专利名称：在联合治疗中使用免疫调节化合物的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明提供了包含一种或多种免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或 曲古抑菌素A的組合物，该組合物在用于骨髓重建和骨髓移植的CD34+ 造血干细胞4本外和体内扩增中使用以增加胎儿血红蛋白表达的方法，和 治疗、预防和/或控制癌症、肿瘤和血液系统疾病和病症的方法。
2.
背景技术：
2.1 IMiDs
已经进行了大量研究，旨在提供能安全有效地治疗与异常TNF-a生成 有关的疾病的化合物，参见，如Marriott, J.B"等人ExpeW 所o/. 77zer. 1(4): 1-8 (2001); G. W. Muller,等人Jot/ma/ o/Me<i/cZ"a/ CAem^o;, 39(17): 3238-3240(1996);和G.W.Muller,等人，倫wg画'c c& MW"W C7;簡勿 丄欲e^， 8: 2669-2674 (1998)。 一些研究关注了通过其有效抑制LPS刺激的 PBMC生成TNF-a的能力所选择的一組化合物。L.G. Corral等人Ann. Rheum. Dis. 58:(Suppl I) 1107-1113 (1999)。这些化合物，称作IMiDs (Celgene Corporation)或免疫调节药物，不仅表现出有效抑制TNF-a，还显 著抑制LPS诱导的单核细胞ILip和IL12的生成。LPS诱导的IL6也受到免疫调节化合物的抑制，虽然是部分抑制，参见同上。这些化合物是LPS 诱导的ILIO的有效刺激剂。
2.2 4-(氨基V2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮 4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮是一种具有如 下化学结构的免疫调节化合物
且在G.W. Muller等人的美囯专利No. 5,635,517中有描述，本文纳入其全部 内容作为参考。
2.3 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮 3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮是一种具有如下 化学结构的免疫调节化合物
NH2 ,
且在G.W. Muller等人的美国专利No. 5,635,517中有描述，本文纳入其全部 内容作为参考。
2.4曲古抑菌素A(TSA)
曲古抑菌素A (TSA)是一种具有如下结构的組蛋白去乙酰化酶抑制
剂
P O、2.5 羟基脲(HU)
鞋基力泉(HU)是一种具有如下结构的核糖核苷酸还原酶
2.6 丙戊酸
丙戊酸是一种具有如下结构的組蛋白去乙酰化酶抑制剂
尽管丙戊酸已经证明具有增加造血干细胞的增殖和自我更新的活 性，还显示出体外和体内的有效抗胂瘤活性(见Kaiser等人，2006 肠顧to/og/ca 91 (2) :248-251; Li等人，2005，舰O "cer 7T er 4(12J: 1912-1922)，但提供造血干细胞相关疾病和病症的安全有效疗法仍然需要改 进(Bug等人，2005, C朋ceri es. 65(7): 2537-2541)。
因此，现有技术急需安全有效的CD34+造血干细胞体外和体内的扩增 方法。
3.
发明内容
9本发明的实施方案是基于发现免疫调节化合物与丙戊酸、羟基脲或曲
古抑菌素A联合使用对CD34+造血干细胞扩增、胎儿血红蛋白(Hb)表达以及恶性细胞凋亡和抗恶性细胞增殖具有加成和协同效果。
在一实施方案中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮(本文中也称作"化合物l")或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氲-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮(本文也称作"化合物2")与丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A联合使用对CD34+造血干细胞扩增、胎儿血红蛋白(Hb)表达以及恶性细胞凋亡和抗恶性细胞增殖具有加成和协同作用。
因此，本发明4是供了組合物(如，药物組合物)，其包括有效量的免疫调节化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，包括该組合物在CD34屮造血干细胞扩增、胎儿血红蛋白(Hb)表达以及恶性细胞凋亡和抗恶性细胞增殖中的4吏用方法，和治疗、预防或控制相关疾病或病症的方法。
本发明还提供了組合物(如，药物组合物)，其包括有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氬-异p引咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，包括该组合物在CD34+造血干细胞扩增、胎儿血红蛋白(Hb)表达以及恶性细胞凋亡和抗恶性细胞增殖中的使用方法，和治疗、预防或控制相关疾病或病症的方法。
104.
图1所示为TSA(即曲古抑菌素A)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6_二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮)对Namalwa细胞增殖的协同和加成作用。
图2所示为TSA (即曲古抑菌素A)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮)对Namalwa细胞凋亡的协同和加成作用。
图3所示为VPA(即丙戊酸)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氲吲哚-l，3-二酮)对Namalwa细胞增殖的协同和加成作用。
图4所示为VPA(即丙戊酸)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮)对Namalwa细胞凋亡的协同和加成作用。
图5所示为VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)对Namalwa细胞增殖的协同和加成作用。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物2和VPA的浓度。
图6所示为VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)对Namalwa细胞凋亡的协同和加成作用。表格表示要得到加成和协同作用所需的化合物2和VPA的浓度。
图7所示为TSA(即曲古抑菌素A)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图7显示了在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞数量。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物1和VPA的浓度。
图8所示为TSA(即曲古抑菌素A)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢"引哚-l,3-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的加成或协
ii同作用。图8显示了在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞百分比。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物1和TSA的浓度。
图9所示为TSA(即曲古抑菌素A)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图9显示了在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞数量。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物2和TSA的浓度。
图10所示为TSA (即曲古抑菌素A)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异p引咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图10代表在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞百分比。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物2和TSA的浓度。
图11所示为VPA(即丙戊酸)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3陽哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图11显示了在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞数量。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物1和VPA的浓度。
图12所示为VPA(即丙戊酸)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图12代表在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞百分比。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物1和VPA的浓度。
图13所示为VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图13显示了在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞数量。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物2和VPA的浓度。图14所示为VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)对脊髓血源性CD34+扩增的协同和加成作用。图14代表在细胞培养6天后所得到的CD34+细胞百分比。表格表示要得到加成或协同作用所需的化合物2和VPA浓度。
图15所示为HU(即羟基脲)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮)或化合物2(即3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)对在红细胞中分化6天的正常供体CD34+细胞中胎儿血红蛋白表达的协同作用。
图16所示为HU(即羟基脲)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲咮-l,3-二酮)对在红细胞中分化6天的镰状细胞贫血患者CD34+细胞中胎儿血红蛋白表达的协同作用。
5.
具体实施例方式
本发明的实施方案是基于发现免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氲-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)与丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A联合使用对CD34+造血干细胞扩增、胎儿血红蛋白表达以及恶性细胞凋亡和抗恶性细胞增殖具有加成和协同效果。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了組合物(如，药物組合物)，其包括有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A 。
在另一实施方案中，本发明还提供了组合物(如，药物组合物)，其包括有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢p引咮-l，3-二酮或3-(4-
13氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还4是供了增加CD34+造血干细胞体外或体内扩增的方法，其包括使CD34+造血干细胞在体外或体内与有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A接触。
在还一实施方案中，本发明还提供了增加CD34+造血干细胞体外或体内扩增的方法，其包括使CD34+造血干细胞在体外或体内与有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氢-异^引咮-2-基)-派啶-2,6-二酮，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A接触。
在再一实施方案中，本发明还提供了治疗、预防或控制可通过0034+造血干细胞在体外或体内扩增来治疗、预防或控制的疾病或病症的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。
在又一 实施方案中，本发明还提供了治疗、预防或控制可通过CD34+造血干细胞在体外或体内扩增来治疗、预防或控制的疾病或病症的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮，和丙戊酸、羟基J泉或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还提供了骨髓移植方法，其包括使骨髓与有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A在体外接触，然后移植给所需患者。在又一实施方案中，本发明还提供了骨髓移植方法，其包括使骨髓
与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，和丙戊酸、羟基脲或曲 古抑菌素A在体外接触，然后移植给所需患者。
