专利名称：具有氨基肽酶 n和 /或二肽基肽酶ⅳ活性的酶的抑制剂在制备治疗和预防因皮脂过度增 ...的制作方法
技术领域：
本发明描述了由于氨基肽酶N(APN；E.C.3.4.11.2.；CD13)和/或二肽基肽酶IV(DP IV；E.C.3.4.14.5.；CD26)抑制剂的作用对皮脂细胞(sebocytes)的增生所必须的DNA合成产生的阻断情况作为分开、同时或者若涉及时间即立刻连续使用这些酶各自的特异性抑制剂或以氨基酸衍生物，多肽或肽衍生物为基础的有相似底物特异性的酶(具有APN-和/或DP IV-类似物的酶活性)的抑制剂的结果是对皮脂细胞的增生(DNA合成)产生了抑制。
许多皮肤疾病都与皮脂细胞的过度增生和分化状态的改变有关。其中既有良性的囊泡过度增生疾病(痤疮、痤疮样囊泡反应、多发性脂囊瘤、皮脂腺痣、老年性皮脂腺肥大，皮肤和头发的皮脂溢出)，也有恶性的囊泡过度增生疾病(混合肿瘤、sebaceomes、皮脂腺肿瘤、皮脂腺CA)。
肽酶，例如氨基肽酶N和二肽基肽酶IV或起相似作用的酶，是特别让人感兴趣的控制和/或调节细胞间相互作用的酶。因为它们部分地是作为胞外酶位于细胞的质膜上，与其它胞外结构发生相互作用，通过酶催化水解作用激活或灭活肽类(peptiderge)信使物质，因此，它对细胞与细胞间的联系是非常重要的。Yaron A.，et al.肽和蛋白的脯氨酸—依赖结构和生理特性。Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.1993；2831-81；Vanhoof G.，et al.Proline motifs in peptides and their biologicalprocessing.FASEB J.1995；9736-744这表明分布于质膜上的肽酶如DPIV或APN在激活和克隆扩展免疫细胞，特别是T-淋巴细胞的过程中扮演了一个关键的角色。Fleischer B.参与T-细胞激活的表面蛋白酶CD26.ImmunologyToday 1994；15180-184；Lendeckel U.et al.丙氨酰氨基肽酶在人T—细胞的生长和功能中的作用.International Journal of MoleculeMedicine 1999；417-27；Riemann D.et al.CD13-不仅仅是淋巴细胞分类的标记.Immunology Today 1999；2083-88。在DP IV或APN的特异性抑制剂存在时有几个功能如刺激单核细胞(MNZ)有丝分裂或富集T-淋巴细胞如DNA合成，产生和分泌免疫刺激细胞因子(IL-2，IL-6，IL-12，IFN-γ)及B-细胞的辅助功能(IgG合成和IgM合成)可能被抑制。Schn E.，et al.二肽基肽酶IV，一种在T淋巴细胞中涉及的膜酶.Biomed.Biochim.Acta 1985；2K9-K15；SchnE.，et al.二肽基肽酶在人T-细胞激活能中的作用.针对二肽基肽酶IV的抑制剂和抗体以及体外淋巴细胞增殖和免疫球蛋白的合成.Eur.J.Immunol.1987；171821-1826；Reinhold D.，et al.在PWN-刺激的PBMNC和T细胞中二肽基肽酶IV的抑制剂诱导转化生长因子β1的分泌.Immunology 1997；91354-360；Lendeckel U.，et al.在人T细胞通过有丝分裂原活化诱导膜丙氨酰氨基肽酶基因和表面表达.Biochem.J.1996；319817-823；Khne T.，et al.二肽基肽酶IV参与调节T细胞生长的细胞表面肽酶(综述).Int.J.Mol.Med.1999；43-15；Lendeckel U.et al.丙氨酰氨基肽酶在人T细胞的生长和功能中的作用(综述).Int.J.Mol.Med.1999；417-27。
现在已经知道可以依靠合成的抑制剂阻断分布在免疫细胞上的二肽基肽酶来达到治疗自身免疫性疾病和移植排斥的目的(见，例如EP-A0 764 151；WO 095/29,691；EP-A 0 731 789；EP-A 0 528 858)。
本发明是基于一个惊人的发现，在皮脂细胞(sebocytes)上或里表达的二肽基肽酶IV/CD26的抑制剂或氨基肽酶N/CD13的抑制剂或有相似底物特异性的酶(具有APN-和/或DP IV-类似物酶活性)的抑制剂，其单独或共同的作用能够抑制这些细胞的增生(DNA合成)。
