微生物中酶活性的诱导和稳定的制作方法

专利名称：：微生物中酶活性的诱导和稳定的制作方法微生物中酶活性的诱导和稳定背景微生物和它们的酶已经在多种产品的制备中用作生物催化剂。酵母在糖发酵成醇中的作用是立即可想到的例子。近年来，在通常认为不适合使用酶的商业活动中使用微生物及其酶的兴趣正日益增长。一个例子是在工业过程，尤其在废弃产物的处理中使用微生物。稳定性，作为实用生物催化剂的关键要素，已经成为在多种商业应用中使用腈水合酶和/或酰胺酶的明显障碍。尽管固定剂和化学稳定剂是用于改善酶稳定性的认可手段，但是目前的固定和稳定技术仍需要进一步发展。概述本发明提供了用于诱导和稳定酶活性的方法。任选地，酶处于能够产生所述酶的微生物中。在一些实施方案中，酶可以是腈水合酶、酰胺酶或天冬酰胺酶I。提供的是包含具有受诱导和/或稳定的活性的酶或微生物的组合物。还提供的是通过使植物或植物部分暴露于具有受诱导和/或稳定的活性的酶或微生物而延迟植物发育过程的方法。一个或多个方面的细节在下文附图和描述中阐述。其他特征、目的和优点将从本描述和附图及从权利要求书中显而易见。附图简述图I显示了说明通过在藻酸钙中固定对腈水合酶活性所提供的稳定作用的图。图2显示了说明通过在聚丙烯酰胺中固定对腈水合酶活性所提供的稳定作用的图。图3显示这样的图，其说明通过在硬化的聚乙烯亚胺交联的藻酸钙或聚丙烯酰胺中固定对腈水合酶活性所提供的稳定作用。图4显示了说明通过戊二醛交联固定对腈水合酶活性所提供的稳定作用的图。图5显示了说明在用天冬酰胺诱导的红球菌(Rhodococcussp.)DAP96253细胞中的天冬酰胺酶I活性的图。图6显示了在55°C于红球菌DAP96253细胞中对腈水合酶活性的稳定作用，其中所述的DAP96253细胞在补充有葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽糊精的YEMEA上培育并且用钴和脲诱导。图7显示了在55°C于红球菌DAP96253细胞中对腈水合酶活性的稳定作用，其中所述DAP96253细胞在补充有葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽糊精的YEMEA上培育；用钴和脲诱导并且用海藻糖稳定。详述如本文中所用，除非上下文另外清楚地说明，否则单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“该(the)”包括复数称谓。在整个说明书中，词语“包含”或其语法变型，将理解为表明包括所述要素、整数或步骤或者所述要素、整数或步骤的组，但不排除任何其它要素、整数或步骤或任何其它要素、整数或步骤的组。本发明提供的是通过使用包含海藻糖和任选的含酰胺氨基酸的培养基和组合物诱导和稳定微生物中酶活性的方法。通常，产生腈水合酶的微生物用于诱导众多有用酶的产生。例如，本发明提供的是用于在产生腈水合酶的微生物中诱导选自腈水合酶活性、酰胺酶活性、天冬酰胺酶I活性及其组合的酶活性的方法，包括在包含海藻糖和任选的一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养所述产生腈水合酶的微生物。还提供的是用于改善多种酶如腈水合酶、天冬酰胺酶I和酰胺酶的稳定的方法。例如，提供的是用于稳定酶或能够产生所述酶的微生物中所需活性的方法，所述方法包括将所述酶或能够产生所述酶的微生物与包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸的组合物接触，其中所述酶选自腈水合酶、酰胺酶和天冬酰胺酶I。提供的是随时间推移可以维持商业有用水平的酶活性的生物脱毒催化剂(尤其掺入酶，如腈水合酶和酰胺酶)。生物脱毒催化剂尤其具有以下特征如本文所述，该生物催化剂的酶活性可以由其环境诱导并稳定。本发明中公开的方法可以用来诱导具有在实用生物脱毒催化剂中有用的水平和稳定性的酶活性。所述方法还以这样的能力为特征从包括(但不限于)革兰氏阳性微生物的微生物中诱导更高水平的天冬酰胺酶I的能力和改善这种天冬酰胺酶I活性的稳定性的能力。如本文所用，酶活性通常指酶在某过程(如一种化合物转化成另一个化合物)中充当催化剂的能力。同样，本文中所指的所需活性可以包括由一种或多种微生物活性表达的一种或多种酶的活性。具体地说，腈水合酶催化腈(或羟腈)水解成相应的酰胺(或羟酸)。酰胺酶催化酰胺水解成相应的酸或羟酸。类似地，天冬酰胺酶(如天冬酰胺酶I)催化天冬酰胺水解成天冬氨酸。活性可以按每质量酶或细胞(一般基于细胞的干重，例如单位/mgcdw)“单位”来提及。“单位”通常指在限定的一组条件下，作为时间的函数，将特定含量的化合物转化成不同化合物的能力。任选地，一个“单位”的腈水合酶活性可以指在PH7.0和30°C的温度下每分钟每毫克细胞(干重)将IUmol丙烯腈转化成其相应酰胺的能力。类似地，一个“单位”的酰胺酶活性可以指在PH7.0和30°C的温度下每分钟每毫克细胞(干重)将IUmol丙烯酰胺转化成其相应酸的能力。此外，一个“单位”的天冬酰胺酶I活性可以指在PH7.0和30°C的温度下每分钟每毫克细胞(干重)将IUmol天冬酰胺转化成其相应酸的能力。所述方法是特别有利的，在于微生物的诱导和稳定可以在不需要向环境中导入危害性腈类如丙烯腈的情况下完成。先前，认为某些微生物中特定酶活性的诱导要求添加化学诱导物。例如，在玫瑰红红球菌(Rhodococcusrhodochrous)和绿针假单胞菌(Pseudomonaschloroaphis)中诱导腈水合酶活性时,通常需要至补充危害性化学品，如乙腈、丙烯腈、丙烯酰胺等。已经发现，产生腈水合酶的微生物中的高酶活性可以通过使用非危害性培养基添加物如海藻糖和任选的含酰胺氨基酸及其衍生物而诱导并稳定。任选地，天冬酰胺、谷氨酰胺或其组合可以用作诱导物，同时完全排除危害性化学品如乙腈、丙烯腈、丙烯酰胺等。因此，提供的是用于产生商业有用的酶和微生物及它们在其他方法中的用途(如用于废物流脱毒)的更安全方法。诱导并稳定微生物中酶活性的更安全方法在美国专利No.7，531，343和美国专利No.7，531，344中描述，所述专利通过引用的方式并入本文。优选地，使用如本文所述的改良培养基、固定和稳定技术，所公开的方法提供了众多酶和能够产生所述酶的微生物的产生和稳定性的显著增加。例如，可以通过使用包含海藻糖和任选的含酰胺氨基酸或其衍生物的培养基增加诱导和稳定。用于本发明所提供的方法中的产生腈水合酶的微生物包括但不限于选自假单胞菌属(Pseudomonas)、红球菌属(Rhodococcus)、短杆菌属(Brevibacterium)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、诺卡氏菌属(Nocardia)及其组合的细菌。任选地，产生腈水合酶的微生物来自红球菌属。