专利名称：：解毒酶活性增强剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种具有增强第二相解毒酶活性和细胞内谷胱甘肽含量的作用的药物、食品或饲料。
背景技术：
：我们每天所吸收的食品、水、空气和化学药物包含对生物体不利的成分。在生物体中，这些成分被识别为外源物体，然后主要在肝脏中进行代谢。肝脏中异型生物质代谢包括第一相和第二相。在第一相中，异型生物质物质在所谓的第一相解毒酶(例如细胞色素P450或单加氧酶)的作用下经历氧化、还原或者水解。在第二相中，在所谓的第二相解毒酶(例如谷胱甘肽S-转移酶(在下文中有时被称为"GST")、醌还原酶(在下文中有时被称为"QR")、UDP-葡糖醛酸基转移酶(在下文中有时被称为"UGT")、谷胱甘肽过氧化物酶或芳基磺酸转移酶)相结合或被:原，进而，、促进了异型生物质代谢。、'、、GST是一种主要存在于肝脏中的酶，GST与各种亲电化合物和还原型谷胱甘肽相结合。GST催化来自第一相解毒酶代谢中的具有毒性的代谢产物的结合，或者催化其它异型生物质物质(毒性物质)的结合，进而，促进了解毒过程。换句话说，通过增强生物体中GST的活性，可以降低由毒性物质所引起的各种疾病的风险。近些年来，来自天然产物的能够增强GST活性的物质被研究。例如，已知大豆加工食品或月桂树中所含的大根香叶内酯(germacranolide)、一种或多种选自唇形科植物和桃金娘科桉树植物的植物或它们的提取物、拧檬苦素配糖体(limonoidglucoside)等(例如专利文献1至4)。谷胱甘肽是一种由半胱氨酸、谷氨酸和甘氨酸构成的三肽，广泛分布于生物体内。如上所述，谷胱甘肽是GST或谷胱甘肽过氧化物酶的底物，因此，谷胱甘肽是这些酶所显示解毒作用的重要组分。此外，谷胱甘肽还通过非酶催化方式与各种有害物质相结合而显示解毒作用。QR是一种与作为辅酶的NADH或NADPH结合而催化还原醌或电子受体化合物的酶，QR可以还原和解毒来自第一相酶代谢中的氧化物或者由活性氧或脂质过氧化物所产生的氧化物。近些年来，来自天然产物的能够增强QR活性的物质已经被研究。例如，已知含硫化合物(例如十字花科(Brassicaceae)植物中所含成分异硫氰酸盐)和欷青植物中所含的锭玉红具有增强QR活性的作用(例如专利文献5，非专利文献1)。UGT是一种能够催化形成异型生物质物质和葡萄糖醛酸复合物(葡萄糖醛酸戒)的反应(葡萄糖醛酸)的酶，该反应将葡萄糖醛酸转移到来自第一相酶代谢中的代谢物，或者转移到使用UDP-葡萄糖醛酸作为糖供体的其它异型生物质物质中。因此，已知UGT能够通过增强底物分子的水溶性来促进将底物分子转运到胆汁或血液中，这导致解毒。近些年来，来自天然产物的能够增强UGT活性的物质已经被研究。例如，靛青植物中所含的靛蓝类染料已知具有增强UGT活性的作用(例如专利文献6)。琼脂是一种由琼脂糖和琼脂胶构成的多聚糖，并广泛用作食品材料使用。琼脂糖的低分子化合物琼脂寡糖(agaro-oligosaccharide)在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖。期望开发琼脂寡糖作为健康食品的材料。据报道琼脂寡糖具有生理学作用，例如抗风湿作用和抗炎症作用(例如专利文献7至9)。此外，L—甘油—1,5—环氧-la卩，6-二羟基—顺式—己—3—烯—2—酉同(L-glycero-l,5-epoxy誦laP,6-dihydroxy-cis画hexa-3-en-2-one)(DGE)是一种通过将上述的琼脂寡糖置于中性至碱性条件下所得到的化合物。据报道，DGE具有生理学作用，例如抗风湿作用和抗炎症作用(例如专利文献10)。专利文献1:JP-A10-234326专利文献2:JP-A9-234020专利文献3:JP-A2006-111585专利文献4:JP-A2000-316527专利文献5:JP-A2003-40774专利文献6:JP-A2003-246734专利文献7:WO00/43018专利文献8:WO99/24447专利文献9:WO2003/086422专利文献10:WO99/64424非专利文献1:Y.Zhang,等人，ProcNatlAcadSciUSA,1992,Vol.89,p2399-240
发明内容本发明解决的问题本发明的目标是开发具有解毒作用的物质，其可以被安全容易地吸收，并且适宜作为食品材料、药物材料或祠料材料，从而提供利用该物质功能性的药物、食品或饲料。解决问题的方法正如本文简单描述的，本发明的第一方面涉及笫二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，包括选自琼脂、琼脂糖、在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物、下述分子式(化学分子式1)所代表的化合物其中X和Y为H或CH2OH,如果X为CH2OH则Y为H，X为H则Y为CH2OH;及其衍生物和其盐中至少一种作为活性成分的化合物。在本发明的第一方面中，在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物的例子包括琼脂寡糖，特别优选地是包括由琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖组成的混合物的琼脂寡糖。此外，在本发明的第一方面中，第二相解毒酶的例子包括谷胱甘肽S-转移酶、醌还原酶和UDP_葡糖醛酸基转移酶。本发明的第二方面涉及含有根据本发明第一方面的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂的药物。本发明的第三方面涉及含有根据本发明第一方面的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂的食品或飼料。发明效果本发明提供了第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，以及含该增强剂的药物、食品或飼料，其中所述增强剂包括选自琼脂、琼脂糖、在还原末端含3,6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物、上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物及其衍生物和其盐中至少一种作为该化合物活性成分的化合物。含有该增强剂的药物、食品或饲料可以通过增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的作用来促进解毒过程，因此，作为药物、食品或饮料用于治疗或治疗各种疾病是特别有用的，特别是作为药物或功能性食品用于防止疾病，这降低了毒性物质所造成各种疾病的风险。