我们的发明表明，为了治疗和预防因皮脂过度增生和分化状态的改变导致的皮肤疾病(良性的囊泡过度增生疾病像痤疮、痤疮样囊泡反应、多发性脂囊瘤、皮脂腺痣、老年性皮脂腺肥大，皮肤和头发的皮脂溢出，恶性的囊泡过度增生疾病像混合肿瘤、sebaceomes、皮脂腺肿瘤、皮脂腺CA)，因为皮脂细胞的增生是核心重要的，单独或共同使用DP IV和APN抑制剂或有相似底物特异性的酶(APN-和/或DP IV-类似物酶活性)的抑制剂或其相应的药物制剂和给药剂型是适合的。
详细地说，本发明是基于这样一个发现给予二肽基肽酶IV的抑制剂和/或氨基肽酶N的抑制剂对皮脂细胞(sebocytes)的DNA合成产生了显著的抑制作用。
到目前为止，以上所提到的疾病是通过给予抗生素和/或抗增生和分化的物质(抗雄激素、13—顺—维A酸及其它)进行局部和/或全身治疗的。尤其在全身治疗中，经常观察到不受欢迎的副作用，尤其是致畸形，类脂物代谢紊乱，精神反应现象，胃肠道紊乱以及黏膜—皮肤刺激反应。
DP IV和/或APN抑制剂的应用代表了一种全新的、大概非常有效地、可能经济的治疗方式和对现存治疗以上所述疾病的观念的有价值的替换。
根据本发明，应用二肽基肽酶IV的抑制剂和/或氨基肽酶N的抑制剂或有相似底物特异性的酶(具有APN-和/或DP IV-类似物酶活性)的抑制剂，可以以制药上适用的配方复合物的形式进行给予，使之作为这些酶的抑制剂、底物、伪底物、抑制活性肽和肽衍生物以及抗体。
DP IV的优选效应物，如Xaa-脯氨酸-二肽，相应衍生物优选二肽磷酸二芳基酯及其盐，Xaa-Xaa(色氨酸)-脯氨酸-(Xaa)n多肽(n＝0-10)，相应衍生物和他们的盐或氨基酸(Xaa)-酰胺，相应衍生物和他们的盐，其中Xaa是α-氨基酸/亚氨基酸或α-氨基酸衍生物/亚氨基酸衍生物，优选Nε-4-硝基苄氧羰基-L-赖氨酸(Nε-4-nitrobenzyloxycarbonyl-L-lysine)，L-脯氨酸，L-色氨酸，L-异亮氨酸，L-缬氨酸，和环胺，如吡咯烷，哌啶，噻唑烷，和它们的酰胺结构的衍生物。这样的化合物和制剂在较早的专利中已有所描述(K.Nerbert et al.DD296075A5)。丙氨酰氨基肽酶的优选抑制剂是苯丁抑制素(bestatin，乌苯美司ubenimex)，放线酰胺素(actinonin)，probestin，phebestin，RB3014或leuhistin。
同时给予抑制剂与已知的载体物质。一方面，给予可以按局部应用的形式，如乳膏，油膏，糊剂，凝胶剂，溶液，喷雾剂，脂质体和微囊体，洗剂(摇动合剂)，水胶体敷料，硬膏剂和相似的新型载体物质，喷射注射或其它皮肤病学的基质/载体，包括滴注应用；另一方面，作为全身应用可以以适合的配方或适合的制剂形式进行口服，皮肤导入，静脉，皮下，皮内，肌肉使用。
实施例1人无限增殖皮脂细胞系SZ95经与合成的DP IV和/或APN抑制剂共同培养后其DNA的合成被抑制我们的研究表明人无限增殖皮脂细胞系SZ95的DNA的合成(Zouboulis，C.C.et al.Establishment and characterization of animmortalized human sebaceous gland cell line(SZ95)，J.Invest.Dermatol.1999，113，1011-1020)在被给予DP IV抑制剂(Lys[Z(NO)2]-thiazolidide)(赖氨酸[Z(NO)2]-噻唑烷)和/或APN抑制剂(放线酰胺素)后以剂量依赖的方式被抑制。
人皮脂细胞系SZ95，公认作为痤疮的细胞模型，强烈表达DP IV和APN(
图1)。活体细胞中DP IV的酶活性总计38±18pkat/106细胞，APN的酶活性总计262±58pkat/106细胞(n＝3)。因此，APN和DP IV的mRNA在这些细胞中是可以被检测到的(图2)。
图1SZ95细胞上DPIV(CD26)和APN(CD13)表达的细胞计数流速率确定
