专利名称：药用化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及嘧啶衍生物及其作为磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂的用途。
背景技术：
磷脂酰肌醇(下文缩写为“PI”)为细胞膜上发现的多种磷脂之一。近年来，逐渐清楚PI在细胞内信号转导中起重要作用。二十世纪八十年代末期，发现PI3激酶(PI3K)是可使磷脂酰肌醇的肌醇环3-位磷酸化的酶(D.Whitman等，1988，Nature，332，664)。
最初认为PI3K是单种酶，但现在已经明确PI3K中存在许多亚型。每种亚型具有其自身的调节活性机理。根据它们体外底物特异性，已鉴定三类主要类型的PI3K(B.Vanhaesebroeck，1997，Trend inBiol.Sci，22，267)。I类PI3K的底物为PI、PI 4-磷酸酯(PI4P)和PI 4，5-二磷酸酯(PI(4，5)P2)。按照它们的激活机理，I类PI3Ks进一步分成两类，即Ia类和Ib类。Ia类PI3Ks包括PI3K p11 0α、p110β和p110γ亚型，它们传送来自酪氨酸激酶偶联受体的信号。Ib类PI3K包括G蛋白偶联受体激活的p110 γ亚型。已知PI和PI(4)P为II类PI3K的底物。II类PI3K包括PI3K C2α、C2β和C2γ亚型，其特征为在C末端含C2区。III类PI3K的底物仅为PI。
在PI3K亚型中，迄今为止已经对Ia类亚型进行了最深入研究。Ia类的三种亚型为110kDa催化亚基和85kDa或55kDa调节亚基的异源二聚体。调节亚基含SH2区并与被具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体或致癌产物磷酸化的酪氨酸残基结合，因而诱导使其脂类底物磷酸化的p110催化亚基的PI3K活性。因此，认为Ia类亚型与细胞增殖和致癌作用有关。
WO 01/083456描述了具有作为PI3K抑制剂活性并且抑制癌细胞生长的一系列稠合杂芳基衍生物。
发明概述现已发现一类新的稠合嘧啶化合物为具有类似药物的理化和药物动力学性质的有效的PI3K抑制剂。相对于Ib类PI3K，所述化合物对Ia类PI3K尤其是对P110α亚型表现出选择性。
因此，本发明提供了一种化合物，所述化合物为式(I)的稠合嘧啶或其药学上可接受的盐 其中A表示噻吩或呋喃环；n为1或2；R1为下式的基团 其中m为0或1；R30为H或C1-C6烷基；R4和R5与其连接的N原子一起形成包含0或1个选自N、S和O的另外的杂原子的5-或6-元饱和含N杂环基团，所述杂环基团可与苯环稠合并且为未取代或取代的；或者R4与R5中的一个为烷基而另一个为如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团或被如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团取代的烷基；
R2选自(a) 其中R6和R7与其连接的氮原子一起形成未取代或取代的吗啉、硫代吗啉、哌啶、哌嗪、氧杂氮杂环庚烷或硫杂氮杂环庚烷基团；和(b) 其中Y为在链的组成碳原子之间和/或在链的一个或两个末端包含1或2个选自O、N和S的杂原子的未取代或取代的C2-C4亚烷基；并且R3为未取代或取代的吲唑基。
发明详述式(I)中的噻吩或呋喃环A可为两种可得到的区域化学定向中的任何一种。因此式(I)包括式(Ia)的噻吩并[3，2-d]嘧啶和呋喃并[3，2-d]嘧啶以及式(Ib)的噻吩并[2，3-d]嘧啶和呋喃并[2，3-d]嘧啶 其中各R1-R3和n如上定义并且X为S或O。
在式(I)中，R1基团或多个基团R1，在给定的化合物中当n为2时，为相同或不同的，可键合于噻吩或呋喃环A上两个可用的环位置中的任何一个或两者。因此，关于以上结构(Ia)和(Ib)，当n为1时，呋喃或噻吩环在2-位或3-位用R1单取代。当n为2时，噻吩或呋喃环在2和3位用R1二取代。
如在此详细说明的，烷基为未取代或取代的直链或支链的饱和烃基。通常，它为C1-C20烷基，例如C1-C10烷基如C1-C6烷基或C1-C4烷基，例如甲基、乙基、异丙基、正丙基、叔丁基、仲丁基或正丁基。它也可以是戊基、己基、庚基、辛基及它们的各种支链异构体。
当烷基被取代时，它通常具有一个或多个R20取代基，该取代基选自卤素、烷氧基、碳环基、如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基、OH、SR、CN、硝基、NR2、-COOR、-C(O)R、-CH2OR、S(O)mR、-NRC(O)R、-S(O)mNR2、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-NRS(O)mR、-NRC(O)NR2和-CONR2，其中各R为H、未取代的烷基或C3-C10环烷基并且m为1或2。
通常R20选自卤素、烷氧基、碳环基、如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基、OH、CN、NR2、-COOR和-CONR2，其中各R为H或如上定义的未取代的烷基。
取代的烷基可为例如卤代烷基或基团-alk-N(R4)(R5)，其中alk为亚烷基链并且R4和R5与其连接的N原子一起形成包含0或1个选自N、S和O的另外的杂原子的5-或6-元饱和含N杂环基团，所述杂环基团可与苯环稠合并且为未取代或取代的。更通常地它为卤代烷基或基团-alk-N(R4)(R5)，其中alk为亚烷基链并且R4和R5与其连接的N原子一起形成如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团。
亚烷基为未取代或取代的、直链或支链的饱和二价烃基。通常它为C1-C8亚烷基例如C1-C6亚烷基。其优选为C1-C4亚烷基例如C2-C4亚烷基如亚甲基、亚乙基、亚异丙基、亚正丙基、亚叔丁基、亚仲丁基或亚正丁基。它也可为亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基及其的各种支链异构体。当亚烷基被取代时，它通常用如上定义的基团R20或者用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
链烯基为具有一个或多个双键的未取代或取代的、直链或支链的烃基。通常它为C2-C8链烯基例如C2-C6链烯基，如烯丙基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基或己烯基。当链烯基被取代时，它通常用如上定义的基团R20或者用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
链炔基为具有一个或多个叁键的未取代或取代的、直链或支链的烃基。通常它为C2-C8链炔基例如C2-C6链炔基，如乙炔基、丙炔基或丁炔基。当链炔基被取代时，它通常用如上定义的基团R20或者用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
卤代烷基为用一个或多个卤素原子取代的如上定义的烷基。它可为全卤代烷基例如三氟甲基或全氟己基。
卤素为氯、氟、溴或碘。它通常为溴或碘。
烷氧基为直链或支链的。通常它为C1-C6烷氧基例如C1-C4烷氧基，如甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丙氧基、叔丁氧基、正丁氧基或仲丁氧基。它为未取代的或者例如用如上定义的基团R20取代或者用未取代或被如上定义的基团R20取代的烷基取代。通常它用碳环基、吗啉代、OH、CN、NR2、-COOR或-CONR2取代，其中各R为H或如上定义的未取代烷基。