在又一实施方案中，本发明还提供了骨髓重建方法，其包括给予有 此需要的患者有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素 A。在一具体实施方案中，本发明提供了对已经进行或正在进行化疗和/ 或放疗的患者进行骨髓重建的方法，其包括给予患者有效量的免疫调节 化合物和丙戊酸、羟基I泉或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还提供了骨髓重建方法，其包括给予有 此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羟 基脲或曲古抑菌素A。在一具体实施方案中，本发明提供了对已经进行 或正在进行化疗和/或放疗的患者进行骨髓重建的方法，其包括给予患者 有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨 基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羟基脲或曲古抑 菌素A。
在又一实施方案中，本发明还提供了骨髓重建方法，其包括使骨髓 与有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A接触。在 一具体实施方案中，所述的骨髓已接受过或正在接受化疗或放疗。
在又一实施方案中，本发明还提供了骨髓重建方法，其包括使骨髓 与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A接触。在一具体实施方案中，所述的骨髓已接受过或正在接受
化疗或力i:疗。
在又一实施方案中，本发明还提供了治疗、预防或控制实体瘤的方 法，所述实体瘤包括但不限于恶性黑色素瘤、胰腺癌、原发部位不明的 类癌、肾癌、乳腺癌、肾上腺皮质癌、结肠直肠癌、内分泌肿瘤、黑色 素瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、肾母细胞瘤或非小细
胞肺癌(NSCLC)，该方法包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化 合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还提供了治疗、预防或控制实体瘤的方 法，所述实体瘤包括但不限于恶性黑色素瘤、胰腺癌、原发部位不明的 类癌、肾癌、乳腺癌、肾上腺皮质癌、结肠直肠癌、内分泌肿瘤、黑色 素瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、肾母细胞瘤或非小细 胞肺癌(NSCLC)，该方法包括给予有此需要的患者有效量的4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还^^是供了治疗、预防或控制血液系统疾 病或病症(如，血液系统癌症或肺瘤)的方法，其包括给予有此需要的患 者有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还^t是供了治疗、预防或控制血液系统疾 病或病症(如，血液系统癌症或肿瘤)的方法，其包括给予有此需要的患 者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羟基脲或曲古 抑菌素A。在又一实施方案中，本发明还提供了治疗、预防或控制骨髓增生异 常综合征、多发性骨髓瘤、卩血红蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、 骨髓增生异常、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞 性白血病、急性淋巴母细胞白血病、急性粒细胞性白血病或急性原始粒 细胞性白血病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化
合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨 基-l-氧代-l,3-二氬-异吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)，或其药学上可接受的盐、 溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲 古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构 体或多晶型。
在又一实施方案中，本发明还提供了增加细胞中胎儿血红蛋白表达 的方法，其包括使表达胎儿血红蛋白的细胞与有效量的免疫调节化合物和 丙戊酸、幾基J泉或曲古抑菌素A接触。
在又一实施方案中，本发明还提供了增加细胞中胎儿血红蛋白表达 的方法，其包括使表达胎儿血红蛋白的细胞与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲 哚-2-基)-派啶-2,6-二酮和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A接触。
在又一实施方案中，本发明还提供了增加所需患者中胎儿血红蛋白 表达的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化合物和丙戊 酸、羟基脲或曲古抑菌素A。在一具体实施方案中，本发明提供了增加 镰状细胞贫血(SCA)患者中胎儿血红蛋白表达的方法，其包括给予SCA 患者有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。在又一实施方案中，本发明还提供了增加所需患者中胎儿血红蛋白
表达的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代 (3画哌啶基))陽异二氢吲哚画l,3隱二酮或3-(4画氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚陽2画 基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A。在一具体实施方案 中，本发明提供了增加SCA患者中胎儿血红蛋白表达的方法，其包括给 予SCA患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羟 基脲或曲古抑菌素A。
在又一实施方案中，本发明还提供了诱导恶性细胞凋亡的方法，其 包括使恶性细胞与有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌 素A接触。 '
在又一实施方案中，本发明还提供了诱导恶性细胞凋亡的方法，其 包括使恶性细胞与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚 -1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊 酸、羟基脲或曲古抑菌素A接触。
在又一实施方案中，本发明还提供了抑制恶性细胞增殖的方法，其 包括使恶性细胞与有效量的免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌 素A接触。
在又一实施方案中，本发明还提供了抑制恶性细胞增殖的方法，其 包括使恶性细胞与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊
酸、羟基纟泉或曲古抑菌素A接触。
185.1
本发明所用的术语"患者"意指任何动物(如牛、马、绵羊、猪、鸡、 火鸡、鵪鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠)，在一实施方案中，是指 哺乳动物，如非灵长类动物或灵长类动物(如猴子或人)，在另一实施方 案中，是指人。在某些实施方案中，所述人是指婴儿、儿童、青少年或 成人。在某一具体实施方案中，所述患者之前患有血液系统疾病或病症 或有患这些病的风险。有患病风险的患者包括但不限于那些有血液系统 疾病或病症遗传病史的患者，或那些处于血液系统疾病或病症的患病风 险中的身体健康患者。在一实施方案中，人患者之前曾接受过或正在接 受血液系统疾病或病症的治疗。
短语"免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A"包括如下 組合(a)免疫调节化合物和丙戊酸；(b)免疫调节化合物和羟基脲；和 (c)免疫调节化合物和曲古抑菌素A，包括其各自的药学上可接受的盐、 溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型。
短语"4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羟基脲 或曲古抑菌素A"包括如下組合(&)4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢"l哚-l,3-二酮和丙戊酸；(b)4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异 二氢吲哚-l,3-二酮和曲古抑菌素A; (c)4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-异二氢吲哚-l,3-二酮和羟基脲;(d) 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲 咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸；(e)3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲咮 -2-基)-哌啶-2,6-二酮和曲古抑菌素A;和(!)3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和羟基脲，包括其各自的药学上可接受的盐、 溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型。
除非另有说明，本发明所用的术语"药学上可接受的盐"是指用药学 上可接受的酸，包括无机酸和有机酸配制而成的盐。适合的酸包括无机 酸和有机酸，但不限于乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、 樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、葡糖酸、谷氨酸、 葡萄糖醛酸、半乳糖酸、缩水甘油酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基碘酸、乳 酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、朴酸、泛酸、苯 乙酸、丙酸、磷酸、水杨酸、石更脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、碌i^酸、 酒石酸、对甲苯磺酸等。特别适合的酸是盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸。
除非另有说明，本发明所用的术语"溶剂化物"是指本发明提供的化 合物或其盐，其还包括通过非共价分子间力结合的化学计量量的或非化 学计量量的溶剂。当溶剂是水时，所述溶剂化物为"水合物"。
本发明所用的"多晶型"是指本发明所述化合物的具体结晶排列。多 晶型可通过使用不同工作条件和/或溶剂来获得。具体地，多晶型可通过 在具体溶剂中重新结晶本发明所述的化合物来制备。
除非另有说明，如本发明所用的术语"前药"是指化合物的 一 种衍生 物，它在生物条件下(在体外或体内)可水解、氧化或以其它方式反应而 提供所述化合物。前药的例子包括但不限于包含可生物水解部分，如可 生物水解酰胺、可生物水解酯、可生物水解氨基甲酸酯、可生物水解碳 酸酯、可生物水解酰^1，以及可生物水解磷酸酯类似物的化合物。前药
的其它例子包括含有以下基团的化合物-NO 、 -N02、 -ONO或-ON02 部分。前药通常可通过已》口方法制备，如\ Me&c/wa/ C7^附^/ry
20Z)/scoveo;， 172- 178, 949-982 (Manfred E. Wolff第五版1995)， 以及D^/g" o/iVcxirags (H. Bundgaard编Elselvier, New York 1985)中所述。
除非另有说明，本发明所用的术语"可生物水解氨基甲酸酯"，"可生 物水解碳酸酯"，"可生物水解酰脲"和"可生物水解磷酸酯"分别是指具有 以下性质的化合物的氨基甲酸酯、石炭酸盐、酰月泉和磷酸盐，其l)不干 扰该化合物的生物活性，但是在体内可赋予该化合物有利属性，例如吸 收、作用持续时间或作用起始；或2)没有生物活性，但是在体内转化成 生物活性化合物。可生物水解氨基甲酸酯的例子包括但不限于低级烷基 胺、取代的乙烯二胺、氨基酸、羟基烷基胺、杂环和杂芳胺和聚醚胺。
除非另有说明，本发明所用的术语"立体异构体"包括本发明所提供 的所有光学/立体异构体纯的和光学/立体异构体富集的化合物。
本发明提供的化合物可以以对映体的外消旋混合物或非对映体混合 物存在。本发明的实施方案包括使用这些化合物的立体异构体纯的形式 和使用那些形式的混合物。例如，在本发明所述的方法和组合物中使用 含有等量或不等量的化合物的对映体的混合物。可以不对称合成或使用 标准技术例如手性柱或手性拆分剂拆分这些异构体。参见，如，Jacques, J.等,五"a"/io^2e/^， i acewa/es i eso/who"s (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen， S. H.等人7Wra/zec/腦33:2725 (1977); Eliel, E. L., 5Vereoc/^/m、^y o/CWrZ)o" C蘭/ ow"A (McGraw-Hill, NY, 1962);和Wilen S. H.， 7b6/es 0// es0/v/Mg々e她awt/Op"ca/i eso/w /om1， 第268页 (E丄. Eliel编，Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame， IN, 1972)。除非另有说 明，本发明所用的术语"立体异构体纯的"、"对映体纯的"或"光学纯的"是指化合物包括一种立体异构体且基本上不含有该化合物的相反立体异