具体实施例方式可用于本发明的琼脂的例子包括来自属于石花菜科(Gelidiaceae)的红色海藻(例如安曼司石花菜(Gelidiumamansii)、日本石花菜(Gelidiumjaponicum)、太平洋石花菜(Gelidiumpacificism)、扁平石花菜(Gelidiumsubcostatum)、鸡毛藻(Pterocladiatenuis)和日本刺盾藻(Acanthopeltisjaponica))、属于江蓠科(Gracilariaceae)的红色海藻(例如真江蓠(Gracilariaverrucosa)和粗江蓠(Gracilariagigas))、属于仙菜禾牛(Ceramiaceae)的红色海藻(例如三叉仙菜(Ceramiumkondoi)和钩凑是菜(Campylaephorahypnaeoides))禾口其它的红色海藻作为原材料所获得的的产物。在太阳下干燥的海藻通常被用作原材料。新鲜的海藻和干海藻都可以被用于本发明中。还可以使用在干燥过程中在喷水时被漂白的被称为漂白原海藻的海藻。用热水提取原材料海藻，然后冷却以得到所谓的"Tokoroten(gelidiumjelly)"。通过冷冻脱水或压缩脱水去除"Tokoroten"中的水分，然后干燥得到琼脂。在本发明中，来自各种种类的海藻的琼脂以及各种形式包括棒状、带状、板状、线状和粉末状的琼脂可以被使用。此外，具有各种强度的市售琼脂可以被使用。琼脂通常包含大约70%的琼脂糖以及大约30%的琼脂胶。可以使用通过已知纯化方法从琼脂中纯化出来的琼脂糖作为本发明的琼脂。可以使用具有各种琼脂糖含量的低纯度或高纯度的纯化琼脂糖。此外，还6可以使用市售琼脂糖。在本发明中，琼脂和琼脂糖被定义为具有10000或者更高分子量的化合物。如下所述，分子量低于10000的琼脂或者琼脂糖被定义为其低分子化合物。也就是说，经过降解处理(例如酸性处理)仍具有10000或者更高的分子量的琼脂或琼脂糖为此处所使用的琼脂或琼脂糖。在本发明中，通过化学、物理和/或酶方法可以通过对上述琼脂、琼脂糖或者作为琼脂或琼脂糖原材料的海洋海藻进行部分降解制备产生在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物。用于部分降解的化学、物理和/或酶方法并无特殊限定，只要可以得到在还原末端含3,6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物即可。化学降解方法的例子包括在酸性至中性条件下的水解。物理降解方法的例子包括使用电磁波或超声波的辐射进行切割或者降解。酶降解方法的例子包括使用水解酶(例如琼胶酶)进行水解。从有效制备在还原末端含3,6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物的观点来看，降解方法的特别优选例子包括酸性水解和使用a-琼胶酶进行的酶水解。在本发明中，在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物的例子包括分子量低于10000的低分子化合物琼脂糖，该琼脂糖优选上由2-50个糖、更加优选由2-30个糖组成，其中p-D-半乳糖和3，6-无水吡喃半乳糖交替排列。其特别优选的例子包括琼脂寡糖。本文使用的琼脂寡糖是指琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖、琼脂八糖，以及选自琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖的两种或多种所组成的混合物，因此，琼脂寡糖与在还原末端具有P-D-半乳糖的新琼脂寡糖不同。作为本发明所使用的琼脂寡糖，琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖或琼脂八糖可以单独使用，优选使用它们的混合物。当含有琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖的琼脂寡糖被使用在本发明中时，可以根据已知方法制备琼脂寡糖，该方法包括但不局限于专利WO00/69285中所描述的制备方法。即，在本发明中，可以使用经过固体酸的酸性降解而从原材料琼脂中获得的含有琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖的琼脂寡糖。还可以使用市售的含有琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖的琼脂寡糖(产品名称Agaoligo,由TakaraBio有限公司制造)。将在还原末端含3,6-无水吡喃半乳糖的化合物等置于中性至碱性条件下，可以获得本发明的上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物。在pH值小于7的条件下将在其结构中含3，6-无水吡喃半乳糖的化合物进行酸性水解和/或酶降解，然后将得到的酸性降解和/或酶降解化合物置于中性至碱性条件下，还可以得到上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物。在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的化合物的例子包括琼脂寡糖，例如琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖和K-角叉双糖。在其结构中含3，6-无水吡喃半乳糖的化合物的例子包括琼脂、琼脂糖、它们的降解产物，以及上述在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物。当在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖(例如琼脂二糖或K-角叉双糖)的化合物被置于pH值为7或更高的中性至碱性条件下时，选自如上所述的在还原末端含3,6-无水吡喃半乳糖的化合物中的至少一种化合物的溶液或悬浮液;故用于反应中，用于进行该反应的此反应液体的成分并无特殊限定。优选地，可以使用石咸性反应液体，该石咸性反应液体包括但不局限于无机碱(例如氢氧化钠、氲氧化钾、氢氧化钙或氨水)和有机碱(例如Tris、乙胺或三乙胺)，这些碱溶于作为溶剂的水(例如蒸馏水、离子交换水、自来水等)中。碱的浓度并无特殊限定。可以4吏用石成浓度优选为0.0001到5N,更加优选为0.001到1N的反应液体。反应温度无特殊限定，优选可以为0至200。C,更加优选为20至130。C。反应时间并无特殊限定，优选可以为几秒至几天。根据化合物的种类和上述分子式(化学分子式1)所代表的所期待的化合物的产量，可以适当地选择碱的种类和浓度、反应温度和反应时间，以及溶于或悬浮于反应液体的作为原材料的化合物的量。反应液体的pH值通常为7或更高。但是，上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物的生成，在高的碱快。例如，通过制备pH值为11.5的琼脂二糖或K-角叉双糖的溶液并将该溶液保持在37。