin XH，Siragy HM. Angiotensin type 2 receptor-mediated hypotension inangiotensin type-1 receptor-blocked rats.Hypertension 2002；39(5)E27-28)。虽然已有许多关于RAS系统基因多态性与原发性高血压的研究，但没有证实AT2R基因与原发性高血压相关性的报道，更没有证实AT2R基因的SNP与原发性高血压相关性的报道。
综上所述，为了最终实现治疗高血压，本领域迫切需要寻找原发性高血压易感基因，并开发检测原发性高血压的方法、试剂盒，以及相关的治疗药物。
发明内容
本发明的目的就是提供一种诊断(尤其是早期诊断)高血压等高血压的方法及检测试剂盒。
本发明的另一目的是提供一种新的治疗高血压的方法。
本发明的再一目的是提供一种治疗高血压等高血压的药物组合物。
在本发明的第一方面，提供了一种对个体的高血压易感性进行诊断的方法，它包括步骤检测该个体的AT2R基因、转录本和/或蛋白，并与正常的AT2R基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患高血压的可能性高于正常人群。
在另一优选例中，所述的方法中检测的是AT2R的基因或转录本，并与正常AT2R核苷酸序列比较差异。
在另一优选例中，所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性362位G→A；438位T→C；1334位T→C；1675位A→G；3066位C→T；3697位T→C；4297位G→T；4303位G→A；4599位C→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO17。
在本发明的第二方面，提供了一种检测样品是否存在AT2R基因的单核苷酸多态性的方法，包括步骤(a)用AT2R基因特异性引物扩增样品的AT2R基因，得到扩增产物；和(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性362位G→A；
438位T→C；1334位T→C；3066位C→T；4599位C→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO17。
在另一优选例中，所述的单核苷酸多态性是1334位T→C。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的AT2R蛋白以及药学上可接受的载体。
在本发明的第四方面，提供了一种检测高血压的试剂盒，它包括特异性扩增AT2R基因或转录本的引物。
在另一优选例中，所述的试剂盒还含有选自下组的试剂(a)与突变部位结合的探针；(b)识别突变位点的限制性内切酶。
在另一优选例中，所述的突变选自以下单核苷酸多态性362位G→A；438位T→C；1334位T→C；1675位A→G；3066位C→T；3697位T→C；4297位G→T；4303位G→A；4599位C→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO17。
在另一优选例中，所述的单核苷酸多态性是1334位T→C。
图1显示了AT2R的一种SNP图像(以SNP03为例)的测序结果。
具体实施例方式
本发明人经过多年研究，首次发现和证明了AT2R基因与高血压密切相关，而且发现了它的新功能AT2R的改变将导致高血压，其中关联研究结果显示，在AT2R第1334位的SNP03(T/C)在病例和对照组中的分布存在显著性差异(P＜0.05)，该SNP多态可改变转录因子结合位点。在此基础上完成了本发明。
AT2R基因的详细序列可参见登录号为U208605的核苷酸序列(可参见网址http//www.ncbi.nlm.nih.gov/)，全长是5293bp(SEQ ID NO17)。
本发明人对AT2R基因中的2938bp区域进行了测序，包括其中启动子区为1501bp，5’UTR为160bp，编码区为1092bp，内含子为152bp，3’UTR为33bp。
基于本发明的新发现，AT2R蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗AT2R蛋白功能低下或丧失所致的疾病(如高血压)，和用于筛选促进AT2R蛋白功能的物质，如抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人AT2R蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能刺激人AT2R蛋白功能的多肽分子。
另一方面，本发明还包括对人AT2R DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人AT2R基因产物或片段。较佳地，指那些能与人AT2R基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人AT2R蛋白的分子，也包括那些并不影响人AT2R蛋白功能的抗体。
本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab′或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体。
本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人AT2R基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人AT2R蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备。本发明的抗体包括能阻断人AT2R蛋白功能的抗体以及不影响人AT2R蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人AT2R基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人AT2R基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。
抗人AT2R蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的人AT2R蛋白。一种优选的抗AT2R抗体是不识别正常AT2R但识别突变AT2R的抗体，或者识别正常AT2R但不识别突变AT2R的抗体。利用该抗体对正常和异常AT2R蛋白的特异性差异，可以方便地进行蛋白质水平的高血压易感性检测。