碳环基为非芳族饱和或不饱和单环烃环，通常具有3-10个碳原子。它可为C3-C8环烷基或C5-C10环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。或者它可为环烯基，通常为C4-C8环烯基，例如环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环庚二烯基、环辛烯基或环辛二烯基。碳环基可为未取代的或者例如用如上定义的基团R20取代或者用未取代或被如上定义的基团R20取代的烷基取代。通常它用烷氧基、吗啉代、OH、CN、NR2、-COOR或-CONR2取代，其中各R为H或如上定义的未取代烷基。
包含0或1个选自N、S和O的另外的杂原子的5-或6-元饱和含N杂环基团，所述杂环基团可与苯环稠合并且为未取代或取代的，通常选自吗啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、硫代吗啉、喹啉、异喹啉、二氮杂环庚烷、氧杂氮杂环庚烷和硫杂氮杂环庚烷。
当如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团被取代时，它可用如上定义的基团R20或用未取代或者用如上定义的基团R20取代的烷基取代。通常它用未取代或取代的烷基、未取代或取代的烷氧基、第二个如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团、未取代或取代的并且可与苯环稠合的5-或6-元含N杂芳基、-NR’R”、-alk-OR、-C(O)NR’R”、-alk-C(O)NR’R”、-alk-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)-alk-OR、-S(O)2-alk-NR’R”、-N(R)-alk-OR、-COOR、氧代(＝O)、OR、-N(R)SO2R、-SO2NR2、-SO2R或-CO-alk-OR(其中alk为亚烷基链，R为H或烷基，R’和R”各自独立为H、烷基或烷氧基，或者R’和R”一起形成如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团，并且R为未取代或例如用NR2或者如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团取代的烷基)。
含有1或2个选自N、S和O的杂原子并且为未取代或取代的5-、6-或7-元饱和杂环基团通常选自四氢吡喃、四氢噻喃、四氢呋喃和四氢噻吩。
当含有1或2个选自N、S和O的杂原子的5-、6-或7-元饱和杂环基团被取代时，它可用如上定义的基团R20或用未取代或者用如上定义的R20取代的烷基取代。通常它用一个或多个选自未取代或例如用如上定义的基团R20、如上定义的卤代烷基、如上定义的未取代或取代的烷氧基、卤素、羟基、CN、硝基、氨基、氧代(＝O)和-NR’R”取代的烷基的取代基取代，其中R’与R”各自独立为H或烷基。
所述杂芳基为含有1、2、3或4个环氮原子和0、1或2个另外的选自O、N和S的杂原子的杂芳基，该基团为单环或双环的并且为未取代或取代的。通常它为5-至12-元环。杂芳基的实例包括吡咯、吡唑、三唑、四唑、吲唑、噻唑、异噻唑、唑、异唑、吲哚、异吲哚、1，3-二氢-吲哚-2-酮、吡啶-2-酮、吡啶、吡啶-3-醇、咪唑、1，3-二氢-苯并咪唑酮、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、喹啉、异喹啉、喹喔啉、吡唑并吡啶、氨基吡唑啉酮、咪唑并吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪和二氢吲哚二酮基。优选的实例包括吲唑、吲哚、吡唑和四唑基团。这些基团可为未取代的或者例如用如上列举的基团R20或用未取代或者用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
可与苯环稠合的5-或6-元含N杂芳基通常选自吡咯、吡唑、三唑、四唑、吲唑、噻唑、异噻唑、唑、异唑、吲哚、异吲哚、1，3-二氢-吲哚-2-酮、吡啶-2-酮、吡啶、吡啶-3-醇、咪唑、1，3-二氢-苯并咪唑酮、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、喹啉、异喹啉、喹喔啉、吡唑并吡啶、氨基吡唑啉酮、咪唑并吡啶、嘧啶、哒嗪和吡嗪。当这样的杂芳基被取代时，它可用如上定义的基团R20或者用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
在R1中，m为0或1，通常为1。R30通常为H。R4和R5通常与其连接的N原子一起形成选自吗啉、硫代吗啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、喹啉、异喹啉、二氮杂庚烷、氧杂氮杂环庚烷和硫杂氮杂环庚烷的饱和含N杂环基团。由R4和R5形成的杂环基为未取代的或者例如用以上列出的取代基(如如上定义的基团R20)或者用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
在式(I)中R2的定义(a)中，由R6和R7形成的环通常为未取代或取代的吗啉环，所述取代基例如为如上列举的基团R20或者为未取代或用如上列举的基团R20取代的烷基。或者它可为选自四氢吡喃、四氢噻喃、四氢呋喃和四氢噻吩的基团，其各自为未取代的或者例如用如上列举的基团R20或用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。当由R6和R7形成的环被取代时，它可在环杂原子或环碳原子上例如用如上定义的基团R20或者用未取代或用如上定义的基团R20取代的烷基取代。
在式(I)中R2的定义(b)中，用Y表示的亚烷基链与它连接的碳原子一起形成含有1或2个选自O、N和S的杂原子并且为未取代或取代的饱和5-、6-或7-元杂环。所述杂环的实例包括四氢吡喃、四氢呋喃、四氢噻喃、四氢噻吩和吗啉。当杂环被取代时，通常它用一个或多个取代基(例如1、2或3个)选自卤素、烷基、卤代烷基(例如三氟甲基)、烷氧基、OH、CN、NR2、氧代(＝O)、-COOR和-CONR2的取代基取代，其中各R为H或如上定义的未取代的烷基。
在R3定义中的吲哚基团为未取代或取代的。如果它被取代，它可用一个或多个选自基团Z的取代基取代，其中Z选自H、OR、SR、-CH2OR、-CO2R、CF2OH、CH(CF3)OH、C(CF3)2OH、-(CH2)qOR、-(CH2)qNR2、-C(O)N(R)2、-NR2、-N(R)C(O)R、-S(O)mN(R)2、-OC(O)R、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)mR、-NRC(O)N(R)2、CN、卤素和-NO2，其中R各自独立选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和5-至12-元芳基或杂芳基，所述基团为未取代或取代的，m为1或2和q为0、1或2；一个或多个取代基选自卤基、烷基、链烯基、链炔基、CN、NO2、OR、SR、NR2、C(O)R、SOR、SO2R、SO2NR2、NRC(O)R和CO2R的取代基，其中R各自独立为H或烷基；和氧代基团(＝O)。通常，如果被取代，吲哚基团用OH、NH2或氧代基取代。在一个实施方案中，吲哚基团未取代。
吲哚基团R3为3-羟基苯基或4-羟基苯基的电子等排体。本文所述的电子等排体为具有与本文中式(I)结构的3-羟基苯基或4-羟基苯基相同或相似的键合性质的官能团。
在一个实施方案中，所述嘧啶具有式(Ic)的结构 其中R2和R3如上定义；
n为1；和R1为下式的基团 其中m为0或1；和R4和R5与其连接的N原子一起形成包含0或1个选自O、N和S的另外的杂原子的5-或6-元饱和含N杂环基团，所述杂环基团为未取代或用烷基、-S(O)2R、-C(O)NR’R”、-alk-C(O)NR’R”、-alk-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)-alk-OR、-S(O)2-alk-NR’R”、-N(R)-alk-OR、-S(O)2-alk-NR’R”、-N(R)-alk-OR和-C(O)-alk-OR取代，其中alk为亚烷基链，R为H或烷基并且R’与R”各自独立为H、烷基或烷氧基，或者R’与R”一起形成如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团。通常R’与R”一起形成吗啉、哌啶或哌嗪基团，更通常为吗啉基团。
