利用北虫草废渣废料转化抗氧化肽功能因子的生产工艺的制作方法
【专利摘要】利用北虫草废渣废料转化抗氧化肽功能因子的生产工艺，属于生物化学工程【技术领域】。是以北虫草生产过程中产生的废渣废料作为原料，以超声波技术，多种蛋白酶复配的可控酶解技术、并集成超滤膜和层析分离技术逐级分离制备了具有生物活性的小分子肽功能因子，具有理想的抗氧化及抗衰老功能。用本发明建立的生产工艺，提取分离的小分子肽功能因子不仅具有显著的生物活性，还具有成本低、原料易得、制备过程简单，变废为宝，符合环保理念的特点。更重要的是能够大规模生产，且具有很好的稳定性和安全指标高等优势。可以用于制药、保健品和食品、化妆品等领域。同时解决了北虫草生产过程中废渣废料的综合利用，提高了资源开发利用度，具有一定的实用价值。
【专利说明】利用北虫草废渣废料转化抗氧化肽功能因子的生产工艺
【技术领域】:
[0001]本发明属于生物化学工程【技术领域】，涉及利用北虫草废渣废料转化抗氧化小分子肽功能因子的提取分离、酶解和纯化工艺过程。
【背景技术】:
[0002]利用本项发明建立的生产工艺获得的小分子肽功能因子，是以北虫草生产过程中产生的废渣废料作为原料，以超声波技术，多种蛋白酶复配的可控酶解技术、并集成超滤膜分离技术逐级分离制备了具有生物活性的小分子肽功能因子，经紫外分光度计检测含量达14%。生物活性检测表明:其抗氧化能力(谷胱甘肽法)，谷胱苷肽的羟自由基清除率138.47%，而这种小分子肽功能因子为1453.33%，在线粒体褐质脂生成量指标检测中，随着小分子肽的浓度增加，褐质脂的生成量逐渐减少，当小分子肽功能因子的量为> 25mg时，抑制率达到原来的63.12%，具有理想的抗氧化及抗衰老的生物功能。用本发明的工艺，提取分离的小分子肽功能因子不仅具有显著的生物活性，还具有成本低、原料易得、制备过程简单，变废为宝，符合环保理念的特点。更重要的是能够大规模生产，且具有很好的稳定性和安全指标高等优势。
【发明内容】
:
[0003]本发明的目的是建立一种将北虫草生产过程中产生的废渣废料，转化成具有生物活性小分子肽功能因子的生产工艺。
[0004]具体工艺技术实施方式:
[0005]1、废渣废料的预处理
[0006]将鲜虫草废渣废料置40°C烘`干至恒重，用粉碎机粉碎，过80目筛，取定量的废渣废料干粉，用溶剂(去离子水)浸透干粉并盖过固体表面，置室温水浴浸泡lh。
[0007]2、超声波破碎
[0008]将上述溶液在50~100W条件下超声破碎10~20s，间隔10~20s，反复3~5次，用去离子水定容，比例:50/1000 (g/ml)。
[0009]3、复配酶解
[0010]将上述溶液加热至45~60°C，恒温后间隔30min，依次分别按3%和5%的比例加纤维素酶和木瓜蛋白酶，酶解3h后，100°C灭酶20min，冷却。
[0011]4、超滤与层析
[0012]将上述溶液用4层纱布过滤后，用分子量10万~5万的超滤膜超滤，再用分子量I万~0.3万的超滤膜超滤,获得淡橙黄色液体I升,再建立Matrex Cellufine Sulfate亲和层析与Sephar0Se4FF凝胶过滤的多柱串联层析纯化方法。过膜除菌后装瓶密封备用。
[0013]5.含量与生物活性检测
[0014]按照上述工艺，100g原料获得小分子肽功能因子约6mg/ml (原液)。抗氧化指标检测结果(谷胱甘肽法):在同等剂量情况下，谷胱苷肽的羟自由基清除率138.47%，而这种小分子肽功能因子为1334.33%，在线粒体褐质脂生成量指标检测中，当小分子肽功能因子的量为> 25mg时，抑制率达到原来的63.12%。
[0015]本发明的实用意义:
[0016]小分子肽功能因子是具有重要生物活性的寡肽。是沟通细胞间和器官间信息的一类重要的化学信使，通过内分泌、神经分泌等方式行使微妙的信息传递功能，是机体生长、发育、繁殖、代谢等生命过程的重要调节剂。其分子量分布由二肽到复杂的线性或环型结构的寡肽不等，正是这些小分子肽功能因子的作用使机体维持其一系列的高密度控制系统。值得关注的是某些蛋白质本身并无生理作用或作用很低，而它的水解片段却具有很强的生理活性。本发明获得小分子肽功能因子安全性高，酶解过程容易控制，加之其生理功能强，具有用量少的独特优势。其抗氧化和抗衰老的功能，可以用于制药、保健品和食品、化妆品等领域。同时解决了北虫草生产过程中废渣废料的综合利用，提高了资源开发利用度，具有一定的实用价值。
【权利要求】
1.利用北虫草废渣废料转化抗氧化肽功能因子的生产工艺，其特征在于包括以下步骤: (1)废渣废料的预处理:将鲜虫草废渣废料置40°c烘干至恒重，用粉碎机粉碎，过80目筛，取定量的废渣废料干粉，用溶剂(去离子水)浸透干粉并盖过固体表面，置室温水浴浸泡Ih。 (2)超声波破碎:将上述溶液在50~100W条件下超声破碎10~20s，间隔10~20s，反复3~5次,用去离子水定容，比例:50/1000 (g/ml)。 (3)复配酶解:将上述溶液加热至45~60°C，恒温后间隔30min，依次分别按3%和5%的比例加纤维素酶和木瓜蛋白酶,酶解3h后，100°C灭酶20min，冷却。 (4)超滤与层析:将上述溶液用4层纱布过滤后，用分子量10万~5万的超滤器膜滤，再用分子量I万~0.3万的超滤膜超滤，获得淡橙黄色液体I升，再建立Matrex CellufineSulfate亲和层析与Sepharose4FF凝胶过滤的多柱串联层析纯化方法。过膜除菌后装瓶密封备用。 (5)含量与生物活性检测:按照上述工艺，100g原料获得小分子肽功能因子约6mg/ml (原液)。抗氧化指标检测结果(谷胱甘肽法):在同等剂量情况下，谷胱苷肽的羟自由基清除率138.47%，而这种小分子肽功能因子为1334.33%，在线粒体褐质脂生成量指标检测中，当小分子肽功能因子的量为> 25mg时，抑制率达到原来的63.12%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的蛋白酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶，及其酶解底物的比例3 %和5 %。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的建立了Matrex Cellufine Sulfate亲和层析与Sepharose4FF凝胶过滤的多柱串联层析纯化方法。
4.根据权利要求1所述的方法中(I)~(4)所述的生产工艺过程。
【文档编号】C12P21/06GK103509841SQ201210217121
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月28日 优先权日:2012年6月28日
【发明者】王洪军, 王绍坤, 周小洲, 吴益民 申请人:王洪军, 王绍坤, 周小洲, 吴益民