利用本发明AT2R蛋白，通过各种常规筛选方法，可筛选出与AT2R蛋白发生相互作用的物质，如抑制剂、激动剂或拮抗剂等。
本发明AT2R蛋白及其抗体、抑制剂、激动剂、拮抗剂等，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)肌内、静脉内、或皮下给药。
正常的AT2R多肽可直接用于疾病治疗，例如，用于高血压治疗。在使用本发明AT2R蛋白时，还可同时使用其他治疗高血压的药剂。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明AT2R蛋白以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约0.1微克/千克体重-约10毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。
使用药物组合物时，是将安全有效量的AT2R蛋白或其拮抗剂、激动剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约0.1微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约10毫克/千克体重，较佳地该剂量是约0.1微克/千克体重-约100微克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
人AT2R蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于AT2R蛋白的无表达或异常/无活性的AT2R蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。构建携带AT2R基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组人AT2R基因可包装到脂质体中，然后再转移至细胞内。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。
本发明还涉及定量和定位检测人AT2R蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。
一种检测检测样品中是否存在AT2R蛋白的方法是利用AT2R蛋白的特异性抗体进行检测，它包括将样品与AT2R蛋白特异性抗体接触；观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在AT2R蛋白。
AT2R蛋白的多聚核苷酸可用于AT2R蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，AT2R蛋白的多聚核苷酸可用于检测AT2R蛋白的表达与否或在疾病状态下AT2R蛋白的异常表达。如AT2R DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断AT2R蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用AT2R蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测AT2R蛋白的转录产物。
检测AT2R基因的突变也可用于诊断高血压。检测可以针对cDNA，也可针对基因组DNA。AT2R蛋白突变的形式包括与正常野生型AT2R DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。一类优选的突变是表2所示的SNP。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
1对象与方法1.1研究对象1.1.1中国人SNP发现和确认样本样本为来自19个核心汉族高血压家系、无亲缘关系的19例原发性高血压病人。
1.1.2 SNP分型和关联分析初步研究样本所有受试者均为汉族。原发性高血压组(EH组)和正常血压组(NT组)各96例，均来自中国上海地区，彼此无亲缘关系。EH组是上海市瑞金医院高血压科门诊确诊或在上海地区普查中确诊的高血压病患者，其中男46例、女50例，平均年龄49.7±7.13岁，入选标准为(1)收缩压＞150mmHg和/或舒张压＞95mmHg(即除外临界高血压患者)，或正在接受抗高血压药物治疗一年以上；(2)在20岁之前或60岁以后发病者除外；(3)临床上除外继发性高血压。NT组为40岁以上居民，其中男47例、女49例，平均年龄49.4±5.30岁，收缩压＜140mmHg，且舒张压＜90mmHg。无高血压家族史，排除肝、肾、甲状腺、糖尿病史。EH组和NT组在年龄、性别构成上无统计学差别。
1.1.3 SNP分型和关联分析扩大研究样本对于在上述初步研究中得到的阳性结果，扩大样本量后(EH组和NT组各250例)进一步验证。EH组男137例、女113例，平均年龄57.03±12.09岁。NT组男126例，女124例，平均年龄49.94±5.47岁。EH组和NT组在性别构成上无统计学差别。
1.2实验方法1.2.1 DNA提取常规酚-氯仿法提取外周血白细胞DNA，并标化DNA浓度值至20ng/μl。
1.2.2 PCR及测序引物的设计根据GenBank中AT2R的基因组序列，应用prime3软件(美国麻省理工生物医学白头研究所，http//www-gonome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3_www.cgi)设计引物。具体引物如下表1所示。
表1引物序列表
1.2.3 AT2R基因的调控区和编码区分段体外扩增以提取的DNA为模板，用Taq酶，在GeneAmp 9700 PCR仪上以Touchdown程序进行PCR扩增。反应条件为94℃预变性2分钟，94℃变性30秒，63℃退火40秒，72℃延伸40秒，共10个循环，每个循环退火温度递减0.5℃；以后94℃变性30秒，58℃退火40秒，72℃延伸40秒，共30个循环；最后72℃延伸7分钟。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证。