任选地，来自红球菌属的微生物是玫瑰红红球菌DAP96622、红球菌DAP96523或其组合。示例性生物包括但不限于绿针假单胞菌(Pseudomonaschloroaphis)(ATCC43051)(革兰氏阳性)、绿针假单胞菌(ATCC13985)(革兰氏阳性)、红串红球菌(Rhodococcuserythropolis)(ATCC47072)(革兰氏阳性)和酮戍二酸短杆菌(Brevibacteriumketoglutamicum)(ATCC21533)(革兰氏阳性)。诺卡氏菌和假诺卡氏菌种类的例子已经在欧洲专利No.375091；Collins和KnowlesJ.Gen.Microbiol.129711-718(1983)；HarperBiochem.J.165:309-319(1977)；HarperInt.J.Biochem.17677-683(1985);Linton和KnowlesJGen.Microbiol.132:1493-1501(1986)JPYamaki等人，J.Ferm.andBioeng.83:474-477(1997)中描述。提供的是用于培育微生物、尤其产生腈水合酶的微生物的方法、用于诱导微生物中所需酶活性的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在包含海藻糖和任选的一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养产生腈水合酶的微生物。任选地，公开了用于使用补充有海藻糖和任选的含酰胺氨基酸或其衍生物的培养基诱导腈脱毒活性的方法，所述培养基优选地包含天冬酰胺、谷氨酰胺或其组合。更具体地，所述方法包括在该培养基中培养微生物并任选地收集培养的微生物或由微生物产生的酶。公开的方法特别用于诱导所需的酶活性。多种类型的微生物(包括本文所述的那些)能够产生具有多种活性的多种酶。如本领域中通常理解，微生物培育中所诱导的酶活性类型可以根据所用的微生物菌株、所用的培育方法和随生长培养基一起使用的补充物而变动。本发明中公开的方法和组合物允许通过使用海藻糖和任选的含酰胺氨基酸或其衍生物诱导多种酶活性。任选地，公开的方法和组合物允许诱导选自腈水合酶、酰胺酶、天冬酰胺酶I的一种或多种酶。在一些实施方案中，公开的方法和组合物允许同时诱导腈水合酶和酰胺酶。这用于例如工业应用，如处理含腈废物流。该处理要求将腈转化成酰胺的第一处理和将酰胺转化成酸的第二处理。同时产生腈水合酶和酰胺酶的能力将不再需要分别制备所述酶并且允许进行单一处理步骤。在提供的方法中，酶的诱导和稳定以在不使用危害性腈类的情况下实现。多种类型的酶活性如腈水合酶活性的诱导在传统上包括补充腈类如乙腈、丙烯腈、琥珀腈等。另夕卜，如果需要多重诱导(即，诱导单一酶的活性以降解两个或更多个类型的腈类)，则通常需要包含两个或更多个类型的危害性腈类。源自使用海藻糖和/或一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物作为酶诱导物和稳定剂的所公开方法不再需要危害性化学品来促进单一或多重酶诱导。尤其，本发明中的方法是有益的原因在于，通过在培养基或混合物中使用海藻糖和/或一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物，多重诱导和稳定是可能的。因此，公开的方法特别用于制备具有用于降解多种含腈化合物的活性的酶或微生物。另外，所述方法提供了使多种腈类或酰胺如具有单个C=N部分的腈类、二腈类(具有两个C=N部分的化合物)或具有多个腈基部分的化合物(例如，丙烯醛羟腈)脱毒的能力。此类酶或微生物在本文中称作被多重诱导。尽管公开的方法消除了需要危害性化学品以诱导酶活性，但是不排除其他此类诱导物的使用。例如，一种或多种腈类可以用来辅助特性活性形成。补充有琥珀腈和钴的培养基可用于酶(包括例如腈水合酶、酰胺酶和天冬酰胺酶I)的诱导。然而，腈类的使用不是诱导酶活性必需的。尽管使用腈类和其他危害性化学品当然不是优选的，然而任选地，此类使用是可能的。任选地，所述方法和组合物尤其以下述能力为特征诱导比使用先前已知方法时可能达到的活性更大的所需活性。使用本发明提供的方法，受诱导的产生腈水合酶的微生物具有的酶活性大于或等于在包含含腈化合物的培养基中诱导时同一种酶的活性。例如，受诱导的产生腈水合酶的微生物具有的酶活性比在包含含腈化合物的培养基中诱导时同一种酶的活性大至少5%。任选地，产生的腈水合酶活性比通过用含腈化合物诱导在相同微生物中产生的活性大至少10%、至少12%或至少15%。、酶处理废水的商业用途以及多种酶的其他商业用途通常受到诱导的活性不稳定限制。例如，新鲜细胞一般将在25°C的温度在24小时内丧失它们初始活性的至少50%。因此，当细胞欲用作催化剂时，细胞必须在需要时产生并且不能为将来使用而贮存。腈水合酶活性可以通过添加含腈化合物来稳定；然而，这又不得不使用不希望的危害性化学品。所公开的方法和组合物解决这个问题。例如，具有经诱导的腈水合酶活性的细胞可以在不需要危害性化学品的情况下稳定，从而细胞具有有效酶活性持续至多到一年的时间段。因此，所公开的方法和组合物使酶或能够产生此类酶的微生物稳定，从而将酶的活性充分延长超过有用活性的常见时间段。因此，提供的是用于稳定酶或能够产生所述酶的微生物中所述活性的方法。此类方法包括使酶或能够产生所述酶的微生物与海藻糖和任选的一种或多种含酰胺氨基酸接触。海藻糖和含酰胺氨基酸或其衍生物可以例如在培养该微生物时添加至所述微生物，或可以添加至包含所述微生物或酶的混合物。任选地，将该酶或能够产生所述酶的微生物的所需活性稳定，从而所需活性在25°C的温度至少30天的时间后维持在由该酶或能够产生该酶的微生物所表现的初始活性的至少约50%水平。可以通过固定方法如附加、包封和交联法实现进一步稳定，从而延长在其间可以使用酶活性的时间。因此，所述方法还包括至少部分地固定该微生物。稳定作用可以通过固定酶或产生该酶的微生物来提供。例如，从微生物收获的酶或受诱导的微生物本身可以被固定至基质，作为稳定受诱导活性的手段。任选地，产生腈水合酶的微生物是至少部分固定的。任选地，酶或微生物至少部分地包封于基质内或位于其表面上。这允许以这样的方式提供具有诱导活性的固定化材料(例如，催化剂)，从而促进该催化剂与预期物质的反应和所述产物的回收，同时使催化剂留在反应介质中并且保持反应性模式。可以使用通常用于附加酶或微生物的任何基质。任选地，该基质包括藻酸或其盐。藻酸是具有分别以((1-4)-连接的P-D-甘露糖醛酸(M)和其C-5差向异构体a-L-古洛糖醛酸(G)残基的均聚嵌段的线性共聚物，所述均聚嵌段以不同顺序或嵌段共价地连接在一起。所述单体可以出现在连续G残基(G嵌段)、连续M残基(M嵌段)、交替M和G残基(MG嵌段)的均聚嵌段中或者无规组织的嵌段中。任选地，藻酸钙用为基质。