构体或对映体。例如，当化合物含有80%、 90%、或95%或更多的一种 立体异构体和20%、 10%、或5%或更少的相反立体异构体时，该化合物 是立体异构体纯的或对映体纯的。在某些情况下，当本发明的化合物相 对于特定的手性中心是约80。/。ee(对映体过量)或更大，在一实施方案中 等于或大于90%ee,在另 一实施方案中相对于特定的手性中心为95% ee 时，则该化合物被认为相对于手性中心是光学活性的或立体异构体/对映 体纯的(即，基本上R-型或基本上S-型)。
除非另有说明，本发明所用的术语"立体异构体富集的"或"光学富
集的"也包括不是外消旋化合物的混合物，如化合物的立体异构体的混合 物(如R/S = 30/70、 35/65、 40/60、 45/55、 55/45、 60/40、 65/35和70/30)。
除非另有说明，本发明所用的术语"治疗"是指当患者患具体疾病或 病症时减少该疾病或病症或其症状的严重性，或者延迟或减緩该疾病或 病症或其症状的进展而发生的行为。
除非另有说明，如本发明所用的术语"预防"是指在患者开始患具体 疾病或病症或其症状之前，抑制或降低该疾病或病症或其症状的严重性 而发生的行为。有血液系统疾病或病症患病风险的患者是这种预防性治 疗的候选人。
除非另有说明，本发明所用的术语"控制"包括对患有具体疾病或病 症或其症状的患者预防该疾病或病症的复发、和/或延长该患有该具体疾 病或病症或其症状的患者处于緩解状态的时间。该术语包括调节该疾病 或病症或其症状的阈值、发展和/或持续时间，或者改变患者对该疾病或 病症或其症^1大的反应方式。
22除非另有说明，本发明所用的术语化合物或組合物的"有效量"是指 在疾病的治疗、预防和/或控制中足以提供治疗益处或延迟或减轻一种或 多种与该疾病或病症相关的症状的量。在一实施方案中，在本发明的所 述组合物、使用方法和治疗、预防和控制方法中所用的术语"有效量"是
指免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)或其 药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型的 量，和丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A，或其药学上可接受的盐、溶剂 化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型的量，这些量当互相组合使 用时可用于本发明所述的方法或提供患者治疗性益处，如疾病或病症的 治疗、预防和/或控制，或与疾病或病症相关的症状的延迟或减轻。例如， "有效量的4-(氨基)-2-(2,6- 二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3- 二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羟基脲 或曲古抑菌素A"包括有效量的每种化合物，当这些量如本发明所述互相 組合使用时会在患者中提供治疗益处，如疾病或病症的治疗、预防和/ 或控制，或与疾病或病症相关的症状的延迟或减轻。
术语"有效量"包括提供总体疗效、减少或避免疾病或病症或其症状 的症状或原因、或提供另 一种治疗试剂的治疗效果的量。
术语"共给予"和"联合"包括没有具体时间限制地同步、同时或先后 给予两种治疗剂(即，免疫调节化合物4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构 体或多晶型的量，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A,或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型)。在一实施方 案中，这两种试剂在细胞或在患者的体内同时存在或同时发挥其生物学 或治疗作用。在另一实施方案中，这两种治疗剂在同一组合物中或单位 剂型中。在又一实施方案中，这两种治疗剂在不同的組合物中或单^f立剂 型中。
术语"白血病"是指造血組织的恶性赘生物。在某些实施方案中，白 血病包括但不限于髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白 血病、急性淋巴母细胞白血病、急性粒细胞性白血病和急性原始粒细胞 性白血病。该白血病是复发的、常规治疗难治的或对常规治疗耐受的。 术语"复发"是指经治疗后白血病被緩解的患者骨髓中的白血病细胞出现 回复和正常血细胞出现减少的情形。术语"难治的或耐受的"是指即使在 深度治疗后患者骨髓还是有残留白血病细胞的情形。
术语关于骨髓的"重建"包括扩大正常造血祖细胞，以重建正常的血 液细J包群。
术语"单位剂型"和"单一单位剂型，，包括片剂；咀嚼片；嚢片；胶 囊，如弹性软明胶胶嚢；袋剂；扁囊剂；锭剂；糖锭剂；分散剂型；粉 剂；溶液；凝胶；适于向患者口服或粘膜给药的液体剂型，包括悬浮液(例 如，水性或非水性液体悬浮液)、乳剂(例如，水包油乳剂或油包水乳剂)、 溶液和酏剂，以及可重新配制以向患者提供适于口服或静脉给药的液体 剂型的无菌固体(如结晶或无定形固体)。该单位剂型并不一定作为单一 剂量予以给药。
5.2免疫调节化合物生物，如美国专利No.5，929,U7所公开的那些；1-氧代-2-(2,6-二氧代-3-氟哌啶-3基)异二氢吲哚和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)异二 氢吲哚，如美国专利No.5,874,448和5,955,476中描述的那些；美国专利 No.5,798,368所述的四位取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代异二氢 吲咮；1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚(如沙利 度胺的4-曱基衍生物)，包括但不限于在美国专利No.5,635,517、 6,476,052、 6,555,554和6,403,613中所述的那些；美国专利No.6,380,239 所述的在二氲p引咮环的4-或5-位被取代的1-氧代和1,3-二氧代异二氢^引 咮(如，4-(4-氨基-l,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-4-氨基甲酰丁酸)；美国专 利No.6,458,810所述的在2-位被2,6-二氧代-3-羟基哌啶-5-基取代的异二 氢吲哚-l-酮和异二氢吲哚-l,3-二酮(如2-(2,6-二氧代-3-羟基-5-氟哌啶-5-基)-4-氨基异二氢吲哚-l-酮)；美国专利No.5,698,579和5,877,200所述的 一类非多肽环酰胺；氨基沙利度胺及其类似物、水解产物、新陈代谢物、 衍生物和前体，以及取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)邻苯二甲酰亚胺和取 代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代异吲哚，如美国专利No.6,281,230 和6,316,471中所述的那些；异"引咮-酰亚胺化合物，如2001年10月5 曰提交的美国申请No.09/972,487、 2001年12月21日提交的美国申请 No.10/032,286和国际申请PCT/US01/50401 (国际公开号WO 02/059106) 中所述的那些。本文中所述的每个专利和专利申请的全部内容纳入本文 作为参考。在一个实施方案中，免疫调节化合物不包括沙利度胺。
免疫调节化合物的其它具体实施方案包括但不限于在苯并环中用氨 基取代的1-氧代-和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢巧|哚，如美国专利No.5,635,517所述，其纳入本文作为参考。这些化合物具有结 构I:
其中X和Y之一是C二O， X和Y的另一个是C二O或CH2， R"是氢 或低级烷基，具体是甲基。具体的免疫调节化合物包括但不限于 l-氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基异二氢吲哚； l-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-5-氨基异二氢吲哚； 1 -氧代-2-(2， 6- 二氧代哌啶-3 -基)-6-氨基异二氢吲哚； l-氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氨基异二氢吲哚； 1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基异二氬吲哚；和 1，3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氨基异二氢吲哚。 其它具体免疫调节化合物属于 一 类取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基) 邻苯二甲酰亚胺和取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代异吲哚，如美 国专利No.6,281，230、 6,316,471、 6,335,349和6,476,052和国际申请 PCT/US97/13375(国际公开号WO98/03502)中所述的那些，这些文献均纳 入本文作为参考。代表化合物具有下式
其中:
X和Y之一是CK)， X和Y的另 一个是C-O或CH2;(i)R1、 R2、 113和114各自彼此独立地是卣素、l至4个碳原子的烷基 或1至4个碳原子的烷氧基，或(ii)R1、 R2、 R 和R"之一是-NHR5，其它 的R1、 R2、 R3和R4是氬；
R"是氢或1至8个碳原子的烷基；
R"是氢、l至8个碳原子的烷基、苯甲基或鹵素；
前提是，如果X和Y是C=0且(i)R1、 R2、 R3和R4各自是氟或(ii)R1、 R2、 113和114之一是氨基，则W不是氢。
这组的代表化合物具有下式
其中W是氢或甲基。在具体实施方案中，本发明提供的所述方法和 组合物包括使用免疫调节化合物的光学纯的形式(如光学纯的(R)或(S)对 映体)。
27其它具体的免疫调节化合物属于美国申请公开No.2003/0096841和 2003/0045552、以及国际申请PCT/US01/50401 (国际公开WO02/059106)
所述的一类异吲咮-酰亚胺，该文献均纳入本文作为参考。代表化合物具
有式n:
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、包合物、对映体、非
对映体、外消旋化合物、和立体异构体的混合物，式中 X和Y之一是C二O，另一个是CH2或C二0;
W是H、 (C广C8)烷基、(C3-C7)环烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、 苯甲基、芳基、(Co-C4)烷基-(C广C6)杂环烷基、(Co-C4)烷基-(C2-C5)杂芳
基、C(O)R3、 C(S)R3、 C(O)OR4、 (C广Cs)烷基-N(R6)2、 (C广C8)烷基-OR5、 (C广C8)烷基隱C(0)OR5、 C(O)NHR3、 C(S)NHR3、 C(0)NR3R3'、 C(S)NR3R3' 或(d-C8)烷基-0(CO)R5;
R2是H、 F、苯甲基、(C广C8)烷基、CVC8烯基、或CVC8炔基； R3和RS'分别是(C广C8)烷基、(C3-C )环烷基、(CVCs)烯基、(C2-C8)
炔基、苯甲基、芳基、(Co-C4)烷基-(C广C6)杂环烷基、(Co-C4)烷基-(C2-Cs)
杂芳基、(C。-Q)烷基-N(R6)2、 (C广Cs)烷基-OR5、 (C广Cs)烷基-C(O)OR5、 (d-C8)烷基画0(CO)R5、或C(0)OR5;
R4是(C广Cs)烷基、(C2-Q)烯基、(CVC8)炔基、(C广C4)烷基-OR5、苯
甲基、芳基、(Co-C4)烷基-(C广C6)杂环烷基、或(Q)-C4)烷基-(C2-C5)杂芳基；
R5是(CrC8)烷基、(CVC8)烯基、(C2-C8)炔基、苯甲基、芳基、或(<:2-(35)
杂芳基；
R"每次出现独立地为H、 (C广C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-Cs)炔基、 苯甲基、芳基、(C2-Cs)杂芳基、或(CVC8)烷基-C(0)0-R5或R"基团联合 形成杂环烷基；
n是0或1;和
*代表手性碳中心。
在式II的具体化合物中，当n是0时，则R1是(C3-C7)环烷基、(C2-Cs) 烯基、(C2-Cs)炔基、苯甲基、芳基、(QrC4)烷基-(C广C6)杂环烷基、(C0-C4) 烷基-(CVC5)杂芳基、C(O)R3、 C(O)OR4、 (C广C8)烷基-N(R6)2、 (C广C8)烷 基画OR5、 (C广C8)烷基-C(0)OR5、 C(S)NHR3、或(C广C8)烷基陽0(CO)R5;
R2是H或(d-Cs)烷基；和
RS是(C广Q)烷基、(C3-C7)环烷基、(C2-Cs)烯基、(CVC8)炔基、苯甲 基、芳基、(Co-C4)烷基-(C广C6)杂环烷基、(Co-C4)烷基-(C2-C5)杂芳基、
(Cs-C8)烷基-N(R6)2、 (Co匿C8)烷基画NH-C(0)0隱R5、 (C广C8)烷基-OR5、 (CrQ) 烷基-C(O)OR5、 (C广C8)烷基-0(CO)R5、或C(0)OR、且其它变体具有同 样的定义。
在式II的其它具体化合物中，RS是H或(d-C4)烷基。 在式II的其它具体化合物中，！^是(C广C8)烷基或苯甲基。 在式II的其它具体化合物中，R1是H、 (C广Cs)烷基、苯甲基、 CH2OCH3、 CH2CH2OCH3、或
29在式II的化合物的另 一实施方案中
R'是
式中Q是O或S;各个R7分别是H、 (d-C8)烷基、((33-<:7)环烷基、
(C2-C8)烯基、(CVC8)炔基、苯甲基、芳基、卣素、(Co-C4)烷基-(C广C6) 杂环烷基、(Co-C4)烷基-(C2-C5)杂芳基、(C()-C8)烷基-N(R6)2、 (C广C8)烷基
-OR5、 (C广C8)烷基-C(0)OR5、 (C广C8)烷基-0(CO)R5、或C(0)OR5或相邻 R7 —起形成双环烷基或芳基环。
在式II的其它具体化合物中，R^是C(0)R3。
在式II的其它具体化合物中，R3是(CVC4)烷基-(CVC5)杂芳基、(C广Q) 烷基、芳基或(Q)-C4)烷基-OR5。
在式II的其它具体化合物中，杂芳基是吡啶基、呋喃基或噻吩基。 在式II的其它具体化合物中，R/是C(0)OR4。