C下五分钟，可以制备上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物。根据目的，制备的含上述分子式(化学分子式1)所代表化合物的碱性溶液可以在中和后使用，或者通过调节pH值至小于7来作为酸性溶液使用。与得到上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物的方式一样，当在pH值小于7的条件下对在结构中含3，6-无水吡喃半乳糖的化合物进行酸性水解和/或酶降解，然后再保持在中性至碱性条件时，酸性水解可以通过例如下述过程实现使用水溶液来作为反应液体，优选使用0.001至5N的酸包括无机酸(例如盐酸、石危酸或硝酸)和有机酸(例如柠檬酸、蚁酸、醋酸、乳酸或抗坏血酸维生素C),将适量的原材料化合物溶于或悬浮于反应液体中，然后再保持反应液体在优选为0-200。C的反应温度下，优选反应时间为几秒至几天。固体酸也可用作酸。在酶降解的条件下，该反应可以使用与酸性水解相同的反应液体以及相同的反应条件下进行，例如使用适量的a-琼胶酶，例如使用在专利WO00/50578中所述的在显示酶活性的条件下的a-琼"交酶。可以通过已知的包括化学方法和物理方法的纯化手段来纯化反应溶液中所含的上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物。可以通过纯化方法的组合来纯化该化合物，纯化方法包括凝胶过滤方法、利用分子量级分月莫(molecularweight-fractioningmembrane)的级分方法、；容液提取方法，以及使用离子交换树脂等的各种色谱方法。例如，当上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物中X为CH2OH、Y为H时，L-甘油—1，5—环氧—1a卩，6—二羟基—顺式—己—3—烯—2-酮(在得到:产物中纯化而来。当上述分子式(化学分子式1)、所代表的^合物中X为H,Y为CH20H时，D-甘油-1,5-环氧-la卩，6-二羟基-顺式-己-3-烯-2-酮(在此之后有时使用k-DGE)是在从中性至碱性条件下通过处理k-角叉双糖所得到的产物中纯化而来。本文中，DGE被认为是一种当上述的琼脂寡糖被带入生物体内时所产生的化合物(Jpn.J.Phycol.(Sorui)48:13-19,March10,2000)。DGE的结构如下述分子式(化学分子式2)所示。的例子包括连接各种取代基团的化合物。但是，衍生物并无特殊限定，只要衍生物可以达到期望的作用即可。取代基团的例子包括脂肪族基团(直链脂肪族基团(例如曱基、乙基和正丙基)和支链脂肪族基团(例如异丙基、异丁基、异戊二烯基和香叶基))、芳香族基团(例如苯基、萘基、联苯基、吡咯基和P引咮基)、芳香脂肪族基团(例如苯曱基和苯乙基)、羟基、羧基、硫酸基、磷酸基、硫醇基、氨基、硝基、烷氧基(例如甲氧基)、酰氧基(例如乙酰基)、卣素(例如氯、溴和氟)、氨基酸和肽。此外，如下所述，该衍生物可为作为前药的化合物的衍生物。作为本发明的活性成分的衍生物，琼脂、琼脂糖或在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物(例如琼脂寡糖)的衍生物包括但不特别局限于、优选为硫酸化产物和甲基化产物。上述分子式与含SH基团化合物的反应所产生的衍生物。这样的衍生物的结构如下述分子式(化学分子式3)所示。其中R为含SH基团的化合物去掉SH基团所获得的残基。所使用的含SH基团的化合物并无特殊限定，只要该化合物含有至少一个SH基团即可。在上述分子式(化学分子式3)中，R是在含SH基团的化合物和上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物的反应中，当上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物与含SH基团的化合物相结合后消耗掉一个SH基团后所剩下的残基。因此，当含SH基团的化合物含有两个或多个SH基团时，一个或多个SH基团出现在由R代表的残基中。含SH基团的化合物的例子包括甲硫醇、丁硫醇、巯基乙醇、含SH基团的氨基酸，以及含SH基团的氨基酸衍生物。含SH基团的氨基酸的例子包括半胱氨酸和高半胱氨酸。含SH基团的氨基酸衍生物的例子包括上述氨基酸的衍生物，例如半胱氨酸衍生物、含半胱氨酸的肽和含半胱氨酸衍生物的肽。半胱氨酸衍生物的例子包括半胱氨酸酯的氨基化合物、乙酰基化合物和酯化合物。含半胱氨酸的肽并无特殊限定，只要该肽含半胱氨酸作为其组成成分即可。含半胱氨酸的肽包括寡肽、低分子肽(例如谷胱甘肽)和由多肽组成的高分子肽(例如蛋白)。此外，在本发明中，通过合并上述反应与将含半胱氨酸或高胱氨酸的肽转换为含半胱氨酸或高半胱氨酸的肽的条件(例如还原处理)，含胱氨酸或高胱氨酸的肽还可以被用作含半胱氨酸或高半胱氨酸的肽。含半胱氨酸衍生物的肽的例子所包括的物质与上述的含半胱氨酸的肽大体相同，不同之处仅在于用半胱氨酸衍生物取代半胱氨酸。含半胱氨酸的肽的例子还包括含有碳水化合物、脂质等的含半胱氨酸的肽。此外，可以使用上述各种物质的盐、酸酐、酯等。上述分子式(化学分子式3)所代表的化合物的制备并无特殊限定，例如可以-按照专利WO99/64424中所描述的方法进4f。在本发明中所使用的上述化合物的盐优选是药学上可接受的盐，可以通过已知的转化方法获得。盐的例子包括与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、氪碘酸和硫酸)形成的盐、与有机酸(例如甲酸、乙酸、草酸、丙二酸和琥珀酸)形成的盐，以及通过与囟代烃(例如曱基碘、千基卣等)反应得到的铵盐。此外，本发明中所使用的化合物可以形成衍生物(前药)，该衍生物可以很容易地在体内被水解以达到期望的作用，例如化合物可以被酯化。此前药可以按照已知的方法来制备。此外，各种异构体(例如上述化合物的光学异构体、酮式-烯醇式互变异构体和几何异构体)也可以用作本发明的活性成分。此外，活性成分还可以为分离的异构体或异构体的混合物。本发明提供了第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂(在下文中有时被称为本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂)，该增强剂包括选自琼脂、琼脂糖、在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖低分子化合物、上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物及其衍生物和其盐中至少一种作为活性成分的化合物(在下文中有时被称为本发明的活性成分)。此处所使用的第二相解毒酶的例子包括谷胱甘肽S_转移酶(GST)、醌氧化酶(QR)、UDP-葡糖醛酸基转移酶(UGT)、谷胱甘肽过氧化物酶或芳基磺酸转移酶。特别优选的例子为GST、QR和UGT。