1.2.4 SNP的发现和检测PCR产物经Resin树脂纯化后，用ABI-PRISMTM377 DNA测序仪(美国应用生物系统公司appliedbiosystems(ABI))进行荧光标记末端终止法双向测序，用Polyphred软件(美国华盛顿大学http//droog.mbt.washington.edu/Polyphred.html)进行序列的判读和SNP确认。
1.2.5 SNP基因分型和关联分析用直接单向测序法进行SNP基因分型。选择启动子区、第1内含子区和外显子区的高频SNP进行初步分型，即在96个高血压病人和96正常血压对照组中进行分型和关联分析，有阳性意义的位点再在250个高血压病人和250个正常血压对照组中进行分型和关联分析。
1.3统计学方法SNPs各基因型在病人和正常血压对照中分布的比较采用R×C表x2检验。P＜0.05认为有统计学差别。
2.结果2.1 AT2R基因SNP的发现和分布AT2R的基因共有3个外显子，测序总长度是2938bp，共发现9个SNP，包括启动子区3个，编码区2个，3′非编码区3个，内含子1个，其中5个是新发现的SNP。AT2R基因SNP分布情况见表2。测序确认杂合子图像见图1。
表2中国人AT2R基因SNP的种类及其分布
说明(1)表中第一列为SNP的名称；第二列为SNP在AT2R基因序列中的位置；第三列为SNP所属基因区域，Promoter为启动子区，Exon为外显子区，Intron为内含子区，3′UTR为3′末端非翻译序列；第四列为在等位基因中SNP的两个碱基；第五列为测序所用引物。
(2)SNP01，SNP02，SNP03(图1)，SNP05，SNP09为新发现的SNP。
(3)在基因序列中的位置以SEQ ID NO17的序列为标准序列。
2.2 SNP位点的基因分型在各为96例的EH组和NT组中，对3个SNP(SNP03、SNP04、SNP05)进行初步基因分型和关联分析。
结果提示，SNP03等位基因分布在两组中有显著差异(P＜0.05)(表3)，即扩大样本，在250例原发性高血压病人和250例正常血压对照中对该SNP进行分型和关联研究。结果表明该SNP与高血压显著相关(P＜0.05)(表4)。
表33个SNPs基因分型和关联分析结果男性 女性频率 频率SNP等位基因1 等位基因2 x2P 等位基因1 等位基因2 x2PEHCON EHCONEHCON EHCONSNP03 0.80 0.95 0.20 0.05 12.72 0.0004 0.84 0.97 0.16 0.03 7.05 0.0079SNP04 0.48 0.67 0.52 0.33 8.000.0047 0.67 0.74 0.33 0.26 0.863 0.353SNP05 0.96 0.98 0.04 0.02 2.560.2620.96 0.98 0.04 0.02 1.006 0.316表4 SNP03基因分型和关联分析结果基因型等位基因频率TTTCCC T C x2p男性EH137113 0 24 0.825 0.175 5.63 ＜0.05NT126113 0 13 0.897 0.103女性EH11372392 0.810 0.190 1.732 0.188NT12493265 0.854 0.145EH，原发性高血压NT，正常血压对照
3.讨论高血压是遗传因素与多种环境因素相互作用而导致的多基因疾病，其遗传机制的研究已经成为目前的研究热点。迄今研究者已经成功地确定了几种单基因遗传性高血压的候选基因，但占高血压约95％的原发性高血压的遗传方式和易感基因仍未确认。研究候选基因是原发性高血压遗传研究的主要策略之一。RAS系统是体内调节血压和水盐代谢的重要系统，该系统中的AGT、ACE、AT1R、AT2R、REN、RENBP等均为原发性高血压的候选基因。
AT2R基因位于X染色体上，约5kb长，包括3个外显子，其启动子区和第一个内含子与基因的调控有关(Martin MM，Elton TS.The sequence andgenetic organization of the human type 2 angiotensin II receptor.Biophys Res Commun 1995；209554-562；Warnecke C，Willich T，HolzmeisterJ，Bottari S，Fleck E，Regitz-Zagrosek V.Efficient transcription ofthe human angiotensin II type 2 receptor gene requires intronic sequenceelements.Biochem J 1999；34017-24)。研究发现AT2R能拮抗AT1R而发挥保护性作用如舒张血管、利钠、抗血管增生等，并在动物中对血压调节起重要作用(Carey RM，Wang ZQ，Siragy HM.Role of the Angiotensin type 2receptor in the regulation of blood pressure and renal function.Hypertension 2000；35[part2]155-163；Carey RM，Wang ZQ，Siragy HM.Updaterole of the angiotensin type-2(AT(2))receptor in bloodpressure regulation.Curr Hypertens Rep 2000；2(2)198-201)。但因其表达在胚胎早期较高，而出生后迅速下降；在成体中的表达也仅局限于肾上腺、心脏、大脑等少数组织(Shanmugam S，Llorens-Cortes C，Clauser E，CorvolP，Gase JM.Expression of angiotensin II AT2receptor mRNA duringdevelopment of the rat kidney and adrenal gland.Am J Physiol 1995；268F922-F930；Sechi LA，Griffin CA，Grady EF，Kalinyak JE，SchambelanM.Characterization of angiotensin II receptor subtypes in rat heart.Circ Res 1992；111482-1489)，故对其的研究特别是多态性方面的研究很少。