图2通过反转录PCR(RT-PCR)确定DP IV(CD26)和APN(CD13)的mRNA的表达SZ95细胞与上面提及的抑制剂一起培养48小时，随后通过检测掺入的3[H]-胸腺嘧啶来测定DNA的合成，见Reinhold et al(Reinhold，D.et al.在PWN-刺激的PBMNC和T细胞中诱导转化生长因子β1的分泌的二肽基肽酶IV.Immunology 1997；91354-360)中的描述。图2表明DNA合成的抑制是剂量依赖的。
图3DP IV抑制剂(赖氨酸[Z(NO)2]-噻唑烷)和氨基肽酶N抑制剂(放线酰胺素)对人SZ95皮脂细胞的作用是剂量依赖的细胞分别与上面提及的浓度的抑制剂一起培养48小时。随后将3[H]-甲基-胸腺嘧啶加入培养基。6个多小时后测量掺入DNA中3[H]-胸腺嘧啶的量。
权利要求
1.二肽基肽酶IV(DP IV)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有DP IV-类似物酶活性)的抑制剂和/或丙氨酰氨基肽酶(氨基肽酶N，APN)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有APN-类似物酶活性)的抑制剂在制备抑制人皮脂细胞增生(DNA合成)的药物制剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中DP IV的抑制剂选自Xaa-脯氨酸-二肽(Xaa＝α-氨基酸或侧链保护的衍生物)，相应的衍生物，优选二肽磷酸二芳基酯，二肽硼酸(例如脯氨酸-硼酸-脯氨酸)及其盐，Xaa-Xaa-(色氨酸)-脯氨酸-(Xaa)n多肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝0-10)，相应的衍生物及其盐，氨基酸(Xaa)酰胺，相应的衍生物及其盐，其中Xaa是α-氨基酸或侧链保护的衍生物，优选Nε-4-硝基苄氧羰基-L-赖氨酸，L-异亮氨酸，L-缬氨酸，L-色氨酸，L-脯氨酸，和环胺，如吡咯烷，哌啶，噻唑烷，及其酰胺结构的衍生物，色氨酸-1，2，3，4四氢异喹啉-3-羧酸衍生物(TSL)和/或(2S，2S’，2S”)-2-[2’-[2”-氨基-3”-(吲哚-3-基)-1”-氧代脯氨酰]-1’，2’，3’，4’-四氢-6’，8’-二羟基-7-甲氧基异醌醇-3-基-羰基-氨基]-4-氢甲基-5-氢戊酸(TMC-2A)。
3.根据权利要求1所述的用途，其中被用作DP IV抑制剂的氨基酸酰胺，优选Nε-硝基苄-氧羰基-L-赖氨酸噻唑烷，吡咯烷和哌啶以及相应的2-氰基噻唑烷，2-氰基吡咯烷和2-氰基哌啶的衍生物。
4.根据权利要求1所述的用途，其中放线酰胺素(actinonin)、leuhistin、phebestin、氨肽酶抑制剂(amastatin)、苯丁抑制素(bestatin)、probestin、β-氨基硫醇(β-aminothiols)、α-氨基次磷酸(α-aminophosphinic acids)、α-氨基次磷酸衍生物(α-amino phosphinicacid derivatives)，优选D-Phe-Ψ-[PO(OH)-CH2]-Phe-Phe，及其盐作为APN抑制剂。
5.根据权利要求1到4的任一项所述的抑制剂的组合应用，是用于制备治疗和预防良性囊泡增生疾病(痤疮、痤疮样囊泡反应、多发性脂囊瘤、皮脂腺痣、老年性皮脂腺肥大，皮肤和头发的皮脂溢出)，SAHA综合症[皮脂溢出，痤疮，多毛症，秃头症]和恶性的囊泡增生疾病(混合肿瘤、sebaceomes、恶性发育的皮脂痣，皮脂腺肿瘤、皮脂腺CA)的药物制剂。
6.二肽基肽酶IV(DP IV)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有DP IV-类似物酶活性)的抑制剂和/或丙氨酰氨基肽酶(氨基肽酶N，APN)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有APN-类似物酶活性)的抑制剂抑制人皮脂细胞增生(DNA合成)的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中DP