藻酸钙可以例如是交联的，如与聚乙烯亚胺交联，以形成硬化的藻酸钙基质。此类固定技术的进一步描述可以在Bucke,“CellImmobilizationinCalciumAlginate,MethodsinEnzymology,第135卷，B部分(K.Mosbach编著)，第175-189页(1987)中找到，所述文献通过引用方式并入本文。在图I中说明并且在以下实施例2中进一步描述使用聚乙烯亚胺交联的藻酸钙的固定的稳定作用。任选地，该基质包含酰胺聚合物。可以使用包含一个或多个酰胺基团的任何聚合物。任选地，该基质包含聚丙烯酰胺聚合物。在图2中说明并且在以下实施例3中进一步描述使用聚丙烯酰胺的固定的稳定作用。稳定可以进一步通过交联实现。例如，可以将诱导的微生物化学地交联以形成细胞的凝集体。任选地，诱导的微生物使用戊二醛交联。例如，微生物可以悬浮在去离子水和戊二醛的混合物中；随后添加聚乙烯亚胺直到实现最大絮凝。交联的微生物(一般为许多细胞形成的颗粒形式)可通过简单的过滤进行收获。在Lopez-Gallego等人，J.Biotechnol.119=70-75(2005)中提供对此类技术的进一步描述，所述文献通过引用方式并入本文。戊二醛交联的稳定作用在图4中说明并且在实施例5中进一步描述。任选地，所述微生物可以包囊化而不允许保持经典的布朗运动。这种包囊促进所述微生物的收集、保持和再使用，并且通常包括将所述微生物附加至基质。这种附加也可以如上文所述，促进所述微生物的稳定，或者可以仅促进便捷处置诱导的微生物或酶。所述微生物可通过通常认可的用于固定微生物的任何方法，如吸附法、静电键合法和共价结合法等固定。通常，所述微生物固定在有助于从混合物或溶液(如脱毒反应混合物)中回收所述微生物的固相支持物。合适的固相支持物包括、但不限于颗粒状活性炭、混合料、木材或木制品(例如，纸、木屑、木块、破碎的垫料或树)、金属或金属氧化物颗粒(例如氧化铝、钌、氧化铁)、离子交换树脂、DEAE纤维素、DEAE-SEPHADEX聚合物、陶瓷珠、交联的聚丙烯酰胺珠、方块(cube)、金属小球或其他凝胶形式、藻酸盐珠子、K-角叉菜胶方块，以及由于固有磁性而能从水溶液中回收的固体颗粒。催化剂的形状是可变的(原因在于所述颗粒状实体的所需动力学性质与影响催化剂活性的体积/表面积关系相结合)。任选地，诱导的微生物固定在已经用聚乙烯亚胺交联的藻酸盐珠内或固定在聚丙烯酰胺聚合物中。另外，提供的是可以在所公开的方法中使用的以及用于产生多种装置如生物滤池的组合物。任选地，所述组合物包含(a)营养培养基，其包含海藻糖和任选的一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物；(b)—种或多种酶微生物；和(c)一种或多种酶。任选地，所述酶选自腈水合酶、酰胺酶、天冬酰胺酶I及其组合。任选地，一种或多种微生物包括选自假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、诺卡氏菌(Nocardia)、假单胞菌(Pseudomonas)、红球菌属(Rhodococcus)、短杆菌属(Brevibacterium)及其组合中的细菌。例如，所述微生物来自红球菌属。任选地，来自红球菌属的微生物是玫瑰红红球菌DAP96622、红球菌DAP96523或其组合。任选地，所述微生物是至少部分固定的。如本文所述，提供的组合物和方法包括使用海藻糖。海藻糖在所提供方法中使用的组合物或培养基中的浓度可以是至少I克/升(g/L)。任选地，海藻糖的浓度在lg/L至50g/L或lg/L至10g/L的范围内。任选地，海藻糖在培养基中的浓度是至少4g/L。任选地，在所提供方法中使用的组合物和培养基还包含一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物。含酰胺氨基酸可以例如选自天冬酰胺、谷氨酰胺、其衍生物或其组合。例如，含酰胺氨基酸可以包括天然形式的天冬酰胺、无水天冬酰胺、天冬酰胺一水合物、天然形式的谷氨酰胺、无水谷氨酰胺和/或谷氨酰胺一水合物，每种均为L-异构体或D-异构体形式。含酰胺氨基酸或其衍生物在培养基中的浓度可以根据所需的最终培养结果变动。例如，培养可以为产生具有特定酶活性的微生物的目的而实施。任选地，培养可以为形成特定酶并从培养的微生物收集特定酶的目的而实施。任选地，培养可以为形成并收集具有相同或不同活性和功能的多种酶的目的而实施。添加至生长培养基或混合物的含酰胺氨基酸或其衍生物的量通常可以基于培养基或混合物的总重量是多达每百万份10，000(ppm)(S卩，以重量计1%)。然而，本发明方法是特别有益的，在于酶活性可以通过添加甚至更少的量来诱导。任选地，一种或多种含酰胺氨基酸是以至少50ppm的浓度存在。通过其他例子，含酰胺氨基酸或其衍生物的浓度在50ppm至5，OOOppm、IOOppm至3，000ppm>200ppm至2，000ppm>250ppm至1500ppm、500ppm至1250ppm或500ppm至IOOOppm的范围内。任选地，将海藻糖和含酰胺氨基酸或其衍生物添加至营养完整培养基。合适的营养完整培养基通常是可以为微生物供应其生长所要求的必需养分的生长培养基，所述必需养分最少包括碳源和/或氮源。一个具体例子是市售可得的R2A琼脂培养基，其一般由琼月旨、酵母提取物、蛋白胨、酪蛋白水解物、葡萄糖、可溶性淀粉、丙酮酸钠、磷酸氢二钾和硫酸镁组成。营养完整液体培养基的另一个例子酵母提取物麦芽提取物琼脂(YEMEA)，其由葡萄糖、麦芽提取物和酵母提取物(但是特别排除琼脂)组成。本领域已知的任何营养完整培养基可以用于所公开的方法，以上培养基仅出于示例目的而描述。可以在本文所述的组合物中包括此类营养完整培养基。任选地，公开的组合物和培养基可以含有其他添加物。一般，其他补充物或养分是用于辅助细胞生长更多的、更多细胞质量或加速生长的那些。例如，组合物和培养基可以包含除营养完整培养基中已经存在的任何碳水化合物源之外的碳水化合物源。如上文所述,大部分培养基一般含有某个含量的碳水化合物(例如,葡萄糖)；然而，可能有用是包含额外的碳水化合物源。提供的过量碳水化合物的类型可以取决于所需的培养结果。例如，已经发现添加糖如麦芽糖或麦芽糊精提供改进的天冬酰胺酶I诱导和改进的腈水合酶稳定性。任选地，组合物和培养基还包含钴。钴或其盐可以添加至所述混合物或培养基。例如，添加钴(例如，氯化钴)至培养基可以对于增加由培养的微生物产生的酶的量特别有用。钴或其盐可以例如添加至培养基，从而钴浓度是多达IOOppm的量。钴可以例如以5ppm至lOOppm、IOppm至75ppm、IOppm至50ppm、或IOppm至25ppm的浓度存在。任选地，组合物和培养基还包含脲。脲或其盐可以添加至所述混合物或培养基。脲或其盐可以例如添加至培养基，从而脲浓度处于直至IOg/的量。脲可以例如以5g/L至100g/L、10g/L至75g/L、10g/L至50g/L或10g/L至25g/L的浓度存在。