本发明人首次在中国人群中对该基因启动子区、3个外显子及其连接区内含子共2938bp进行了SNP检测，共发现9个SNP，包括启动子区3个，编码区2个，3′非编码区3个，内含子1个。与NCBI的SNP数据库(http//www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP)中的数据相比较，本发明在中国人群中发现的9个SNP，该库收录的仅4个，它们分别是SNP04、SNP06、SNP07和SNP08，其余5个SNP(SNP01、SNP02、SNP03、SNP05和SNP09)均为未被该库收录的新SNP。这反映了SNP的分布存在种族差异性。
由于多基因疾病表现型的复杂性、相关基因的微效性和人群的遗传异质性，其相关基因定位克隆研究一直是一个很大的挑战。在原发性高血压候选基因中筛选多态性标记，然后在病例-对照中进行相关分析是目前寻找疾病相关基因的重要方法之一。SNP数量多、分布广、密度高，是进行遗传连锁分析和关联研究最理想的遗传标记。本研究从AT2R基因的9个SNP中选出启动子区、第一个内含子和第一个外显子区内各1个SNP(SNP03、SNP04、SNP05)，在上海地区汉族中，通过病例-对照分析，进行它们与高血压间的相关性研究。结果表明这3个SNP在上海地区汉族中都存在，并在一项病例-对照组各为250例的研究中发现SNP03(1334T/C)的2种等位基因频率分布，在男性EH组和NT组之间有显著性差异(P＜0.05)。
AT2R基因的这个位于启动子区的SNP是一个新发现的SNP，该位点涉及3个转录因子的结合位点(V$COMP1.01、V$RBPJK.01和V$HMGIY.01)，T到C的改变将失去其中1个转录因子的结合位点V$RBPJK.01，且不能增加新的结合位点，设想该位点能够影响AT2R基因的表达，从而影响AT2R的功能。而该SNP等位基因频率分布的差异在男性中存在，可能与该基因位于X染色体而对男性与女性的影响不同有关。本发明的结果提示，AT2R基因变异与上海汉族人群EH发病相关，尤其是男性的EH发病相关。
实施例2原发性高血压易感性检测试剂盒制备一试剂盒，它含有名称序列(5’→3’) 编号 浓度正向引物gcacatttgtggaaacttcattt SEQ ID NO7 干粉2OD反向引物ctggttgttgaagtttaaagcag SEQ ID NO8 干粉2ODPCR反应液 含Taq酶dNTP镁离子PCR反应缓冲液抽取待检测男性病人的血液3ml，使用常规方法(或使用特定的试剂盒)从血液中提取DNA。将高血压检测试剂盒中的PCR引物稀释到1μmol/μl，以所提取的DNA为模板与所提供的引物进行PCR反应。PCR产物纯化后，用ABI-PRISMTM377 DNA测序仪进行荧光标记末端终止法双向测序，用Polyphred软件进行序列的判读和SNP确认。
检测结果图1所示，其中，含C表示高血压易感性高于正常人群。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表<110>上海市高血压研究所国家人类基因组南方研究中心<120>血管紧张素II 2型受体基因与原发性高血压的相关性<130>036164<160>17<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
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<223>引物<400>16tagattaact ataaacctcc actc 24<210>17<211>5293<212>DNA<213>智人(Homo sapiens)<400>17aactatagaa acccatctag tcacaagttt ctccttcctg tggtctccat ttgggcaata 60caattaagaa aaatacgttt ccccacataa caattcttcc aattcttttc cccttctttg 120atgcttttat gatagattat gaatggtcat cagtgatttt ctgtaaatgc cacgtttcct 180ttttgccaag acaaagagtg agactaaggg accatctagt gccttcctct tgctggtata 240gaggctaaac agcgtgagtt ctgatattag tttcctttga tttaaatgca agtgtcttca 300tttaatagct gtatgatctc agaaaagtta ttaaactcta tgagtcctag tttcctgatt 360tgtaaagtgg gggctaatat gaatagcttg taatagcacc taccatatgc taggcatgat 420tttaggcact ttaaacatat tagctcattt aaatttccat tagcttattt aaaattccta 480ctctacgatg taggtaattt atatcattct cctttctcag atgagaaact gagacatgaa 540gaagtaaagt aacttggcca aggtcagaat tagtaggtgg tagagctggg tttgtaaagc 600caggtagttg gatcccagag gctatttact aaccagtgtg ctatattgcc tctctattaa 660attattgatg ataaataact catcacagtg ttcggcacat aacatttatt gtcagctagt 720attatcacta ccatcacctg ttcttatctt tcttcatttt gtcactcttg cttctgctgg 780attggttgtg tagtttattg cccccactgc cacaagagac agcagcaaca gtgatctagg 840ttgaaatagc tagctaatcc ctcttcactt tatgtgcttt gtatttaaac cacaaatatg 900acagagacct atgaaaggag actaaacctc tttttggtcg tgtaaaaatt atattcctgc 960aatctccaac cctccagcaa caagccaaca aaaactgcgc aaagcaaggc cgaaatttta1020gaagtggtag acttcaagta aaattcctac cattctttaa taaacagggg taaaaatttc1080agaaagtaat gaaggttgtg aaagctgatg aagcaaagac tttgctacta taataaattt1140cctagtctct actcactaat ttctattaga atgccaatat caggaaaaaa