在式II的其它具体化合物中，C(O)NHC(O)的H被(C广C4)烷基、芳 基或苯甲基取代。
这类化合物的其它例子包括但不限于[2-(2,6- 二氧代-哌啶-3-基)-l,3-二氧代-2,3-二氢-lH-异吲哚-4-基甲基]-酰胺；(2-(2,6-二氧代-哌啶 -3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-111-异吲哚-4-基甲基]-氨基甲酸叔丁酯；4-(氨 基曱基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶))-异二氢吲哚-l,3-二酮；^(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-l,3-二氧代-2,3-二氢-lH-异吲哚-4-基甲基)-乙酰胺；^{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)甲基}环丙基-甲酰胺；2-氯-N-((2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代异二氢吲哚-4-基) 甲基}乙酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶))-l,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)-3-吡啶基甲酰胺；3-{1-氧代-4-(苯甲基氨基)异二氢吲哚-2-基}哌啶-2，6-二 酮；2-(2,6-二氧代(3-哌啶基》-4-(苯甲基氨基)异二氢吲哚-l,3-二酮;N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)甲基}丙酰胺； N-((2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)甲基)-3-吡啶 基甲酰胺；N-《(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l，3-二氧代异二氢吲哚-4-基)甲 基}庚酰胺；N-((2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代异二氢吲哚-4-基) 甲基}-2-呋喃基甲酰胺；(N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代异二氢 吲哚-4-基)氨基甲酰}乙酸甲酯；N-(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代 异二氢W咮-4-基)戊酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代异二氢 "引咮-4-基)-2-噻吩基甲酰胺；N-U2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代异 二氢吲哚-4-基]甲基}( 丁基氨基)甲酰胺；N-{[2-(2,6- 二氧代(3 -哌啶 基))-1，3-二氧代异二氢吲哚-4-基]甲基}(辛基氨基)甲酰胺；和^{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基]甲基}(苯甲基氨基)甲酰 胺。
其它具体免疫调节化合物属于美国专利申请公开No.2002/0045643、 国际申请公开WO98/54170和美国专利No.6,395,754中所述的一类异吲 哚-酰亚胺，这些文献均纳入本文作为参考。代表化合物具有式III:
<formula>formula see original document page 31</formula>及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、包合物、对映体、非 对映体、外消旋化合物和立体异构体混合物，式中
X和Y之一是C二O，另一个是CH2或C二0; R是H或CH2OCOR';
(i)R1、 R2、 RS或R"各自分别是卣素、1至4个碳原子的烷基或1至 4个碳原子的烷氧基，或(ii)R1、 R2、 RS或R"之一是硝基或-NHR5,其它 R1、 R2、 113或114是氢；
RS是氢或1至8个碳原子的烷基；
R"是氢、l至8个碳原子的烷基、苯并、氯或氟；
R'是R7-CHR1()-N(R8R9);
R〒是间亚苯基或对亚苯基或-(CnH2n)-，其中n的值为0至4;
118和119各自分别是氢或1至8个碳原子的烷基，或R8和R9—起为 四亚甲基、亚戊基、六亚甲基或-CH2CH2X!CH2CH2-,式中X,是-O-、 -S-、 或-NH-;
R"是氢，1至8个碳原子的烷基或苯基；和
*代表手性碳中心。
其它代表化合物具有下式<formula>formula see original document page 32</formula>
式中
X和Y之一是C=0， X和Y的另 一个是C=0或CH2;
(i)R1、 R2、 R^或I^各自分别是卣素、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基，或(ii)R1、 R2、 W或R4之一是-NHR5，其它R1、
R2、 113或114是氢；
Rs是氢或1至8个碳原子的烷基；W是氢、l至8个碳原子的烷基、苯并、氯或氟；R7是间亚苯基或对亚苯基或-(C。H2n)-，其中n的值为0至4;RS和R9各自分别是氢或l至8个碳原子的烷基，或RS和R"—起为
四亚甲基、亚戊基、六亚甲基或-CH2CH2X!CH2CH2-,式中X,是-O-、 -S陽、
或-NH画；
R"是氢、1至8个碳原子的烷基或苯基。其它代表化合物具有下式
式中
X和Y之一是C=0， X和Y的另 一个是C=0或CH2;
(i)R1、 R2、 RS或I^各自分别是卤素、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基；或(ii)R1、 R2、 R3或R4之一是硝基或受保护的氨基，其它R1、 R2、 113或114是氩；和
W是氢、l至8个碳原子的烷基、苯并、氯或氟。
其它代表化合物具有下式
33式中
X和Y之一是C=0, X和Y的另 一个是C=0或CH2;
(i)R1、 R2、 R 或I^各自分别是卤素、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基；或(ii)R1、 R2、 R3或W之一是-NHR5，其它R1、R2、 113或114是氲；
R5是氢或1至8个碳原子的烷基、或CO-R7-CH(R1G)NR8R9，其中R7、 R8、 R9和R"各自如本文所定义；和
W是1至8个碳原子的烷基、苯并、氯或氟。
所述化合物的具体例子具有下式
式中
X和Y之一是C=0， X和Y的另 一个是C=0或CH2;
R"是氢、l至8个碳原子的烷基、苯甲基、氯或氟。
R"是间亚苯基、对亚苯基或-(CnH2n)-，其中n的值为0至4;
RS和R9各自分别是氢或1至8个碳原子的烷基，或RS和R"—起为四亚甲基、亚戊基、六亚甲基或-CH2CH2X'CH2CH2-，式中Xi是-0-、 -S-、或隱丽-;和R"是氢、1至8个碳原子的烷基或苯基。
具体免疫调节化合物是4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚 -1，3-二酮和3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。
4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮具有如下化学
并在G.W. Muller等人的美国专利No.5,635,517中有描述，在此将其全 部内容纳入本文作为参考。4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚 -1,3 - 二酮可使用商业上可获得的原料通过常规的有机合成方法制备。例 如但不限于如美国专利No.5,635,517所述制备4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮是一种具有如下 化学结构的免疫调节化合物
并在G.W. Muller等人的美国专利No.5，635，517中有描述，在此将其全 部内容纳入本文作为参考。3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮可使用商业上可获得的原料通过常规的有机合成方法制备。例 如但不限于如美国专利No.5,635,517所述制备3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氪-
结构:
P O,
35异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。
在另 一个实施方案中，本发明的具体免疫调节化合物包括3-(4-氨基 -1 -氧代-1,3- 二氢-异吲咮-2-基)-哌啶-2,6- 二酮的多晶型形式，例如公开在 2003年9月4日提交的美国临时申请60/499,723和2004年9月3日提 交的相应美国非临时申请中的形式A、 B、 C、 D、 E、 F、 G和H，在此 通过引用的方式将该两专利申请并入本文。例如，3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式A是非溶剂化的结晶物，其可以 从非水性溶剂体系中得到。形式A的X-射线粉末衍射图在约8、 14.5、 16、 17.5、 20.5、 24和26度20处包含明显峰，其差示扫描量热法最大熔 融温度约270。C。形式A弱吸湿或不吸湿，是3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢 -异p引哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的至今热力学最稳定的无水多晶型。
3-(4-氨基-l陽氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式B是
半水合结晶物，其可以从各种溶剂体系中得到，包括但不限于己烷、甲 苯和水。形式B的X-射线粉末衍射图在约16、 18、 22和27度26处包 含明显峰，DSC曲线在约146和268。C出现吸热，通过热台显微实验证 实是脱水和熔融。互变研究表明，形式B在水性溶剂体系中转化成形式 E,在丙酮和其它无水体系中转化成其它形式。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式C是 半溶剂化结晶物，其可以从溶剂例如但不限于丙酮中得到。形式C的 X-射线粉末衍射图在约15.5和25度20处包含明显峰，其差示扫描量热 法最大熔融温度约269°C。形式C在低于约85%RH下不吸湿，但是在 高相对湿度下可以转化成形式B。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的形式D是结晶的溶剂化多晶型物，其从乙腈和水的混合物中制备。形式D的X-
射线粉末衍射图在约27和28度20处包含明显峰，其差示扫描量热法最 大熔融温度约270。C。形式D弱吸湿或不吸湿，但是当在高相对湿度下 压力下， 一般会转化成形式B。
3 -(4-氨基-1 -氧代-1,3 - 二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6- 二酮的形式E是 二水合的结晶物，其可通过使3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-派咬-2,6-二酮在水中形成浆料，并在约9: l的丙酮水的溶剂体系中緩 慢蒸发3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氬-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮来获得。形 式E其X-射线粉末衍射图在约20、 24.5和29度26处包含明显峰，其差 示扫描量热法最大熔融温度约269° C 。形式E在丙酮溶剂体系中可以转 化成形式C,在THF溶剂体系中可以转化成形式G。在水性溶剂体系中， 形式E是最稳定的形式。形式E的反溶解实验表明，当在约125。C加热 约5分钟时，形式E转化成形式B。在175°C加热约5分钟时，形式B 转化成形式F。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式F是 非溶剂化的结晶物，其可通过使形式E脱水得到。形式F的X-射线粉末 衍射图在约19、 19.5和25度20处包含明显峰，其差示扫描量热法最大 熔融温度约269°C。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的形式G是 非溶剂化的结晶物，其可以从形式B和E在溶剂例如但不限于四氢呋喃 (THF)中的浆料中得到。形式G的X-射线粉末衍射图在约21、 23和24.5 度20处包含明显峰，其差示扫描量热法最大熔融温度约267°C。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式H是部分水合(约0.25摩尔)的结晶物，其可通过使形式E暴露在0%相对湿 度中得到。形式H的X-射线粉末衍射图在约15、 26和31度26处包含 明显峰，其差示扫描量热法最大熔融温度约269°C。
氧代-3-氟哌啶-3-基)异二氢吲哚和1,3-二氧代-2-(2，6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)异二氢p引咮，如在美国专利No.5,874,448和5,955,476中描述的那些， 这两个专利通过引用并入本文。代表性的化合物具有下式<formula>formula see original document page 38</formula>
其中，Y是氧或H2，和
R1、 R2、 113和114各自独立地是氢、卣素、l-4个碳原子的烷基、1-4 个碳原子的烷氧基、或氨基。
本发明的其它具体免疫调节化合物包括但不限于美国专利No. 5,798,368所述的四取代2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代异二氢吲哚，该 专利通过引用纳入本文。代表化合物具有下式<formula>formula see original document page 38</formula>
