Cik细胞培养方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种CIK细胞培养方法及其应用，所述CIK细胞培养方法包括步骤：A）取外周血，并分离外周血单个核细胞；B）将单个核细胞接种到培养装置中进行培养，对培养单个核细胞的培养液中加入细胞因子；C）培养14-28天，收获CIK细胞。本发明用采用少因子体系进行CIK细胞培养，细胞扩增比例达到使用传统扩增方法所获得的比例，且因子的使用量较小，降低了细胞培养成本，增加了培养效果的稳定性。
【专利说明】CIK细胞培养方法及其应用
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于细胞培养领域，尤其是涉及一种CIK细胞培养方法及其应用。
【背景技术】
[0003]随着肿瘤免疫 学的发展，越来越多的研究表明，杀伤细胞过继免疫治疗对于消除残留的肿瘤病灶、促进患者免疫系统的重建具有良好的效果，并逐步成为化学治疗和造血干细胞移植后清除残留肿瘤细胞的重要治疗手段。CIK细胞主要表达⑶3 +和⑶56 +表面分子，通过穿孔素和颗粒酶介导的细胞毒作用和增强IL-12、INF-y等细胞因子的作用来杀伤肿瘤细胞，在肿瘤发生、转移和监视中显示出重要的抗肿瘤和排斥肿瘤细胞的作用；经典的CIK细胞培养方法需要通过多种细胞因子的共同培养诱导，如IFN- Y、IL-2、抗⑶3Ab和IL-1 α等。
[0004]CIK细胞是一群来源于血液T细胞的异质性细胞群体，通过穿孔素和颗粒酶介导的细胞毒作用和增强IL-12、INF-y等细胞因子的作用来杀伤肿瘤细胞，⑶3 +⑶56 +细胞是其中主要的效应细胞。
[0005]Schmidt 于 1991 年建立的由 IL-1、IL-2、IFN-Y、Anti_CD3Ab 等细胞因子组成的“经典”的CIK扩增方案目前已被全球众多的研究者所采纳。近年以此为基础，一些其他的细胞因子也开始被尝试用于扩增CIK细胞，如Ant1-CD28、IL-15、IL-24、SCF、FLT3L等。
[0006]多因子的培养体系会增加免疫细胞过继治疗的费用，增大培养诱导过程中潜在的污染风险，同时也因为多种因子的使用使得培养效果可重复性和稳定性降低，因此探索建立有效的少因子CIK细胞培养体系十分必要。
[0007]
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供一种少因子CIK细胞培养体系。
[0009]本发明采用的技术方案为:
一种CIK细胞培养方法，包括步骤:
A)取外周血，并分离外周血单个核细胞；
B)将单个核细胞接种到培养装置中进行培养，对培养单个核细胞的培养液中加入细胞因子；
C)培养14-28天，收获CIK细胞。
[0010]本发明用采用少因子体系进行CIK细胞培养，细胞扩增比例达到使用传统扩增方法所获得的比例，且因子的使用量较小，降低了细胞培养成本，增加了培养效果的稳定性。
[0011]【专利附图】
【附图说明】
[0012]图1为实施例中不同细胞因子组合的CIK细胞集落形成图。
[0013]
【具体实施方式】
[0014]下面结合具体实施例和附图，对本发明作进一步详细说明。
[0015]实施例1细胞培养
外周血用含肝素抗凝剂的无菌干燥瓶收集，采血量为50mL，4h内分选。采用Ficoll-Hypaque法分离单个核细胞，以IX IO6Cell /孔接种于24孔培养板,每孔终体积ImL(含150mL / LFCS、青一链霉素50U / mL的IMDM);根据因子培养体系的不同分组(共分6组，A组一 F组，每组6个重复孔)按本实验室方法培养。开始每孔分别加入IL-2(80ng /mL)、IL-7 (40ng / mL)及 IL-12 (40ng / mL)的单因子组合(A 组:IL_7 ;B 组:(IL-12)、双因子组合(C组:IL-7 + IL-12 ；D组:IL_2 + IL-7 ；E组:IL_2 + IL-12)和三因子组合(F组:IL-2 + IL-7 + IL-12)，详见表1。在37°C，体积分数5% C02及饱和湿度的条件下培养，每隔3d半量换液及全量补充上述细胞因子，共培养21d收获细胞。
[0016]表1各实验组加入细胞因子的种类和浓度(ng / ml)
【权利要求】
1.一种CIK细胞培养方法，包括步骤: A)取外周血，并分离外周血单个核细胞； B)将单个核细胞接种到培养装置中进行培养，对培养单个核细胞的培养液中加入细胞因子； C)培养14-28天，收获CIK细胞。
2.如权利要求1所述的CIK细胞培养方法，其特征是:所述B)步骤中，加入的细胞因子为:IL-2，或者为IL-7，或者为IL-12，或者为IL_2、IL_7、IL-12中的两种或者三种的组合。
3.如权利要求2所述的CIK细胞培养方法，其特征是:所述细胞因子的加入量为:IL-280ng / mL, IL-740ng / mL, IL-1240ng / mL。
4.如权利要求1所述的CIK细胞培养方法，其特征是:在培养过程中，每隔2-3天，半量换培养液及全量补充上述细胞因子。
5.一种生物制品，包括权利要求1-4任一项所述的CIK细胞培养方法制备得来的CIK细胞。·
【文档编号】C12N5/0783GK103710307SQ201310693544
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月16日 优先权日:2013年12月16日
【发明者】姜舒, 罗朝霞, 刘颖斐, 杨顺, 魏明军 申请人:深圳市茵冠生物科技有限公司