专利名称：桑白皮中提取粗品黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及一种药材的提取方法，特别是涉及一种中药有效成分的 提取与净化方法。
背景技术：
目前中药制药企业中药物提取净化的常用方法是水提醇沉法，水提 醇沉法以水为溶剂，对中药材进行煎煮、精提，再以乙醇为澄清剂，对 水提液进行澄清处理，去除中药水提液中的大部分多糖、蛋白质、树脂 等，最后回收乙醇，得到澄清透明的提取物溶液。此种方法适用于所含 有效成分对热稳定、能溶于水，并能溶于一定浓度乙醇的中药材。虽然 使用醇沉法可以得到清澈的有效成分溶液，但也存在成品稳定性较差、 乙醇耗用大、工艺复杂、成本较高且资源浪费严重等缺点。在澄清药液 同时又将中药中的一些醇不溶性的大分子有效成分(如蛋白质及部分多 糖)作为杂质除去，而这些成分特别是多糖通过药理学、免疫学及临床 研究表明具有增强免疫作用和广泛的生理活性，难以保证成品制剂的有 效性且成品的稳定性较差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种桑白皮中提取粗品黄酮的方法，对桑白 皮水提液醇沉法的过程进行改进，在醇沉之前，使用具有选择性吸附作 用的壳聚糖和壳聚糖与单宁复合使用作为桑白皮水提液的澄清剂，通过絮凝法对桑白皮水提液进行澄清净化以去除杂质，达到提高粗品黄酮的 有效成分含量的目的。
本发明是通过以下技术方案实现的
桑白皮中提取粗品黄酮的方法，利用絮凝澄清法处理桑白皮水提液; 在醇沉之前净化；使用具有选择性吸附作用的壳聚糖和壳聚糖与单宁复 合使用作为桑白皮水提液的澄清剂。
所述的桑白皮中提取粗品黄酮的方法，在桑白皮水提液醇沉法提取 粗品黄酮之前使用絮凝法除杂。
所述的桑白皮中提取粗品黄酮的方法，对桑白皮水提液使用选择性 絮凝的方法净化除杂。
本发明通过将壳聚糖絮凝剂和桑白皮与单宁复合使用用于桑白皮水 提液的净化除杂，得到如下效果
1. 本发明首次将絮凝剂壳聚糖应用与中药桑白皮水提液的净化除杂 中，并取得了良好的效果，絮凝率可达90%以上，澄清效果好。
2. 本发明首次将絮凝剂壳聚糖和单宁复合使用，并将其应用于中药 桑白皮水提液的净化除杂中，取得良好效果。
3. 本发明应用絮凝法的壳聚糖絮凝澄清率比水提醇沉法提高 8.69%，壳聚糖絮凝法的黄酮损失率比水提醇沉法降低10.32%，絮凝法 在澄清效果和有效成分损失两个方面都明显优于醇沉法，有取代传统醇 沉法的趋势。
4. 本发明应用壳聚糖与单宁复配絮凝澄清率比壳聚糖絮凝澄清率提 高6.16%，壳聚糖与单宁复配黄酮损失率比壳聚糖黄酮损失率降低9.92%，壳聚糖与单宁复配絮凝比壳聚糖絮凝减少了3/4个周期，复配絮
凝效果明显优于单一絮凝剂的使用。
5.本发明选用的澄清剂壳聚糖处理的粗品黄酮和黄酮糖苷呈亮黄 色，品质明显好于传统方法所得到的粗品黄酮和黄酮糖苷，更适合制药。
图1为本发明壳聚糖加入量对絮凝效果的影响； 图2为本发明总黄酮损失率随PH值的变化曲线图； 图3为本发明温度对总黄酮损失率影响的关系曲线； 图4为本发明絮凝原理中未加入絮凝剂时胶体溶液的示意图； 图5为本发明絮凝原理中絮凝剂吸附在颗粒上的示意图； 图6为本发明絮凝原理加入絮凝剂搅拌后胶体溶液的示意图； 图7为本发明选择性絮凝前两种性质不同颗粒胶体溶液示意图； 图8为本发明胶体溶液选择性絮凝后示意图； 图9a为本发明絮凝作用架桥的机理示意图； 图9b为本发明絮凝作用电荷中和作用示意图； 图9c为本发明絮凝作用网捕巻扫示意图。
