江南卷柏抗柯萨奇病毒和疱疹病毒提取物及提取工艺和制剂的制作方法

文档序号:1230727阅读:320来源:国知局

专利名称::江南卷柏抗柯萨奇病毒和疱疹病毒提取物及提取工艺和制剂的制作方法
技术领域
:本发明涉及一种中药提取物和中药成分的提取工艺及其制剂,特别是涉及江南巻柏抗柯萨奇病毒和疱疹病毒的总黄酮有效部位的提取物及提取工艺和制剂。
背景技术
:柯萨奇病毒(Coxsackievirus)属小RNA病毒科的肠道毒属,在人群中感染十分普遍,与多种人类疾病有着十分密切的关系,如病毒性心肌炎、慢性胰腺炎、慢性疲劳综合症'、慢性肾炎、心律失常、I型糖尿病等。据统计,全世界每年心肌炎患病率为58个/10万,其中25%50%为急性心包炎患者,而36%65%的急性心肌炎患者有近期或复发的CVB感染。由于缺乏有效的治疗药物,许多患者演变为慢性扩张性心肌病,最后死于心力衰竭。人类单纯疱疹病毒分为两型,即单纯疱疹病毒I型(HSV-I)和单纯疱疹病毒II型(HSV-II)。HSV-1型主要引起生殖器以外的皮肤、粘膜(口腔粘膜)和器官(脑)的感染。HSV-II型主要引起生殖器部位皮肤粘膜感染。生殖器疱疹是主要由HSV-II引起的性传播病,疱疹病毒存在于皮肤和粘膜损害的渗出液、精液、前列腺分泌液、宫颈以及阴道分泌液中,主要通过性交传染,引起原发性生殖器疱疹。原发性生殖器疱疹消退后,残存的病毒经周围神经沿祌经轴长期潜存于骶神经节,当机体抵抗力降低或某些激发因素如发热、受凉、感染、月经、胃肠功能紊乱、创伤等作用下,可使体内潜伏的病毒激活而复发。本病发病率高,可通过胎盘及产道感染新生儿,导致流产及新生儿死亡,与宫颈癌的发生也有关,危害较大,又无特效疗法,己受到人们的重视。因此,生殖器疱疹己被卫生部列为重点防治的8种性病之一。江南巻柏又名地柏枝,为巻柏科植物江南巻柏5"a/a《J'/7eWs/Hoe"et/or/YiHieron的全草,具有凉血止血,清热利湿的功效,民间用来治疗肝炎、各种内外出血等疾病。现代药理证明,江南巻柏具有抗肿瘤,抗病毒,抑菌等作用。以江南巻柏为原料制得的江南巻柏片治疗原发性血小板减少性紫癜、继发性血小板减少性紫癜以及多种出血性疾病,有较好作用。《广西中药材标准》将其作为石上柏的原植物之一收载,用于癌症及多种炎症的治疗。江南巻柏所含化学成分以双黄酮类为主,主要含穗花杉双黄酮。穗花杉双黄酮具有抗肿瘤,抗病毒,血管舒张作用。
发明内容(一)要解决的技术问题、本发明的目的旨在提供一种江南巻柏总双黄酮提取物。本发明的另一个目的是提供一种江南巻柏总双黄酮提取物的制备工艺。本发明的再一个目的是提供应用江南巻柏总双黄酮提取物制成抗柯萨奇病毒和疱疹病毒的药物制剂。(二)技术方案本发明的一种江南巻柏总双黄酮提取物,其特征是,提取物中总双黄湿重量百分率以穗花杉双黄酮计》50%。木发明的江南巻柏总双黄酮提取物中,罗波斯塔双黄酮占总双黄酮重量的0-50%,罗波斯塔-4'甲醚双黄酮占总双黄酮重量的0-50%、穗花杉双黄酮占总双黄酮重量40-95%。本发明的江南巻柏总双黄酮提取物的制备工艺,制备步骤包括第i、将采集的江南巻柏植物材料晒干,去除杂质,粉碎成粗粉;第2、称取步骤l粗粉,首先用石油醚脱脂,再用40%-95%乙醇提取,过滤,合并滤液,滤液用旋转蒸发器回收溶剂,得到乙醇粗提取物;或者先用40%-95%乙醇提取,提取后回收溶剂,再以石油醚脱脂,得到脱脂后的乙醇粗提取物;第3、将乙醇粗提取物用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取液回收溶剂后干燥,得乙酸乙酯提取物;第4、将乙酸乙酯提取物溶于5%-45%乙醇溶液,过大孔树脂,以大孔树脂纯化,回收乙醇后丁燥,得到江南巻柏总双黄酮提取物,该提取物中总双黄醞重量百分率以穗花杉双黄酮计》50/。