一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：包括DNA提取液，HPV16、58、35、HBB-PCR反应液，HPV18、33、51、66-PCR反应液，HPV45、59、39、56-PCR反应液，HPV31、52、68、53-PCR反应液，Taq/UNG酶混合液，阳性对照，阴性对照。本发明提供的试剂盒能用于检测宫颈分泌物样本中人乳头瘤病毒核酸的存在。
【专利说明】一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明属体外诊断试剂领域，具体地，涉及一种试剂盒，更具体地，涉及一种人乳头瘤病毒(15个型)核酸分型检测试剂盒,主要适用于检测宫颈分泌物样本中人乳头瘤病毒(15个型)核酸的存在。
【背景技术】
[0002]宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，世界上每年的新发病例约为50万，死亡率为50%。WHO指出如不尽快采取措施，在未来十年因宫颈癌导致的死亡人数将上升约25%。大量临床实验表明99.7%的宫颈癌可检测到人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus, HP V) DNA, HPV的持续性感染是宫颈癌发生的必要条件。
[0003]HPV是一组双链环状DNA病毒，具有严格的嗜上皮性。目前确定HPV型别约有120多种，根据生物学特征、致癌潜能可分为高危型和低危型。其中即￥16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68属于高危型，其基因组能整合到人基因组中，可导致宫颈上皮内高度病变与宫颈癌的发生。由于不同HPV基因型会对宫颈癌的形成造成不同的风险。因此，快速、准确的检测出高危型HPV感染并对其进行分型对于诊断和预防宫颈癌的发生具有重要的意义。
[0004]目前HPV分型方法主要有核酸杂交(核酸印迹原位杂交、斑点印迹杂交、原位杂交和PCR-反向点杂交)和基因芯片。核酸杂交具有较好的特异性，但操作复杂，耗时长不合适临床上大规模使用。基因芯片法能检测同一样本中多种亚型，但价格昂贵，大大制约了其在临床上的应用。
[0005]荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点，而且运用Taqman探针的5'末端标记上不同的荧光染料(FAM、JOE等)技术可以进行基因分型方面的研究。因此应用多色荧光PCR技术开发一种人乳头瘤病毒核酸(15个型)分型检测试剂盒是非常必要的。
【发明内容】
[0006]本发明旨在克服上述缺陷，利用多色荧光PCR技术提供一种特异性强、灵敏度高、重复性好且准确度高的人乳头瘤病毒(15个型)核酸分型的试剂盒。
[0007]本发明提供的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:包括DNA提取液,HPV16、58、35、HBB-PCR 反应液，HPV18、33、51、66-PCR 反应液，HPV45、59、39、56-PCR 反应液，HPV31、52、68、53-PCR反应液，Taq/UNG酶混合液，阳性对照，阴性对照。
[0008]其中，DNA提取液包括 1-lOmM、pH 为 5-9 的 EDTA、l_10mM、pH 为 5-9 的 Tris-HCl和体积分数为5-10%的Chexel-100。
[0009]本发明所涉及的HPV16、58、35、HBB-PCR 反应液包括 10XPCR buffer, MgCl2,dNTPs'l-100μΜ的HPV16的引物和探针、1-100 μ M的HPV58的引物和探针、1-100 μ M的HPV35的引物和探针、1-100 μ M的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
[0010]其中，HPV16的引物和探针为如序列表 SEQ ID N0.USEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3 ；HPV58的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.5、SEQ ID N0.6所示的序列；HPV35的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.7、SEQ ID N0.8、SEQ ID N0.9所示的序列；HBB的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.10、SEQ ID N0.1USEQ ID N0.12所示的序列。
[0011]具体地，HPV16、58、35、HBB-PCR反应液包括 10XPCR buffer (1-lOOmM KC1、1-1OOmM (NH4) 2S04、l-200mM Tris-HCl (ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2, dNTPs (l_25mMdATP、l-25mMdGTP、l-25mM dCTP、l_12.5mM dUTP、l_12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV16 基因上游引物 Al、1-100 μ M HPV16 基因下游引物 B1、1-100 μ MHPV16 基因荧光探针 Pl (FAM)、1-100 μ MHPV58基因上游引物All、l-100yMHPV58下游引物BI 1、1-100 μ M HPV58荧光探针Pll (JOE)、1-100 μ M HPV35 基因上游引物 Α5、1-100 μ M HPV35 基因下游引物 Β5、1-100 μ M即￥35基因荧光探针？51?0?(?)、1-10(^]\1 HBB基因上游引物Α17、1-100μΜ HBB基因下游引物Β17、1-100μΜ HBB基因荧光探针P17(CY5)和无菌蒸馏水。
[0012]其中，Al序列为:5-AGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGT-3