如下述实施例1至7所示，由本发明的活性成分所产生的GST、QR或UGT的活性的增强作用可以通过例如但并不特别局限于测量GST、QR或UGT的酶活性，或者测量GST、QR或UGT的基因表达量来提南。如下述实施例8所示，本发明的活性成分对所产生的细胞内谷胱甘肽含量的增强作用可以通过例如但并非特别局限于测量细胞内谷胱甘肽的含量来提高。本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂增强第二相解毒酶(例如上述GST、QR和UGT)的活性，还进一步增加谷胱甘肽的量，谷胱甘肽可以作为一些第二相解毒酶的底物，存在于细胞内，因此可以促进生物体内尤其是在肝脏中毒性物质的代谢，以及肝脏的功能。因此，本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂可以降低由各种毒素物质引起的各种疾病的风险，因此尤其适于作为下述药物和功能性食品使用。其代谢可以被GST、QR、UGT和谷胱甘肽促进的毒性物质并非特别局限于特定的化合物，还包括多种不同外源物质，例如致癌物质、农用化学品、环境污染物和具有副作用的药品。也就是说，本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂所起作用的疾病并非局限于特定的疾病。此外，如下述的比较实施例所示，对于由本发明的活性成分所产生的第二相解毒酶活性的这种增强作用在其还原末端含(3-D-半乳糖的新琼脂寡糖中并未发现。根据本发明，提供了含本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂的药物(在下文中有时被称为本发明的药物)。本发明的药物可以通过增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量来促进毒性物质代谢的肝功能。本发明的药物对于治疗或预防各种疾病是有用的，该疾病伴随着肝功能的退化，例如肝炎、肝硬化、肝癌、脂肪肝和酒精肝病病。本发明的药物非常适合作为一种用于降低这些疾病发生的预防性药物，主要因为本发明的活性成分所产生的增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的作用。此外，当本发明的药物与具有损害肝脏副作用的药物联合使用时，因为本发明的药物的毒性物质代谢的促进作用，本发明的药物能够降低用药后的肝脏损伤。在此情况下，本发明12的活性成分和其它的药物可以混合起来配制成为一种剂型，或者可以单独配制成为单独的剂型，然后同时使用。此外，除了上述各种疾病外，本发明的药物可以用于预防和治疗由各种毒性物质引起的疾病。这些疾病的例子包括但不特别局限于癌症、动脉硬化、阿尔茨海默(Alzheimer)症、肥胖(代谢综合症)和皮肤病。本发明的药物的例子包括通过混合上述活性成分与已知的药物载体混合所获得的制剂，其中所述活性成分被用于本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂。本文所使用的药物包括准药物(quasidrugs)。此外，本发明的药物还可以与同本发明的活性成分(即第二相解毒酶)具有相同用途的其它成分联合使用，或者与已知具有增强第二相解毒酶活性的其它成分联合使用。已知具有增强第二相解毒酶本发明的药物还可以与谷胱甘肽或含大量谷胱甘肽的成分联合使用。本发明的药物的解毒作用还可以进一步通过加入可以作为第二相解毒酶底物的谷胱甘肽来增强，第二相解毒酶的活性可以通过本发明的活性成分或者能够增强细胞内谷胱甘肽的量的成分来增强。能够增加细胞本发明的药物通常可以通过下述步骤制成将上述活性成分与药学上可接受的液体或固体载体进行混合；任选地加入溶剂、分散剂、乳化剂、緩冲液、稳定剂、赋形剂、粘合剂、分解剂、润滑剂等来将混合物配制成为固体剂型例如片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂或胶嚢，或者液体剂型(例如传统的液体剂、悬浮液或乳状液)。此外，本发明的药物可以被配制成为干产品，用于在使用之前与适宜的载体或与外用制品(externalpreparation)重新成为液体形态。可以根据药物的给药模式和剂型来选择药物载体。当本发明的药物是固体组合物的口服药物时，固体组合物的口服药物的例子包括片剂、丸剂、胶嚢、散剂、细粒剂和颗粒剂，所使用的药物载体的例子包括淀粉、乳糖、甘露醇(mannite)、羧甲基纤维素、玉米淀粉和无机盐。在制备口服药物过程中，可以添加粘合剂、分解剂、表面活性剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂、着色剂、香料等。例如，当口服药物为片剂或丸剂时，如果期望，口服药物可以包被蔗糖、凝胶、羟丙基纤维素等的糖衣或者肠或胃可溶性薄膜。当本发明的药物为液体成分的口服药物时，液体成分的口服药物的例子包括药学上可接受的乳状液、溶液、悬浮液和糖浆，能够使用的药物载体的例子包括纯化水和乙醇。在制备液体成分口服药物的过程中，如果期望，可以进一步添加辅助试剂(例如润湿剂或悬浮剂)、甜味剂、调味剂、防腐剂等。当本发明的药物为肠胃外药物(parenteraldrug)时，可以通过将本发明的上述活性成分溶解或悬浮在稀释液(例如注射用蒸馏水、生理食盐水、液体葡萄糖溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇或聚乙二醇)中，选择性地向其中加入杀菌剂、稳定剂、涨度剂(tonicity)、舒緩剂等来制造该药物。肠胃外用药物还可以被制成固体组合物，在使用前可以溶于注射用灭菌水或灭菌溶剂。外用制品的例子包括用于透皮给药或透粘膜(口腔或鼻内)给药的固体、半固体或液体配制品。此外，还包括栓剂等。外用制品的具体例子包括乳状液(例如乳化剂或洗液)、液体制品(例如用于透粘膜给药的外用酊剂或液体试剂)、药膏(例如油状药膏或亲水性药膏)和用于透皮给药或透粘膜给药的贴片(例如薄膜、胶带或敷布)。药物的上述各种剂型可以按照传统方法使用已知的药物载体等进行适当地制造。药物中活性成分的含量根据剂型、给药方法等而变化，但并无特殊限定。优选地，药物活性成分的含量为这样一种量，以便可以在下述给药量范围内的活性成分的给药的量。本发明的药物活性成分的含量通常大约为1重量％至100重量％。本发明的药物通过适宜其药物剂型的给药方法给药。给药方法并无特殊限定。例如，本发明的药物可以通过内部、外部或注射给药。当本发明的治疗药物或预防药物通过注射给药时，可以通过静脉、肌肉、皮下、皮内或类似方法给药。当本发明的药物通过外部给药时，可以通过例如栓剂的外用制品的适宜给药方法给药。根据剂型、给药方法及其期望用途，以及给药受试病人的年龄、体重和症状进行适当地选摔本发明的药物剂量，因此药物剂量不是固定的。药物所含的活性成分剂量对于成人，通常优选为每天0.005至5000mg/kg体重，更加优选为0.05至500mg/kg体重，再更加优选为0.5至50mg/kg体重。