;或者,第5、将步骤4所得的江南巻柏总双黄酮提取物,直接以提取物粉末上样经100-200目硅胶柱色谱分离,依序用氯仿与甲醇体积比为ioo:i,99:i,98:l,81:l,80:i,70:i,50:i,40:i,30:i,20:i,io:i,o:i的混合液进行梯度洗脱,每一种混合液的体积为3倍柱体积,每0.5倍柱体积洗脱液为一个流分体积,共有168个流分体积,收集103#—150#流分洗脱液;第6、将103^—15(^流分洗脱液经过SephadexLH-20柱、200-300目硅胶柱色谱分离,分别以氯仿-甲醇体积比为45:i,30:i,io:i的混合液洗脱,洗脱液浓縮干燥后,相对应得到罗波斯塔-4'甲醚双黄酮,罗波斯塔双黄酮,穗花杉双黄酮,穗花杉双黄酮的纯度90%以上。以紫外分光光度法和高效液相色谱法对江南巻柏总双黄酮提取物进行含量测定,结果表明,其中含总双黄醒重量百分率以穗花杉双黄酮计》50%;江南巻柏总双黄酮提取物及其乙醇或乙酸乙酯粗提取物中几种主要双黄酮类成分的比例经测定是罗波斯塔双黄酮占总双黄酮重量的0-50%,罗波斯塔-4'甲醚双黄酮占总双黄酮重量的0-50%、穗花杉双黄酮占总双黄酮重量40-95%。经研究发现,本发明的江南巻柏总双黄酮提取物具有较强的抗柯萨奇病毒的活性,并且其细胞毒性较小,上述制备步骤4所得的江南巻柏总双黄酮提取物或者步骤6所得的穗花杉双黄酮的纯度90%以上提取物,与药剂学上所述的辅料混合可以制成制成相应的内服或外用的中药制剂,用于治疗柯萨奇病毒、疱疹病毒引起的心肌炎、疱疹和带状疱疹等多种病毒性疾病。所述的制剂包括软胶囊、胶囊剂、片剂、颗粒剂,注射剂,以及外用的软膏剂、乳剂、酊剂等等。图丄为江南巻柏总双黄酮提取物的制备工艺图其工艺流程将采集的江南巻柏植物材料晒干,去除杂质,粉碎成粗粉。称取粗粉适量,首先用粗粉重量7-9倍量石油醚回流脱脂2-3次,每次l-2h,过滤,滤液弃去,滤渣用该渣重量10-12倍量40%-95%乙醇溶液回流提取2-3次,每次l-2h,过滤,滤渣弃去,合并滤液,滤液用旋转蒸发器回收溶剂后,以所得干膏重量10-12倍量乙酸乙酯萃取3-4次;将乙酸乙酯萃取液回收溶剂后干燥,得乙酸乙酯提取物。将乙酸乙酯提取物溶于5%-45%乙醇溶液,配成浓度为O.8g/ml溶液,用D101型大孔树脂纯化首先以2-3BV/h(2-3倍柱体积/小时)流速上样吸附,再用3-4倍柱体积5。/。-45y。乙醇溶液在2-3BV/h流速下洗脱除杂后,用6-8倍柱体积60%-75%乙醇溶液在2-3BV/h流速下洗脱,按每0.5倍柱体积洗脱液为一个流分,收集第26流分洗脱液,回收乙醇后干燥,得到江南巻柏总双黄酮提取物。江南巻柏总双黄酮提取物直接以提取物粉末匕样经100-200目硅胶柱色谱分离,用氯仿与甲醇体积比为ioo:1—0:i混合液梯度洗脱,具体氯仿与甲醇体积比为ioo:l,99:i,98:i,......81:i,80:i,70:i,50:i,40:i,30:i,20:i,io:i,oi,每一梯级洗脱溶剂的体积为3倍柱体积(3BV),每0.5倍柱体积洗脱液为一个流分体积,共有168个流分体积,收集103#—150#流分洗脱液。将该部分流分经过SephadexLH-20柱、200-300目硅胶柱色谱分离,分别以氯仿-甲醇体积比为45:i,30:l,io:i的混合液洗脱。液洗脱干燥后,用氯仿-甲醇体积比为45:1洗脱得到罗波斯塔-4'甲醚双黄酮。用氯仿-甲醇体积比为30:i洗脱得到罗波斯塔双黄酮。