在式(Ic)中，“alk”通常为直链C1-C4亚烷基，更通常为C1-C3亚烷基例如-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。由R4和R5形成的杂环基团通常选自吗啉、哌啶和哌嗪，其各自为未取代的或如以上定义的那样被取代。R2通常为吗啉。R3通常为未取代的吲哚基团。
本发明化合物的具体实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐1.2-(1H-吲哚-4-基)-6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶；2.2-(1H-吲哚-4-基)-6-(4-甲磺酰基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶；3.{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N，N-二甲基-甲酰胺；4.{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-吗啉-4-基-甲醛；5.{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-甲酰胺；6.{1-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌啶-4-基}-(2-甲氧基-乙基)-甲基-胺；7.2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-6-哌嗪-1-基甲基-噻吩并[3，2-d]嘧啶；8.2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-6-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基甲基)-噻吩并[3，2-d]嘧啶；9.2-{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-乙醇；10.{1-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌啶-4-基}-二甲基-胺；11.4-((2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉代噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基)甲基)-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺；和12.2-(4-((2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉代噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-N，N-二甲基乙酰胺。
根据取代基的种类，式(I)化合物可以几何异构体或互变异构体的形式存在，并且以分离形式或其混合物存在的这些异构体可用于本发明。当化合物具有不对称碳原子时，可基于这样的碳原子存在光学异构形式。这些光学异构体的混合物和分离形式都可用于本发明。
用于制备其中m为1的式(I)化合物的合适的合成方案采用式(II)的前体甲醛
其中A和R2如上定义。从该前体开始，合成包括以任一顺序进行钯催化的(苏楚基型(Suzuki-type))交叉偶联反应和还原氨化。因此本发明进一步提供了用于制备如上定义的其中m为1的式(I)化合物的方法，所述方法包括(a)在Pd催化剂存在下，用式R3B(OR15)2的硼酸或其酯处理式(II)化合物，式R3B(OR15)2中R3如上定义和各R15为H或C1-C6烷基或者两个基团OR15与其连接的硼原子一起形成频哪醇硼酸酯基团，式(II)中A和R2如上定义； 并且在合适的还原剂存在下，用式NHR4R5的胺处理得到的式(III)化合物，式NHR4R5中R4和R5如上定义，式(III)中A、R2和R3如上定义； 或者(b)在合适的还原剂存在下，用式NHR4R5的胺处理如上定义的式(II)化合物，其中R4和R5如上定义；并且在Pd催化剂存在下，用式R3B(OR15)2的硼酸或其酯处理得到的式(IV)化合物，式R3B(OR15)2中R3如上定义和各R15为H或C1-C6烷基或者两个基团OR15与其连接的硼原子一起形成频哪醇硼酸酯基团，式(IV)中A、R2、R4和R5如上定义 氨基化步骤和Pd催化的交叉偶联步骤均在常规条件下进行。钯催化剂可为通常用于苏楚基型(Suzuki-type)交叉偶联的任何催化剂，例如PdCl2(PPh3)2。还原剂通常为硼氢化物例如NaBH(OAc)3、NaBH4或NaCNBH4，尤其是NaBH(OAc)3。
如上定义的其中R2为-NR6R7的式(II)化合物可通过这样的方法制备，所述方法包括先后用锂化剂和N，N’-二甲基甲酰胺(DMF)处理式(IX)化合物，其中A、R6和R7如上定义。
通常通过向式(IX)化合物在有机溶剂例如四氢呋喃(THF)中的悬浮液中加入锂化剂在非极性有机溶剂(例如烃溶剂如己烷)中的溶液进行反应。如果使用THF，在约-78℃的低温下加入。锂化剂一般为烷基锂例如正丁基锂。
如上定义的式(IX)化合物可通过这样的方法制备，所述方法包括在有机溶剂中用式NHR6R7的胺处理式(X)化合物，其中R6和R7如上定义。
溶剂通常为醇例如甲醇。反应通常在室温下进行。
通过在参考实施例1中描述的用于制备2，4-二氯-噻吩并[3，2-d]嘧啶的方法或者通过与这样的方法类似的方法可制备式(X)化合物。
如上定义的其中R2具有下式的式(II)化合物可通过这样的方法制备， 所述方法包括使其中A和R3如上定义的式(XI)化合物 与式(XII)化合物进行钯催化的交叉偶联 其中L为H或选自卤素、-OSO2CF3、-B(OR)2、-Sn(R)3和-Si(R)3的基团，其中R为H或如上定义的烷基，随后还原，得到式(XIII)化合物，其中A、R3和Y如上定义。
通过例如在以上对式(IX)化合物转化为式(II)化合物描述的条件下先后用锂化剂和N，N’-二甲基甲酰胺(DMF)处理，可将式(XIII)化合物转化为相应的甲醛。锂化剂通常如上定义。然后通过在合适的还原剂例如如上列举的硼氢化物尤其是NaBH(OAc)3存在下用式NHR4R5的胺处理，其中R4和R5如上定义，得到的甲醛可转化为如上定义的要求的最终式(I)化合物，其中m为1。
通过Buchwald型钯催化的氮插入反应可制备其中m为0的如上定义的式(I)化合物。这样的方法可包括在钯催化剂存在下用式NHR4R5的胺，其中R4和R5如上定义，处理式(XIV)化合物，其中A、R2和R3如上定义和W为选自Br和I的卤基。
通过用锂化剂和选自溴和碘的卤素处理式(XV)化合物，其中A、R2和R3如上定义，可制备式(XIV)化合物。
锂化剂一般为烷基锂例如丁基锂。卤素一般为碘，得到其中W为I的式(XIV)化合物。
例如在由D.Prim和G.Kirsch于Tetrahedron1999，55(21)，6511-6526中描述的条件下，通过SNAr置换反应也可制备其中m为0的如上定义的式(I)化合物。这种方法包括在回流下在H2O中用其中R4和R5如上定义的式NHR4R5的胺处理如上定义的式(XIV)化合物12小时。
或者通过在CuI/En和K3PO4存在下在1，4-二烷中用式NHR4R5的胺(其中R4和R5如上定义)处理如上定义的式(XIV)化合物(其中W为I)可制备其中m为0的如上定义的式(I)化合物。反应在约110℃下进行24小时。该方法由Kang-K等在Synlett，(3)，427-430，2002中描述。
