专利名称：一种抗氧化肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及到食品加工领域，具体指一种抗氧化肽的制备方法。
背景技术：
花蛤，学名菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum),是帘蛤科双壳贝类,其肉质细嫩，滋味鲜美，营养丰富，是我国传统的养殖贝类。但是，随着花蛤养殖产业的快速发展，产量迅速增加，已出现供过于求的趋势。因此，如何充分高效地利用花蛤资源，开发花蛤加工利用的新途径具有重大意义。花蛤蛋白质含量高，游离氨基酸种类丰富，是优质的蛋白源。CN1768765A公开了一种利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解牡蛎蛋白获得抗氧化肽的方法。以上公开的这些方法都是通过酶解天然蛋白质，得到抗氧化多肽。但是，蛋白质在酶解过程中，受到许多因素的影响，酶解工艺条件严格，酶解反应进程难以控制，酶解产 物种类及活性成分含量不稳定，难以规模化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种反应进程易于控制且产物活性好的抗氧化肽的制备方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为该抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括下述步骤①将新鲜花蛤煮至壳开，去壳，将花蛤肉在35_50°C真空烘干；②将烘干的花蛤肉粉碎，过50-100目筛，得到初级花蛤肉粉末；③将所述的花蛤肉粉末按照Ig粉末，10_20mL石油醚的比例放入，振荡，常温静置I小时，过滤，将滤渣重复上述操作2-3次进行脱脂；④将上述脱脂后的花蛤肉粉末置于50_70°C真空干燥箱中，去除石油醚，得到中级花蛤肉粉末；⑤用蒸馏水与中级花蛤肉粉末混合，配制成质量浓度为5-30%的悬浮液；调节悬浮液的PH为4. 5-9. 0，加入中级花蛤肉粉末质量O. 5-5. 0%的Alcalase蛋白酶，于45_75°C下酶解1-3小时，然后再在95-100°C下灭酶5-10min ;将得到的酶解液在3000-12000rpm下离心，得到的上清液即为花蛤蛋白水解液；⑥对上述花蛤蛋白水解液进行超滤除去大分子，过分子量10-50KDa的超滤膜，收集透过液；⑦将上述透过液真空浓缩至固形物含量为15-50%，加入葡萄糖，葡萄糖在浓缩后的透过液中的浓度为I. 0-10%，在110-120°c下反应30-90min，得到反应产物；⑧将上述反应产物用S印hadex G_25凝胶层析，以纯水为洗脱剂，洗脱液在420nm下检测，收集洗脱液组分；⑨将上述洗脱液组分真空冷冻干燥至水分含量为1_5%，即得到黄色粉末状的抗氧化肽。与现有技术相比，本发明所提供的抗氧化肽的制备方法使用生物酶制剂对花蛤蛋白进行水解，酶解条件相比控制水解更加简单可控，反应条件温和，且避免了酸水解对产品的污染，酶解产物的种类和含量更加稳定，抗氧化肽得率高，且利用真空干燥技术，在干燥过程中最大限度的保证了抗氧化肽的活性，使其抗氧化功能大大增加，制成的花蛤抗氧化肽粉，功能性强，易保存；且生产工艺简单、易于工业化生产，也为花蛤的深加工利用开辟了新途径。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。本实施例中抗氧化肽的制备方法包括下述步骤
①将新鲜花蛤煮至壳开，去壳，将花蛤肉在50°C下真空烘干；②将烘干的花蛤肉粉碎，过80目筛，得到初级花蛤肉粉末；③将所述的花蛤肉粉末按照Ig粉末，IOmL石油醚的比例加入，振荡，常温静置I小时，过滤，将滤渣重复上述操作3次进行脱脂；④将上述脱脂后的花蛤肉粉末置于50°C真空干燥箱中，去除石油醚，得到中级花蛤肉粉末；⑤用蒸馏水与中级花蛤肉粉末混合，配制成质量浓度为10%的悬浮液；调节悬浮液的PH为8. 