其中，R1、 R2、 113和114各自独立地为卣素、l-4个碳原子的烷基或 1-4个碳原子的烷氧基。
其它具体免疫调节化合物包括但不限于美国专利No.6,403，613所述
l-氧代-2-(2，6-二的1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚，该专利通 过引用纳入本文。代表化合物具有下式
其中
Y是氧或H2，
Ri和R"中的一个为卣素、烷基、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、氰 基或氨基甲酰基，W和I^中另一个独立地为氢、卤素、烷基、烷氧基、 烷氨基、二烷基氨基、氰基或氨基甲酰基，和
W是氢、烷基或苯甲基。
该化合物的具体例子具有下式
其中，R^和R"中的一个为卣素、l-4个碳原子的烷基、1-4个碳原 子的烷氧基、二烷基氨基(其中每个烷基含有1-4个碳原子)、氰基或氨基 甲酰基，
R^和W中另一个独立地为氢、卣素、l-4个碳原子的烷基、1-4个 碳原子的烷氧基、烷氨基(其中所述烷基含有1-4个碳原子)、二烷基氨基 (其中每个烷基含有1-4个碳原子)、氰基或氨基甲酰基，和
R 是氢、1-4个碳原子的烷基或苯甲基。具体的例子包括但不限于 l-氧代-2(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-甲基异二氢吲哚。其它代表性的化合物具有下式:
其中，RJ和R"中的一个为卣素、l-4个碳原子的烷基、1-4个碳原 子的烷氧基、二烷基氨基(其中每个烷基含有1-4个碳原子)、氰基或氨基 甲酰基，
W和R2中另 一个独立地为氢、卣素、l-4个碳原子的烷基、1-4个 碳原子的烷氧基、烷氨基(其中所述烷基含有1-4个碳原子)、二烷基氨基 (其中每个烷基含有1-4个碳原子)、氰基或氨基甲酰基，和
W是氢、1-4个碳原子的烷基或苯甲基。
本发明的其它具体免疫调节化合物包括但不限于美国专利 No.6，380,239和2004年7月28日提交的共同未决美国申请No. 10/900,270 所述的在二氢"引哚环的4-位或5-位被取代的1-氧代和1,3-二氧代异二氢 p引哚，该专利在此通过引用并入本文。代表性的化合物具有下式
其中，表示为<:*的^_原子构成了手性中心(当n不是0且R1与R2 不相同时)；Xi和xz之一是氨基、硝基、1-6个碳原子的烷基或NH-Z， 而X1或X2中另 一个是氢；R1和R2各自独立地为羟基或NH-Z; R3是氢、 l-6个碳原子的烷基、卣素或卣代烷基；Z是氢、芳基、l-6个碳原子的 烷基、甲酰基或1-6个碳原子的酰基；且n的值为0、 l或2;条件是，
9 如果乂1是氨基且11是1或2,则Ri和R"都不是羟基；以及其盐。 其它代表性的化合物具有下式
^^^^^^^ 曾
其中，当n不是0且W与R"不相同时，表示为(:*的碳原子构成手 性中心；Xi和XS之一是氨基、硝基、1-6个碳原子的烷基或NH-Z，而 乂]或乂2中另一个是氢；R/和W各自独立地为羟基或NH-Z; R3是1-6 个碳原子的烷基、卤素或氢；Z是氢、芳基或1-6个碳原子的烷基或酰 基；且n的值为0、 1或2。
具体例子包括但不限于分别具有如下结构的2-(4-氨基-1 -氧代-1,3-二氢-异吲咪-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸和4-(4-氨基-1 -氧代-1,3- 二氢-异吲 哚_2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸，和其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、 和立体异构体
代表性的其它化合物具有下式:其中，表示为C^的^5炭原子构成了手性中心(当n不是0且R1与R2 不相同时)；Xi和xs之一是氨基、硝基、1-6个碳原子的烷基或NH-Z， X'或X、々另一个是氢；R^和W各自独立地是羟基或NH-Z; R3是1-6 个碳原子的烷基、卣素或氢；Z是氢、芳基、或l-6个碳原子的烷基或 酰基；并且n的值为0、 l或2;以及其盐。
具体例子包括但不限于具有分别如下结构的4-氨基甲酰基 -4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸, 4-氨基甲酰基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚 -2-基}-丁酸，2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚 -2-基}-4-苯基氨基甲酰基-丁酸，和2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二 氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基}-戊二酸，和其药学上可接受的盐、溶剂化物、 前药、和立体异构体
该化合物的其它具体例子具有下式:其中，X^口X"之一是硝基或NH-Z,而X'或X"中的另一个是氬； R1和R2各自独立地为幾基或NH-Z; W是1-6个碳原子的烷基、卤素或氬；
Z是氢、苯基、1-6个碳原子的酰基或1-6个碳原子的烷基；和 n的值为0、 1或2;
条件是，如果Xi和X"之一是硝基且n是1或2，则R'和I^不是羟 基；和
如果-COI^和-(CH2)nCOR1不相同，则表示为C^的碳原子构成手性 中心。其它代表性的化合物具有下式
其中，^和XZ之一是1-6个碳原子的烷基； R1和R2各自独立地为鞋基或NH-Z; R 是1-6个碳原子的烷基、卣素或氢；
Z是氢、苯基、1-6个碳原子的酰基或1-6个碳原子的烷基；和 n的值为0、 1或2;和
如果-COI^和-(CH2)nCOR1不相同，则表示为C"々碳原子构成手性 中心。
其它具体免疫调节化合物包括但不限于美国专利No.6,458,810描述 的2-位用2,6-二氧代-3-羟基哌啶-5-基取代的异二氢吲咮-1-酮和异二氢 p引咮-l,3-二酮，该专利通过引用纳入本文。代表性的化合物具有下式
女1 o
> " 貧其中
用*表示的碳原子构成手性中心；
X是-C(0)-或-CH2-;
R1是1-8个碳原子的烷基或-NHR3;
R"是氢、1-8个碳原子的烷基或卣素；和
R3是氢；
l-8个碳原子的烷基，未取代或被1-8个碳原子的烷氧基、卣素、氨 基或1_4个碳原子的烷氨基取代； 3-18个碳原子的环烷基；
苯基，未取代或被1-8个碳原子的烷基、l-8个碳原子的烷氧基、卤 素、氨基或1-4个碳原子的烷氨基取代；
苯甲基，未取代或被1-8个碳原子的烷基、l-8个碳原子的烷氧基、 卣素、氨基或1-4个碳原子的烷氨基取代，或-COR4,其中
R4是氢，
l-8个碳原子的烷基，未取代或被1-8个碳原子的烷氧基、卣素、氨 基或1_4个碳原子的烷氨基取代， 3-18个碳原子的环烷基，
苯基，未取代或被1-8个碳原子的烷基、l-8个碳原子的烷氧基、卣 素、氨基或1-4个碳原子的烷氨基取代,或
苯甲基，未取代或被1-8个碳原子的烷基、l-8个碳原子的烷氧基、卣素、氨基或1-4个碳原子的烷氨基取代。
免疫调节化合物可通过商业购得或按照本说明书所公开的专利或专 利申请中所描述的方法来制备。此外，可以不对称合成或用已知的拆分 剂或手性柱以及其它标准有机化学合成技术拆分光学纯的化合物。
各种免疫调节化合物含有 一 个或多个手性中心，可以以对映体的外 消旋混合物或非对映体混合物存在。本发明包括使用这种化合物的立体 异构体纯的形式以及使用那些形式的混合物。例如，可以在本发明的方 法和组合物中使用含有等量或不等量具体免疫调节化合物的对映体的混 合物。可以用不对称合成或使用标准技术例如手性柱或手性拆分剂拆分
这些异4勾体。例A口参见Jacques, J.等人，五waw〃附oers, i ace附a&s i eso/w"(ms (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen， S.H.等人, r"ra/7eA0M 33: 2725 (1977); Eliel， E丄.,5Vem3c/zew/W^y o/ Cflr6o" C謂; 画^ (McGraw-Hill, NY， 1962);和Wilen, S.H.， ！Tato 々e她朋(i Pp"ca/i eso/w//<ms ， 268页(E丄.Eliel编，Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame， IN， 1972)。
需要注意的是，如果所示结构和该结构的名称之间有差异，应以所 示结构为准。此外，如果没有用例如粗线或虚线指出结构或结构部分的 立体化学，则应当理解为该结构或结构部分包括其所有立体异构体。
5.3曲古抑菌素A,羟基^^和丙戊酸
曲古抑菌素A(TSA)是一种具有如下结构的组蛋白脱乙酰基酶抑制
剂曲古抑菌素A可用商业上可获得的原料通过常规的有机合成来制
备。曲古抑菌素A也可从商业途径获得(如，Sigma-Aldrich, CAS RN: 58880-19-6)。
羟基脲(HU)是 一 种具有如下结构的核苷酸还原酶
羟基脲可用商业上可获得的原料通过常规的有机合成来制备。羟基 脲也可从商业途径获得(如Sigma-Aldrich， CAS RN: 127-07-1)。 丙戊酸是一种具有如下结构的組蛋白脱乙酰基酶抑制剂
丙戊酸可用商业上可获得的原料通过常规的有机合成来制备。丙戊 酸也可从商业途径获得(如，Sigma-Aldrich, CAS RN: 99-66-1 ，或其钠盐， CAS RN: 1069-66-5)。
5.4应用和治疗方法
在一实施方案中，本发明提供了增加CD34+造血千细胞体外或体内 扩增的方法，该方法包括使CD34+造血干细胞在体外或体内与有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学 上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙 戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合 物、前药、立体异构体或多晶型接触。在某些实施方案中，相对于未接 触本发明所述组合的细胞，CD34+造血干细胞扩增在体外或体内大约增 加25%、 50%、 100%、 200%、 300%、 400%、 500%或1000%。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗、预防或控制可通过〔034+ 造血干细胞在体外或体内扩增治疗、预防或控制的疾病或病症或其症状 的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化合物(如， 4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氢-异^哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂 化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古 抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构 体或多晶型。
在一具体实施方案中，所述可通过CD34+造血干细胞扩增治疗、预 防或控制的疾病或病症是血液系统疾病或病症，如骨髓增生异常综合征、 多发性骨髓瘤、(3血红蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、骨髓增生性 疾病、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、 急性淋巴母细胞白血病、急性粒细胞性白血病或急性原始粒细胞性白血 病。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗、预防或控制血液系统疾病 或病症(如血液系统癌症)的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效
47量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其 药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型， 和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、 水合物、前药、立体异构体或多晶型。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗、预防或控制白血病的方法， 该方法包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合 物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其 药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗、预防或控制套细胞淋巴瘤 的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节化合物(如， 4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代 -1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、 水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A 或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型。
在另一实施方案中，本发明提供了骨髓移植的方法，该方法包括在 体外使骨髓与有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体 或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、 溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型接触，然后移植给所需患者。
在另一实施方案中，本发明提供骨髓重建的方法，该方法包括给予
