一种用于大麦小孢子培养愈伤组织诱导的培养基的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种用于大麦小孢子培养愈伤组织诱导的培养基，所述诱导培养基依据N6培养基配方配制而成，但其KNO3浓度为0-2500mg/L，(NH4)SO4的浓度为0-400mg/L，且添加有400-2500mg/L的水解干酪素和/或400-2500mg/L的谷氨酰胺。本发明也包括使用本发明诱导培养基诱导培养大麦小孢子愈伤组织并获得再生植株的方法，以及含有本发明的诱导培养基和任选的分化培养基和生根壮苗培养基的套盒。本发明的整个过程都在实验室可控条件下进行，结果真实可靠，获得的愈伤组织经过分化可以获取大量纯合的再生植株。
【专利说明】一种用于大麦小孢子培养愈伤组织诱导的培养基
【技术领域】
[0001]本发明属于植物生物【技术领域】，涉及谷类作物小孢子的诱导培养基改良，以此获取大量愈伤组织及加倍单倍体(DH)再生植株的方法。
【背景技术】 [0002]植物细胞具有全能性，即每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力。在适宜条件下，任何一个细胞都可以发育成一个新的个体。植物细胞全能性是植物组织培养的理论基础。植物的小孢子是一种处于特殊发育时期的细胞，具有单倍体、单细胞的特性，因而小孢子培养系统可用于细胞脱分化再分化机理的研究、构建加倍单倍体(DH)作图群体、突变体筛选、单倍体原生质体培养及融合以及单倍体的转基因受体。在杂交育种中，对杂种后代的选择是重要的一环，由于杂种后代遗传组成高度杂合，性状不断分离，往往要经过4-5次田间选择才能得到性状稳定的重组型材料，耗费大量的人力物力。利用小孢子培养方法诱导可以产生100%单倍体植株，通过染色体加倍，在I个世代中即可获得能正常结实的、纯合的二倍体植株，等位基因不会在以后的世代中由于分离而丢失，可以避免杂种后代的严重分离，从而加速性状重组过程，缩短育种年限，使各种性状得以表现出来，极大地提高选择效率。小孢子培养的愈伤组织产量及质量决定了再生绿苗的数量，所以，诱导培养基的优劣在很大程度上决定了小孢子培养方法的有效性。到目前为止，谷类作物小孢子培养的效果较差，其中，愈伤组织诱导率较低是主要的限制因子。因此，研发提高小孢子培养愈伤组织诱导率的方法，对于建立高效的谷类作物小孢子培养体系具有至关重要的作用。
【发明内容】
[0003]本发明针对小孢子培养中基因型的限制和愈伤组织产量低的不足，提供一种愈伤组织诱导培养基。 [0004]本发明以现有的N6培养基为基础。N6培养基是禾谷类作物细胞和组织培养的常用诱导培养基，氮素是培养基中最重要的成分。常规的N6培养基的成分基本如下表1所示，不同厂商或文献所记载的不同成分的浓度或许有些许差别，但其功能都大致相同:
[0005]表1:N6培养基的配方(单位:mg/L):
[0006]
【权利要求】
1.一种诱导培养基，所述诱导培养基依据N6培养基配方配制而成，其特征在于，所述培养基中KNO3浓度为0-2500mg/L，(NH4) SO4的浓度为0_400mg/L，且所述诱导培养基还添加有400-2500mg/L的水解干酪素和400_2500mg/L的谷氨酰胺。
2.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述培养基中KNO3的浓度为650-2200mg/L, (NH4) SO4 的浓度为 100_350mg/L。
3.如权利要求1或2所述的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基含有37.3-74.6mg/L 的 Na2EDTA 和 27.8-55.6mg/L 的 FeSO4.7H20。
4.如权利要求1一 3中任一项所述的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基还添加有肌醇 100-200mg/L、2，4，5-T 和 / 或 2，4-D0.4-1.2mg/L、ΚΤ0.3-0.8mg/L、和麦芽糖60-120g/L。
5.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述培养基的配方如下所示:
6.一种套盒，该套盒含有权利要求1 一 5中任一项所述的诱导培养基和任选的分化培养基和生根壮苗培养基。
7.如权利要求6所述的套盒，其特征在于，所述分化培养基为添加了6-BA0.3-1.2mg/L、KT0.5-2.0mg/L、NAA0.01-0.lmg/L 和麦芽糖 10_50g/L2/3MS 分化培养基，pH 为 5.5-6.2 ；所述生根壮苗培养基为添加有ΝΑΑ0.02-0.08mg/L、多效唑2.0-10.0mg/L和蔗糖10_40g/L，pH5.6-6.0的1/2MS生根壮苗培养基。
8.一种大麦小孢子愈伤组织的诱导培养方法，其特征在于，该方法包括用权利要求1 - 5任一项所述的诱导培养基诱导培养大麦小孢子，从而获得愈伤组织。
9.一种制备大麦再生植株的方法，其特征在于，该方法包括: (I)用权利要求1 一 5中任一项所述的诱导培养基诱导培养大麦小孢子，从而获得愈伤组织；和(2)用分化培养基培养将步骤(1)获得的愈伤组织，从而获得再生植株。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法还包括:(3)用生根壮苗培养基培养步 骤(2)所获得的再生植株。
【文档编号】C12N5/04GK103583369SQ201310596632
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月22日 优先权日:2013年11月22日
【发明者】陆瑞菊, 黄剑华, 王亦菲, 陈志伟, 刘成洪, 杜志钊, 何婷, 高润红, 徐红卫, 郭桂梅 申请人:上海市农业科学院