当然，剂量根据各种条件而不同，因此可以低于上述剂量范围或者可以超过上述剂量范围。可以在理想的剂量范围内每天一次或每天几次进行给药。术语给药是任意的。本发明的药物可以通过口服给药其自身，或者还可以添加到每天所吸收的任意食品中。根据本发明，提供了含本发明的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂的食品或祠料(下文有时被称为本发明的食品或飼料)。与本发明的药物的作用方式相同，本发明的食品或祠料能够增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量，因此可被用作增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的食品或祠料。本发明的食品和詞料可用于治疗或预防各种疾病，该疾病伴随着肝功能的退化，例如肝炎、肝硬化、肝癌、脂肪肝以及酒精肝病病。本发明的食品或饲料非常适于作为降低这些疾病发生的功能性食品，这主要由本发明的活性成分所产生的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强作用。此外，除了上述各种疾病以外，本发明的食品或饲料还可用于预防或治疗由生物体内聚积的毒性物质引起的疾病。这样的疾病的例子包括但不特别局限于癌症、动脉硬化、阿尔茨海默症、肥胖(代谢综合症)和皮肤病。此外，本发明的食品或饲料的吸收导致了由解毒作用引起的健康恶化(例如皮肤粗糙和疲乏)的改善。本发明的食品的一个方面为具有解毒作用，即脱毒作用的食品。这种食品的例子包括用于降低发生上述疾病风险的功能性食品(用于健康维持的食品)、用于生物体内促进解毒来预防衰老现象的抗衰老的功能性食品，以及用于酒精摄取之前或之后的宿醉预防(hangoverprevention)的功能性食品。该功能性食品包括特定的健康食品，其上贴有标签显示本发明的活性成分参与食品的功能，并且该食品可以降低上述疾病的发生风险，具有解毒作用、具有抗衰老作用或具有宿醉预防作用。与本发明的药物的作用方式相同，本发明的食品或饲料还可以与其的，即已知能够增强第二相解毒酶活性的第二相解毒酶或其它成分。此外，与本发明的药物的作用方式相同，本发明的食品或伺料还可以与已知具有增强其活性作用的第一相解毒酶或成分的混合而使用。此外，本发明的食品或詞料还可以与谷胱甘肽或含大量谷胱甘肽的成分的混合二使用。优选地，本发明的食品与上述可混合的成分中优选作为食品材料使用的成分相混合，例如椰菜、姜黄、片姜黄、酵母、淡水蛤提取物、牡蛎提取物、牛奶蓟提取物、岩藻依聚糖、明日叶及其加工产品。术语"包括，，用于本发明的食品或飼料时的意思是包含、添加和/或稀15释。在本文中，术语"包含"是指本发明中所用的活性成分被包括在食品或饲料中。术语"添加，，是指本发明中所用的活性成分被添加到食品或饲料原材料中。术语"稀释"是指食品或祠料的原材料被添加到本发明中所用的活性成分中。本发明的食品还包括将活性成分作为食品添加剂而添加的食品产品。用于制造本发明的食品或饲料的方法并无特殊限定，只要食品或饲料包括本发明的活性成分即可。例如，混合、烹调、加工等过程可根据那些用于普通食品或饲料的过程进行。本发明的食品或伺料可以通过普通的食品或饲料的制造方法进行制造。的加工谷类产品(例如面粉产品、淀粉产品、预混合产品、面条、通心面、面包、豆酱、荞麦面条、面筋面包、米粉、凝胶面条和包装的米糕)、加工脂肪类和油类产品(例如塑料脂肪和油、天麸罗油、色拉油、蛋黄酱和调味品)、加工大豆类产品(例如豆腐、味噌和发酵大豆)、加工肉类产品(例如火腿、培根、压制火腿和香肠)、加工海类产品(例如冷冻底栖鱼、煮鱼酱、管状煮鱼酱条、底栖鱼饼、煎鱼酱馅饼、鱼球、腱、鱼肉火腿或香肠、干鲣、加工鱼卵产品、罐装海产品和甜酱油煮鱼)、奶类产品(例如原牛奶、奶油、酸奶、黄油、干酪、浓缩奶、粉状奶和水激凌)、加工蔬菜和水果产品(例如糊、酱、泡菜、水果汁、蔬菜饮料和混合饮料)、糖果类(例如巧克力、饼干、甜圏、蛋糕、甜米糕和甜米)、酒精饮料(例如米酒、中国白酒、葡萄酒、威士忌酒、烧酒、伏特加酒、白兰地酒、杜松子酒、浪姆酒、啤酒、软酒精饮料、水果酒和利口酒)、奢侈饮料(例如绿茶、茶、乌龙茶、咖啡、软饮料和乳酸饮料)、调味品类(例如酱油、酱、醋和甜米酒)、罐装、瓶装或袋装食品(例如各种烹调食品(例如盖有经烹调的牛肉和蔬菜的米饭、小罐内肉和蔬菜煮米饭、蒸红豆米饭和咖逸))，半干或浓缩食品(例如肝酱、其它涂抹食品(spread)、荞麦面条或乌东汤和浓缩汤)、干食品(例如速食面条、速食咖喱、速食咖啡、粉末果汁、粉末汤、速食味噌汤、经烹调的食品、经烹调的饮料和经烹调的汤)、冷冻食品(例如寿喜烧、茶碗蒸、烤鳗鱼、汉堡牛排、烧卖、猪肉陷饺子、各种棒状食品和水果鸡尾酒)、固体食品、液体食品(例如汤)、加工农业或林业食品(例如香料)、加工家畜产品和加工海产品。本文所使用的食品包括16饮料。例如，根据本发明，该饮料可以通过将琼脂寡糖溶解于水中，并且适当在其中添加现有饮料所使用的成分进行制造。本发明的食品可为任何形式，包括口服可吸收形式(例如粉末形式、片状形式、颗粒形式和胶嚢形式)，只要一种或多种活性成分被包括、添加和/稀释于本发明的食品中，并且该活性成分的含量需要达到足以显示出增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽的作用的量。本发明的食品还包括本发明的上述活性成分自身，以及活性成分与适当的乳化剂、赋形剂等按适当比例的混合物。这些食品可以自身而被食用，或者也可以与水相混合，然后作为饮料吸收。本发明的食品中的活性成分含量并无特殊限定，可以根据它们显示的功能性和活性进行适当选择。例如，本发明的食品的活性成分的含量优选为0.0001至100重量％,更加优选为0.001至60重量％，再更加优选为0.01至30重量％。本发明的食品可以在这样的量下被吸收，对于成人而言，每天本发明的活性成分剂量可纟皮吸收的量通常优选为0.005至5000mg/kg体重，更加优选为0.05至500mg/kg体重，再更加优选为0.5至50mg/kg体重。此外，本发明提供了用于具有增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽活性的作用的生物体飼料，该饲料包括，也就是包括、添加或稀释上述活性成分。本发明的另一个方面提供了培养生物体的方法，该方法包括给药生物体上述活性成分。本发明的进一步另一方面提供了包括上述活性成分的生物体培养剂。物动物。饲养动物的例子包括家畜类(例如马、牛、猪、绵羊、山羊、骆驼和羊羔)，实验用动物类(例如小鼠、大鼠、豚鼠和兔)、家禽类(例如鸡、鸭、火鸡和鸵鸟)、鱼类、曱壳类和贝壳类。宠物动物的例子包括狗和猫。作为饲料，例子是用于维持和/或提高身体状况的饲料。作为生物体培养剂，例子是浸润剂、饲料添加剂和饮料添加剂。根据这些发明，根据本发明的活性成分的增强第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽的作用，可以预计本发明的药物的作用与这些发明所使用的上述生物体所显示的作用相同。