[0013]BI 序列为:5-CACACTTGCAACAAAAGGTTACAAT-3
[0014]Pl 序列为:5-ACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCA-3
[0015]其中Y端标记FAM荧光报告基团，3^端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0016]All 序列为:5-GGTTTCATAATATTTCGGGTCGTT-3
[0017]Bll 序列为:5-CTCTCATGGCGTTGTTACAGGTT-3
[0018]Pll 序列为:5-TGGAGACCCCGACGTAGACAAAC ACAAGT-3
[0019]其中，5'端标记JOE荧光报告基团，3'端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0020]A5 序列为:5-CAGCACAAGCATTATTTCATGCA-3[0021 ] B5 序列为:5-GCTCACGCTGCTAAGTGGACTAC-3
[0022]P5R 序列为:5-AGCAAACACACAAAGAGGCTGTACAGGTCC-3
[0023]其中，5 ^端标记ROX荧光报告基团，3'端标记BHQ2荧光淬灭基团；
[0024]Al7 序列为:5-TGAAGGCTCATGGCAAGAAAGT-3
[0025]B17 序列为:5-TTGTCACAGTGCAGCTCACTCA-3
[0026]P17 序列为:5-ACAACCTCAAGGGCACCTTTGCCAC-3
[0027]其中，5'端标记CY5荧光报告基团，3^端标记BHQ2荧光淬灭基团。
[0028]本发明所涉及的HPV18、33、51、66-PCR 反应液 10XPCR buffer、MgC12、dNTPs、1-100μΜ的HPV18的引物和探针、1-100μΜ的HPV33的引物和探针、1-100 μ M的HPV51的引物和探针、1-100 μ M的HPV66的引物和探针及无菌蒸馏水；
[0029]其中，HPV18的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.13、SEQ ID N0.14、SEQ IDN0.15 ；HPV33 的引物和探针为如序列表 SEQ ID N0.16、SEQ ID N0.17、SEQ ID N0.18 所示的序列；HPV51的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.19,SEQ ID N0.20,SEQ ID N0.21所示的序列；HPV66的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.22、SEQ ID N0.23、SEQ ID N0.24所示的序列。
[0030]具体地，HPV18、33、51、66-PCR反应液包括 10XPCR buffer(10mM KC1、10mM(NH4)2S04、200mM Tris-HCl(ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2、dNTPs(l_25mM dATP、卜25mMdGTP、l-25mM dCTP、1-12.5mM dUTP、1-12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV18 基因上游引物 A2、1-100 μ M HPV18 基因下游引物 Β2、1-100μΜ HPV18 荧光探针 Ρ2 (FAM)、1-100 μ MHPV33 基因上游引物 Α4、1-100 μ M HPV33 下游引物 Β4、1-100 μ M HPV33 荧光探针 Ρ4 (JOE)、1-100 μ M HPV51 基因上游引物 Α8、1-100μΜ HPV51 下游引物 Β8、1-100 μ M HPV51 荧光探针 P8R(ROX)、1-100 μ M HPV66 基因上游引物 Α13、1-100 μ M HPV66 下游引物 Β13、1-100 μ MHPV66荧光探针P13C(CY5)和无菌蒸馏水。
[0031 ] A2 序列为:5-GGAAGAAAACGATGAAATAGATGGA-3
[0032]B2 序列为:5-CAACATTGTGTGACGTTGTGGTT_3
[0033]P2 序列为:5-CATCAACAITTACCAGCCCGACGAGC-3
[0034]其中，5 ^端标记FAM荧光报告基团，3'端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0035]A4 序列为:5-TAAGTGACAGCTCAGATGAGGATGA-3
[0036]B4 序列为:5-ACGAACTGTGGTGTTACAAGTGTGA-3
[0037]P4 序列为:5-ATGGACAAGCACAACCAGCCACAGC-3
[0038]其中，5'端标记JOE荧光报告基团，3'端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0039]A8 序列为:5-CCATGAAATAGCGGGACGTT-3
[0040]B8 序列为:5-TTACCACGCATGGCTTTATTACA-3[0041 ] P8R 序列为:5-CGCTAATTGCTGGCAACGTACACGACA-3
[0042]其中，5 ^端标记ROX荧光报告基团，3'端标记BHQ2荧光淬灭基团；
[0043] Al3 序列为:5-GAGGAGCTACGTGTGGTACAACAG-3
[0044]B13 序列为:5-CCCTCCCCATTTGTACCTTCA-3
[0045]P13C 序列为:5-AGTAACGTGCCCACTCTGCGCGTCA-3
[0046]其中，5'端标记CY5荧光报告基团，3^端标记BHQ2荧光淬灭基团；