任选地，脲以7.5g/L的浓度存在。所述组合物和培养基也可以包括其他组分。例如，其他合适的培养基组分可以包括商用添加物，如棉籽蛋白、麦芽糖、麦芽糊精和其他商业糖。任选地，培养基还包含麦芽糖或麦芽糊精。麦芽糖或麦芽糊精，例如，可以添加至培养基以使麦芽糖或麦芽糊精浓度是至少lg/L。任选地，麦芽糖或麦芽糊精可以按的浓度存在。任选地，所述组合物和培养基不含任何含腈化合物。在培养基中先前需要腈化合物以诱导针对两种或更多种腈化合物的酶活性。本文所述的组合物通过使用完全安全的海藻糖和/或含酰胺氨基酸或其衍生物实现这一点；因此，培养基可以不含有任何含腈化合物。可以培育多种微生物以用于所提供的方法和组合物中。通常，如本文所述，可以使用能够产生酶活性的任何微生物。任选地，所述微生物能够产生腈水合酶。如本文所用，产生腈水合酶的微生物意指尽管通常认为能够产生腈水合酶，但还能够产生一种或多种其他酶的微生物。另外，大多数微生物能够产生多种酶，此类产生经常由微生物的环境决定。因此，尽管用于本文中的微生物可以作为产生腈水合酶的微生物公开,然而此类语言仅指此类微生物产生腈水合酶的已知能力并且不限制该微生物仅产生腈水合酶。相反，产生腈水合酶的微生物是能够产生至少腈水合酶(即，能够产生腈水合酶或腈水合酶以及一种或多种其他酶)的微生物。众多产生腈水合酶的微生物是本领域已知的。例如，属于诺卡氏菌属[见日本专利申请No.54-129190]、红球菌属[见日本专利申请No.2-470]、根瘤菌属(Rhizobium)[见曰本专利申请No.5-236977]、克雷伯氏菌属(Klebsiella)[曰本专利申请No.5-30982]、气单胞菌属(Aeromonas)[日本专利申请No.5-30983]、农杆菌属(Agrobacterium)[日本专利申请No.8-154691]、芽孢杆菌属(Bacillus)[日本专利申请No.8-187092]、假诺卡氏菌属[日本专利申请No.8-56684]和假单胞菌属的细菌是可以使用的产生腈水合酶的微生物的非限制性例子。任选地，产生腈水合酶的微生物包括来自红球菌属的细菌。另外，微生物的具体例子包括，但不限于，诺卡氏菌物种(Nocardiasp.)、红球菌(Rhodococcussp.)、玫瑰红红球菌、克雷伯氏菌(Klebsiellasp.)、气单胞菌Aeromonassp.)、弗氏朽1樣酸杆菌(Citrobacterfreundii)、发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)、根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)、黄黄色杆菌(Xanthobacterflavas)、流黑欧文氏菌(ErwinianigrifIuens)、肠杆菌(Enterobactersp.)、链霉菌(Streptomycessp.)、根瘤菌(rhizobiumsp.)、百脉根根瘤菌(Rhizobiumloti)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumlegminosarum)、根瘤菌属(Rhizobiummerioti)、高里假丝酵母(Candidaguilliermondii)、成团泛菌(Pantoeaagglomerans)、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiellapneumoniaesubsp.pneumoniae)、放身寸形土壤杆菌(Agrobacteriumradiobacter)、史密氏芽抱杆菌(Bacillussmithii)、嗜热假诺卡氏菌属(Pseudonocardiathermophila)、绿针假单胞菌、红色假单胞菌(Pseudomonaserythropolis)、酮戍二酸短杆菌、红串红球菌和嗜热假诺卡氏菌。任选地，使用的微生物可以例如包括红球菌DAP96253和DAP96255和玫瑰红红球菌DAP96622及其组合。任选地，所述微生物也可以包括转化体。具体而言，转化体可以是其中插入和表达从已知包括这种基因的微生物中克隆的腈水合酶基因的任何宿主。例如，美国专利No.5，807，730描述了大肠杆菌作为阶-10822细菌菌株(FERMBP-5785)的宿主的用途。当然，其他类型基因修饰的细菌可以在本发明中使用，只要所述细菌能够产生如本文所述的一种或多种酶。给定的属内全部种类不都显示相同类型的酶活性和/或生产。因此，可能具有这样的属，所述属已知包括能够显示所需活性的菌株，但是具有通常不显示出所需活性的一个或多个种类。因此，宿主微生物可以包括不具体知道具有所需活性，但是来自下述属的细菌菌株，其中所述属已知具有能够产生所需活性的特定菌株。此类菌株可以具有转移至其中的用以引起所需活性的一个或多个基因。此类菌株的非限制性例子包括马红球菌(Rhodococcusequi)和球状红球菌(Rhododoccusgloberulus)PffDl微生物可以选自已知来源或可以包含新分离的微生物。任选地，可以通过在海藻糖和/或一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物存在下培养菌株，分离微生物并且将其鉴定为有用的微生物菌株。基于本发明的多重诱导后使腈类混合物或腈与酰胺化合物的混合物或酰胺混合物脱毒成为相应的酰胺和/或酸的能力，微生物可以从已知的来源分离或选出或获得或可以从未来来源中筛选。确定微生物是否有用的测定法是本领域已知的。例如，可以通过检测游离氨确定腈水合酶或酰胺酶活性的存在。见Fawcett和Scott,“ARapidandPreciseMethodfortheDeterminationofUrea(用于测定服的快速和精确方法)”J.Clin.Pathol.13:156-9(1960)，所述文献通过引用方式并入本文。可以为实现最佳生物量培养和收获微生物。在某些例子中，如在琼脂平板上培养时，微生物可以培养至少24小时时间，但是通常少于六天。在发酵罐中培养时，微生物优选地在极限培养基中培养I小时至48小时，I小时至20小时或16小时至23小时时间。如果需要更多的生物量，微生物可以在发酵罐中培养更长时间。在培养时间结束时，一般例如通过刮取、离心、过滤或本领域技术人员已知的任何其他方法收集和浓缩培养的微生物。微生物可以在其他指明的条件下培养。例如，培养优选地在3.0和11.0之间，更优选地在6.0和8.0之间的pH上实施。进行培养的温度优选地在4°C和55°C之间，更优选地在15°C和37°C之间。此外，溶解氧张力优先在0.1%和100%之间，优选地在4%和80%之间和更优选地在4%和30%之间。溶解氧张力可以进行监测并且通过以环境空气、纯氧、过氧化物和任选释放氧的其他组合物的形式供应氧而维持于所需范围内。