式(I)的稠合嘧啶可转化为药学上可接受的盐，并且盐可通过常规方法转化为游离化合物。药学上可接受盐的实例包括与无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸和磷酸；和有机酸例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸、甲磺酸、乙磺酸、天冬氨酸及谷氨酸的酸加成盐。
在本发明化合物具有游离羧基取代基的情况下，所述盐包括碱和碱土金属及铵的盐，例如钠、钾、镁、钙和铵的盐。后者通过用相应的金属碱或氨处理式(I)的游离稠合嘧啶或其酸加成盐制备。式(I)化合物及其的盐可作为水合物或溶剂合物存在。
在生物学试验中已经发现本发明化合物为PI3激酶抑制剂。化合物对Ia类型PI3激酶比对Ib类型更具有选择性并且通常对Ia类型比对Ib类型PI3激酶呈现至少20倍的选择性。尤其是所述化合物对p110α同工型较p110γ具有选择性。
因此本发明化合物可用作PI3激酶尤其是Ia型PI3激酶的抑制剂。因此，本发明化合物可用于治疗由与PI3激酶有关的异常细胞生长、功能或行为引起的疾病或病症。这样疾病和紊乱的实例由Drees等在Expert Opin.Ther.Patents(2004)14(5)703-732中讨论。这些疾病和紊乱包括癌症、免疫疾病、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌疾病和神经疾病。代谢/内分泌疾病的实例包括糖尿病和肥胖症。可用本发明化合物治疗的癌症的实例包括白血病、脑瘤、肾癌、胃癌和皮肤、膀胱、乳腺、子宫、肺、结肠、前列腺、卵巢和胰腺的癌症。
因此，患有免疫疾病、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌疾病或神经疾病的人或动物患者可通过包括给予如上定义的本发明化合物的方法治疗。因而可以改善或缓解患者的症状。
除具有生化效力以外，本发明化合物呈现特别适合于药物用途的物理化学和药物动力学性质。例如，这在以下实施例3中描述的生物试验的结果表现出来。具体地讲，所述化合物在生理pH下具有高水溶性；其中的许多化合物具有至少40μM的溶解度，并且其中的数量显著的化合物具有大于100μM的溶解度。在生理pH下具有高溶解度是合乎需要的，因为它促进生物利用度。如实施例3中描述的肝细胞清除率试验具体显示，所述化合物也具有高代谢稳定性，其中大多数受试化合物显示具有低的肝细胞清除率。低的肝细胞清除率与肝代谢的低速率相关。因此可见本发明化合物在具有作为PI3激酶抑制剂的生化效力的同时，具有改善的理化和药物动力学性质。
本发明化合物可以多种剂型给药，例如以片剂、胶囊剂、糖或者薄膜包衣片剂、液体溶液剂或者混悬剂的形式口服给药，或者例如肌内、静脉内或皮下非肠道给药。因此，所述化合物可通过注射或输注给予。
剂量依多种因素而定，包括患者的年龄、体重和身体状况及给药途径。每日剂量可在广泛限度内变化并且应在每种具体情况下调节至个体需要量。然而，当单独给予成人所述化合物时，对每种给药途径采用的剂量为0.0001-50mg/kg，最通常为0.001-10mg/kg体重，例如0.01-1mg/kg范围内。这样的剂量可给予例如每天1-5次。对静脉注射合适的每日剂量为0.0001-1mg/kg体重，优选为0.0001-0.1mg/kg体重。可作为单次剂量或者按照分开的剂量方案给予每日剂量。
所述化合物可配制成用作药用或兽用并含有药学上或兽医学上可接受的载体或稀释剂的组合物。通常按照常规方法制备组合物并且以药用或兽用合适的形式给予。可以任何常规形式给予化合物，例如以下A)例如作为片剂、包衣片剂、糖衣丸(dragee)、锭剂(troch)、糖剂(lozenge)、水或油混悬剂、液体溶液剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或者糖浆剂或酏剂口服。用于口服的组合物按照本领域公知的制备药物组合物的任何方法制备，并且这类组合物可包含一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的添加剂以提供药物上美观和可口的制剂。
片剂包含与适用于片剂制备的非毒性药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、葡萄糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉、马铃薯淀粉、磷酸钙或磷酸钠；颗粒剂和崩解剂例如玉米淀粉、藻酸、藻酸盐或者淀粉羟乙酸钠；粘合剂例如淀粉、明胶或者阿拉伯胶；润滑剂例如硅石、硬脂酸镁或硬脂酸钙、硬脂酸或滑石；泡腾剂混合物；染料、甜味剂、湿润剂例如卵磷脂、聚山梨醇酯或者月桂基硫酸盐。片剂可为未包衣或者可以通过已知技术包衣以延迟在胃肠道崩解和吸收并且因而提供更长期的持续作用。例如，可以采用时间缓释材料例如单硬脂酸甘油酯或者二硬脂酸甘油酯。以已知的方式例如通过混合、制粒、压片、糖包衣或者薄膜包衣方法可以制备这样的制剂。
用于口服使用的制剂也可为硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或者高岭土混合，或者为软明胶胶囊形式，其中活性成分为其本身的形式，或者与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或者橄榄油)混合。
水混悬液含有与适合于制备水混悬液的赋形剂混合的活性物质。这样的赋形剂为悬浮剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散或湿润剂可以为天然存在的磷脂类例如卵磷脂，或者环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如十七烷氧乙烯鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetanol)，或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的部分酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的缩合产物例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。
所述水混悬剂也可包含一种或多种防腐剂例如对-羟基苯甲酸乙酯或者正丙酯，一种或更多种着色剂例如蔗糖或者糖精。
通过使活性成分悬浮于植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或者悬浮于矿物油例如液体石蜡中可配制油混悬剂。油混悬剂可以含增稠剂例如蜂蜡、硬石蜡或者鲸蜡醇。
可以加入甜味剂，例如上面列出的那些，和矫味剂以提供可口的口服制剂。通过加入抗氧剂例如抗坏血酸可以使这些组合物防腐。通过加入水，适于制备水混悬剂的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或者湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。通过以上已提及的那些举例说明合适的分散剂或者润湿剂及悬浮剂。也可存在另外的赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
本发明药物组合物也可以水包油乳剂的形式存在。油相可以为植物油例如橄榄油或花生油，或者矿物油例如液体石蜡或者这些的混合物。合适的乳化剂可以为天然存在的树胶(例如阿拉伯胶或者黄蓍胶)、天然存在的磷脂类(例如大豆卵磷脂)和衍生自脂肪酸和己糖醇酐混合物的酯或部分酯例如脱水山梨醇单油酸酯，和所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含甜味剂和矫味剂。可以用甜味剂例如甘油、山梨醇或者蔗糖配制糖浆剂和酏剂。具体地讲，用于糖尿病患者的糖浆剂可仅包含作为载体的产物例如山梨醇，它不代谢为果糖或者它仅有非常少量代谢为葡萄糖。
