解淀粉芽孢杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开一株海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus?amyloliquefaciens)M001及其应用，所述的解淀粉芽孢杆菌M001保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2013年11月4日，保藏号为CGMCC?No.8433。该菌株分离筛选自牙鲆鱼肠道，能明显提高养殖鱼非特异性免疫水平，增强养殖鱼抵御细菌病原感染的能力。
【专利说明】解淀粉芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及水产微生物应用【技术领域】，具体的说是一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及其应用。
【背景技术】
[0002]我国水产养殖产量连续十多年居世界首位，成为大农业中发展最快的产业之一。由于养殖业多年的集约式快速发展，加上养殖环境不断恶化、养殖品种抗逆性衰退，最终导致养殖动物病害频繁发生，直接造成巨大的经济损失。病害已成为限制水产养殖产业持续健康发展的瓶颈。我国水产病害的防治手段主要依赖抗生素等化学药物，由于抗生素带来的生态、环境以及食品安全等的不良影响，其在水产养殖的应用在国内外受到很多限制。益生菌是一类能够抑制病原微生物、改善养殖生态环境、调节动物体内生态平衡、增强肌体免疫功能、提高饲料利用效率等作用的有益微生物，许多商品化的益生菌制剂已在畜牧养殖业中广泛应用，以达到减少抗生素使用、控制疾病发生、促进动物生长的目的。目前用于水产养殖的益生菌多数来源于陆生环境或陆生动物，这些益生菌多数不适合在水生环境特别是海洋环境中生长和繁殖，导致其益生效应难以有效发挥。因此，从海洋环境或海洋动物中分离筛选土著菌作为益生菌来源，对保证海洋益生菌制剂的高效性和安全性特别关键。
【发明内容】
[0003]本发明目的在于提供一种海洋解淀粉芽孢杆菌及其应用。
[0004]为实现上述目的，本发明采用的技术方案为:
[0005]—种海洋解淀粉芽孢杆菌，海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)MOOl保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2013年10月5日，保藏号为CGMCC N0.8433，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号。
[0006]一种解淀粉芽孢杆菌的应用，所述解淀粉芽孢杆菌用于制备微生物制剂。
[0007]所述解淀粉芽孢杆菌作为添加剂用于抑制海水鱼类病原菌、增强鱼类免疫功能的微生物制剂。
[0008]将所述解淀粉芽孢杆菌制成干菌粉。
[0009]进一步的说，将解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)MOOI在Zobell2216E海水固体培养基上划线，取一单菌落接种于2216E液体培养基中，在25_30°C培养6-8小时，即为种子液，将所得种子液按体积比1:100转接于新鲜的2216E液体培养基，在25-30°C、120-200rpm培养24-36小时，即为发酵液；所得发酵液在5000g离心30min，取菌泥在60°C恒温干燥至衡重，而后与玉米淀粉混合制成干菌粉。
[0010]海洋解淀粉芽孢杆菌，即来源于牙鲆鱼类消化道的内源性解淀粉芽孢杆菌M001，该菌株不仅有抑制病原菌的效果，还能增强养殖鱼非特异性免疫水平和抵御病原菌感染的能力。
[0011] 本发明所涉及的菌株信息如下:[0012]1.来源。该菌株分离自健康牙鲆(Paralichthys olivaceus)消化道,经高剂量注射和投喂确定对养殖大菱鲆、牙鲆、舌鳎、小白鼠等安全，无致病性。
[0013]2.形态学特征。革兰氏染色阳性，在Zobell2216E海水固体培养基上、28°C培养2天的菌落形态直径大小为2~3_，圆形，凸起，乳白色，表面粗糙，边缘不整。具有荚膜和芽孢，芽孢呈椭圆形。
[0014]3.生理生化特征。氧化酶反应阴性，过氧化氢酶反应阳性，鸟氨酸脱羧酶反应阴性，精氨酸双水解酶阳性，赖氨酸脱羧酶反应阳性，脲酶反应阴性，L-阿拉伯糖醇反应阴性，半乳糖酸盐反应阴性，5-酮基-葡萄糖酸钠反应阴性，脂肪酶反应阳性，酚红反应阴性，β -葡萄糖苷反应阳性，甘露醇反应阳性，麦芽糖反应阳性，吲哚产生阴性，N-乙酰-β -葡萄糖反应阴性，β_半乳糖苷酶反应阴性，葡萄糖反应阳性，蔗糖反应阳性，L-阿拉伯糖反应阴性，α-葡萄糖反应阳性，α-半乳糖苷酶反应阳性，海藻糖反应阳性，鼠李糖反应阳性，肌醇反应阳性，侧金盏花醇反应阴性，帕拉金糖反应阴性，β_葡萄糖酸酶反应阳性，纤维二糖反应阴性，山梨醇反应阳性，α-麦芽糖苷反应阳性，丙二酸利用阳性，L-天门冬素芳胺酶反应阳性。
[0015]I) 16SrRNA 基因序列如 SEQ ID:1 所示。
[0016]2)抗生素敏感性。用药敏纸片扩散法检测解淀粉芽孢杆菌MOOl对抗生素的敏感性，结果表1所示，该菌对6种抗生素敏感。
[0017]表1M001的抗生素敏感性
[0018]
【权利要求】
1.一种海洋解淀粉芽孢杆菌，其特征在于:海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)M001保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期2013年11月5日，保藏号为CGMCC N0.8433。
2.—种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌用于制备微生物制剂。
3.按权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于:所述解淀粉芽孢杆菌作为添加剂用于抑制海水鱼类病原菌、增强鱼类免疫功能的微生物制剂。
4.按权利要求2或3所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于:将所述解淀粉芽孢杆菌制成干菌粉。
5.按权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌的应用，其特征在于: 将解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)M001 在 Zobell2216E 海水固体培养基上划线，取一单菌落接种于2216E液体培养基中，在25-30°C培养6_8小时，即为种子液，将所得种子液按体积比1:100转接于新鲜的2216E液体培养基，在25-30°C、120-200rpm培养24-36小时，即为发酵液；所得发酵液在5000g离心30min，取菌泥在60°C恒温干燥至 衡重，而后与玉米淀粉混合制成干菌粉。
【文档编号】C12R1/07GK103966118SQ201310711090
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】莫照兰, 李贵阳, 黄倢, 李 杰 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所