具体实施例方式
桑白皮水提液的特点和桑白皮水提液的醇沉法
在桑白皮水提液中存在两种性质不同的胶体颗粒，有效成分胶体和 杂质胶体，其中有效成分胶体的粒度远小于杂质胶体的粒度。
醇沉法是中药现代生产的常用方法，它主要利用蛋白质、淀粉、多 糖等杂质不溶于醇，而中药有效成分溶于醇的性质来实现有效成份和杂质分离的。醇沉法分水提醇沉法和醇提法两种。水提醇沉法一般将中药 水提液浓縮后加入醇，使药液的醇浓度超过80%，这时不溶于醇的杂质 就沉降出来，而有效成分溶于醇液中，实现了有效成份的分离。
由于桑白皮水提液中杂质胶体颗粒不溶于醇，有效成分胶体颗粒溶 于醇，因此采用水提液醇沉法得到纯净的粗品黄酮。
絮凝澄清法原理
絮凝澄清技术是一种新兴的中药生产技术，它利用无毒的絮凝剂吸 附中药水提液中不能沉降的微小的杂质颗粒，使之结合成较大的能够沉
降的絮团来净化中药水提液，如图4、 5、 6所示，絮凝剂加入胶体溶液
后吸附在胶体颗粒上，经机械脱水(搅拌)形成絮团并沉降，絮凝法在 一些中药生产中已取得成功，但还没有应用到桑白皮生产的报道。
对于有效成分难溶于水的中药水提液(有效成分在水提液中和杂质 一样呈胶体存在)，应该使用选择性絮凝的方法实现去除杂质的目的，选
择性絮凝的原理如图7、 8所示，絮凝剂只吸附絮凝胶体溶液(具有两种 以上性质不同的胶体颗粒)中的一种胶体颗粒，而保留其它种类的颗粒。
壳聚糖对桑白皮水提液具有选择性絮凝吸附作用
壳聚糖作为桑白皮水提液的澄清剂具有选择性絮凝吸附作用，它只 絮凝吸附杂质胶体颗粒，而对有效成分胶体颗粒不产生吸附作用，从而 实现了选择性的絮凝沉降杂质而保留有效成分的目的，为醇沉法提取较 纯净的粗品黄酮提供了条件。
壳聚糖作为絮凝剂兼有电荷中和絮凝及吸附絮凝的双重作用 一方 面通过电荷中和而使胶体颗粒脱稳并形成细小的凝聚体；另一方面通过高分子架桥作用使这些凝聚体形成大体积的絮团。
在絮凝桑白皮水提液过程中，由于壳聚糖分子链上分布着大量的游 离羟基和氨基，在稀酸溶液中氨基容易质子化，从而使壳聚糖分子链上 带有大量的正电荷，成为一种可溶性的聚电解质，具有阳离子絮凝剂的 作用。而桑白皮水提液中的杂质颗粒带有负电荷，刚好构成了异种电荷 的吸附絮凝。
壳聚糖絮凝剂对桑白皮水提液的絮凝作用，首先通过静电作用被吸 引到桑白皮水提液中的粒子上，并在不同的粒子间架桥，然后再通过电 荷中和和双电层的压縮作用形成了较大的絮团，在絮团的下沉过程中不 断的巻扫水提液中的细小颗粒，最后形成絮状沉淀，达到澄清水提液的
目的。如图9a-9c所示为壳聚糖絮凝剂对桑白皮水提液的絮凝作用三种原 理图。
单宁对桑白皮水提液具有选择性絮凝吸附作用
单宁的大量酚羟基与蛋白质或酶的肽基(-NH-CO-)、氨基(-NH2-) 以及羧基(-COOH-)等可以氢键的形式发生多点结合，以至沉淀。单宁 对蛋白质及酶的沉淀可分为两步首先是单宁在单个蛋白质分子表面结 合；再在多个蛋白质分子间形成交联，最终导致沉淀。
单宁的酚羟基和苯环使其同时具有亲水性和疏水性。在蛋白质多肽 中，所带的芳环或脂肪侧链的氨基酸残基特别是对蛋白质构型有影响的 脯氨酸残基的比较集中的区域，常常因疏水作用而在水溶液中形成疏水 区或称疏水袋。反应先是单宁通过疏水键向蛋白质分子表面靠近，单宁 分子进入疏水袋，然后发生多点氢键结合。疏水键和氢键的同时作用使单宁-蛋白质反应进一步加强。此后单宁以多点结合的方式在蛋白质分子 间形成疏水层，使蛋白质分子聚集最终导致沉淀。