IV的抑制剂选自Xaa-脯氨酸-二肽(Xaa＝α-氨基酸或侧链保护的衍生物)、相应的衍生物，优选二肽磷酸二芳基酯、二肽硼酸(例如脯氨酸-硼酸-脯氨酸)及其盐、Xaa-Xaa-(色氨酸)-脯氨酸-(Xaa)n多肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝0-10)、相应的衍生物及其盐、氨基酸(Xaa)酰胺、相应衍生物及其盐，其中Xaa是α-氨基酸或侧链保护的衍生物，优选Nε-4-硝基苄氧羰基-L-赖氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-色氨酸、L-脯氨酸和环胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷及其作为酰胺结构起作用的衍生物、色氨酸-1，2，3，4四氢异喹啉-3-羧酸衍生物(TSL)和/或(2S，2S’，2S”)-2-[2’-[2”-氨基-3”-(吲哚-3-基)-1”-氧代脯氨酰]-1’，2’，3’，4’-四氢-6’，8’-二羟基-7-甲氧基异醌醇-3-基-羰基-氨基]-4-氢甲基-5-氢戊酸(TMC-2A)。
8.根据权利要求6所述的用途，其中被用作DP IV抑制剂的氨基酸酰胺，优选Nε-4-硝基苄-氧羰基-L-赖氨酸噻唑烷，吡咯烷和哌啶以及相应的2-氰基噻唑烷，2-氰基吡咯烷和2-氰基哌啶的衍生物。
9.根据权利要求6所述的用途，其中放线酰胺素、leuhistin、phebestin、amastatin、苯丁抑制素、probestin、β-氨基硫醇、α-氨基次磷酸、α-氨基次磷酸衍生物，优选D-Phe-Ψ-[PO(OH)-CH2]-Phe-Phe，及其盐作为APN抑制剂。
10.根据权利要求6到9的任一项所述的抑制剂的组合应用，用于预防和治疗良性的囊泡增生疾病(痤疮、痤疮样囊泡反应、多发性脂囊瘤、皮脂腺痣、老年性皮脂腺肥大，皮肤和头发的皮脂溢出)、SAHA综合症[皮脂溢出，痤疮，多毛症，秃头症]和恶性的囊泡增生疾病(混合肿瘤、sebaceomes、恶性发育的皮脂痣、皮脂腺肿瘤、皮脂腺CA)。
11.一种抑制人皮脂细胞增生(DNA合成)的方法，包括给具有相应疾病模式的病人单次或重复给予药物制剂，包括给予二肽基肽酶IV(DP IV)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有DP IV-类似物酶活性)的抑制剂和/或丙氨酰氨基肽酶(氨基肽酶N，APN)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有APN-类似物酶活性)的抑制剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中DP IV的抑制剂选自Xaa-脯氨酸-二肽(Xaa＝α-氨基酸或侧链保护的衍生物)，相应的衍生物，优选二肽磷酸二芳基酯，二肽硼酸(例如脯氨酸-硼酸-脯氨酸)及其盐，Xaa-Xaa-(色氨酸)-脯氨酸-(Xaa)n肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝0-10)，相应的衍生物及其盐，氨基酸(Xaa)酰胺，相应衍生物及其盐，其中Xaa是α-氨基酸或侧链保护的衍生物，优选Nε-4-硝基苄氧羰基-L-赖氨酸，L-异亮氨酸，L-缬氨酸，L-色氨酸，L-脯氨酸，和环胺，如吡咯烷，哌啶，噻唑烷，和它们的酰胺结构的衍生物，色氨酸-1，2，3，4四氢异喹啉-3-羧酸衍生物(TSL)和/或(2S，2S’，2S”)-2-[2’-[2”-氨基-3”-(吲哚-3-基)-1”-氧代脯氨酰]-1’，2’，3’，4’-四氢-6’，8’-二羟基-7-甲氧基异醌醇-3-基-羰基-氨基]-4-氢甲基-5-氢戊酸(TMC-2A)。
13.根据权利要求11所述的方法，其中被用作DP IV抑制剂的氨基酸酰胺，优选Nε-4-硝基苄-氧羰基-L-赖氨酸噻唑烷，吡咯烷和哌啶以及相应的2-氰基噻唑烷，2-氰基吡咯烷和2-氰基哌啶的衍生物。
14.根据权利要求11所述的方法，其中放线酰胺素、leuhistin、phebestin、氨肽酶抑制剂、苯丁抑制素、probestin、β-氨基硫醇、α-氨基次磷酸、α-氨基次磷酸衍生物、优选D-Phe-Ψ-[PO(OH)-CH2]-Phe-Phe、及其盐作为APN抑制剂。