根据本发明中公开的方法还可能将微生物培育和酶活性诱导的步骤分开。例如，可以在不包含对诱导酶活性必需的补充的第一培养基上培育一种或多种微生物。这种第一培养基可以称作微生物的生长期培养基。在第二期(即，诱导期)中，培养的微生物可以转移至包含包含对诱导酶活性必需的补充的第二培养基。如本文所述，这种第二培养基将优先地包含海藻糖和/或一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物。类似地，诱导补充物可以在培养所需微生物期间的任何时间添加。例如，培养基可以在开始培养微生物之前补充海藻糖和/或含酰胺氨基酸或其衍生物。或者，微生物可以在培养基上培育预定量的时间以生长所述微生物，并且可以一个或多个预定时间添加海藻糖和/或含酰胺氨基酸或其衍生物以在微生物中诱导所需的活性。另外，可以将海藻糖和/或含酰胺氨基酸或其衍生物添加至生长培养基(或至包含事先培育的微生物的独立混合物)以在微生物的生长完成后在微生物中诱导所需的活性。提供的是通过将腈类转化成相应的酰胺或酸而使腈类混合物脱毒的方法。任选地，所述方法包括施加降解腈的微生物的培养物至腈类混合物和用海藻糖和/或含有酰胺的氨基酸或其衍生物的混合物多重诱导所述微生物持续足够量的时间以将腈类转化成相应的酰胺。可选择地，所述方法包括施加多重诱导的微生物至腈类混合物持续足够量的时间以将腈类转化成相应的酰胺。当所述微生物施加至废物流时，微生物可以是生长(活跃分裂)或静息(非活跃地分裂)的。当所述方法需要施加活跃生长的微生物的培养物时，施加条件优选地支持或维持细菌生长。当所述方法需要施加非活跃分裂的微生物的培养物时，施加条件优选地支持酶活性。任选地，所公开的方法和组合物可以用来处理具有废物的生产厂的废物流，所述废物一般含有高浓度的腈、羟腈或易受酶降解的其他化学品。例如，提供的是使来自腈基生产厂的废水流中腈化合物的混合物或腈和酰胺化合物的混合物脱毒的方法。另外，本发明可以用于处理丙烯腈丁二烯苯乙烯(ABS)生产中的废物流，其中丙烯腈用于ABS的生产中。另外，提供可生物滤器，所述生物滤器可以用于使流出物如空气、蒸气、气溶胶和水或水溶液中的腈化合物的混合物、腈和酰胺化合物的混合物和酰胺化合物的混合物脱毒。例如，如果挥发性腈化合物存在，挥发物可以从存在这些挥发物的固体或水溶液中剥离，并且应当以使挥发物截获于生物滤器中的方式实施各个步骤。一旦截获，所述挥发物可以如本文所述，用纯培养物微生物提取物脱毒。还提供试剂盒，所述试剂盒包含微生物的培养物，所述微生物已经被多重诱导并且能够使腈化合物的混合物、腈和酰胺化合物的混合物和酰胺化合物的混合物脱毒。所述微生物可以是活跃分裂的或者冻干的，并且可以直接添加至含有腈和/或酰胺化合物的水溶液中。任选地，试剂盒包含受诱导的冻干样品。微生物也可以如本文所述固定到固相支持物上。其他试剂盒组分可包括，例如，本文所述的用于诱导所述微生物的多种诱导补充物的混合物，以及其他试剂盒组件，如小瓶、包装组件等，这对于本领域技术人员而言是已知的。还提供的是延迟植物发育过程的方法，所述方法包括使植物或植物部分暴露于一种或多种酶或产生所述酶的微生物。任选地，用来延迟植物发育过程的微生物用如本文所述的诱导剂和/或稳定剂(包括例如海藻糖、含酰胺氨基酸、钴、脲及其混合物)处理。例如，提供的是用于延迟植物发育过程的方法，包括使植物或植物部分暴露于一种或多种酶，其中通过在包含海藻糖和任选的一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养一种或多种细菌，由所述细菌产生所述酶并且其中将所述酶以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于植物或植物部分。任选地，所述方法涉及延迟植物发育过程，包括使植物或植物部分暴露于选自红球菌、绿针假单胞菌、酮戊二酸短杆菌的一种或多种细菌及其混合物。一种或多种细菌在包含海藻糖和任选的一种或多种含酰胺氨基酸或其衍生物的培养基中培养并且以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于植物或植物部分。提供的方法可以例如用来延迟果实、蔬菜成熟或花衰老并用来增加果实、蔬菜或花的储存期，从而促进此类植物产品的运输、分销和销售。用于延迟植物发育过程的方法在美国公开No.2008/0236038中描述，所述专利通过引用方式并入本文。任选地，所述方法包括使植物或植物部分暴露于来自细菌的一种或多种酶或提取物。酶或提取物以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于植物或植物部分。例如，提供的是用于延迟植物发育过程的方法，包括使植物或植物部分暴露于一种或多种细菌的酶提取物，其中所述细菌在包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养并且其中将所述酶提取物以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于植物或植物部分。如本文所用，使植物或植物部分暴露于一种或多种以上细菌包括，例如暴露于完整细菌细胞、细菌细胞裂解物和拥有酶活性的细菌提取物(即，“酶提取物”)。用于从细胞(包括细菌细胞)制备裂解物和酶提取物的方法是已知的。在提供的方法中使用的一种或多种细菌有时可以更常见地在本文中称作通常“催化剂”。如本文所用、“植物”或“植物部分”广义地定义成包括完整植物和植物的任何部分、包括但不限于果实、营养体(vegetable)、花、种子、叶、坚果、胚、花粉、胚珠、枝、种仁(kernel)、穗、穗轴、籽粒、柄、根、根尖、花药等。植物部分可以例如是果实、蔬菜或花。任选地，植物部分是果实，更具体地跃变型果实，如下文更详细描述。所公开的方法涉及延迟植物发育过程，如一般与增加的乙烯生物合成相关的植物发育过程。“植物发育过程”是意指植物或植物部分的任何生长或发育过程，包括但不限于果实成熟、营养体成熟、花衰老、叶脱落、种子萌发等。任选地，植物发育过程是果实或营养体成熟、花衰老或叶脱落，更具体地果实或营养体成熟。如本文定义，“延迟植物发育过程”及其语法变体，指任何减慢、中断、抑制或阻抑植物或植物部分的目的植物发育过程或一般与特定植物发育过程相关的表型或基因型变化。例如，当植物发育过程是果实成熟时，果实成熟的延迟可以包括抑制如上文所述，通常与成熟过程相关的变化(例如，颜色变化，果皮(即，子房壁)软化、含糖量增加、风味变化、果实总体降解和顾客对果实的需求度最终下降。本领域技术人员会理解，果实成熟出现所要求的时间的长度将根据例如果实的类型和所用的特定储存条件(例如，温度、湿度、通气量等)变动。因此，“延迟果实成熟”可以构成延迟I至90天，特别是I至30天，更特别地是5至30天。