用氯仿-甲醇体积比为io:i洗脱得到穗花杉双黄酮,穗花杉双黄酮的纯度90%以上。具体实施例方式通过下面给出的具体实施例可以进一步清楚地理解本发明,但下述实施例不是对本发明的限定。实施例1江南巻柏总双黄酮提取物试验将采集的江南巻柏植物材料晒干,去除杂质,粉碎成粗粉。称取粗粉500克,首先用8倍量(4000ml)石油醚回流脱脂2次,每次1.5h,再用10倍量(5000ml)90%乙醇溶液回流提取3次,每次1.5h,过滤,合并滤液,滤液用旋转蒸发器回收溶剂后,以蒸发后滤液体积12倍量乙酸乙酯萃取3次。将乙酸乙酯萃取液回收溶剂后干燥,此为乙酸乙酯提取物。将乙酸乙酯提取物溶于10%乙醇溶液,配成浓度为0.8g/ml溶液,用D101型大孔树脂纯化。首先以2倍柱体积/小时(BV/h)流速上样吸附,再用3倍柱体积5。/。乙醇溶液在3BV/h流速下洗脱除杂后,用7倍柱体积65。/。乙醇溶液在3BV/h流速下洗脱,每0.5倍柱体积洗脱液为一个流分体积,收集第2-6流分的洗脱液,回收乙醇后千燥,得到江南巻柏总双黄酮提取物。江南巻柏总双黄酮提取物直接以提取物粉末上样经100-200目硅胶柱色谱分离,用氯仿与甲醇体积比为ioo:i—o:i混合液梯度洗脱,具体的氯仿与甲醇体积比为ioo:i,99:,98:l,......81:1,80:l,70:i,50:i,40:l,30:l,20:i,io:i,o:i,每一梯级洗脱溶剂的体积为3倍柱体积(3BV),每0.5倍柱体积洗脱液为一流分体积,共有16S个流分体积,收集103#—150#流分洗脱液。将该部分流份经过SephadexLH-20柱、200-300目硅胶柱色谱分离,分别以氯仿-甲醇(45:i),氯仿-甲醇(30:i),氯仿-甲醇(io:i)洗脱,可依次得到罗波斯塔-4'甲醚双黄酮1.0mg,罗波斯塔双黄酮0.2tng,穗花杉双黄酮3.3mg,穗花杉双黄酮的纯度90%以上。实施例2.休外抗病毒实验2.1实验材料江南巻柏提取物;H印-2细胞,由武汉大学医学院病毒所保存;CVB:;(Nancy株)、HSV-I(单纯疱疹病毒I型)、HSV-II(单纯疱疹病毒II型)由武汉大学医学院病毒所保存。2.2方法2.2.l药物对细胞的毒性测定取已经生长成单层Hep-2细胞的96孔培养板,弃去培养液,加入不同浓度(6.25,12.5,25,50,100,200,400/xg/ml)的药物培养液,37°C5%C02培养72小时(h),每12小时观察细胞形态,并与正常细胞作对照,MTT(噻唑兰)法检测细胞活性。结果显示穗花杉双黄酮对细胞的毒性较大(TC5(^53Mg/ml),江南巻柏乙酸乙酯提取物(TC50^5Mg/ml)和江南巻柏总双黄酮提取物(TC50=60/xg/ml)细胞毒性较小,前者乂略小。2.2.2药物体外抗病毒实验根据病毒的复制周期,设计三个药物抗病毒作用途径,分三个处理组,同时根据药物细胞毒性实验的结果,在最低有效浓度和半数毒性浓度之间确定5个药物终浓度进行实验。①药物抗病毒吸附组将不同浓度(6.25,12.5,25,50,100/xg/ml)的药物培养液加入生长完好的单层H印-2细胞培养板中,37°C,5y。C02孵育1.5h后,弃去含药培养液,再加入病毒液,37°C,5%(:02孵育1.5h后,弃去病毒液,再加入普通细胞维持液继续培养。经72h的观察,各孔细胞均出现典型的病毒病变,即CPE症状细胞生长紊乱,细胞状态变形,颗粒增多,折光性增加,最后脱落死亡。说明病毒在H印-2细胞中的繁殖不受抑制,各组药物均无抗病毒吸附作用。②药物直接作用组将不同浓度(6.25,12.5,25,50,100Mg/ml)的药物培养液和病毒液同体积混合37。