15.根据权利要求11至14任一项所述的方法，用于预防和治疗良性的囊泡增生疾病(痤疮、痤疮样囊泡反应、多发性脂囊瘤、皮脂腺痣、老年性皮脂腺肥大，皮肤和头发的皮脂溢出，SAHA综合症[皮脂溢出，痤疮，多毛症，秃头症])和恶性过度增生疾病(混合肿瘤、sebaceomes、具有恶性发育的脂腺痣、皮脂腺肿瘤、皮脂腺CA)，包括给予病人单次或重复多次的一种或多种DP IV和/或APN抑制剂的药物制剂。
16.药物制剂，包括二肽基肽酶IV(DP IV)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有DP IV-类似物酶活性)的抑制剂和/或丙氨酰氨基肽酶(氨基肽酶N，APN)的抑制剂及有相似底物特异性的酶(具有APN-类似物酶活性)的抑制剂结合本身已知的载体物质、添加剂和/或辅助物质。
17.根据权利要求16的药物制剂，包括Xaa-脯氨酸-二肽(Xaa＝α-氨基酸或侧链保护的衍生物)、相应的衍生物，优选二肽磷酸二芳基酯及其盐，Xaa-Xaa-(色氨酸)-脯氨酸-(Xaa)n肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝0-10)，相应的衍生物及其盐，氨基酸(Xaa)酰胺，相应衍生物及其盐，其中Xaa是α-氨基酸或侧链保护的衍生物，优选Nε-4-硝基苄氧羰基-L-赖氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-色氨酸、L-脯氨酸、和环胺，如吡咯烷、哌啶、噻唑烷、及其用作酰胺结构的衍生物，色氨酸-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸衍生物(TSL)和/或(2S，2S’，2S”)-2-[2’-[2”-氨基-3”-(吲哚-3-基)-1”-氧代脯氨酰]-1’，2’，3’，4’-四氢-6’，8’-二羟基-7-甲氧基异醌醇-3-基-羰基-氨基]-4-氢甲基-5-氢戊酸(TMC-2A)作为DP IV的抑制剂。
18.根据权利要求16所述的药物制剂，包括氨基酸酰胺，如Nε-4-硝基苄-氧羰基-L-赖氨酸噻唑烷、吡咯烷和哌啶以及相应的2-氰基噻唑烷、2-氰基吡咯烷和2-氰基哌啶衍生物作为DP IV的抑制剂。
19.根据权利要求16的药物制剂，包括放线酰胺素、leuhistin、phebestin、amastatin、苯丁抑制素、probestin、β-氨基硫醇、α-氨基次磷酸、α-氨基次磷酸衍生物，优选D-Phe-Ψ-[PO(OH)-CH2]-Phe-Phe，及其盐作为APN抑制剂。
20.根据权利要求16到19任一项所述的药物制剂，包括两种或两种以上的DP IV抑制剂或具有DP IV-类似物酶活性的酶的抑制剂和/或APN的抑制剂或具有APN-类似物酶活性的酶的抑制剂，用间隔配方的方式结合本身已知的载体物质、添加剂和/或辅助物质，同时或，对于时间，立刻连续给予，以达到联合作用的目的。
21.根据权利要求16到20任一项所述的药物制剂，用于全身给药，给药方式如结合本身已知的载体物质、添加剂和/或辅助物质进行口服、经皮、静脉内、皮下、皮内、肌肉、直肠、阴道、舌下的应用。
22.根据权利要求16到20任一项所述的药物制剂，用于局部给药，其形式如乳膏、油膏、糊剂、凝胶剂、溶液、喷雾剂、脂质体或微囊体、摇动合剂、水胶体敷料、硬膏剂和其它包括滴注应用的皮肤病学基质/载体。
全文摘要
本发明涉及一种用于通过对这些细胞表达的氨基肽酶N(APN)和二肽基肽酶IV(DP IV)抑制剂的单独或联合作用抑制人皮脂细胞的增生所必须的DNA合成的方法。给予的APN和/或DP IV的抑制剂后对人皮脂细胞DNA的合成(增生)是剂量依赖性的。我们的发明显示，为了治疗和预防因皮脂细胞的过度增生和分化状态改变导致的皮肤疾病，使用上面提及的酶抑制剂和它的相应药物制剂及给药形式是适合的。
文档编号A61P17/00GK1738636SQ03806155
公开日2006年2月22日 申请日期2003年3月7日 优先权日2002年3月15日
发明者S·安佐格, H·戈尔尼克, K·诺伊贝特, C·C·佐步里斯, J·福斯特, U·伦代科尔, D·莱因霍尔德, R·费特尔 申请人:马格德堡医疗技术研究所(Imtm)股份有限公司, S·安佐格, H·戈尔尼克, K·诺伊贝特, C·C·佐步里斯