用于评估植物发育过程(如果实成熟、营养体成熟、花衰老和叶脱落延迟)延迟的方法完全在本领域普通技术人员的日常能力范围内，可以基于例如与未处理的植物或植物部分中的植物发育过程比较。任选地，因所公开的方法引起的植物发育过程延迟可以相对于未处理的植物或植物部分或相对于已经用已知迟滞植物发育过程的一种或多种化学物质处理过的植物或植物部分进行评估。例如，因所提供的方法引起的果实成熟延迟可以与未处理的果实或已经用抗成熟剂(如本文所述的那些)处理过的果实的果实成熟时间比较。—种或多种细菌以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于植物或植物部分。“使植物或植物部分暴露于”一种或多种细菌包括用于提供细菌至所述植物或植物部分的任何方法。间接暴露方法包括，例如，将细菌或细菌混合物总体上靠近植物或植物部分安置(即，间接暴露)。任选地，可以将细菌通过更靠近或直接接触而暴露于植物或植物部分。另夕卜，如本文定义，一种或多种本发明细菌的“足够”量将取决于多种因素，包括但不限于，在所述方法中所用的具体细菌、细菌暴露于植物或植物部分的形式(例如，作为完整细菌细胞、细胞裂解物或酶提取物，如上文所述)、细菌借以暴露于植物或植物部分的手段和暴露的时间长度。本领域技术人员可以通过例行实验确定对于延迟植物发育过程必需的一种或多种细菌的“足够”量。通过暴露于合适的诱导剂或用其处理，将一种或多种细菌“诱导”以显示出所需的特征(例如，延迟植物发育过程(如果实成熟)的能力)。诱导剂包括但不限于海藻糖、天冬酰胺、谷氨酰胺、钴、脲或其任何混合物。任选地，将细菌暴露于诱导剂天冬酰胺或用其处理，更具体地是包含海藻糖、天冬酰胺、钴和脲的诱导剂混合物。诱导剂可以在培养所需细胞期间的任何时间添加。尽管不意图受限于特定的机理，然而“诱导”细菌可以导致如上文所述的一种或多种酶如腈水合酶、酰胺酶和/或天冬酰胺酶的产生(或增加的产生)，并且这些酶中一种或多种酶的诱导可以在延迟目的植物发育过程中发挥作用。“腈水合酶”、“酰胺酶”和“天冬酰胺酶”包含在来自多种生物的细胞中存在的酶家族，所述生物包括，但不限于细菌、真菌、植物和动物。此类酶是熟知的，并且每类酶拥有识别的酶活性。提供的是延迟植物发育过程的方法，包括使植物或植物部分暴露选自腈水合酶、酰胺酶、天冬酰胺酶或其混合物中的一种或多种酶，其中将所述一种或多种酶以足够延迟所述植物发育过程的量或酶活性水平暴露于植物或植物部分。例如，产生、受诱导以产生或经基因修饰以产生一种或多种上述酶(即，腈水合酶、酰胺酶和/或天冬酰胺酶)的完整细胞可以用于延迟植物发育过程的方法中。可选择地，腈水合酶、酰胺酶和/或天冬酰胺酶可以从任何上述细胞中分离、纯化或半纯化并且以更为分离的形式暴露于植物或植物部分。见例如，Goda等人，JBiolChem.276:23480-5(2001)；Nagasawa等人，Eur.J.Biochem.267138-144(2000)；Soong等人，Appl.Environ.Microbiol.661947-52(2000);Kato等人，Eur.J.Biochem.263:662-70(1999)，所述文献全部通过引用的方式整体并入本文。任选地，单一细胞类型可以能够产生(或经诱导或基因修饰以产生)多于一种酶。此类细胞适用于所公开的方法中。所公开的方法可以用来延迟任何植物或植物部分的植物发育过程。任选地，所述方法是涉及延迟成熟，并且植物部分是(跃变型或非跃变型)果实，营养体或经历成熟的其他植物部分。本领域技术人员会认识到“跃变型果实”在果实成熟期间显示出乙烯产生骤增，而通常认为“非跃变型果实”在成熟过程期间不经历乙烯生物合成的明显增力口。示例性果实、营养体和其他植物产物包括但不限于苹果、杏、biriba、面包果、番荔枝(cherimoya)、斐济果(feijoa)、无花果、番石槽、木菠萝、称猴桃、香蕉、桃、鳄梨、苹果、哈密瓜、芒果、甜瓜、油桃、柿子、美果榄(sapote)、刺果番蒸枝(soursop)、橄榄、木瓜、西番莲、梨、李子、西红柿、灯笼椒、蓝莓、可可、caju、黄瓜、柚子、柠檬、酸橙、辣椒、樱桃、柑桔、葡萄、菠萝、草莓、西瓜、树番爺(tamarillo)和坚果。任选地，所述方法涉及延迟花衰老、萎蔫、落叶或花瓣闭合。可以在此使用任何花。示例性花包括但不限于玫瑰、康乃馨、兰花、半枝莲、锦葵和秋海棠。切花，更特别地，商业上重要的切花如玫瑰和康乃馨，是特别有意义的。任选地，本发明中使用对乙烯敏感的花。乙烯敏感型花包括但不限于来自六出花属(Alstroemeria)、银莲花属(Aneomone)、花烛属(Anthurium)、金鱼草属(Antirrhinum)、紫毙属(Aster)、落新妇属(Astilbe)、卡特兰属(Cattleya)、兰属(Cymbidium)、大丽花属(Dahlia)、石斛属(Dendrobium)、石竹属(Dianthus)、洋桔梗属(Eustoma)、香雪兰属(Freesia)、大丁草属(Gerbera)、石头花属(Gypsophila)、鳶尾属(Iris)、山黧豆属(Lathyrus)、百合属(Lilium)、补血草属(Limonium)、尼润属(Nerine)、蔷薇属(Rosa)、丁香属(Syringa)、郁金香属(Tulipa)和百日菊属(Zinnia)的花。代表性的乙烯敏感型花还也包括石蒜科(Amarylidaceae)、葱科(Alliaceae)、铃兰科(Convallariaceae)、菅草科(Hemerocallidaceae)、风信子科(Hyacinthaceae)、百合科(Liliaceae)、兰科(Orchidaceae)、番杏科(Aizoaceae)、仙人掌科(Cactaceae)、結梗科(Campanulaceae)、石竹科(Caryophyllaceae)、景天科(Crassulaceae)、龙胆科(Gentianaceae)、锦奏科(Malvaceae)、白花丹科(Plumbaginaceae)、马齿觅科(Portulacaceae)、爺科(Solanaceae)、龙舌兰科(Agavacaea)、独尾草科(Asphodelaceae)、天门冬科(Asparagaceae)、秋海棠科(Begoniaceae)、忍冬科(Caprifoliaceae)、川续断科(Dipsacaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、科(Fabaceae)、唇形科(Lamiaceae)、桃金娘科(Myrtaceae)、柳叶菜科(Onagraceae)、虎耳草科(Saxifragaceae)和马鞭草科(Verbenaceae)的那些。