[0047]本发明所涉及的HPV45、59、39、56-PCR 反应液包括 10 XPCR buffer,MgCl2,dNTPs、1-100 μ M的HPV45的引物和探针、1-100 μ M的HPV59的引物和探针、1-100 μ M的HPV39的引物和探针、l-100μΜ的HPV56的引物和探针及无菌蒸馏水；
[0048]其中，HPV45的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.25、SEQ ID N0.26、SEQ IDN0.27 ；HPV59 的引物和探针为如序列表 SEQ ID N0.28、SEQ ID N0.29、SEQ ID N0.30 所示的序列；HPV39的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.31、SEQ ID N0.32、SEQ ID N0.33所示的序列；HPV56的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.34、SEQ ID N0.35、SEQ ID N0.36所示的序列。
[0049]具体地，HPV45、59、39、56-PCR反应液包括 10XPCR buffer(10mM KC1、10mM(NH4)2S04、200mM Tris-HCl(ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2、dNTPs(l_25mM dATP、卜25mMdGTP、l-25mM dCTP、1-12.5mM dUTP、1-12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV45 基因上游引物Α7、1-100μΜ HPV45基因下游引物Β7、1-100μΜ HPV45基因荧光探针Ρ7 (FAM)、1-100 μ M HPV59 基因上游引物 Α12、1-100μΜ HPV59 基因下游引物 Β12、1-100 μ M HPV59基因荧光探针Ρ12 (JOE)、1-100 μ M HPV39基因上游引物Α6、1-100 μ M HPV39基因下游引物Β6、1-100 μ M HPV39 基因荧光探针 Ρ6 (ROX)、1-100 μ M HPV56 基因上游引物 A10U-100 μ MHPV56基因下游引物Β10、1-100μΜ HPV56基因荧光探针PlOC(CY5)和无菌蒸馏水。
[0050]Α7 序列为:5-TGGAAATAGTAATACGTGGGA-3[0051 ] B7 序列为:5-TCGACGTGGAGGCGTGTT-3
[0052]P7 序列为:5-TGACTCTATGTGCAGTACCA-3
[0053]其中，5 ^端标记FAM荧光报告基团，3'端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0054]Al2 序列为:5-CTCGGAGTCGGAGTCAGGTAA-3
[0055]B12 序列为:5-AACGACAAGCGCGTAGTGAA-3
[0056]P12 序列为:5-TGCTCGTAGCACACAAGGTCAACTTCCTC-3
[0057]其中，5'端标记JOE荧光报告基团，3'端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0058]A6 序列为:5-CACCTTGCAGGACATTACAATAGC-3
[0059]B6 序列为:5-GGTTCCCCGTCCCTATATACTACA_3
[0060]P6 序列为:5-TATTGCAGACGACCACTACAGCAAACCGAG-3
[0061]其中乂端标记ROX荧光报告基团义端标记BHQ2荧光淬灭基团；
[0062]AlO 序列为:5-CCAAAGAGGACCTGCGTGTT_3
[0063]BlO 序列为:5-ACCTTCAGGTGACGCCATTG-3
[0064]PlOC 序列为:5-AGTAACGTGCCCACTCTGCGCRTCA-3
[0065]其中，5'端标记CY5荧光报告基团，3^端标记BHQ2荧光淬灭基团；
[0066]本发明所涉及的HPV31、52、68、53-PCR 反应液包括 10XPCR buffer、MgC12、dNTPs'l-100μΜ的HPV31的引物和探针、1-100 μ M的HPV52的引物和探针、1-100 μ M的HPV68的引物和探针、1-100 μ M的HPV53的引物和探针及无菌蒸馏水；
[0067]其中，HPV31的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.37、SEQ ID N0.38、SEQ IDN0.39 ；HPV52 的引物和探针为如序列表 SEQ ID N0.40、SEQ ID N0.41、SEQ ID N0.42 所示的序列；HPV68的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.43、SEQ ID N0.44、SEQ ID N0.45所示的序列；HPV53的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.46、SEQ ID N0.47、SEQ ID N0.48所示的序列。
[0068]具体地，HPV31、52、68、53-PCR反应液包括 10XPCR buffer(10mM KC1、10mM(NH4)2S04、200mM Tris-HCl(ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2、dNTPs(l_25mM dATP、卜25mMdGTP、l-25mM dCTP、l_12.5mM dUTP、l_12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV31 基因上游引物 Α3-1、1-100μΜ HPV31 基因下游引物 Β3-1、1-100 μ M HPV31 基因荧光探针 Ρ3-1 (FAM)、1-100 μ M HPV52 基因上游引物 Α9-2、1-100μΜ HPV52 基因下游引物 Β9、1-100 μ M HPV52基因荧光探针Ρ9 (JOE)、1-100 μ M HPV68基因上游引物Α14、1-100 μ M HPV68基因下游引物Β14、1-100 μ M HPV68基因荧光探针Ρ14 (ROX)、1-100 μ M HPV53基因上游引物Α18、1-100 μ MHPV53基因下游引物Β18、1-100μΜ HPV53基因荧光探针Ρ18 (CY5)和无菌蒸馏水。