这样的制剂也可以含缓和剂、防腐剂和矫味剂及着色剂；B)以灭菌注射水混悬剂或者油混悬剂的形式或者通过皮下，或者静脉内，或者肌内，或者胸骨内，或者通过灌注技术胃肠外给药。按照已知技术，采用以上已经提及的那些合适分散的湿润剂和悬浮剂可以配制该混悬剂。灭菌注射制剂也可以为在非毒性胃肠外可接受的稀释剂或者溶剂中的灭菌注射溶液剂或混悬剂，例如作为在1，3-丁二醇中的溶液剂。
在可接受的溶媒和溶剂当中可以采用的有水、Ringer溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌固定油(fixed oil)常规用作溶剂或者悬浮介质。为了该目的，可以采用任何牌号的固定油包括合成单-或二甘油酯。此外，发现可在制备注射剂时使用脂肪酸(例如油酸)；C)以用于喷雾器的气溶胶或溶液剂形式经吸入给药；D)以栓剂的形式直肠给药，栓剂的制备方法如下使药物与在常温下为固体但在直肠温度下为液体并且因而在直肠中熔融以释放药物的合适的非刺激性赋形剂混合。这样的材料为可可豆油和聚乙二醇；E)以霜剂、膏剂、凝胶剂、洗眼剂、溶液剂或混悬剂形式局部给药。
通过以下实施例对本发明进行进一步描述参考实施例12，4-二氯-噻吩并[3，2-d]嘧啶(64) 将3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯(13.48g，85.85mmol)和尿素(29.75g，5当量)的混合物在190下加热2小时。然后将热反应混合物倾入到氢氧化钠溶液中，随后经过滤除去任何不溶性物质。然后用2N HCl酸化混合物，得到为白色沉淀的1H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-2，4-二酮(63)，经过滤收集并空气干燥(9.49g，66％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)11.60-11.10(2H，br，s)，8.10(1H，d，J 5.2)，6.90(1H，d，J5.2).
将1H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-2，4-二酮(9.49g，56.49mmol)和氧氯化磷(150mL)的混合物在回流下加热6小时。然后冷却反应混合物并在剧烈搅拌下倾入到冰/水中，得到沉淀。然后过滤混合物，得到为白色固体的2，4-二氯-噻吩并[3，2-d]嘧啶(64)(8.68g，75％)。
δH(400MHz，CDCl3)8.13(1H，d，J5.5)，7.56(1H，d，J5.5).
参考实施例22-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶(65) 将2，4-二氯-噻吩并[3，2-d]嘧啶(64)(8.68g，42.34mmol)、吗啉(8.11mL，2.2当量)和MeOH(150mL)的混合物在室温下搅拌1小时。然后过滤反应混合物，用水和MeOH洗涤，得到为白色固体的标题化合物(11.04g，100％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)8.30(1H，d，J5.6)，7.40(1H，d，J5.6)，3.90(4H，t，J4.9)，3.74(4H，t，J4.9).
参考实施例32-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-甲醛(66) 在-78℃下，向2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶(65)(1.75g，6.85mmol)在干燥四氢呋喃(40mL)中的悬浮液中加入nBuLi在己烷中的2.5M溶液(3.3mL，1.2当量)。搅拌1小时后，加入干燥N，N-二甲基甲酰胺(796μL，1.5当量)。在-78℃下搅拌反应混合物1小时，然后缓慢温热至室温。在室温下再反应2小时后，将反应混合物倾入到冰/水中，得到黄色沉淀。经过滤收集并空气干燥，得到标题化合物(1.50g，77％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)10.20(1H，s)，8.28(1H，s)，3.95(4H，t，J4.9)，3.76(4H，t，J4.9).
参考实施例42-氯-6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶(72) 向2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-甲醛(66)(147mg，0.52mmol)、1-甲基-哌嗪(1.5当量，87μL)和乙酸(1.05当量，32μL)在1，2-二氯乙烷(3mL)中的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.1当量，121mg)，然后在室温下搅拌过夜。用二氯甲烷稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，分离并经MgSO4干燥。真空蒸发粗品产物并经层析法纯化，得到为灰白色结晶固体的标题化合物72(51mg，45％)。
实施例12-(1H-吲哚-4-基)-6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶(61)
将2-氯-6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶(72)(100mg，0.27mmol)、吲哚-4-硼酸(1.1当量，48mg)、碳酸氢钠(3当量，69mg)和氯化双(三苯基膦)合钯(II)(0.05当量，10mg)在甲苯(2.5mL)、乙醇(1.5mL)和水(0.7mL)中的混合物用氩气吹扫并在120℃下于微波照射下加热1小时。在二氯甲烷和水之间分配反应混合物，用盐水洗涤有机层，经硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。采用快速层析法纯化得到的残余物，得到标题化合物61(23mg，19％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)2.33(s，3H)，2.52(brm，4H)，2.63(brm，4H)，4.85(s，2H)，3.90-3.92(m，4H)，4.07-4.10(m，4H)，7.26-7.33(m，2H)，7.37(s，1H)，7.49(d，1H，J＝8.0)，7.55(m，1H)，8.19(d，1H，J＝7.3)，8.26(brs，1H).MS(ESI+)449.1(MH+)实施例2本发明的其他化合物通过与实施例1类似的方法制备以下本发明化合物。在每一种情况中用经参考实施例4的方法采用相应的胺替代1-甲基哌嗪制备的合适的前体氯代化合物替代化合物72。必要时，胺的制备在下文中进行描述。对每一种本发明标题化合物给出NMR数据。
1122-(1H-吲哚-4-基)-6-(4-甲磺酰基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶经自1-甲磺酰基-哌嗪制备的2-氯-6-(4-甲磺酰基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶制备。
1H NMR(400MHz，CDCl3)2.67-2.71(4H，m)，2.81(3H，s)，3.29-3.33(4H，m)，3.89(2H，s)，3.89-3.93(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.39(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.2Hz)，7.53-7.54(1H，m)，8.19(1H，d，J＝8.0Hz)，8.28(1H，brs)；MS(ESI+))513(MH+).