有此需要的患者有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氪-异吲哚-2-基)-哌 咬-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构 体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、 溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型。
在一具体实施方案中，本发明提供了已进行或正在进行化疗和/或放
疗的患者的骨髓重建的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效量的 免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二 酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可 接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、 羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前 药、立体异构体或多晶型。
在另一实施方案中，本发明提供了骨髓重建方法，该方法包括使骨 髓与有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二 氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)，
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型， 和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、 水合物、前药、立体异构体或多晶型接触。
在一具体实施方案中，本发明提供了已进行过或正在进行化疗或放 疗的患者的骨髓重建的方法，该方法包括使骨髓与有效量的免疫调节化 合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异^咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶
剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古
抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体 或多晶型接触。
与CD34+造血干细胞相关的具体疾病包括但不限于血液系统癌症。 在一实施方案中，血液系统癌症是多发性骨髓瘤、(3血红蛋白病、白血 病、骨髓癌、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性 髓细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、急性粒细胞性白血病或急性 原始粒细胞性白血病。
CD34+造血干细胞的具体应用包括但不限于骨髓重建和骨髓移植。 因此，在一实施方案中，本发明4是供了治疗、预防或控制血液系统疾病 或病症的方法(如，血液系统癌症)，该方法包括给予有此需要的患者有 效量的CD34+造血干细胞，该造血干细胞已经与或正与有效量的免疫调 节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受 的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基 脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、 立体异构体或多晶型接触。
本发明所述的可用免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氦-异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)和丙戊酸、羟基J象或曲古抑菌素A联合治疗、预防和/或控制的 具体疾病或病症包括但不限于骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、P 血红蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、骨髓增生性疾病、非何杰金氏
50淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、急性淋巴母细胞 白血病、急性粒细胞性白血病或急性原始粒细胞性白血病。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗、预防或控制骨髓增生异常 综合征、多发性骨髓瘤、P血红蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、骨 髓增生性疾病、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞 性白血病、急性淋巴母细胞白血病、急性粒细胞性白血病或急性原始粒 细胞性白血病的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效量的免疫调
节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6- 二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)，或其药学上可接受 的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基 脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、 立体异构体或多晶型接触。
在另 一实施方案中，本发明提供了增加细胞内胎儿血红蛋白表达的 方法，该方法包括使表达胎儿血红蛋白的细胞与有效量的免疫调节化合 物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基 -1-氧代-1,3-二氢-异丐1咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂 化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑 菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或 多晶型接触。
在另 一实施方案中，本发明提供了在由此需要的患者中增加胎儿血 红蛋白表达的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效量的免疫调节 化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氩-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲 古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构 体或多晶型。
在另一实施方案中，本发明提供了诱导恶性细胞凋亡的方法，该方
法包括使恶性细胞与有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代 (3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立 体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接
受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型接触。
在另一实施方案中，本发明提供了抑制恶性细胞增殖的方法，该方 法包括使恶性细胞与有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代 (3-哌啶基))-异二氢"引咮-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立 体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接
受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型接触。
在一实施方案中，本发明所公开的方法包括使用免疫调节化合物 (如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氢-异p引咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)的基本上纯的(S)对映体或基本 上纯的(R)对映体。
在本发明所述的任何用途或方法中的免疫调节化合物(如，4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合 物、前药、立体异构体或多晶型，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型可同 时、同步或依次给药。
5.4.1周期性治疗
在某些实施方案中，周期性地给予患者免疫调节化合物(如，4-(氨 基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代'-1,3-二氢-异巧l咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A。周 期性治疗包括给予一段时间的第 一试剂，接着休息(不治疗)一段时间， 并重复该给药顺序。周期性治疗可降低对一种或多种治疗形成的耐受性， 避免或减轻该治疗的副作用，和/或提高该治疗的效果。
因此，在一具体实施方案中，将免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氪-异吲 咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)与丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A持续地每天联 合使用，起始剂量为0.1至5mg/日，以1至10mg/日的剂量递增(每周) 至最大剂量50mg/日，只要患者对治疗耐受。在另一实施方案中，在一 个四或六周周期中，将免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)与丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A以大约1、 5、 10或25mg/ 日的量，或以大约10mg/日的量联合使用三至四周，然后休息一或两周。
在一实施方案中，将免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氲-异吲哚-2-基)-哌 啶-2,6-二酮)和丙戊酸、羟基l泉或曲古抑菌素A经口服给药，在四至六周 的周期中，在给予丙戊酸、羟基"泉或曲古抑菌素A 30或60分钟之前给
53予免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氬-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)。在另一实 施方案中，所述联合在每个周期中通过静脉输注大约90分钟给予。在一 具体实施方案中， 一个周期包括给予大约1至25mg/日的免疫调节化合 物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基 -1-氧代-1,3-二氢-异"引咮-2-基)-派啶-2，6-二酮)，和大约1至2000mg/m2/EI 、 大约10至1000 mg/m2/日、大约10至500 mg/m2/g或大约50至200 mg/n^/日的丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A,持续三至四周，然后休息 一至两周。一般来说，给予患者联合治疗的周期数大约是1至24个周期， 更典型地是大约2至16个周期，更典型地是大约3至4个周期。
5.5药物组合物和剂型
药物組合物可用于制备单独的单 一 单位剂型。本发明提供的药物组 合物和剂型包含有效量的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌 啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构 体或多晶型，和有效量的丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A或其药学上可 接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、立体异构体或多晶型。本发明提供 的药物组合物和剂型还包含一种或多种赋形剂、载体或稀释剂。本发明 提供的药物组合物和剂型还包含CD34+造血干细胞或骨髓。
本发明的单一单位剂型适于通过口服、粘膜(例如鼻、舌下、阴道、 颊或直肠)、或肠胃外(例如皮下、静脉内、弹丸注射、肌内内或动脉内)、 局部(如滴眼剂或其它眼科制剂)、透皮或经皮向患者给药。剂型的实例
54包括但不限于片剂(如，咀嚼片)；嚢片；胶嚢，如弹性软明胶胶嚢； 扁嚢剂；锭剂；糖锭剂；分散剂型；栓剂；粉剂；气雾剂(例如鼻喷雾剂 或吸入剂)；凝胶剂；适于向患者口服或粘膜给药的液体剂型，包括悬浮 液(例如，水性或非水性液体悬浮液、油包水乳剂或水包油乳剂)、溶液 和酏剂；适于向患者肠胃外给药的液体剂型；滴眼剂或其它适于局部给 药的眼科制剂；以及可重新配制以向患者提供适于肠胃外给药的液体剂 型的无菌固体(如结晶或无定形固体)。
剂型的所述组成、形状和类型一般根据其应用而变化。例如，与用 于相同疾病的慢性治疗的剂型相比，用于疾病急性治疗的剂型可含有更 多量的一种或多种活性成分。类似地，与用于治疗相同疾病的口服剂型 相比，肠胃外剂型可含有更少量的一种或多种活性成分。本发明的特定 剂型从一种改变为另 一种的这些和其它方法对于本领域技术人员来说是 显而易见的。参见例如i em/wgto" ^P/wrmacewdca/ tSc/e"c^s1 ， 第18片反， Mack Publishing, Easton PA (1990)。