C孵育L5h后,再加入生长完好的单层H印-2细胞培养板中,37°C,5%0)2孵育L5h后,弃去含药含病毒培养液,再加入普通细胞维持液继续培养。结果显示各药物组分均具有一定的抑制感染细胞病变的作用,其最大病毒抑制率为50%-60%,IC50为30-50pg/ni1,即各组分都具有直接杀死CVB3或HSV病毒的效力。③药物抗病毒生物合成组将病毒液加入生长完好的单层H印-2细胞培养板中,37°C,5%0)2孵育1.5h后,弃去病毒液,再加入不同浓度(6.25,12.5,25,50,lOOpg/ml)的药物维持液继续培养。结果显示各组分均具有一定的抑制感染细胞病变的作用,其最大病毒抑制率为65%-70%,IC50为15-30pg/ml,即都具有抑制病毒在细胞内生物合成的效力。从以上结果看出江南巻柏各提取部位均具有较好的直接杀死CVB,、HSV病毒和抑制CVB.,、HSV病毒在细胞内的生物合成的效力,并具有较低的细胞毒性。实施例3.体内抗CVBs(柯萨奇病毒)病毒实验3.1实验材料根据体外抗病毒实验,选取抗病毒效力最好的配比进行体内抗病毒实验;4周龄雄性小鼠,体重(18±2)g,购于湖北省实验动物中心3.2实验方法①药物对小鼠的急性毒性实验将50只雄性小鼠随机分成5组,每组10只,不同药物浓度灌胃,记录小鼠72小时的死亡情况,计算其LD50为5000mg/kg。②动物模型的建立4周龄雄性小鼠30只,注射部位消毒后,腹腔注射CVB3病毒液0.lml(病毒滴度为10—7),每天观察小鼠的发病及死亡情况,并作记录。24天小鼠出现活动减少、倦缩、体重减轻、紫绀等症状,6天后开始出现规律性死亡,说明造模成功。③体内抗病毒实验随机将100只小鼠分成5组,每组20只,分别设立药物治疗高剂量组(10mg/g)、中剂量组(1ixig/g)、低剂量组(0.1mg/g)、阳性药物对照组和生理盐水对照组,于病毒感染后24h开始治疗,同时另设立正常动物对照10只。各治疗组动物于CVB:;感染10天后处死5只,摘除眼球后取血分离血清,并无菌操作取动物心、肝、脾、肾等脏器。各组小鼠脏器经10%甲醛固定、石蜡包埋、连续切片、服染色、镜下观察,并记录病灶数。按常规方法,小鼠脏器无菌匀浆后接种于H印-2(人喉癌上皮细胞)细胞,测定病毒滴度。表lCVB.,病毒感染小鼠存活率比较__<table>complextableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>药物治疗高剂量组2070药物治疗中剂量组2060药物治疗低剂量组2045阳性药物对照组205生理盐水对照组205正常对照组10100表2药物治疗CVB3病毒感染小鼠组织中病毒滴度(1ogTCLD50/0.lml)比较组别心肝脾月巿肾_药物治疗高剂量组222药物治疗中剂量组332药物治疗低剂量组333阳性药物对照组544生理盐水对照组544_以上结果说明该药物组合能显著减轻小鼠发病症状,延长其生存天数,降低死亡率;抑制小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器中病毒增殖,使这些脏器中感染性病毒滴度下降,特别是对心肌细胞病理损伤的减轻。本发明确定的该江南巻柏提取物(乙酸乙酯提取物或总双黄酮提取物)确实具备抗柯萨奇病毒的疗效。实施例4.休内抗HSV(单纯疱疹病毒)病毒实验4.1实验材料根据体外抗病毒实验,选取抗病毒效力最好的配比进行体内抗病毒实验;Dunkin-Harthey白毛豚鼠,体重300-350g,雌性,购于湖北省实验动物中心。4.2实验方法①动物病毒接种方法戊巴比妥钠将豚鼠麻醉,背部脱毛,清洁,无菌操作。