专利名称：蛹虫草菌高产栽培方法
技术领域：
本发明涉及一种药用食用真菌的栽培方法，特别是蛹虫草菌高产栽培方法。
在专利号为93105056.1的专利中，公开了一种“北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法”，其菌种为蛹草头孢霉Cepnalosporl-um C868，由于该菌种退化现象比较严重，且培养基营养不足，不能充分满足子实体生长需要，故栽培效果不太理想，一般转化率60-70％，达不到高产的目的。
本发明的目的是提供一种选用新菌种源人工栽培蛹虫草菌的方法，采用合成培养基以达到高产的目的。
本发明的目的是这样实现的选用蛹草拟青霉菌种[Paecilom-yces militaris(Kob.)Br.etSm]定名为Pm66，保藏号为CGMCC NO 0301，其栽培方法包括以下步骤1、菌种选育将采集的野生蛹虫草菌按常规方法在无菌条件下进行菌种分离，菌种在平皿培养基中进行插片培养7天后，显微镜下观察菌丝及分生孢子形态，蛹草拟青霉特征是菌丝无色，丝状，具有隔膜，直径2微米，分生孢子梗有两种类型一是从营养菌丝上生单根的分生孢子梗，顶端链生成迭瓦状孢子链；二是从营养菌丝上生的分生孢子梗，顶端分枝呈拟青霉状的产孢细胞，其上也链生迭瓦状孢子链，分生孢子近球形，卵圆形，单胞，无色，大小为1.5-2.5×1-2微米，将纯化后的该菌种Pm66接种到液体培养基中，在23±2℃，避光条件下静止培养2天，摇瓶培养5天，再在散射光(3000lux左右)照射下静止培养2-3天，其菌苔表面呈淡黄色，菌丝绒毛状，有凸凹不平，呈不规则的龟裂纹。
2、子实体培养将上述选育的菌种接种到含水量55-60％的优质稻米加营养液的合成培养基中，PH8-8.5，常规灭菌后接入菌种，在洁净环境下，控制温度23±2℃，避光培养7-10天，当菌丝长满培养基后，温度降至21±2℃，给于散射光照射并通风保湿，经过20-25天，子实体成熟，肉质，橙黄色，全长5-120毫米，有的可达150毫米以上，顶端子座呈棍棒状，长30-80毫米，粗3-9毫米。
由于本发明选用了蛹草拟青霉菌种，其栽培成活率及出子实体率均达到100％，所以为稳产、高产奠定了良好的基础。因采用了优质稻米加营养液的合成培养基，在适合的温度、光照、PH等条件下栽培一次可连续采收2-4茬子实体，使生物转化率高达160％以上，从而实现了稳产、高产，显著降低成本40％以上。经中国科学院沈阳应用生态研究所及辽宁中医测试结果表明本发明所选用的蛹草拟青霉菌种Pm66所含氨基酸总量及其它几种营养与药用成份均高于93105056.1专利中采用的蛹草头孢霉菌种的C868。所以用Pm66菌种栽培的子实体是一种更为理想的应用广泛的药品和保健品。它不仅用于治疗肺肾两虚引起的咳嗽气喘、肾虚乏力等疾病，还可用于癌症的辅助治疗，如与环磷酰胺合用，能明显抑制癌细胞生长，具有增效减毒、提高生存质量、明显延长寿命的功效。另外，由于它不含兴奋剂，对恢复运动疲劳、增强体力有明显效果。可广泛应用于运动领域。
本发明所选用的蛹草拟青霉菌种Pm66所含氨基酸总量及其它几种营养成份与药用成份均高于93105056.1专利中采用的蛹草头孢霉菌种的C868，细见下表Pm66与C868菌种有效成份对比项 目Pm66 C868氨基酸种 ASP1705 ILE853ASP1531ILE722类与含量 THR1174 LEU1142 THP1184LEU901(mg/100g) SER933TYR1157 SER1047TYR862GLU3263 PHE823GLU3120PHE670GLY1146 LYS1160 GLY823 LYS962ALA1564 NH3245ALA1256NH3627CYS154HIS385CYS微量HIS370VAL1210 APG1242 VAL1063APG1104MET134PRO1072 MET852 PRO772氨基酸 19,362 17,866总量(mg/100g)虫草多糖13.23.1(mg/g)有机锗 4.157 0.030(PPM/g)SOD(鲜品) 154.5 54(U/mg蛋白)虫草素 0.230.15(纯品)(％)维 VA 1.250.347生(mg/g)VB1 0.182 0.130素Pm66菌种与C868菌种显微镜形态比较
图1是蛹草拟青霉Pm66显微观察菌丝及分生孢子形态。
图2是蛹草头孢霉C868显微观察菌丝及分生孢子形态。
根据图1-2显微观察结果表明，蛹草拟青霉Pm66的菌丝粗壮、清晰，分生孢子呈迭瓦状孢子链。而头孢霉C868的菌丝细弱，不清晰，分生孢子团聚呈头状。二者的菌丝有明显差异，因此其栽培成活率及出子实体率大不相同。
Pm66菌种与C868菌种栽培效果比较Pm66C868出草率(％) 10070-80最高生物效率(％) 16090-100下面结合实施例对本发明作详细说明实施例1将采集的野生蛹虫草菌按常规方法在无菌条件下进行菌种分离，然后将菌种接种在平皿培养基中，插入盖玻片，在23±2℃温度下培养7天，显微镜观察菌丝及分生孢子形态，符合蛹草拟青霉特征的即为Pm66纯菌种。该母种培养基为胡萝卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖3％、天门冬酰胺0.1％、氯化钾0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸铁0.001％、硝酸钠0.05％、磷酸二氢钾0.1％、琼脂2％、PH7-7.5。