0，加入中级花蛤肉粉末质量1%的Alcalase蛋白酶，65°C下酶解3小时，然后再95°C下灭酶IOmin ;将得到的酶解液在3000rpm离心，得到的上清液即为花蛤蛋白水解液；⑥对上述花蛤蛋白水解液进行超滤除去大分子，过分子量10_50KDa的超滤膜，收集透过液；⑦将上述透过液真空浓缩至固形物含量为15%，加入葡萄糖，葡萄糖在浓缩后的透过液中的浓度为6. 0%，在120°C下反应60min，得到反应产物；⑧将上述反应产物用S印hadex G_25凝胶层析，以纯水为洗脱剂，洗脱液在420nm下检测，收集洗脱液组分。采用葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析，主要作用是除去杂质，收集抗氧化组分。⑨将上述洗脱液组分真空冷冻干燥至水分含量在3%，即得到黄色粉末状抗氧化肽。将得到的抗氧化肽配制成5mg/mL的溶液，取lmL。加入ImL磷酸缓冲液(O. 2mol/L，pH6. 6)及ImL质量浓度为1%的铁氰化钾溶液，混匀，50°C下水浴反应20min后在2min内冷却至室温，然后加入ImL质量浓度为10%的三氯乙酸终止反应,混匀后在3000rpm下离心IOmin ;取ImL上清液，依次加入3mL蒸馏水及O. 2mL质量浓度为O. 1%的三氯化铁，混合均匀，于700nm处测定吸光度。以水代替质量浓度为5mg/mL抗氧化肽溶液，重复上述实验作为空白对照，吸光值越大，表示还原力越强。本实施例抗氧化肽的还原力如表I所示。将得到的抗氧化肽配制成5mg/mL的溶液，取O. ImL试样溶液，加O. 2mmol/LDPPH ·甲醇溶液3. 9mL，室温下避光反应30min。以甲醇做参比，517nm波长下测其吸光值。用下式计算清除率
权利要求
1.一种抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括下述步骤 ①将新鲜花蛤煮至壳开，去壳，将花蛤肉在35-50°C真空烘干； ②将烘干的花蛤肉粉碎，过50-100目筛，得到初级花蛤肉粉末； ③将所述的花蛤肉粉末按照Ig粉末，10-20mL石油醚的比例放入，振荡，常温静置I小时，过滤，将滤渣重复上述操作2-3次进行脱脂； ④将上述脱脂后的花蛤肉粉末置于50-70°C真空干燥箱中，去除石油醚，得到中级花蛤肉粉末； ⑤用蒸馏水与中级花蛤肉粉末混合，配制成质量浓度为5-30%的悬浮液；调节悬浮液的PH值为4. 5-9. 0，加入中级花蛤肉粉末质量O. 1-5. 0%的Alcalase蛋白酶，于45_75°C下酶解1-3小时，然后再于95-100°C下灭酶5-10min ;将得到的酶解液在3000-12000rpm离心，得到的上清液即为花蛤蛋白水解液； ⑥对上述花蛤蛋白水解液进行超滤除去大分子，过分子量10-50KDa的超滤膜，收集透过液； ⑦将上述透过液真空浓缩至固形物含量为15-50%，加入葡萄糖，葡萄糖在浓缩后的透过液中的浓度为I. 0-10%，在110-120°C下反应30-90min，得到反应产物； ⑧将上述反应产物用S印hadexG-25凝胶层析，以纯水为洗脱剂，洗脱液在420nm下检测，收集洗脱液组分； ⑨将上述洗脱液组分真空冷冻干燥至水分含量在1_5%，即得到黄色粉末状抗氧化肽。
全文摘要
本发明涉及到一种抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括下述步骤将花蛤肉在真空烘干后过50-100目筛，得到的初级花蛤肉粉末放入石油醚中脱脂，去除石油醚，得到的中级花蛤肉粉末与蒸馏水混合，配制悬浮液，加入蛋白酶酶解，将得到的酶解液在离心后的上清液超滤除去大分子，透过液浓缩后加入葡萄糖反应，得到的反应产物纯化后即为抗氧化肽。与现有技术相比，本发明所提供的抗氧化肽的制备方法酶解条件简单可控，反应条件温和，且避免了酸水解对产品的污染，酶解产物的种类和含量更加稳定，抗氧化肽得率高，功能性强，易于工业化生产，为花蛤的深加工利用开辟了新途径。
文档编号A23J3/04GK102870954SQ20121041464
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月25日 优先权日2012年10月25日
发明者张慧恩, 杨华, 王彩霞 申请人:浙江万里学院