在裸露皮肤的中心区注射病毒液0.02ml(病毒滴度为l(T)。麻醉后,动物保存在3(TC环境中2小时。观察皮肤感染情况。②体内抗病毒实验随机将20只豚鼠分成2组,每组10只,为药物治疗组和对照组,于接种病毒24h开始治疗,用微量加样器加O.03ml药物(20mg/ral)于各自对应的皮区上,涂抹于感染部位,至药物干燥为止。每天涂抹2次。于第3、5、6、7天留皮肤样本做病毒滴度检测。表3药物治疗HSV病毒感染豚鼠皮肤中病毒滴度(1ogTCLD50/0.lml)比较22222222323232333333345444445554455组别7天3天5天6天药物治疗高剂量组1药物治疗中剂量组1药物治疗低剂量组2阳性药物对照组0生理盐水对照组6211322433210466以上结果说明江南巻柏提取物能显著减轻豚鼠皮肤的发病症状,使皮肤感染性病毒滴度下降。本发明确定的该江南巻柏提取物(乙酸乙酯提取物或总双黄酮提取物)确为抗疱疹病毒的有效药物。以下本发明的抗柯萨奇病毒和疱疹病毒中药组合物制剂实例仅为了对本发明作进一步的说明,而本发明的范围不受所举实例的局限。实施例5本发明的抗柯萨奇病毒和疱疹病毒中药组合物片剂的制备方法1.组成选用下列用量的药物组合物和附加剂,制备片剂1000片江南巻柏总黄酮(50%)提取物230g淀粉320g乳糖25g硬脂酸镁5g其中,江南巻柏总黄酮(50%)提取物以穗花杉双黄酮计含双黄酮为50-60%mg/mg;2.制备取江南巻柏总黄酮提取物、乳糖混合均匀,过80冃筛,用95%乙醇湿法制粒,烘干,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,压片,包衣,即得。实施例6本发明的抗柯萨奇病毒和疱疹病毒中药组合物软膏剂的制备方法1.组成选用下列用量的药物组合物和附加剂,制备软膏剂1000g江南巻柏乙酸乙酯提取物95g硬脂酸甘油脂80g硬脂酸120g凡士林150g甘油150g蒸馏水500ml其中,江南巻柏乙酸乙酯提取物中罗波斯塔双黄酮罗波斯塔-4'甲醚双黄酮穗花杉双黄酮为10-15%:0-5%:50-55%;2.制备取硬脂酸甘油脂、硬脂酸、凡士林加热融化成液相,甘油、蒸馏水加热至9(TC为水相;将水相缓缓倒入油相,边加边搅拌,得乳剂型基质;将江南巻桕乙酸乙酯提取物加入上述基质中,搅拌均匀,即得。实施例7本发明的抗柯萨奇病毒和疱疹病毒屮药组合物软膏剂的制备方法1.组成选用下列用量的药物组合物和附加剂,制备胶囊剂100(3粒江南巻柏总黄酮(50%)提取物265g羧甲基纤维素钠25g糊精35g硬脂酸镁5g其中,江南巻柏总黄酮(50%)提取物以穗花杉双黄酮计含双黄酮为50-60%mg/mg;2.制备取江南巻柏总黄酮提取物、羧甲基纤维素钠、糊精、硬脂酸镁混合均匀,过80目筛,千法制粒,整粒,灌装于胶囊中,即得。实施例8本发明的抗柯萨奇病毒和疱疹病毒中药组合物分散片的制备方法l.组成选用下列用量的药物组合物和附加剂,制备分散片iooo片江南巻柏乙酸乙酯提取物100g聚乙二醇600Q900g淀粉50g硬脂酸镁5g其中,江南巻柏乙酸乙酯提取物中罗波斯塔双黄酮罗波斯塔-4'甲醚双黄酮穗花杉双黄酮为10-15%:0-5°/。50-55%;2.制备取江南巻柏乙酸乙酯提取物、聚乙二醇6000,将PEG6000加热熔融,取药物加热溶解于适量无水乙醇中,再加入到熔融状态下的载体中不断搅拌,使混合均匀,并于8(TC搅拌挥去溶媒,然后迅速倾倒入预冷的不锈钢板上,涂成薄层,在-20'C条件下冷却固化,成品贮于干燥器中数日,研细,过60目筛,再加入淀粉、乳糖,PVP湿法制粒,烘下,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,压片,包衣,即得。