113{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N，N-二甲基-甲酰胺经自(哌嗪-1-基)-N，N-二甲基-甲酰胺制备的[4-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌嗪-1-基]-N，N-二甲基-甲酰胺制备。
胺的制备向1-BOC-哌嗪(867mg)在干燥四氢呋喃(8mL)中的溶液中先后加入三乙胺(0.97mL)和二甲基氨基甲酰氯(0.51mL)。在搅拌24小时后，然后用二氯甲烷稀释反应混合物，用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空除去溶剂，得到4-二甲基氨基甲酰基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(940mg)。用在二氯甲烷/甲醇中的HCl处理该化合物，得到化合物113。
1H NMR(400MHz，CDCl3)2.56-2.62(4H，m)，2.83(6H，s)，3.30-3.35(4H，m)，3.87(2H，s)，3.92-3.96(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3Hz)，8.30(1H，brm)；MS(ESI+) 506(MH+).
114{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-吗啉-4-基-甲醛经自吗啉-4-基-哌嗪-1-基-甲醛制备的[4-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌嗪-1-基]-吗啉-4-基-甲醛制备。
1H NMR(400MHz，CDCl3)2.55-2.58(4H，m)，3.28-3.32(4H，m)，3.35-3.39(4H，m)，3.67-3.71(4H，m)，3.88(2H，s)，3.92-3.96(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.0)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3Hz)，8.30(1H，br m)；(ESI+)MS(ESI+)548(MH+).
胺的制备在室温下，搅拌4-吗啉代碳酰氯(0.38ml)、1-BOC-哌嗪(552mg)和碳酸钾(439mg)在乙腈(7mL)中的混合物3小时。然后用二氯甲烷稀释反应混合物，用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空除去溶剂，得到4-(吗啉-4-羰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(865mg)。用在二氯甲烷/甲醇中的HCl处理该化合物，得到标题化合物，分离盐酸盐形式的化合物。
115{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-甲酰胺经自(哌嗪-1-基)-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-甲酰胺制备的[4-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌嗪-1-基]-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-甲酰胺制备。
胺的制备向在二氯甲烷(5mL)和三乙胺(0.41mL)中的N-BOC-哌嗪(500mg)中加入氯甲酸4-硝基苯酯(541mg)。1小时后，用二氯甲烷稀释反应混合物，用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空除去溶剂，得到哌嗪-1，4-二甲酸叔丁酯4-硝基-苯酯(940mg)。
向在四氢呋喃(5mL)中的哌嗪-1，4-二甲酸叔丁酯4-硝基-苯酯(500mg)中加入N-(2-甲氧基乙基)甲基胺(254mg)并把反应混合物加热回流24小时。真空减少反应混合物并采用快速层析法纯化，得到4-[(2-甲氧基-乙基)-甲基-氨基甲酰基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(304mg)。用在二氯甲烷/甲醇中的HCl处理该化合物，得到标题化合物，分离盐酸盐形式的化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)2.59-2.63(4H，m)，2.90(3H，s)，3.27-3.30(4H，m)，3.31(3H，s)，3.48(2H，t)，3.57(2H，t)，3.90(2H，s)，3.92-3.96(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3Hz)，8.30(1H，br m)；MS(ESI+)550(MH+).
116{1-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌啶-4-基}-(2-甲氧基-乙基)-甲基-胺经自(2-甲氧基-乙基)-甲基-哌啶-4-基-胺制备的[1-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌啶-4-基]-(2-甲氧基-乙基)-甲基-胺制备。
胺的制备在室温下，搅拌N-BOC-4-哌啶(500mg)、N-(2-甲氧基乙基)甲基胺(335mg)、乙酸(0.15mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(797mg)于1，2-二氯乙烷(5mL)中的混合物。搅拌过夜后，用氯仿稀释反应混合物，用碳酸氢钠溶液洗涤，经MgSO4干燥并真空除去溶剂。采用快速层析法纯化残余物，得到4-[(2-甲氧基-乙基)-甲基-氨基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯。用在二氯甲烷/甲醇中的HCl处理该化合物，得到标题化合物，分离盐酸盐形式的化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.62-1.72(2H，m)，1.76-1.84(2H，m)，2.10-2.18(2H，m)，2.36(3H，s)，2.40-2.48(1H，m)，2.68(2H，t，J＝6.0Hz)，3.04-3.11(2H，m)，3.38(3H，s)，3.50(2H，t，J＝6.3Hz)，3.85(2H，s)，3.92-3.97(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3Hz)，8.30(1H，br)；MS(ESI+) 521(MH+).
1172-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-6-哌嗪-1-基甲基-噻吩并[3，2-d]嘧啶4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯经醚化HCl催化的BOC-基团裂解制备。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)2.90-3.05(4H，br.m)，3.15-3.28(4H，br.m)，3.86-3.92(2H+4H，m)，4.18-4.25(4H，br m)，7.05(1H，br m，7.30(1H，t，J＝7.8Hz)，7.60(1H，s)，7.72(1H，d，J＝8.1Hz)，7.78(1H，brs)，7.95(1H，d，J＝8.1Hz)，9.30-9.40(2H，brm)，11.60(1H，br m)；MS(ESI+)435(MH+).
1182-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-6-(4-吗啉-4-基-6-哌啶-1-基甲基)-噻吩并[3，2-d]嘧啶.
经自4-吗啉代哌啶(可市售得到)制备的2-氯-4-吗啉-4-基-6-(4-吗啉-4-基-6-哌啶-1-基甲基)-噻吩并[3，2-d]嘧啶制备。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.55-1.68(2H，m)，1.83-1.90(2H，m)，2.11-2.18(2H，m)，2.18-2.25(1H，m)，2.54-2.60(4H，m)，3.05-3.11(2H，m)，3.70-3.76(4H，m)，3.84(2H，s)，3.92-3.96(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3Hz)，8.30(1H，br)；MS(ESI+)519(MH+).
1192-{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-乙醇经自N-(2-羟乙基)哌嗪(可市售得到)制备的2-[4-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌嗪-1-基]-乙醇制备。
1H NMR(400MHz，CDCl3)2.63(br m，10H，2xCH2)，3.65(m，2H，CH2)，3.84(2H，s)，3.92-3.96(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3Hz)，8.30(1H，br)；MS(ESI+)479(MH+).