见例如，VanDoorn,AnnalsofBotany89:375-383(2002)；VanDoorn,AnnalsofBotany89:689-693(2002)；和Elgar,“CutFlowersandFoliage-CoolingRequirementsandTemperatureManagement(切花和叶-冷却要求和温度管理)”于hortnet.co.nz/pubIications/hortfacts/hf305004.htm(1998)(2007年3月20日最近登录)，所述文献全部通过引用的方式整体并入本文。本文中还公开了用于延迟叶脱落的方法。对于调节植物发育过程如成熟、衰老和脱落的方法，显著的商业意义存在于植物、果实、蔬菜和花卉产业中。技术人员将进一步认识到，本发明中公开的任何方法可以与用于延迟植物发育过程、尤其通常与增加的乙烯生物合成相关的那些过程(例如，果实/营养体成熟、花衰老和叶脱落)的其他已知方法组合。另外，如上文所述，在植物或植物部分被病原生物侵袭期间也观察到增加的乙烯产生。因此，所述方法可以进一步用于改善植物对病原体的应答。通常，可以在本文使用能够产生或受诱导以产生腈水合酶、酰胺酶、天冬酰胺酶或其任何组合的任何细菌细胞、真菌细胞、植物细胞或动物细胞。腈水合酶、酰胺酶和/或天冬酰胺酶可以在来自特定生物的细胞(例如，细菌细胞、真菌细胞、植物细胞或动物细胞)中组成型地产生或，可选择地，细胞可以产生所需的酶或仅在用合适的诱导剂“诱导”后产生酶。“组成型”意指本发明的至少一种酶在特定的细胞类型中连续地产生或表达。然而，如上文所述，其他细胞类型可能需要“诱导”以便以延迟目的植物发育过程的足够量或酶活性水平表达腈水合酶、酰胺酶和/或天冬酰胺酶。即，本发明的酶可以仅在暴露于合适诱导剂或用其处理后产生(或以足够的水平产生)。此类诱导剂是已知并且如上概述。例如，一种或多种细菌用诱导剂如天冬酰胺、谷氨酰胺、钴、脲或其任何混合物、更具体地用天冬酰胺、钴和脲的混合物处理。另外，如通过引用方式整体并入的题为“InductionandStabilizationofEnzymaticActivityinMicroorganisms(微生物中酶活性的诱导和稳定)”的美国专利No.7，531，343和7，531，344中公开，天冬酰胺酶I活性可以在补充有含酰胺氨基酸或其衍生物的培养基中的玫瑰红红球菌DAP96622(革兰氏阳性)或红球菌DAP96253(革兰氏阳性)内诱导出来。使用含酰胺氨基酸或其衍生物，也可以优选地诱导红球菌属的其他菌株以显示天冬酰胺酶I酶活性。在所公开的方法中也使用绿针假单胞菌(P.chloroaphis)(ATCC保藏号43051),其在天冬酰胺存在下产生天冬酰胺酶I活性，和酮戊二酸短杆菌(B.kletoglutamicum)(ATCC保藏号21533)，一种也已经证实产生天冬酰胺酶活性的革兰氏阳性细菌。表达腈水合酶，酰胺酶和/或天冬酰胺酶的真菌细胞(如来自镰刀菌属(Fusarium)的那些)、植物细胞和动物细胞也可以在本文中作为完整细胞或作为从其中分离一种或多种上述酶的来源使用。来自多种生物的几种腈水合酶、酰胺酶和天冬酰胺酶的核苷酸序列和氨基酸序列公开于可公共获得的序列数据库内。本领域已知的代表性腈水合酶和脂族酰胺酶的非限制性列表在表I和表2中并且在序列表中描述。表I和表2中提到的“蛋白质评分”提供基于质谱分析数据鉴定分离的蛋白质的置信区间百分比(置信区间％)的概述。表I:代表性腈水合酶的氨基酸序列信息权利要求1.一种用于在产生腈水合酶的微生物中诱导选自腈水合酶活性、酰胺酶活性、天冬酰胺酶I活性及其组合的酶活性的方法，包括在包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养所述产生腈水合酶的微生物。2.如权利要求I所述的方法，其中所述产生腈水合酶的微生物包括选自红球菌(Rhodococcus)属、短杆菌(Brevibacterium)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、假诺卡氏菌(Pseudonocardia)属、诺卡氏菌(Nocardia)属及其组合的细菌。3.如权利要求I所述的方法，其中所述酶活性包括腈水合酶活性。4.如权利要求I所述的方法，其中所述产生腈水合酶的微生物包括来自红球菌属的细菌。5.如权利要求I所述的方法，其中所述产生腈水合酶的微生物包括选自玫瑰红红球菌(Rhodococcusrhodochrous)DAP96622、红球菌DAP96253及其组合的细菌。6.如权利要求I所述的方法，其中所述海藻糖以至少4克/升培养基的浓度存在。7.如权利要求I所述的方法，其中所述海藻糖以至少I克/升培养基至10克/升培养基的浓度存在。8.如权利要求I所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸选自天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬酰胺衍生物、谷氨酰胺衍生物及其组合。9.如权利要求8所述的方法，其中所述含酰胺氨基酸包括天冬酰胺和天冬酰胺衍生物，并且其中所述天冬酰胺和天冬酰胺衍生物包括天然形式的天冬酰胺、无水天冬酰胺、天冬酰胺一水合物以及其L-异构体及D-异构体。10.如权利要求8所述的方法，其中所述含酰胺氨基酸包括谷氨酰胺和谷氨酰胺衍生物，并且其中所述谷氨酰胺和谷氨酰胺衍生物包括天然形式的谷氨酰胺、无水谷氨酰胺、谷氨酰胺一水合物以及其L-异构体及D-异构体。11.如权利要求I所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸包括天冬酰胺。12.如权利要求I所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以至少50ppm的浓度存在。13.如权利要求I所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以200ppm至2000ppm的浓度存在。14.如权利要求I所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以每百万50份(ppm)至5000ppm的浓度存在。15.如权利要求I所述的方法，其中所述培养基不含有任何含腈化合物。16.如权利要求I所述的方法，其中所述受诱导的产生腈水合酶的微生物具有的酶活性大于或等于在包含含腈化合物的培养基中诱导时同一种酶的活性。17.如权利要求I所述的方法，其中所述受诱导的产生腈水合酶的微生物具有的酶活性比在包含含腈化合物的培养基中诱导时同一种酶的活性大至少5%。18.如权利要求I所述的方法，其中所述培养基还包含钴。19.如权利要求I所述的方法，其中所述培养基还包含脲。20.如权利要求I所述的方法，其中所述培养基还包含麦芽糖或麦芽糊精。21.如权利要求I所述的方法，其中所述产生腈水合酶的微生物是至少部分固定的。22.