权利要求1、一种江南卷柏总双黄酮提取物,其特征是,提取物中总双黄酮重量百分率以穗花杉双黄酮计≥50%。2、如权利要求1所述的江南巻柏总双黄酮提取物,其特征是,所述的总双黄酮提取物中罗波斯塔双黄酮占总双黄酮重量的0-50%,罗波斯塔-4'甲醚双黄酮占总双黄酮重量的0-50%、穗花杉双黄酮占总双黄酮重量40-95%。3、江南巻柏总双黄酮提取物的制备工艺,其特征是,工艺步骤包括第1、将采集的江南巻柏植物材料晒干,去除杂质,粉碎成粗粉;第2、称取歩骤l粗粉,首先用石油醚脱脂,再用40%_95%乙醇提取,过滤,合并滤液,滤液用旋转蒸发器回收溶剂,得到乙醇粗提取物;或者,先用40%95%乙醇提取,过滤,合并滤液,滤液用旋转蒸发器回收溶剂,再以石油醚脱脂,得到乙醇粗提取物;第3、将乙醉粗提取物用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取液回收溶剂后干燥,得乙酸乙酯提取物;第4、将乙酸乙酯提取物溶于5%-45%乙醇溶液,过大孔树脂,以大孔树脂纯化,回收乙醇后千燥,得到江南巻柏总双黄酮提取物,该提取物中总双黄fi重量百分率以穗花杉双黄酮计》50%;或者,第5、将步骤4所得的江南巻柏总双黄酮提取物经100-200目硅胶柱色谱分离,按序用氯仿与甲醇体积比为ioo:i,99:i'98:i,......81:l,80:l,70:l,50:i,40:i,30:i,20:i,io:i,o:i的混合液进行梯度洗脱,每一种混合液的体积为3倍柱体积,每0.5倍柱体积洗脱液为一个流分体积,共有168个流分体积,收集103#—150#流分洗脱液;第6、将103^—150弁流分洗脱液经过SephadexLH-20柱、200-300目硅胶柱色谱分离,分别以氯仿-甲醇体积比为45:1,30:l,io:l的混合液洗脱,洗脱液干燥后,相对应得到罗波斯塔-4'甲醚双黄酮,罗波斯塔双黄酮,穂花杉双黄酮,穗花杉双黄酮的纯度90%以上。4、江南巻柏总双黄酮提取物的应用,其特征是,权利要求3的步骤4所得的江南巻柏总双黄酮提取物或者步骤6所得的穗花杉双黄酮的纯度90%以上提取物,与药剂学上所述的辅料混合制成抗柯萨奇病毒和疱疹病毒的药物制剂。5、如权利要求4所述的江南巻柏总双黄酮提取物的应用,其特征是,所述的抗柯萨奇病毒和疱疹病毒的药物制剂包括软胶囊、胶囊剂、片剂、颗粒剂,注射剂,以及外用的软膏剂、乳剂及酊剂。全文摘要江南卷柏抗柯萨奇病毒和疱疹病毒提取物及提取工艺和制剂。将江南卷柏植物材料晒干,去杂,粉碎,用石油醚回流脱脂,再用40%-95%乙醇溶液回流提取,过滤,滤液蒸发回收溶剂,残渣以乙酸乙酯萃取。萃取液回收溶剂后干燥,得乙酸乙酯提取物。将该提取物溶于5%-45%乙醇溶液,用大孔树脂纯化。收集适当流分,回收乙醇后干燥,得到江南卷柏总双黄酮提取物(1),其提取物中总双黄酮重量含量以穗花杉双黄酮计达50%。该提取物经硅胶柱色谱继续分离,氯仿-甲醇梯度洗脱,收集适当流份经SephadexLH-20柱、200-300目硅胶柱色谱反复分离,得到穗花杉双黄酮含量达到90%以上的提取物(2)。(1)提取物以及(2)提取物加入辅料后,均可制备成用于抗柯萨奇病毒和疱疹病毒的药物制剂。文档编号A61P31/20GK101361765SQ20081019703公开日2009年2月11日申请日期2008年9月19日优先权日2008年9月19日发明者丹殷,陈科力申请人:湖北中医学院
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