120{1-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌啶-4-基}-二甲基-胺经自4-二甲基氨基哌啶(可市售得到)制备的[1-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌啶-4-基]-二甲基-胺制备。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.58-1.68(2H，brm)，1.87-1.95(2H，br m)，2.10(2H，brt，J＝10.7Hz)，2.34(1H，brm)，2.37(6H，brs)，3.02(2H，brm)，3.84(2H，s)，3.92-3.96(4H，m)，4.08-4.12(4H，m)，7.28-7.33(2H，m)，7.38(1H，s)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.56(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.3)，8.30(1H，br m)；MS(ESI+)477(MH+).
实施例3生物试验对如上述实施例中所述制备的本发明的化合物进行以下一系列生物试验(i)PI3 K生化筛选用纯化的重组酶和浓度为1μM的ATP通过放射测定确定化合物的PI3K抑制作用。连续用100％DMSO稀释所有化合物。于室温下将激酶反应温育1小时，通过加入PBS终止反应。接着采用S形剂量-反应曲线拟合测定IC50值(斜率可变)。列出的所有化合物针对PI3K的IC50为510μM或者更小。特别是，针对PI3K的p110δ同工型所有受试化合物具有0.1μM或者更小的IC50。
(ii)对细胞增殖的抑制作用在受试化合物存在下于96孔板中以最佳密度接种细胞并温育4天。随后把Alamar BlueTM加入到测定用培养基中，并把细胞温育6小时，之后在544nm激发波长，590nm发射波长下读数。采用S形剂量-反应曲线拟合计算EC50值。在所采用的细胞系范围中，所有受试化合物具有50μM或者更小的EC50。
(iii)Caco-2通透性以1×105细胞/cm2将Caco-2细胞接种到Millipore Multiscreen板上并且培养20天。随后对各化合物进行通透性评价。将各化合物施加到单层细胞的顶端表面(A)，测定渗入基底外侧(B)的化合物。以反方向(B-A)进行来研究主动转运。计算每种化合物的渗透系数值Papp，该值为化合物穿透膜的渗透速率的量度。基于与已确定人吸收的对照化合物的比较，把各种化合物分为低(Papp＜/＝1.0×106cm/s)或者高(Papp＞/＝1.0×106cm/s)吸收效能的两组。
为了评价化合物进行主动外排的能力，进行B-A/A-B的测定。B-A/A-B＞/＝1.0表明发生了主动细胞外排。通过Caco-2通透性筛选的所有受试化合物的Papp值＞/＝1.0×106cm/s。通过双向试验评价的化合物PI540具有小于1.0的B-A/A-B不对称指数，表明该化合物不进行主动细胞外排。
(iv)肝细胞清除率采用冷冻保存的人肝细胞悬浮液。在0.5×106活细胞/mL的细胞密度下，以1mM或者3μM的化合物浓度进行温育。在温育液中最终的DMSO浓度为0.25％。同时在不存在细胞下进行对照温育以表示任何非酶促降解。0、5、10、20、40和60分钟(对照组样品仅在60分钟)时从温育混合物中取出双份样品(50μL)并且加入到含MeOH的内标物(100μL)中以终止反应。用甲苯磺丁脲、7-羟基香豆素和睾酮作为对照化合物。把样品离心，并且对每一时间点集中的上清液进行LC-MSMS分析。自峰面积比(母体化合物峰面积/内标物峰面积)的自然对数与时间的关系曲线，如下计算内在清除率(CLint)CLint(μL/分钟/百万个细胞)＝V×k，其中k为消除率常数，得自浓度的自然对数与时间的关系曲线的斜率；V为衍生自温育体积的体积术语并且表示为uL 106个细胞-1。
将化合物分为低(CL≤4.6μL/分钟/106个细胞)、中(25.2μl/分钟/106个细胞≥CL≥4.6μl/分钟/106个细胞)和高(≥25.2μl/分钟/106个细胞)清除率三种。经测定，大部分本发明受试化合物具有低的肝细胞清除率。
(v)对细胞色素P450的抑制作用用双份样品在10种浓度下针对5个靶CYP450(1A2、2C9、2C19、2D6、3A4)来筛选本发明化合物，采用的最高浓度为100μM。标准抑制剂(呋拉茶碱、磺胺苯吡唑、反苯环丙胺、奎尼丁、酮康唑)用作对照物。用BMG Lab Technologies PolarStar在荧光模式下进行读板。在该测定中被评价的大部分受试化合物对CYP450的所有同工型的抑制活性弱(IC50＞/＝5μM)。
(vi)对细胞色素P450的诱导作用将得自单一供体的新鲜分离的人肝细胞培养48小时，然后以三种浓度加入受试化合物并且温育72小时。温育结束前1.5小时，加入CYP3A4和CYP1A2的探针底物。72小时后，移去细胞和培养基，并通过LC-MS/MS定量测定每一种探针底物的代谢程度。采用在一种浓度下温育的各P450的诱导物进行对照实验，一式三份。在本测定种评估的本发明的化合物对细胞色素P450酶的诱导作用可忽略不计。
(vii)血浆蛋白结合用缓冲液和10％血浆(v/v在缓冲液中)中制备受试化合物的溶液(5μm，0.5％最终DMSO浓度)。装配96孔HT透析板使得各孔通过半透纤维素膜分为两部分。向膜一侧加入缓冲溶液并向另一侧加入血浆溶液；然后在37℃下温育2小时，一式三份。随后排空小室(cell)，把每批化合物的溶液合并成两组(不含血浆组和含血浆组)，然后采用两组不含血浆(6个数据点)和含血浆溶液(7个数据点)的校准标准物通过LC-MSMS分析。计算各化合物的未结合部分值高蛋白结合的化合物(结合＞/＝90％)的Fu＜/＝0.1。在该测定中评价的本发明化合物具有＞/＝0.1的Fu值。
(viii)对hERG通道的阻滞作用采用已建立的通量方法学，评价本发明化合物调节从稳定表达hERG钾通道的HEK-294细胞流出铷的能力。在含RbCl的培养基中制备细胞并在96孔板中平板培养，生长过夜以形成单层。室温下通过吸取培养基并且用3×100μL的预孵育缓冲液(低[K+])冲洗各孔启动流出实验。吸取完后，将50μL的工作储备液(2x)化合物加入到各孔中并在室温下孵育10分钟。然后将50μL刺激缓冲液(高[K+])加入到各孔中，使受试化合物达到最终浓度。然后在室温下将细胞平板再孵育10分钟。然后把每孔取出的80μL上清液转移至96孔板的相应孔中并且通过原子发射光分析。用10个数据点(10pt)的IC50曲线筛选化合物，n＝2，始于100μm的最高浓度。
实施例4片剂组合物如下制备片剂，每片重0.15g并且含25mg的本发明化合物10000片的组合物含活性化合物(250g)乳糖(800g)玉米淀粉(415g)滑石粉(30g)硬脂酸镁(5g)把活性化合物、乳糖和一半玉米淀粉混合。然后使混合物通过0.5mm筛过筛。把玉米淀粉(10g)悬浮于温水(90mL)中。得到的糊状物用于把粉末制粒。干燥颗粒，然后在1.4mm筛上破碎成小的碎片。加入其余量的淀粉、滑石和硬脂酸镁，小心混合并加工成片剂。
实施例5注射制剂制剂A活性化合物 200mg盐酸溶液0.1M或者氢氧化钠溶液0.1M，加水至pH 4.0-7.0灭菌水加至 10mL使本发明化合物溶于大部分水(35℃-40℃)中，适当地用盐酸或者氢氧化钠把pH调至介于4.0-7.0之间。然后用水把每批容量补充至所需体积，并通过灭菌微孔滤膜过滤到已灭菌的10mL琥珀色玻璃小瓶(型号1)中，用灭菌密封结构密封。