即，本发明的祠料可以治疗或预防生物体内有毒物质所引起的各种疾病，例如，该飼料可以降低毒性物质所引起的发生各种疾病的风险。对于受试生物体而言，每天本发明中所使用的上述活性成分通常按照优选为0.005至5000mg/kg体重，更加优选为0.05至500mg/kg体重，再更加优选为0.5至50mg/kg体重的量给药。给药可以通过例如以下实现在待给药受试生物体的人造混合飼料的原材料中添加和混合活性成分，或者通过将活性成分与人造混合饲料的粉状原材料相混合，然后再进一步添加混合物到其它原材料中，并且将混合物与其它原材料混合起。祠料中活性成分的含量并无特殊限定，可以根据期望的目的来进行适当地选择。例如，饲料中活性成分的含量优选为0.0001至100重量％,更加优选为0.001至60重量％,再更加优选为0.01至30重量％。用于制造本发明的饲料的方法并无特殊限定，该饲料的混合物也可以按照普通祠料进行制造，只要所制造的饲料中含有本发明的上述活性成分即可。也可以按照相同方式制造生物体培养剂。根据本发明，家畜动物、实验用动物、家禽、宠物动物等动物的身体状况可以维持在良好的条件下或者被改善，这是通过例如允许受试生物体来吸收包括本发明所使用的上述活性成分的饲料，上述活性成分具有增强本发明所使用的II解毒酶活性的增强作用或细胞内谷胱甘肽的作用，或者是通过将受试生物体浸润在含本发明中所使用的上述活性成分(例如，通过将浸润剂溶解于水中所得到的液体)的液体中。这些方面是本发明中生物体方培养法的部分方面。的作用时，并未发现用于本发明的上述活性成分具有毒性。例如，在口服给药的情况下，当按照2000mg/kg体重的单一剂量给药小鼠琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖、琼脂八糖及其混合物或者DGE时，并未发现致死病例。此外，当按照2000mg/kg体重的单一剂量对大鼠通过口服给药给药上述活性成分时，并未发现致死病例。实施例参考下列实施例对本发明进行更具体地描述，其中本发明并不限于下列实施例。在实施例中，除特殊说明，"％"的意思是"体积％"。制备实施例L琼脂二糖的制备将琼脂(AGARNOBLE)悬浮于0.1N的HC1中，配成10%的浓度，然后在100。C加热19分钟。将10ml上述样品装到水平tf过的Toyopearl18HW40C(由TOSOH公司制造)色谱柱上(体积为4.4cmx85cm)。使用水作为流动相利用凝胶过滤色谱法进行分离，流速为每分钟1.4ml。洗脱的物质由示差折射仪进行检测，每次收集7毫升的级分。在洗脱时间为406分钟、435分钟、471分钟和524分钟时分别出现峰。取对应于每个峰的级分，在硅胶60F254板(由默克(Merck)公司制造)上进行点板，使用5:5:l比例的l-丁醇乙醇水进行展开，然后使用苔黑素-硫酸方法进行分析。结果为在524分钟洗脱出来的峰是琼脂二糖。此级分被冻干后得到140mg琼脂二糖。制备实施例2:L-甘油-1,5-环氧-la卩，6-二羟基-顺式-己—3—烯_2—酮(DGE)的制备将2.5g市售琼脂(AGARNOBLE)在50ml0.1NHC1中的悬浮液，在100。C的温度下加热13分钟得到溶液。将该溶液冷却至室温，使用NaOH调节pH值至12,然后再中和该溶液。将中和产物使用下述正相HPLC进行纯化。收集每个峰，减压下进行干燥，然后再溶解于水中。通过使用HL-60细胞进行测量每个级分的癌细胞生长抑制活性。发现保留时间为4.05和4.16的级分具有癌细胞生长抑制活性。然后，大量收集保留时间为4.05和4.16的级分，并对其进行结构分析。据发现结果为该级分是L-甘油-1,5-环氧-1ap,6-二羟基-顺式-己-3-烯_2-酮(DGE)。用于正相HPLC的条件显示如下。柱PALPAKS型(4.6mmx250mm,由TAKARASHUZO有限公司制造)流动相A:90%乙腈水溶液流动相B:50%乙腈水溶液流速1ml/min洗脱流动相A(10分钟)—流动相A至流动相B的线性浓度梯度(40分钟)—流动相B(10分钟)检测在195nm的吸光度柱温40°C实施例1:增强谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性的作用的评估(1)将Hepalclc7细胞(ATCCCRL-2026)悬浮于含有10%的胎牛血清(由MPBiomedicals公司制造)和1%的青霉素—链霉素(由NacalaiTesque有限公司制造)的达尔伯克改良伊格尔培养基(DulbeccomodifiedEaglemedium)(由Sigma制造)，细胞浓度为4x105个细胞/ml。在96孔微孔板(microtiterplate)中的每个孔中，加入0.2ml的细胞悬浮液，在存在5%二氧化碳气体时，在37。C培养过夜。然后，用达尔伯克改良伊格尔培养基更换每个孔中的培养基。向每个孔中，加入0.4jnl测试物质的水溶液，然后培养24小时。制备实施例1所得到的琼脂二糖和市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo,由TakaraBio有限公司制造，均含20至25%的琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖)被用作测试物质。在阴性对照中，加入水来代替测试物质。培养完成后，去除培养基，使用磷酸緩冲液来洗涤该细胞。然后，加入0.1ml的细胞溶解溶液(10mMTris-HCl(pH值为7.4)),38.5mMKC1和1mMEDTA,1%NP-40)，在37。C孵育10分钟，得到酶溶液。向25jal的酶溶液中，加入155pi的反应溶液(0.13M磷酸钾緩冲溶液(pH值为6.5)，1.3mM谷胱甘肽)。在临近测量之前，加入20pl作为反应底物的10mM的CDNB并且在340nm处测量吸收率的变化。进行三遍活性分析。使用用磷酸緩冲液进行50倍稀释的酶溶液和MicroBCA蛋白分析试剂盒(由PIERCE公司制造)来测量蛋白含量。加入测试物质的量需要达到下述表所显示的浓度。GST活性作为相对于对照的GST活性，并且根据下述公式进行计算。GST活性=(加入测试物质部分的最大速率系数/加入测试物质部分的蛋白含量)/(加入水部分的最大速率系数/力。入水部分的蛋白含量)结果如表1所示。表1显示了加入各种测试物质后的细胞内GST活性。发现加入琼脂寡糖或琼脂二糖造成了GST活性的显著增加。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>实施例3:醌还原酶(QR)活性的测量参照HansJ.Prochaska等人，AnalyticalBiochemistry169,328-336(1988)中所述方法的部分改进的方法测量QR的活性。将Hepalclc7细胞悬浮于含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基，细胞浓度为4x105个细胞/ml。