典型的药物組合物和剂型含有 一 种或多种赋形剂。合适的赋形剂是 药学领域的普通技术人员所熟知的，合适的赋形剂的非限制性例子在本 说明书中有提供。具体赋形剂是否适于掺入药物组合物或剂型，这取决 于本领域众所周知的多种因素，包括但不限于将该剂型给予患者的方式。 例如，口服剂型(如片剂)可含有不适合用于肠胃外剂型的赋形剂。具体 赋形剂的适用性可取决于剂型中的特定活性成分。例如， 一 些赋形剂(如 乳糖)，或当暴露于水时可加速一些活性成分的分解。含有伯胺或仲胺的 活性成分对这种加速分解特别敏感。因此，本发明包括含有极少(若有的 话)乳糖其它单糖或二糖的药物组合物和剂型。在本发明中，所使用的术语"无乳糖"表示乳糖的含量(若有的话)不足以在实质上加快活性成分的 降解速度。
本发明的无乳糖组合物可含有本领域熟知的赋形剂，这些赋形剂列在，
例如，(f^房秀^》(USP)25-NF20(2002)中。通常，无乳糖组合物含有药学 上可相容的且药学上可接受量的活性成分、粘合剂/填料和润滑剂。优选无 乳糖剂型含有活性成分、微晶纤维素、预胶凝淀粉和硬脂酸镁。
本发明还包括含有活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可能 会促进某些化合物的降解。因为水会促进某些化合物的降解。例如，为 了测定制剂随时间变化的性质，如保存期或稳定性，加入水(例如5%) 作为 一 种模拟长期储存的方式在制药领域是被广泛接受的。参见例如， Jens T.Carstensen,《秀參《J. ^ JY/口实戏'》Sto^7"乂.尸〃.wc/》/es &/Vacf/ce」，第二版，Marcel Dekker, NY, NY， 1995,第379-80页。 实际上，水和热将加速一些化合物的分解。因此，水对于制剂的作用非 常显著，因为水分和/或湿气在制剂的制造、处理、包装、储存、装运和 使用过程中经常遇到。
本发明的无水的药物组合物和剂型可用无水或水分含量低的成分并 在低湿度条件下制造。如果预计在生产、包装和/或储存期间会与水分和 /或湿气发生实质性接触，那么包含乳糖和至少一种含有伯胺或仲胺的活 性成分的药物组合物和剂型是无水的。
无水药物组合物应以保持其无水特性的方式制备和储存。因此，无 水组合物优选用已知可防止暴露于水的材料来包装，因此可将它们装在 合适的制剂盒中。合适的包装的例子包括但不限于密封的薄膜、塑料、 单位剂量容器(如药瓶)、水泡包装和窄条包装。本发明还包括含有一种或多种可降低活性成分分解速度的化合物的 药物組合物和剂型。这种化合物在本文称为"稳定剂"，其包括但不限于 抗氧化剂(如抗坏血酸)、pH緩冲剂或盐緩冲剂。如同赋形剂的量和类型 一样，剂型中特定活性成分的类型和量可根据各种因素而改变，这些因 素包括但不限于向患者的给药途径。然而，本发明提供的典型剂型包含
大约0.10至150mg的免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、前 药或多晶型。典型剂型包含大约O.l、 1、 2、 5、 7.5、 10、 12.5、 15、 17.5、 20、 25、 50、 100、 150或200 mg免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲 哚-2-基)-派啶-2,6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体 异构体、前药或多晶型。在一具体实施方案中，剂型包含大约l、 2、 5、 10、 25或50mg免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二 酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、前药或多晶 型。典型剂型包含大约1至1000mg、大约5至500mg、大约10至350mg 或大约50至200mg的丙戊酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、 立体异构体、前药或多晶型。典型剂型包含大约1至5000mg、大约5至 1000mg、大约10至500mg或大约50至200mg的曲古抑菌素A或其药学 上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、前药或多晶型。典型剂 型包含大约1至5000mg、大约5至2500mg、大约10至2000mg、大约50 至1000mg、大约50至500mg或大约50至250mg羟基脲或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、前药或多晶型。当然，试剂的 具体量取决于所使用的具体试剂和所治疗、预防或控制的疾病或病症类型。
5.5.1 口服剂型
适合口服给药的本发明的药物組合物可制成分散剂型，例如但不限 于片剂(例如咀嚼片)、嚢片、胶嚢和液体(例如风味糖浆)。这种剂型含有 预定量的活性成分，并可用本领域的普通技术人员所熟知的制药方法来
制备。通常可参见《#辨银秀參/#夢》，第18版，Mack Publishing, Easton PA(1990)。
本发明的典型的口服剂型是按照常规药物化合技术通过将活性成分 与至少一种赋形剂充分混合而制得的。根据给药所需的制剂形式，赋形 剂可呈多种不同的形式。例如，适用于口服液体或气雾剂剂型的赋形剂 包括但不限于水、二醇、油、醇、风味剂、防腐剂和着色剂。适用于固 体口服剂型(例如粉剂、片剂、胶囊和胶囊片)的赋形剂的实例包括但不 限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解 剂。
如果需要，可通过标准的水或非水化技术将片剂包衣。这种剂型可 通过任何制药方法制得。药物组合物和剂型一般这样制得将活性成分 与液体载体、良好分散的固体载体或二者均匀充分混合，然后如果需要 的话将产物制成所需的形状。
例如，片剂可通过压缩或压模来制得。压缩片可通过在合适的机器 中压缩自由流动形式，例如粉末或颗粒形式的活性成分来制得，任选地 与赋形剂混合。压模片可通过在合适的机器中压模粉末状化合物的混合物来制备，该粉末状化合物用惰性液体稀释剂润湿。
可用于本发明的口服剂型的赋形剂的实例包括但不限于粘合剂、填 充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药物组合物和剂型的粘合剂包括但不限 于玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉，明胶，天然与合成树胶例如阿拉 伯胶、藻酸钠、藻酸、其它藻酸盐，黄蓍胶粉末、瓜尔胶，纤维素及其 衍生物(例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素 钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预凝胶化淀粉、羟基丙基甲基纤维
素(例如2208、 2906、 2910号)、微晶纤维素及其混合物。
微晶纤维素的适当形式包括但不限于以AVICEL-PH-101、 AVICEL-PH隱103、 AVICELRC匿581、 AVICEL-PH-105销售的材料(得自 FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA)及其混合物。 一种具体的祐合剂是以AVICELRC-581销售的微晶纤 维素与羧甲基纤维素钠的混合物。合适的无水或低水分含量的赋形剂或 添加剂包括AVICEL-PH-103 和Starch 1500 LM。
适用于本发明药物組合物和剂型的填充剂的实例包括但不限于滑石 粉、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、纤维素粉末、葡萄糖结合 剂(dextrates)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预凝胶化淀粉及 其混合物。本发明药物組合物中粘合剂或填充剂以占药物組合物或剂型 重量的约50%到约99%的量存在。
在本发明組合物中使用崩解剂以提供在暴露于水环境时发生崩解的 片剂。含有太多崩解剂的片剂在储存时可能会崩解，而含有太少崩解剂 的片剂可能不会以所需速度崩解或者在所需条件下不崩解。因此，应当 使用既不太多也不太少的决定性地改变活性成分的释放的足量崩解剂以形成本发明的固体口服剂型。所用崩解剂的量随着制剂的类型而改变， 并且易于由本领域技术人员来决定。典型的药物组合物包含约0.5%到约
15%重量的崩解剂，优选约1%到约5%重量的崩解剂。
可用于本发明药的物組合物和剂型的崩解剂包括但不限于琼脂、海 藻酸、碳酸钓、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、聚克 立林钾、羟乙酸淀粉钠、马铃薯或甘薯淀粉、其它淀粉、预凝胶化淀粉、 粘土、其它藻酸盐、其它纤维素、树胶及其混合物。
可用于本发明的药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于硬脂酸 钙、石更脂酸镁、矿物油、轻矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、 其它二醇、硬脂酸、十二烷基疏酸钠、滑石粉、氢化植物油(例如花生油、 棉籽油、向日葵油、芝麻油、#:榄油、玉米油和豆油)、；更脂酸锌、油酸 乙酯、月桂酸乙酯、琼脂及其混合物。其它的润滑剂包括例如syloid硅 胶(AEROSIL200,由W. R. Grace Co. of Baltimore, MD生产)、合成二氧 化硅的凝固气雾胶(由Degussa Co. of Piano, TX销售)、CAB-O-SIL (Cabot Co. ofBoston， MA销售的烧结二氧化硅产品)及其混合物。如果完全使 用，润滑剂通常以小于其所掺入的药物組合物或剂型重量的约1%的量 使用。
5.5.2緩释剂型
本发明活性成分可以通过控释装置或本领域技术人员公知的递送装 置给药。实例包括但不限于在以下专利中描述的那些美国专利号 3,845,770、 3,916,899、 3,536,809、 3,598,123、 4,008,719、 5,674,533、 5,059,595、 5,591,767、 5,120,548、 5,073,543、 5,639,476、 5,354,556和
605,733,566,其分别通过引用并入本文。通过使用例如羟丙基甲基纤维素、 其它聚合物基质、凝胶、可渗透性膜、等渗系统、多层包衣、微颗粒、 脂质体、微球或其組合来产生不同比例的理想释放效果，这种剂型可用 来緩释或控释一种或多种活性成分。合适的控释制剂包括本文所述的那 些，其是本领域技术人员公知的，且易于选择以与本发明的活性成分一 起使用。因此，本发明包括适于控释并适于口服给药的单一单位剂型， 包括但不限于片剂、胶嚢、凝胶胶嚢和囊片。
5.5.3胃肠外剂型
肠胃外剂型可通过各种途径，包括但不限于皮下、静脉内(包括弹丸 注射)、肌内内和动脉内途径来对患者给药。由于其给药一般绕过了患者 对污染物的天然防御，所以肠胃外剂型优选是无菌的，或者能够在对患 者给药之前灭菌。肠胃外剂型的实例包括但不限于注射溶液、可溶解或 悬浮在药学上可接受的载体中以用于注射的干燥产品、注射悬浮液和乳 剂。
可用于提供本发明的肠胃外剂型的合适的载体是本领域技术人员公 知的。实例包括但不限于USP注射用水；水性载体，例如但不限于氯 化钠注射液、林4各注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳 酸化林格注射液；可与水混溶的载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和 聚丙二醇；以及非水性载体，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、 芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸千酯。
还可以将能够提高本文所公开的一种或多种活性成分的溶解度的化 合物掺入到本发明的肠胃外剂型中。例如，可使用环状糊精及其衍生物来提高本发明所述活性试剂的溶解度。参见例如美国专利No.5,134,127，
其通过引用并入本文。
5.6药品盒
在一些实施方案中，免疫调节化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氮-异吲哚-2-基)-哌 咬-2,6-二酮)，和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A并不在同一时间或通过 相同的给药途径给予患者。因此，本发明提供了试剂盒，其在由医务人 员使用时，可简化向患者给予适量的活性试剂的给药过程。
本发明提供的典型试剂盒包括容器，该容器包括免疫调节化合物 (如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异二氢吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氪-异W咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)或其药学上可接受的盐、溶剂化 物、水合物、立体异构体、前药或多晶型，和丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌 素A或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、前药或多 晶型的剂型。
本发明的试剂盒还可以包含用于施用所述活性成分的装置。这种装 置的实例包括但不限于注射器、无针注射点滴塑料袋、贴片和吸入器。
本发明提供的试剂盒还可包含用于移植的CD34+造血干细胞或骨髓 和用于给予一或多种活性成分的药学上可接受的运载体。例如，如果活 性成分是固体形式，且必须重新配制成以进行肠胃外给药，那么该试剂 盒可以包括含有适当运载体的密封容器，该活性成分可溶解在该运载体 中而形成适于肠胃外给药的不含颗粒的无菌溶液。药学上可接受的载体 的实例包括但不限于USP注射用水；含水载体，例如但不限于氯化钠
62注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸化 林格注射液；可与水混溶的运载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚 丙二醇；以及非水性运载体，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、 芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸千酯。