[0069]A3 序列为:5-GCTCAGATGAGGAGGATGTTATAGACA-3
[0070]B3 序列为:5-CACACTGACAACAAAAGGTAACGATA-3[0071 ] P3 序列为:5-TGGACAAGCAAAACCGGACACATCC-3
[0072]其中，5'端标记FAM荧光报告基团，3^端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0073]A9 序列为:5-GTCAAACGCCATTATGTCCTGAA-3
[0074]B9 序列为:5-CTCCACGCATGACGTTACACTT-3
[0075]P9 序列为:5-TGTTGGAGACCCCGACCTGTGACC-3
[0076]其中，5'端标记JOE荧光报告基团，3'端标记BHQl荧光淬灭基团；
[0077]A14 序列为:5-CAAAGGTTGTAGTTCAATGCTGTCA-3
[0078]B14 序列为:5-TCTGGACATTGTTCGTTTACATAGG-3
[0079]P14 序列为:5-TGCACCTGTGCCCCGATTTGTG-3
[0080]其中，5 ^端标记ROX荧光报告基团，3'端标记BHQ2荧光淬灭基团；
[0081 ] A18 序列为:5-ACCAACGACTCACACCTACAACAC-3
[0082]B18 序列为:5-AATGCCATGAGCAATTGAACAG-3
[0083]P18 序列为:5-TCCCGTCTAGCTTGCTGTGGCTGC-3
[0084]其中，5'端标记CY5荧光报告基团，3^端标记BHQ2荧光淬灭基团。
[0085]本发明所涉及的Taq/UNG酶混合液包括耐热DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶。
[0086]本发明所涉及的阴性对照为含有黏蛋白和BSA的TE缓冲液。
[0087]本发明所涉及的阳性对照包括册￥16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66,68和人β -globin的线性化重组质粒的混合液、黏蛋白和BSA的TE缓冲液。
[0088]上述方法制造的试剂盒为人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒。优选为一种人乳头瘤病毒(15个型)核酸分型检测试剂盒,主要适用于检测宫颈分泌物样本中人乳头瘤病毒(15个型)核酸的存在。
[0089]本发明的作用和效果
[0090]本发明提供的试剂盒的使用方法包括以下步骤:
[0091](I)样本的采集和保存；
[0092](2) PCR扩增试剂配制；
[0093](3)样本、阴性对照和阳性对照的处理；
[0094](4)加样；
[0095](5) PCR 扩增；
[0096](6)结果分析。
[0097]本发明利用不同荧光标记的探针，采用同一样本进行4管PCR扩增的方法，能同时检测15种高危HPV和人β -globin,并确定其型别，与现有HPV基因分型检测试剂盒相比，具有以下优势:
[0098](I)具有更高的特异性和灵敏度。
[0099](2)封闭检测，无需PCR后反应，避免交叉污染和环境污染。
[0100](3)可实现一管PCR反应检测多种型别，更简便和快速。
[0101] (4)分四管扩增能检测15种高危HPV，检测型别多，使用方便。
【专利附图】
【附图说明】
[0102]附图1、显示阳性样本在4种PCR反应液中的扩增曲线，
[0103]其中，横坐标为PCR循环数，纵坐标为荧光值。
[0104]附图2、显示阴性样本在4种PCR反应液中的扩增曲线，
[0105]其中，横坐标为PCR循环数，纵坐标为荧光值。
【具体实施方式】
[0106]下面结合具体实施例，对本发明进一步说明，但发明的保护范围并不限于此。
[0107]实施例1:试剂盒的组成
[0108]人乳头瘤病毒(15个型)核酸分型检测试剂盒的组成如表1所示:
[0109]表1人乳头瘤病毒(15个型)核酸分型检测试剂盒的组成
[0110]
【权利要求】
1.一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:包括DNA提取液，HPV16、58、35、HBB-PCR 反应液，HPV18、33、51、66-PCR 反应液，HPV45、59、39、56-PCR 反应液，HPV31、52、68、53_PCR反应液，Taq/UNG酶混合液，阳性对照，阴性对照。
2.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述DNA提取液包括1-1OmM pH为5-9的EDTA、1-1OmM pH为5-9的Tris-HCl和体积分数为5-10%的 Chexel-100。
3.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述HPV16、58、35、HBB-PCR 反应液包括 10XPCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-100 μ M 的 HPV16 的引物和探针、1-100 μ M的HPV58的引物和探针、1-100 μ M的HPV35的引物和探针、1-100 μ M的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水； 其中，所述HPV16的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.USEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3 ； 所述HPV58的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.5、SEQ ID N0.6所示的序列； 所述HPV35的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.7、SEQ ID N0.8、SEQ ID N0.9所示的序列； 所述HBB的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.10、SEQ ID N0.1USEQ ID N0.12所示的序列。