制剂B活性化合物 125mg灭菌，无致热原，pH7磷酸盐缓冲液，加至25mL活性化合物 200mg苯甲醇 0.10gGlycofurol 751.45g注射用水加至 3.00mL使活性化合物溶于Glycofurol 75中。然后加入苯甲醇并溶解，水加至3mL。然后通过灭菌微孔滤膜过滤混合物，并密封在3mL玻璃小瓶(型号1)中。
实施例6糖浆剂活性化合物 250mg山梨糖醇溶液1.50g甘油2.00g甘油2.00g苯甲酸钠0.005g香料0.0125mL纯净水加至 5.00mL使本发明化合物溶于甘油和大部分纯净水的混合物中。然后把苯甲酸钠水溶液加入到该溶液中，随后加入山梨糖醇溶液，最后加入香料。用纯净水补充剩余体积并且充分混合。
权利要求
1.一种式(I)的稠合嘧啶或其药学上可接受的盐 其中A表示噻吩或呋喃环；n为1或2；R1为下式的基团 其中m为0或1；R30为H或C1-C6烷基；R4和R5与其连接的N原子一起形成包含0或1个选自N、S和O的另外的杂原子的5-或6-元饱和含N杂环基团，所述杂环基团可与苯环稠合并且为未取代或取代的；或者R4与R5中的一个为烷基而另一个为如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团或被如上定义的5-或6-元饱和含N杂环基团取代的烷基；R2选自 其中R6和R7与其连接的氮原子一起形成未取代或取代的吗啉、硫代吗啉、哌啶、哌嗪、氧杂氮杂环庚烷或硫杂氮杂环庚烷基团；和 其中Y为在链的组成碳原子之间和/或在链的一个或两个末端包含1或2个选自O、N和S的杂原子的未取代或取代的C2-C4亚烷基；并且R3为未取代或取代的吲哚基团。
2.权利要求1的化合物，其中所述稠合嘧啶具有式(Ia)的结构 其中X为S或O且R1、R2、R3和n如权利要求1中定义。
3.权利要求1的化合物，其中所述稠合嘧啶具有式(Ib)的结构 其中X为S或O且R1、R2、R3和n如权利要求1中定义。
4.权利要求1的化合物，所述化合物选自下列化合物及其药学上可接受的盐1.2-(1H-吲哚-4-基)-6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶；2.2-(1H-吲哚-4-基)-6-(4-甲磺酰基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶；3.{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N，N-二甲基-甲酰胺；4.{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-吗啉-4-基-甲醛；5.{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-甲酰胺；6.{1-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌啶-4-基}-(2-甲氧基-乙基)-甲基-胺；7.2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-6-哌嗪-1-基甲基-噻吩并[3，2-d]嘧啶；8.2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-6-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基甲基)-噻吩并[3，2-d]嘧啶；9.2-{4-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-乙醇；10.{1-[2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌啶-4-基}-二甲基-胺；11.4-((2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉代噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基)甲基)-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基哌嗪-1-甲酰胺；和12.2-(4-((2-(1H-吲哚-4-基)-4-吗啉代噻吩并[3，2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-N，N-二甲基乙酰胺。
5.一种用于制备如权利要求1中定义的其中m为1的化合物的方法，所述方法包括(a)在Pd催化剂存在下，用式R3B(OR15)2的硼酸或其酯处理式(II)化合物，式R3B(OR15)2中R3如上定义和各R15为H或C1-C6烷基或者两个基团OR15与其连接的硼原子一起形成频哪醇硼酸酯基团，式(II)中A和R2如权利要求1中定义； 并且在合适的还原剂存在下，用式NHR4R5的胺处理得到的式(III)化合物，式NHR4R5中R4和R5如权利要求1定义，式(III)中A、R2和R3如上定义； 或者(b)在合适的还原剂存在下，用式NHR4R5的胺处理如上定义的式(II)化合物，其中R4和R5如上定义；并且在Pd催化剂存在下，用式R3B(OR15)2的硼酸或其酯处理得到的式(IV)化合物，式R3B(OR15)2中R3如上定义和各R15为H或C1-C6烷基或者两个基团OR15与其连接的硼原子一起形成频哪醇硼酸酯基团，式(IV)中A、R2、R4和R5如上定义，
6.一种用于制备如权利要求1中定义的其中m为0的化合物的方法，所述方法包括在钯催化剂存在下，用式NHR4R5的胺处理式(XIV)化合物，式NHR4R5中R4和R5如权利要求1中定义，式(XIV)中A、R2和R3如权利要求1中定义且W为选自Br和I的卤基，
7.权利要求5或6的方法，所述方法还包括使得到的式(I)化合物转化为其药学上可接受的盐。
8.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的载体或稀释剂以及作为活性成分的权利要求1-4中的任何一项的化合物。
9.权利要求1的化合物在经疗法治疗人或动物体的方法中的用途。
10.权利要求1的化合物在制造用于治疗由与PI3激酶有关的异常细胞生长、功能或行为引起的疾病或病症的药物中的用途。
11.权利要求10的用途，其中所述疾病或病症选自癌症、免疫疾病、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌疾病和神经疾病。
12.一种用于治疗由与PI3激酶有关的异常细胞生长、功能或行为引起的疾病或病症的方法，所述方法包括给予需要患者权利要求1的化合物。
13.权利要求12的方法，其中所述疾病或病症选自癌症、免疫疾病、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌疾病和神经疾病。
全文摘要
本发明涉及式(I)的稠合嘧啶及其药学上可接受的盐其中A表示噻吩或呋喃环；n为1或2；R
文档编号A61K31/519GK101087795SQ200580044639
公开日2007年12月12日 申请日期2005年10月25日 优先权日2004年10月25日
发明者S·J·舒特尔沃尔思, A·J·福尔克斯, I·S·楚科夫里, N·C·万, T·C·汉科克斯, S·J·贝克, S·索哈尔, M·A·拉蒂夫 申请人:派拉梅德有限公司