6.实施例
本发明提供的一些实施方案通过如下非限定性实施方案进行说明。
6.1实验步骤 6.1.1材料
Namalwa CSN.70细胞购自DSMZ (Brauschweig, Germany)。 骨骨逸和 脐带血CD34+细胞分别购自Cambrex (Walkersville, MD)和AllCells (Emeryville, CA)。镰状细胞贫血(SCA)患者的骨髓CD34+细胞由 Christopher Morris (Loma Linda University Medical Center, CA)提供。
抗CD34-PE购自BD pharmingen。丙戊酸、曲古抑菌素A和羟基脲 来自Sigma。
6丄2细胞培养和处理
在补充了 10 %胎牛血清、青霉素(100 u/ml)和链霉素(100吗/ml)的 RPMI-1640培养基(Invitrogen， Carlsbad)中培养Namalwa。 CD34+细胞在 无血清条件下在补充了 20 %血清取代BIT (StemCell Techologies, Vancouver, BC)和SCF (100ng/ml)、 Flt3-L (100ng/ml)和IL-3 (20ng/ml) (Biosource International, Camarillo, CA)的Iscove's DMEM (Invitrogen, Carlsbad, CA)中扩增。Namalwa细胞和CD34+细胞分别培养3天和6天。 在培养的这3天或6天中将0.P/。DMSO、化合物1或化合物2、丙戊酸(VPA)或曲古抑菌素A (TSA)以所指示的浓度加入。
BM-CD34+细胞在补充了 BIT 95000和生长因子的Iscove's MDM(StemCelltechnologies)中培养。在第一个6天中，CD34+细胞用SCF (100ng/ml)、 Flt3-L (100ng/ml)和IL-3 (20ng/ml)扩增，然后通过用SCF (50 ng/ml)和EPO (2U或4U/ml)培养6天分化成红细胞系。为了研究免疫调 节化合物的效果，CD34+祖细胞在含有或不含化合物1、化合物2或羟 基脲(HU)的培养中分化6天。
6.1.3细胞增殖和凋亡分析
Namalwa和CD34+细胞分别以4000个和2000个细胞/孔接种到96 孔板中，并用化合物处理。在指示的时间之后，用FACS阵列通过流式 细胞测量术进行细胞计数和表型分析。根据制造商的实验步骤，分别用 碘化丙啶染色(BD pharmingen, Chicago, IL)和CD34 (PE-结合的)(BD pharmingen)抗体监测凋亡细胞和CD34+细胞百分比。
6.1.4用BrDu混合进4亍Namalwa细胞增殖测定
Namalwa细胞以10,000个细胞/孔接种到96孔板中，并用指示浓度 的TSA和化合物1处理3天。TSA和化合物1对细胞增殖的效果用BrDu 混合试剂盒(Roche, Germany)测量。
6.1.5胎儿血红蛋白免疫荧光染色
细胞培养6天后，用磷酸盐緩冲液(PBS)洗涤，用2%多聚甲醛固定， cytopermeafix(BD-pharmingen)透化，HbF-PE (BD Pharmingen, San Diego, CA)染色，最后用流式细胞计(F ACS Aria, BD pharmingen)分析。
6.2结果用Namalwa细月包(人Burkitt淋巴瘤)，发现10 nM的TSA在诱导细 胞增殖抑制中对化合物1有协同作用(图1 )。
用Namalwa细胞(人Burkitt淋巴瘤)，发现10 nM的TSA在诱导凋 亡中对化合物l有协同作用(图2)。
用Namalwa细胞(人Burkitt淋巴瘤)，发现VPA在诱导细胞增殖抑 制中对化合物1有加成和协同作用(图3)。
用Namalwa细胞(人Burkitt淋巴瘤)，发现VPA在诱导凋亡中对化 合物1有加成和协同作用(图4)。
用Namalwa细胞(人Burkitt淋巴瘤)，发现VPA在诱导细胞增殖抑 制中对化合物2有加成和协同作用(图5)。
用Namalwa细胞(人Burkitt淋巴瘤)，发现VPA在诱导凋亡中对化 合物2有加成和协同作用(图6)。
在CD34+细胞扩增中研究化合物1和TSA联合的作用。如图7和8 所示，在培养6天后，化合物1单独以剂量依赖的方式增加CD34+细胞 数和百分比。在生长鸡尾酒试剂中加入10 nM的TSA显著提高化合物1 对CD34+扩增的效果。如图7和8的表格所示，VPA加入化合物1中， 在某些条件下，也观察到有协同作用。
在CD34+细胞扩增中研究化合物2和TSA的联合作用。如图9和 10所示，在培养6天后，化合物2单独以剂量依赖的方式增加CD34+ 细胞数和百分比。在生长鸡尾酒试剂中加入l至10 nM的TSA显著提 高化合物2对CD34+扩增的效果。如图9和10的表格所示，VPA加入 化合物1中，在某些条件下，也观察到有协同作用。
在CD34+细胞扩增中研究化合物1和VPA联合的作用。如图11和12所示，在培养6天后，化合物1单独以剂量依赖的方式增加CD34+ 细胞数和百分比。在生长鸡尾酒试剂中加入O.l、 0.3和1 mM的VPA显 著提高化合物1对CD34+扩增的作用。如图11和12的表格所示，VPA 加入化合物l中，在某些条件下，也观察到有协同作用。
在CD34+细胞扩增中研究化合物2和VPA联合的作用。如图13和 14所示，在培养6天后，化合物2单独以剂量依赖的方式增加CD34+ 细胞数和百分比。在生长鸡尾酒试剂中加入0.1和0.3 mM的VPA显箸 提高化合物2对CD34+扩增的作用。如图13和14的表格所示，VPA 加入化合物2中，在某些条件下，也观察到有协同作用。
在从健康捐赠者获得的分化成红细胞的CD34+造血干细胞的胎儿血 红蛋白表达中研究化合物1和化合物2和鞋基脲联合的作用。如图15 所示，在培养6天后，化合物1和化合物2单独以剂量依赖的方式增加 HbF表达细胞百分比。在生长鸡尾酒试剂中加入10iiM的HU显著提高 化合物1和化合物2对HbF表达的协同作用。
在从镰状细胞贫血患者(SCA)获得的分化成红细胞的CD34+细胞的 胎儿血红蛋白表达中研究化合物1和羟基脲(HU)联合的作用。如图16 所示，在培养6天后，化合物1单独以剂量依赖的方式增加HbF表达细 胞百分比。在生长鸡尾酒试剂中加入10pM的HU显著提高化合物1对 HbF表达的协同作用。
本文所引用的所有参考资料都通过引用全部并入本文。尽管所述公 开是通过具体实施方案来描述的，但在不偏离本发明的精神和所付权利 要求所揭示的范围下可进行各种变型和修改，这些变型和修改对本领域 的普通技术人员来说显而易见。本发明提供的实施方案仅仅意在举例说明，本领域的普通技术人员 使用不超出常规的实验能够明白具体化合物、材料和步骤的大量等同物。
所有这些等同物均祐:认为在所附权利要求所限定的范围内。
权利要求
1.组合物，其包含有效量的免疫调节化合物或其药学上可接受的盐，和有效量的丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
2. 如权利要求1所述的組合物，其特征在于，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢巧l哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
3. 如权利要求2所述的組合物，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲咮-l，3-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸或其药学上可接受的盐。
4. 如权利要求2所述的組合物，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲咮-l,3-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
5. 如权利要求2所述的组合物，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲咮-l,3-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的羟基脲或其药学上可接受的盐。
6. 如权利要求2所述的组合物，其包含有效量的3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸或其药学上可接受的盐。
7. 如权利要求2所述的组合物，其包含有效量的3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
8. 如权利要求2所述的组合物，其包含有效量的3-(4-氨基-l-氧代-1，3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的羟基脲或其药学上可接受的盐。
9. 如权利要求1或2所述的組合物，其还包药学上可接受的载体。
10. 包含如权利要求l或2所述的組合物的单位剂型。
11. 如权利要求2所述的组合物，其包含4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基)-派啶-2,6-二酮的基本上纯的(S)对映体。
12. 增加CD34+造血干细胞扩增的方法，其包含使CD34+造血干细胞与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受 的盐接触。
13. 如权利要求12所述的方法，其中所述CD34+造血干细胞在体外接触。
14. 如权利要求12所述的方法，其中所述CD34+造血干细胞在体内接触。
15. 治疗、预防或控制血液系统疾病或病症的方法，其包括给予有 此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药 学上可接受的盐。
16. 如权利要求15所述的方法，其中所述的血液系统疾病或病症是 血液系统癌症。
17. 如权利要求16所述的方法，其中所述血液系统癌症是多发性骨 髓瘤、卩血红蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、 慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、 急性粒细胞性白血病或急性原始粒细胞性白血病。
18. 如;f又利要求15所述的方法，其中所述血液系统疾病或病症是骨髓增生异常综合征或骨髓增生性疾病。
19. 骨髓移植方法，其包括使骨髓与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧 代(3-哌啶基)-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氢异吲哚 -2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸、羟 基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐在体外接触，然后移植到所 需患者体内。
20. 骨髓重建方法，其包括给予有此需要的患者有效量的4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代 -1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效 量的丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
21. 如权利要求20所述的方法，其中所述患者已进行过或正在进行 化学疗法或放射疗法。
22. 治疗、预防或控制实体瘤的方法，其包括给予有此需要的患者 有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的 盐，以及有效量的丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
23. 治疗、预防或控制多发性骨髓瘤、卩血红蛋白病、白血病、骨髓 癌、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性 白血病、急性淋巴母细胞白血病、急性粒细胞性白血病或急性原始粒细 胞性白血病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代 -1,3-二氢异吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效 量的丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A或其药学上可接受的盐。
24. 治疗、预防或控制骨髓增生异常综合征或骨髓增生性疾病的方 法，其包括给予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基)-异二氢吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸、羟基脲或曲古 抑菌素A或其药学上可接受的盐。
25. 增加细胞中胎儿血红蛋白表达的方法，其包括使表达胎儿血红 蛋白的细胞与有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-异二氢吲哚 -1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢异^咪-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其药学上可接受的盐，以及有效量的丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A或其药 学上可接受的盐相接触。
26. 如权利要求25所述的方法，其中所述细胞为镰状细胞贫血细胞。
27. 如权利要求25所述的方法，其中所述细胞为正常细胞。
全文摘要
本发明提供了包含一种或多种免疫调节化合物和丙戊酸、羟基脲或曲古抑菌素A的组合物，及其在用于骨髓重建和骨髓移植的CD34+造血干细胞体外和体内扩增中使用以增加胎儿血红蛋白表达的方法，和治疗、预防和/或控制癌症、肿瘤和血液系统疾病和病症的方法。
文档编号A61K31/165GK101495111SQ200780027722
公开日2009年7月29日 申请日期2007年5月24日 优先权日2006年5月26日
发明者凯乐·陈, 劳拉·克拉尔, 劳瑞·穆塔-德帕塞维尔, 多米尼克·维希里, 海伦·布拉迪 申请人:细胞基因公司