ggaagagaaa1200attctgtaaa taacttacta tatttttctc ctacgaagta agccactgac ttcaaaattc1260tctagcacat ttgtggaaac ttcatttttt ttgtttgaga tttatttgaa tgagctgtta1320tgattggaga cagtgagaat ttcagattaa tgttttgcag tcaaaaaaaa acctctctgg1380aaagctggca agggttcata agtcagccct agaattatgt aggttgaagg ctcccagtgg1440acagaccaaa catataagaa ggaaaccaga gatctggtgc tattacgtcc cagcgtctga1500gagaacgagt aagcacagaa ttcaaagcat tctgcagcct gaattttgaa ggtaagtatg1560aagcaattta tatataattt acttggaagg tagaacatac attaaatgaa aatatttttt1620atggatgaac ttctgttttt cctgtgtttt aacactgtat tttgcaaaac tcctaaatta1680tttagctgct gtttctctta caggagtgtg tttaggcact aagcaagctg atttatgata1740actgctttaa acttcaacaa ccagtaagtc ttcaagtgga atttattatt gattctttta1800tgttaatttg ttaggtcaaa agaaaaatct ttagagcaaa ataaaagttt tgctctttat1860taggaggttc tttagatatt acacttttaa ttgggtagct tatttgcatg tattttgaaa1920ctatctaaag taaatagtgt ttcctttgta tgcttatctt tagctaatgt gttttttttt1980tggtttaaat atgctctagt gaaaaaatca caaaactcac actgtaacgt ttgagagcaa2040cggctattca gttcggttaa accgaaaaga gagaaaaaga aaaatgataa gactatatca2100tgattaatca ttgatgttca tttctcattt cactgagcaa tctaaactac ttctacttga2160acctaacata ggtttggctg tttttttctt tatctgattt aattgaaaat ggattgttta2220gatattaaat agaccaaaat tagatatcta tatctaaaac taatattctc tattaaaagg2280agaagactta gaaatataaa tatatttcat aacttcttct taactatatt attattgtga2340
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1.一种对个体的高血压易感性进行诊断的方法，其特征在于，它包括步骤检测该个体的AT2R基因、转录本和/或蛋白，并与正常的AT2R基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患高血压的可能性高于正常人群。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，检测的是AT2R的基因或转录本，并与正常AT2R核苷酸序列比较差异。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的差异是选自下组的单核苷酸多态性362位G→A；438位T→C；1334位T→C；1675位A→G；3066位C→T；3697位T→C；4297位G→T；4303位G→A；4599位C→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO17。
4.一种检测样品是否存在AT2R基因的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，包括步骤(a)用AT2R基因特异性引物扩增样品的AT2R基因，得到扩增产物；和(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性362位G→A；438位T→C；1334位T→C；3066位C→T；4599位C→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO17。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的单核苷酸多态性是1334位T→C。
6.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的AT2R蛋白以及药学上可接受的载体。
7.一种检测高血压的试剂盒，其特征在于，它包括特异性扩增AT2R基因或转录本的引物。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，它还含有选自下组的试剂(a)与突变部位结合的探针；(b)识别突变位点的限制性内切酶。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的突变是选自下组的单核苷酸多态性362位G→A；438位T→C；1334位T→C；1675位A→G；3066位C→T；3697位T→C；4297位G→T；4303位G→A；4599位C→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO17。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的单核苷酸多态性是1334位T→C。
全文摘要
本发明公开了一种检测原发性高血压易感性的方法，它包括检测个体的血管紧张素II 2型受体基因AT
文档编号C12Q1/68GK1614033SQ20031010842
公开日2005年5月11日 申请日期2003年11月5日 优先权日2003年11月5日
发明者张怡, 朱鼎良, 张奎星, 王谷亮, 黄薇 申请人:上海市高血压研究所, 国家人类基因组南方研究中心