专利名称：新型麦芽寡糖基海藻糖水解酶、酶基因、含该基因的重组表达载体及重组工程菌及酶的制备的制作方法
技术领域：
本发明属于基因工程和酶工程领域，具体涉及麦芽寡糖基海藻糖水解酶及其表达基因、含有该基因的重组表达载体及重组工程菌，以及利用含有该基因的重组工程菌制备该酶的方法。
背景技术：
海藻糖(Trehalose)是一种由两个葡萄糖分子通过半缩醛羟基以a _1，1糖苷键结合的非还原性糖，分子式为C12H22O11,相对分子量为378.33。其结构式如
图1所示:
权利要求
1.一种麦芽寡糖基海藻糖水解酶，其特征是:具有如SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶，其特征是:具有以下特性: (1)最适作用温度 当pH5.3温育60 min，最适作用温度60°C ； (2)最适作用pH 当60°C温育60 min,最适pH为5.3 ; (3)热稳定性 当于pH5.3温浴60 min,在高达70°C下稳定； (4)pH稳定性 当于60°C温浴60 min,在pH4.5-6.5下稳定。
3.根据权利要求1或2所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶，其特征是:由下列任意一种基因表达而得: 基因1:含有SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列的基因； 基因2:含有由SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列因遗传密码子的兼并性而取代一个或多个碱基所形成的核苷酸序列的基因，该基因的核苷酸序列不改变由SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列； 基因3:含有基因I或基因2中互补核苷酸序列的基因。
4.一种表达权利要求1或2所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的基因。
5.根据权利要求4所述的基因，其特征是:含有下列任意一种的核苷酸序列: 核苷酸序列1:如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列； 核苷酸序列2:由SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列因遗传密码子的兼并性而取代一个或多个碱基所形成的核苷酸序列，该核苷酸序列不改变由SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列； 核苷酸序列3:核苷酸序列I或核苷酸序列2的互补核苷酸序列。
6.含有权利要求4或5所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的基因的重组表达载体；所述重组表达载体优选由表达载体pET24a (+)和权利要求5或6所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的基因构建而成。
7.含有权利要求4或5所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的基因的重组工程菌。
8.根据权利要求7所述的重组工程菌，其特征是:将权利要求6所述的重组表达载体转入大肠杆菌中构建而成；所述大肠杆菌优选为大肠杆菌BL21。
9.一种制备麦芽寡糖基海藻糖水解酶的方法，其特征是:通过培养权利要求7或8所述的重组工程菌制得。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征是:具体包括以下步骤:将重组工程菌在含有0.10-0.30 mMol/L卡那霉素的LB液体培养基中34-37°C培养12-15 h后，降温至26-29°C，加入终浓度为0.1-0.3 mMol/L的IPTG或者0.3-0.5 mMol/L的乳糖作为诱导剂，在26_29°C下诱导培养12-18 h，然后 离心或过滤收集菌体细胞；将菌体细胞破碎、离心收集上清液，得含麦芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液。
全文摘要
本发明公开了一种麦芽寡糖基海藻糖水解酶、该酶的基因、含有该基因的重组表达载体及重组工程菌及酶的制备方法，所述水解酶具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列，可以由含有SEQIDNO:4所示的核苷酸序列的基因或该基因的突变体或者它们的互补序列表达而得。本发明水解酶MTHase具有较高的最适反应温度和热稳定性，具有较低的最适pH，降低了染菌风险，提高了生产的稳定性，显著提高了其和普鲁兰酶联合作用还原性淀粉水解物生产海藻糖的效率。本发明得到表达酶的基因，可通过基因重组技术生产MTHase，酶表达量高，制备效率显著提高，成本显著降低，降低了海藻糖的生产成本。
文档编号C12N9/24GK103194434SQ20131012871
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月15日 优先权日2013年4月15日
发明者陈平平, 张全景, 付吉明, 刘敏, 庄祎, 王乔隆, 李慧君, 郑秀宁 申请人:山东天力药业有限公司