蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺的制作方法
【专利摘要】本发明属于生物发酵领域，涉及蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，通过技术革新利用枯草芽孢杆菌表达蜜蜂抗菌肽产品，选用优化发酵配方和工艺，提供了一种高含量蜜蜂抗菌肽产品发酵生产工艺，使蜜蜂抗菌肽发酵液含量达到100-120μg/mL，干燥后产品抗菌肽含量达到0.9-1.0mg/g。该发酵工艺简便、质量稳定，可规模化生产，优化养殖生态环境，生产周期短且成本低廉。
【专利说明】蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物发酵领域，更具体地说是关于蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺。
【背景技术】
[0002] 近年来养殖业滥用抗生素的现象引起了越来越广泛的关注，滥用抗生素导致其在 畜产品中残留以及细菌耐药性的产生，严重威胁人类健康。蜜蜂抗菌肽是指一类来源于昆 虫富含脯氨酸，长度为18-20个氨基酸的抗菌肽，是目前已知的最大抗菌肽家族，专对革兰 氏阴性菌有抑菌作用。蜜蜂抗菌肽能够进入大肠杆菌和沙门氏菌，与目标蛋白DnaK结合， 明显抑制DnaK的ATPase活性；并降低DnaK蛋白分子伴侣的作用从而显著抑制胞内β -半 乳糖苷酶和碱性磷酸酶等蛋白活性，最终抑制细菌细胞正常代谢而死亡，并且对机体无毒 无害无残留。这使得其成为抗生素替代物的绝佳选择之一，对畜牧业健康和可持续发展有 重要意义。
[0003] 但是天然蜜蜂抗菌肽很难得到，化学合成蜜蜂抗菌肽成本太高，因此发酵工程成 为了令人瞩目的大规模生产蜜蜂抗菌肽方法。
【发明内容】
[0004] 1.本发明通过技术革新利用枯草芽孢杆菌表达蜜蜂抗菌肽产品，选用优化发酵配 方和工艺，提供了一种高含量蜜蜂抗菌肽产品发酵生产工艺。
[0005] 2.制备蜜蜂抗菌肽工艺按以下步骤实现：
[0006] 1)工艺流程：配料一发酵一双效浓缩一喷雾干燥一成品。
[0007] 2)优选的发酵培养基配方：玉米粉10-40g，豆柏10-40g，木薯10-20g，蛋白胨 5_20g，葡萄糖（或蔗糖）2-20g，再少量加入其他营养成分如：酵母粉，硫酸铵，硝酸铵，硫酸 镁，硫酸猛，磷酸盐等，水l〇〇〇mL。
[0008] 3)所述发酵培养基加氢氧化钠调节初始pH :7. 0-8. 0
[0009] 4)接种：接种量1-10%。
[0010] 5)发酵：温度 30-37°C，发酵 24-32h。
[0011] 6)喷雾干燥：进风温度：140-180°C，出风：80-100°C。
[0012] 3.本发明以玉米、大豆、木薯加工品为原料，附加一些营养物，进行发酵，原料低 廉，抗菌肽发酵液含量达到100-120 μ g/mL，干燥后产品抗菌肽含量达到0. 9-1. Omg/g。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1
[0014] 发酵规模：10m3。1L发酵培养液含：玉米粉15g，豆柏15g，木薯10g，蛋白胨5g，葡萄 糖5g，硫酸铵5g，硫酸镁0. 8g。用氢氧化钠调pH7. 5。培养液经温度121°C，罐压0. 08Mpa， 维持时间30min灭菌。枯草芽孢杆菌菌种接种量为5X 106CFU/mL。发酵培养温度：34°C，通 气量：600m3/h，搅拌速度：120r/min，pH7. 0。发酵培养时间：32h。
【权利要求】
1. 本发明通过技术革新利用枯草芽孢杆菌表达蜜蜂抗菌肽产品，选用优化发酵配方和 工艺，提供了一种高含量蜜蜂抗菌肽产品发酵生产工艺，制备蜜蜂抗菌肽工艺按以下步骤 实现： 1) 工艺流程：配料一发酵一双效浓缩一喷雾干燥一成品； 2) 优选的发酵培养基配方：玉米粉10_40g，豆柏10-40g，木薯10-20g，蛋白胨5-20g， 葡萄糖（或蔗糖）2-20g，再少量加入其他营养成分如：酵母粉，硫酸铵，硝酸铵，硫酸镁，硫 酸猛，磷酸盐等，水lOOOmL ; 3) 所述发酵培养基加氢氧化钠调节初始pH :7. 0-8. 0 ; 4) 接种：接种量1-10% ; 5) 发酵：温度30-37°C，发酵24-32h ; 6) 喷雾干燥：进风温度：140-180°C，出风：80-100°C。
2. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：每1L发酵培养基含 玉米粉15g，豆柏15g，木薯10g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，硫酸铵5g，硫酸镁0. 8g，用氢氧化钠 调PH7. 5,培养液经温度121°C，罐压0. 08Mpa，维持时间30min灭菌。
3. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：枯草芽孢杆菌菌 种接种量为5X106CFU/mL，发酵培养温度：34°C，通气量：600m 3/h，搅拌速度：120r/min， PH7. 0,发酵培养时间：32h。
4. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：每1L发酵培养基含 玉米粉40g，豆柏40g，20g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，硫酸铵5g，酵母粉5g，磷酸氢二钾5g，用 氢氧化钠调PH8. 0,培养液经温度120°C，罐压0. 15Mpa，维持时间30分钟灭菌。
5. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：枯草芽孢杆菌菌种 接种量为lXl〇8CFU/mL，发酵培养温度：32°C，通气量：900m 3/h，搅拌速度：150r/min，pH : 6. 5,发酵培养时间：24h。
6. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：每1L发酵培养基含 玉米粉l〇g，豆柏l〇g，蛋白胨5g，蔗糖2g，硫酸铵5g，用氢氧化钠调pH7. 0,培养液经温度 121°C，罐压0. lOMpa，维持时间30分钟灭菌。
7. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：枯草芽孢杆菌菌种 接种量为lXl〇7CFU/mL，发酵培养温度：37°C，通气量：680m 3/h，搅拌速度：180r/min，pH : 6.0,发酵培养时间：27h。
8. 根据权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽发酵生产工艺，其特征在于：以玉米、大豆、木薯 加工品为原料，附加一些营养物，进行发酵，原料低廉，抗菌肽发酵液含量达到100-120 μ g/ mL，干燥后产品抗菌肽含量达到0. 9-1. 0mg/g。
【文档编号】C12R1/125GK104099390SQ201310120420
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年4月9日 优先权日:2013年4月9日
【发明者】张魁, 樊奇 申请人:广州市纽溢乐商贸有限公司