4.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述HPV18、33、51、66-PCR 反应液 10XPCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-100 μ M 的 HPV18 的引物和探针、1-100 μ M的HPV33的引物和探针、1-100 μ M的HPV51的引物和探针、1-100 μ M的HPV66的引物和探针及无菌蒸馏水； 其中，所述HPV18的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.13、SEQ ID N0.14、SEQ IDN0.15 ； 所述HPV33的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.16、SEQ ID N0.17、SEQ ID N0.18所不的序列； 所述HPV51的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.19、SEQ ID N0.20、SEQ ID N0.21所不的序列； 所述HPV66的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.22、SEQ ID N0.23、SEQ ID N0.24所示的序列。
5.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述HPV45、59、39、56-PCR 反应液包括 10XPCR buffer、MgCl2' dNTPs、1-100 μ M 的 HPV45 的弓丨物和探针、1-100 μ M的HPV59的引物和探针、1-100 μ M的HPV39的引物和探针、1-100 μ M的HPV56的引物和探针及无菌蒸馏水； 其中，所述HPV45的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.25、SEQ ID N0.26、SEQ IDN0.27 ； 所述HPV59的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.28、SEQ ID N0.29、SEQ ID N0.30所不的序列； 所述HPV39的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.31、SEQ ID N0.32、SEQ ID N0.33所不的序列；所述HPV56的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.34、SEQ ID N0.35、SEQ ID N0.36所示的序列。
6.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述HPV31、52、68、53-PCR 反应液包括 1XPCR buffer, MgCl2' dNTPs、1-100 μ M 的 HPV31 的弓丨物和探针、1-100 μ M的HPV52的引物和探针、1-100 μ M的HPV68的引物和探针、1-100 μ M的HPV53的引物和探针及无菌蒸馏水； 其中，所述HPV31的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.37、SEQ ID N0.38、SEQ IDN0.39 ； 所述HPV52的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.40、SEQ ID N0.41、SEQ ID N0.42所不的序列； 所述HPV68的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.43、SEQ ID N0.44、SEQ ID N0.45所不的序列； 所述HPV53的引物和探针为如序列表SEQ ID N0.46、SEQ ID N0.47、SEQ ID N0.48所示的序列。
7.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述的Taq/UNG酶混合液包括耐热DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶。
8.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述的阴性对照为含有黏蛋白和 BSA的TE缓冲液。
9.如权利要求1所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述的阳性对照包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68 和人 β-globin 的线性化重组质粒的混合液、黏蛋白和BSA的TE缓冲液。
10.如权利要求1-9任一所述的一种人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于:所述试剂盒为人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒。
【文档编号】C12Q1/68GK104073573SQ201410335816
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年7月15日 优先权日:2014年7月15日
【发明者】宋冬梅, 刘军辉, 刘代新 申请人:江苏同科医药科技有限公司