向96孔微孔板中的每个孔中，加入0.2ml的细胞悬浮液，在存在5%二氧化碳气体时，在37。C培养过夜。然后，用达尔伯克改良伊格尔培养基更换每个孔中的培养基。向每个孔中，加入0.4pl测试物质的水溶液，然后培养24小时。将通过制备实施例1中所得到的琼脂二糖和市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo)用作测试物质。在阴性对照中，加入水来代替测试物质。培养完成后，去除培养基，使用磷酸緩冲液来洗涤细胞。然后，加入0.1ml的细胞溶解溶液(2mMEDTA(pH值为7.8),1%NP-40),在37°C孵育10分钟，得到酶溶液。向25pl的酶溶液中，加入100|il的反应溶液(25mMTris-HCl(pH值为7.4),0.67%BSA,0.01%Tween20,5pMFAD,1mMG6P,30一NADP,0.3mg/mlMTT,2U/mlG6PDH(由Sigma制造))。此时，加入或者不加入底物。当加入底物时，进一步以最终浓度为50jiM向反应溶液中加入曱萘醌(由Sigma制造)。在室温孵育30分钟后，加入75jli12N的-灰酸钠来终止反应，并且在590nm处测量其吸光度。进行三遍活性分析。使用用磷酸緩冲液进行50倍稀释的酶溶液和MicroBCA蛋白分析试剂盒来测量蛋白含量。所加入测试物质的量要达到下述表所显示的浓度。QR活性作为相对于对照的QR活性，并且根据下述公式进行计算。QR活性z{[(有底物时加入测试物质部分的吸光度)-(无底物时加入测试物质部分的吸光度)]/(加入测试物质部分的蛋白含量)}/{[(有底物时加入水部分的吸光度)-(无底物时加入水部分的吸光度)]/(加入水部分的蛋白含量))}结果如表3所示。表3显示了加入各种测试物质后细胞内的QR活性。发现，加入琼脂寡糖或琼脂二糖导致了QR活性的显著增加。22表3<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>实施例4:诱导谷胱甘肽S-转移酶(GST)mRNA表达的作用的评估将Hepalclc7细胞悬浮于含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基，细胞浓度为4x105个细胞/ml。向6孔板的每个孔中，加入5ml的细胞悬浮液，在存在5%二氧化碳气体时，在37。C培养过夜。然后，用达尔伯克改良伊格尔培养基更换每个孔中的培养基。向每个孔中，加入被作为测试物质的市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo),最终浓度为100吗/ml，然后培养16小时。在阴性对照中，加入水来代替测试物质。培养完成后，去除培养基，力口入0.5ml的RNAiso(由TakaraBio有限公司制造)将细胞回收在1.5ml的微量离心管(Eppendorfmicro-tube)中，并置于室温5分钟。再向其中加入O.lml的氯仿。将混合液混勻直至成为乳白色。将混合液置于室温5分钟，在4。C下以10000rpm离心15分钟。转移上清液至另外一个农吏量离心管中。再向其中加入0.25ml的异丙醇，混合均匀。混合液被置于室温10分钟，在4。C下以10000rpm离心10分钟得到沉淀物。使用0.5ml的75%乙醇来洗涤沉淀物，在4。C下以10000rpm离心5分钟，然后干燥。沉淀物溶于20pl注射用水中，得到总RNA在水中的溶液。使用EXScriptRT-PCR试剂盒(由TakaraBio有限公司制造)进行反转录反应和实时PCR。在实时PCR中，使用GST的特异性引物和作为对照的铁传递蛋白受体(Tfrc)的特异性引物。使用SmartCyclerIISystem(由Cepheid公司制造)进行测量。进行两遍活性分析。GSTmRNA的表达量作为相对于对照的GSTmRNA的量，并且根据下述公式进行计算。GSTmRNA的表达量=[(加入测试物质部分中GSTmRNA的表达量)/(加入测试物质部分中TfrcmRNA的表达量)]/[(加入水部分中GSTmRNA的表达量)/(加入水部分中TfrcmRNA的表达量)]结果如表4所示。表4显示了加入琼脂寡糖后细胞内GSTmRNA的表达量。发现，琼脂寡糖具有显著的诱导GSTmRNA表达的活性。表4测试物质表达量(倍)100pg/ml琼脂寡糖4.8实施例5:诱导醌还原酶(QR)mRNA表达的作用的评估按照实施例4中所描述的方法测量琼脂寡糖对于诱导QRmRNA表达的活性。市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo)被作为测试物质使用。进行两遍活性分析。QRmRNA的表达量作为相对于对照的QRmRNA的量，并且根据下述公式进行计算。QRmRNA的表达量=[(加入测试物质部分中QRmRNA的表达量)/(加入测试物质部分中TfrcmRNA的表达量)]/[(加入水部分中QRmRNA的表达量)/(加入水部分中TfrcmRNA的表达量)]结果如表5所示。表5显示了加入琼脂寡糖后细胞内QRmRNA的表达量。发现，琼脂寡糖具有显著的诱导QRmRNA表达的活性。表5测试物质表达量(倍)100|ug/ml琼脂寡糖4.4实施例6:增强UDP_葡糖醛酸基转移酶(UGT)活性的作用的评估参照B.Burchell，P.Weatherill等人，MethodsinEnzymology77,p169(1981)中所述方法的部分改进的方法测量UGT活性。将Hepalclc7细胞悬浮于含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基，细胞浓度为4x105个细胞/ml。向12孔板的每个孔中，加入2ml的细胞悬浮液，在存在5%二氧化碳气体时，在37。C培养过夜。然后，用达尔伯克改良伊格尔培养基更换每个孔中的培养基。向每个孔中，加入4pl被作为测试物质的市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo)的水溶液，然后培养24小时。在阴性对照中，加入水来代替测试物质。培养完成后，去除培养基，使用磷酸緩冲液来洗涤该细胞。细胞被冷冻和解冻后，向其中加入0.2ml的反应溶液(0.1MTris-HCl(pH值为7.4),1mMMgCl2,0.02%TritonX-100,0.15mMp-硝基酚(PNP,由NacalaiTesque有限公司制造))，搅拌均匀，在冰中孵育30分钟得到酶溶液。将80|xl酶溶液转移至96孔樣^反中。在每个孔中加入或者不加入20|il20mM的葡萄糖醛酸(由WakoPureChemicalIndustries有限公司制造)。在37°C孵育该板1个小时。此外，使用已知浓度的PNP制作校准曲线。然后，加入100|il2M的甘氨酸緩沖液(pH值为10.4)，在405nm处测量其吸光度。进行三遍活性分析。所加入的测试物质的量按照显示于下述表中的浓度。