实施例2将上述母种取豆粒大小的菌丝块接种到液体培养基中，在23±2℃，避光条件下，静止培养2天，然后摇瓶振荡5天，再在散射光(3000lux左右)照射下，静止培养2-3天，观察菌丝状态，由白色转为淡黄色，表面菌苔呈绒毛状，有凸凹不平，呈不规划的龟裂纹。此为优选栽培菌种。其液体培养基除不含琼脂外，其它成份同实施例1培养基。
实施例3在500毫升广口玻璃瓶中装入优质稻米50克，填加含胡萝卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖2％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸镁0.15％、活性氨基酸0.2％的营养液、二氧化锗0.01％的营养液40-60毫升，使培养基含水量为55-60％，调PH8-8.5，封口灭菌，1.5公斤/平方厘米灭菌50分钟，然后接种例2栽培菌种3-4毫升，在23±2℃，避光条件下，培养7-10天，当菌丝长至培养基表面90％，用散射光(3000lux左右)照射，当菌丝长满培养基表面，进行表面搔菌及温差刺激(5-7℃、3-4天)，促进子实体大量生成，并使其生长整齐、一致，为高产、稳产打下基础。瓶口覆盖一层细孔膜，控制温度在21±2℃，空气相对湿度80-90％，每天通风3-4次，每次20-30分钟，经过10天左右，长出橙黄色或橙红色子实体。
实施例4当虫草子实体长出2厘米左右时喷施0.2％活性氨基酸液，促使子实体粗壮，长至10厘米左右时，去掉封口膜，喷施1％蔗糖水，瓶口套上塑料薄膜筒，上盖细孔薄膜，使子实体向上生长至15厘米以上。经过20-25天，子实体成熟即可采收。
实施例5采收一茬子实体后，整理好料面，加入营养液10-20毫升，在23±2℃避光条件下，10天左右给于散射光照射，温度降至21±2℃，约20天左右，第二茬子实体即可采收，同样方法还可采收第三茬、第四茬子实体。
权利要求
1.一种蛹虫草菌高产栽培方法，其特征是选用蛹草拟青霉菌种[Pae-ciomyces mlitaris(Kob.)Br.etSm]定名为Pm66，保藏号为CGMCC NO 0301，其栽培方法包括以下步骤(1)、菌种选育；将采集的野生蛹虫草菌按常规方法在无菌条件下进行菌种分离，菌种在平皿培养基中进行插片培养7天后，显微镜下观察菌丝及分生孢子形态，蛹草拟青霉特征是菌丝无色，丝状，具有隔膜，直径2微米，分生孢子梗有两种类型一是从营养菌丝上生单根的分生孢子梗，顶端链生成迭瓦状孢子链；二是从营养菌丝上生的分生孢子梗，顶端分枝呈拟青霉状的产孢细胞，其上也链生迭瓦状孢子链，分生孢子近球形，卵圆形，单胞，无色，大小为1.5-2.5×1-2微米，将纯化后的该菌种Pm66接种到液体培养基中，在23±2℃，避光条件下静止培养2天，摇瓶培养5天，再在散射光(3000lux左右)照射下静止培养2-3天，其菌苔表面呈淡黄色，菌丝绒毛状，有凸凹不平，呈不规则的龟裂纹。(2)、子实体培养将上述选育的菌种接种到含水量55-60％的优质稻米加营养液的合成培养基中，PH8-8.5，常规灭菌后接入菌种，在洁净环境下，控制温度23±2℃，避光培养7-10天，当菌丝长满培养基后，温度降至21±2℃，给于散射光照射并通风保湿，经过20-25天，子实体成熟，肉质，橙黄色，全长5-120毫米，有的可达150毫米以上，顶端子座呈棍棒状，长30-80毫米，粗3-9毫米。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是在子实体长出前要及时进行表面搔菌，并进行昼夜温差刺激(5-7℃、3-4天)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是在子实体长至2厘米左右时，喷施0.2％活性氨基酸营养液，可促使子实体粗壮。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是当子实体长至10厘米时，再喷施1％蔗糖水，瓶口套上塑料薄膜筒，上盖微孔膜，子实体可长至15厘米以上。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是采收一茬子实体后，整理好料面，每瓶加营养液10-20毫升，在相同条件下培养20天左右后可采收第二茬子实体，同样方法还可采收第三茬子实体或第四茬子实体。
6.根据权利要求1和3所述的方法，其特征是营养液配方为胡萝卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖2％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸镁0.15％、活性氨基酸0.2％、二氧化锗0.01％、。
全文摘要
本发明是一种蛹虫草菌的高产栽培方法,采用蛹草拟青霉菌种[Paecilomyces mlitaris (Kob.)Br.etSm],通过母种选育,子实体选用优质稻米加营养液合成培养基,在pH8—8.5、温度23±2℃,避光培养7—10天,菌丝长满培养基后,进行表面搔菌与温差刺激,温度降至21±2℃,散射光照射并通风保湿,经过20—25天子实体成熟,可连续采收2—4茬,成活率及出子实体率100%,生物转化率高达160%,降低成本40%以上。
文档编号C12N1/14GK1200403SQ9710585
公开日1998年12月2日 申请日期1997年5月7日 优先权日1997年5月7日
发明者李春燕 申请人:李春燕