一种用于稳定酶或能够产生所述酶的微生物中所需活性的方法，所述方法包括使所述酶或能够产生所述酶的微生物与包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸的组合物接触，其中所述酶选自腈水合酶、酰胺酶和天冬酰胺酶I。23.如权利要求22所述的方法，其中所述海藻糖以至少4克/升的浓度存在。24.如权利要求22所述的方法，其中所述海藻糖以至少I克/升至10克/升的浓度存在。25.如权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以至少50ppm的浓度存在。26.如权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以至少50ppm至5000ppm的浓度存在。27.如权利要求22所述的方法，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以200ppm至2000ppm的浓度存在。28.如权利要求22所述的方法，其中所述含酰胺氨基酸选自天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬酰胺衍生物、谷氨酰胺衍生物及其组合。29.如权利要求22所述的方法，其中所述含酰胺氨基酸包括天冬酰胺和天冬酰胺衍生物，并且其中所述天冬酰胺和天冬酰胺衍生物包括天然形式的天冬酰胺、无水天冬酰胺、天冬酰胺一水合物以及其L-异构体及D-异构体。30.如权利要求22所述的方法，其中所述含酰胺氨基酸包括谷氨酰胺和谷氨酰胺衍生物，并且其中所述谷氨酰胺和谷氨酰胺衍生物包括天然形式的谷氨酰胺、无水谷氨酰胺、谷氨酰胺一水合物以及其L-异构体及D-异构体。31.如权利要求22所述的方法，其中使所述酶或所述能够产生所述酶的微生物的所述所需活性稳定，从而所述所需活性在25°C的温度至少30天的时间后维持在由所述酶或所述能够产生所述酶的微生物所表现的初始活性的至少50%的水平。32.如权利要求22所述的方法，其中所述微生物包括选自红球菌属、短杆菌属、假单胞菌属、假诺卡氏菌属、诺卡氏菌属及其组合中的细菌。33.如权利要求22所述的方法，其中所述微生物包括选自玫瑰红红球菌DAP96622、红球菌DAP96253及其组合的细菌。34.如权利要求22所述的方法，其中所述组合物不含有任何含腈化合物。35.如权利要求22所述的方法，其中所述组合物还包含钴、脲、麦芽糖、麦芽糊精及其组合。36.如权利要求22所述的方法，其中所述微生物是至少部分固定的。37.一种组合物，包含(a)营养培养基，其包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸；(b)一种或多种能够产生一种或多种酶的微生物,所述酶选自腈水合酶、酰胺酶、天冬酰胺酶I及其组合；和(C)选自腈水合酶、酰胺酶、天冬酰胺酶I及其组合的一种或多种酶。38.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种微生物包括选自红球菌属、短杆菌属、假单胞菌属、假诺卡氏菌属、诺卡氏菌属及其组合中的细菌。39.如权利要求37所述的组合物，其中所述海藻糖以至少4克/升培养基的浓度存在。40.如权利要求37所述的方法，其中所述海藻糖以至少I克/升培养基至10克/升培养基的浓度存在。41.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸选自天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬酰胺衍生物、谷氨酰胺衍生物及其组合。42.如权利要求37所述的组合物，其中所述含酰胺氨基酸包括天冬酰胺和天冬酰胺衍生物，并且其中所述天冬酰胺和天冬酰胺衍生物包括天然形式的天冬酰胺、无水天冬酰胺、天冬酰胺一水合物以及其L-异构体及D-异构体。43.如权利要求37所述的组合物，其中所述含酰胺氨基酸包括谷氨酰胺和谷氨酰胺衍生物，并且其中所述谷氨酰胺和谷氨酰胺衍生物包括天然形式的谷氨酰胺、无水谷氨酰胺、谷氨酰胺一水合物以及其L-异构体及D-异构体。44.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸包括天冬酰胺。45.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以至少50ppm的浓度存在。46.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种含酰胺氨基酸以200ppm至2000ppm的浓度存在。47.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种微生物包括选自红球菌属的细菌。48.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种微生物包括选自玫瑰红红球菌、红球菌DAP96253、酮戍二酸短杆菌(Brevibacteriumketoglutaricum)及其组合的细菌。49.如权利要求37所述的组合物，其中所述一种或多种微生物是至少部分固定的。50.如权利要求37所述的组合物，其中所述培养基还包含钴。51.如权利要求37所述的组合物，其中所述培养基还包含脲。52.如权利要求37所述的组合物，其中所述培养基不含有任何含腈化合物。53.如权利要求37所述的组合物，其中所述培养基还包含麦芽糖或麦芽糊精。54.一种用于延迟植物发育过程的方法，包括使植物或植物部分暴露于一种或多种酶，其中所述酶通过在包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养一种或多种细菌而由所述细菌产生，并且其中使所述酶以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于所述植物或植物部分。55.—种用于延迟植物发育过程的方法,包括使植物或植物部分暴露于一种或多种细菌的酶提取物，其中所述细菌在包含海藻糖和一种或多种含酰胺氨基酸的培养基中培养，并且其中使所述酶提取物以足够延迟所述植物发育过程的量暴露于所述植物或植物部分。全文摘要本文提供的是用于诱导和稳定酶活性的方法。任选地，酶处于能够产生所述酶的微生物中。在一些实施方案中，所述酶可以是腈水合酶、酰胺酶或天冬酰胺酶I。提供的是包含具有受诱导和/或稳定的活性的酶或微生物的组合物。还提供的是通过使植物或植物部分暴露于具有受诱导和/或稳定的活性的酶或微生物而延迟植物发育过程的方法。文档编号C12N9/14GK102770535SQ201180006968公开日2012年11月7日申请日期2011年1月24日优先权日2010年1月25日发明者T·A·图克,乔治·E·皮尔斯申请人:佐治亚州立大学研究基金会