另外，由于氨基上的氢原子与电负性大得多的氮原子结合,共用电子 对强烈地偏向氮的一方，使氢原子成为了带正电荷、几乎暴露的质子,当带 负电荷的蛋白质离子靠近时，便于蛋白质上的氧原子形成氢键,这可能是 氨基与蛋白质离子主要相互作用力,氢键键能介于共价键与范德华之间， 但氢键有别于范德华力,是静电相互作用为主的有方向性和饱和性的较强 的作用力。
壳聚糖与单宁复合使用对桑白皮水提液具有选择性絮凝吸附作用
单宁与壳聚糖共同作用中药水提液中，目前还没有人研究，国内外 还没有相关文献报道，笔者认为它们二者共同作用与桑白皮水提液中， 除了具备它们单独反应机理外，还应具有下面的作用。
由于壳聚糖分子间亦存在-O...H-O型及-O...H-N型氢键的作用，易 与酸形成盐而溶于水中。单宁属于酸类，当絮凝剂单宁和壳聚糖相遇时， 互相反应生成盐，溶于水中，盐中的离子可以压縮双电层，双电层减薄， 则；电位降低，因此扩散层的厚度变薄，溶液脱稳，从而产生絮凝沉淀。
另外，单宁中还有的鞣质，可以与絮凝剂壳聚糖吸附杂质颗粒形成 的长链结合，更有利于絮团的沉降速度，这一点在实验中己经得到证实， 沉降速度变为原来的四倍，效果十分显著。
桑白皮提取液的制备
称取桑白皮药粉(100目过滤)50g放入1000mL烧瓶中，先向烧瓶 中加入500mL温水(35°C 45°C)浸泡约20min，然后加热至沸腾，煎煮lh，停止加热，冷却后用筛网(200目)三层过滤，将滤渣挤至半干，
再次放入烧瓶中，向烧瓶中加入400mL热水，继续加热至沸腾，lh后停 止加热，冷却，过滤，挤干药渣，合并两次滤液，并采用稀释或蒸发浓 縮的办法，保证生药浓度为0.1g/mL。
壳聚糖溶液的制备
用1%的乙酸溶液配制成浓度为1%的壳聚糖溶液，充分溶胀后作为 絮凝剂立即使用，以免在稀酸中缓慢水解而影响絮凝效果。
单宁溶液的制备
用纯净水配置浓度为5%的单宁溶液，静置半小时后使用。 水提醇沉法操作方法
取桑白皮提取液50mL加热进行浓縮，然后加入适量的无水乙醇， 使得药液浓度为0.1g/mL，边加边搅拌，静置24h后去除沉淀，即可得到 纯净的粗品黄酮。
图中文字清楚与否并不影响对本发明的理解。
权利要求
1.桑白皮中提取粗品黄酮的方法，其特征在于利用絮凝澄清法处理桑白皮水提液；在醇沉之前净化；使用具有吸附作用的壳聚糖和壳聚糖与单宁复合使用作为桑白皮水提液的澄清剂。
2. 根据权利要求l所述的桑白皮中提取粗品黄酮的方法，其特征在 于在桑白皮水提液醇沉法提取粗品黄酮之前使用絮凝法除杂。
3. 根据权利要求l所述的桑白皮中提取粗品黄酮的方法，其特征在 于对桑白皮水提液使用絮凝的方法净化除杂。
全文摘要
桑白皮中提取粗品黄酮的方法，涉及一种药材的提取方法，特别是涉及一种中药有效成分的提取与净化的方法。利用絮凝澄清法处理桑白皮水提液；在醇沉之前净化；使用具有选择性吸附作用的壳聚糖和单宁作为桑白皮水提液的澄清剂。在桑白皮水提液醇沉法提取粗品黄酮之前使用絮凝法除杂。对桑白皮水提液使用选择性絮凝的方法净化除杂。本发明选用的澄清剂壳聚糖处理的粗品黄酮呈亮黄色，品质明显好于传统方法所得到的粗品黄酮，更适合制药。
文档编号A61K36/185GK101596234SQ20091001135
公开日2009年12月9日 申请日期2009年4月29日 优先权日2009年4月29日
发明者张建伟, 园 袁 申请人:沈阳化工学院