UGT活性作为相对于对照的结合的PNP的量，并且根据下述公式进行计算。UGT活性=[(无葡萄糖醛酸的加入测试物质部分的PNP量)一(有葡萄糖醛酸的加入测试物质部分的PNP量)]/[(无葡萄糖醛酸的加入水部分的PNP量)一(有葡萄糖醛酸的加入水部分的PNP量)]结果如表6所示。表6显示了加入琼脂寡糖后细胞内UGT的活性。发现，加入琼脂寡糖导致了UGT活性的显著增加。表6测试物质最终浓度UGT活性(倍)琼脂寡糖50pg/ml1.1訓jxg/ml1.4200昭/ml1.4实施例7:诱导UDP-葡糖醛酸基转移酶(UGT)mRNA表达的作用的评估按照实施例4中所述方法测量琼脂寡糖诱导UGTmRNA表达的活性。市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo)被用作测试物质。进行两遍活性分析。UGTmRNA的表达量作为相对于对照的UGTmRNA的量，并且根据下述公式进行计算。UGTmRNA的表达量=[(加入测试物质部分中UGTmRNA的表达量)/(加入测试物质部分中TfrcmRNA的表达量)]/[(加入水部分中UGTmRNA的表达量)/(加入水部分中TfrcmRNA的表达量)]结果如表7所示。表7显示加入琼脂寡糖后细胞内UGTmRNA表达的量。发现，琼脂寡糖具有显著诱导UGTmRNA表达的活性。表7测试物质表达量(倍)100ng/ml琼脂寡糖2.0实施例8:对于细胞内谷胱甘肽(GSH)含量提高作用的评估参照ClarissaGerhauser等人，CancerResearch57,272-278(1997)中所述方法的部分改进的方法测量GST含量。将Hepalclc7细胞悬浮于含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基，细胞浓度为4x105个细胞/ml。在96孔微板的每个孔中，加入0.2ml的细胞悬浮液，在存在5。/。二氧化碳气体时，在37。C培养过夜。然后，26用达尔伯克改良伊格尔培养基更换每个孔中的培养基。向每个孔中，加入0.4iul测试物质的水溶液，然后培养24小时。通过制备实施例1所得到的琼脂二糖和市售琼脂寡糖(商业名称Agaoligo)被用于测试物质。在阴性对照中，加入水来代替测试物质。培养完成后，去除培养基，使用磷酸緩沖液来洗涤该细胞。去除溶液，重复三遍冷冻-解冻细胞过程。向其中加入O.lml緩冲液A(125pM磷酸钠緩冲液(pH值为7.5),6.3mMEDTA)得到细胞溶解产物。向25pl细胞溶解产物中加入100pl反应溶液(25mMTris-HCl(pH值为7.4),1mMG6P,30NADP,2U/mlG6PDH,0.25U/ml谷胱甘肽还原酶(由Sigma制造)，0.6mMDTNB)。在室温孵育5分钟后，在405nm处测量其吸光度。进行三遍活性分析。同时，一系列2倍稀释的2-200pl的GST代替细胞溶解产物作为标准测试。使用用磷酸緩冲液进行50倍稀释的细胞溶解产物和MicroBCA蛋白分析试剂盒来测量蛋白含量。按照下述表所示浓度加入测试物质。GSH的浓度作为相对于对照的GSH的浓度，并且根据下述公式进行计算。GSH的浓度=[(加入测试物质部分中GSH的浓度)/(加入测试物质部分中蛋白的浓度)]/[(加入水部分中GSH的浓度)/(加入水部分中蛋白的浓度)]结果如表8所示。表8显示了加入各种测试物质后细胞内GSH的含量。发现，加入琼脂寡糖或琼脂二糖导致了GSH含量的显著增加。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>比较实施例新琼脂寡糖对于增强谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性和醌还原酶(QR)活性的作用的评估分别4要照实施例1和实施例3中的相同方法评估使用新琼脂六糖作为琼脂寡糖所得到的增强GST活性和QR活性的作用。结果如表9所示。表9显示了加入新琼脂六糖后细胞内GST的活性和QR的活性。发现，加入新琼脂六糖并没有导致GST活性和QR活性的显著增加。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>产业实用性根据本发明，提供了II解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，包括选自琼脂、琼脂糖、在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物、由上述分子式(化学分子式1)所代表的化合物及其衍生物和其盐中至少一种作为活性成分的化合物，以及含增强剂的药物、食品或饲料。含增强剂的药物、食品或饲料能够通过增强II解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的作用来促进解毒过程，因此，特別适合作为治疗或预防各种疾病的药物、食品或饮料，尤其适合作为降低疾病风险的预防疾病的药物或功能性食品。权利要求1.第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，其包括选自琼脂、琼脂糖、在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖的低分子化合物、由下述分子式(化学分子式1)所代表的化合物其中X和Y为H或CH2OH，条件是，当X为CH2OH时Y为H，当X为H时Y为CH2OH；及其衍生物和其盐中至少一种作为活性成分的化合物。2.如权利要求1所述的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，其中在还原末端含3，6-无水吡喃半乳糖的琼脂糖低分子化合物为琼脂寡糖。3.如权利要求2所述的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，其中琼脂寡糖为包括琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖和琼脂八糖的混合物。4.如权利要求l至3中任一项所述的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂，其中第二相解毒酶为谷胱甘肽S-转移酶、醌还原酶或UDP-葡糖醛酸基转移酶。5.含有如权利要求1至4中任一项所述的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂的药物。6.含有如权利要求1至4中任一项所述的第二相解毒酶活性或细胞内谷胱甘肽含量的增强剂的食品或饲料。全文摘要本发明提供一种具有增强第二相解毒酶活性的作用和增加细胞内谷胱甘肽含量的作用的药物、食品或饲料。文档编号A61K31/729GK101528240SQ200780038630公开日2009年9月9日申请日期2007年10月11日优先权日2006年10月16日发明者中原宽子,加藤郁之进,大野木宏,工藤庸子,榎龙嗣申请人:宝生物工程株式会社