专利名称：抗nr10抗体及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗NRlO抗体、以及含有抗NRlO抗体的药物组合物。
背景技术：
作为参与各种细胞的增殖分化或分化成熟的细胞的功能激活的体液因素，已知存 在多种细胞因子。在机体内，接受了细胞因子刺激的细胞产生其他细胞因子，由多个细胞因 子形成网络。机体的恒定性通过该网络的相互调节而保持微妙的平衡。认为多种免疫炎症 性疾病是由这些细胞因子、网络的破绽产生的，利用单克隆抗体进行的抗细胞因子疗法受 到关注。例如，抗TNF抗体及抗IL-6受体抗体在临床上显示出高疗效。但另一方面，在实 际病情中是补偿途径在起作用，仅凭阻断IL-4等单一的细胞因子，无法取得治疗效果，失 败的例子颇多。本发明人等成功地分离了与IL-6的信号传递受体gpl30的同源性高的新型细胞 因子受体NRlO (专利文献1)。NRlO与制癌蛋白M受体(OSMR)形成异源二聚体，发挥IL-31 的受体的功能(非专利文献1)。关于IL-31，有报道称过剩表达IL-31的转基因小鼠自然 发生搔痒性皮炎(专利文献2)。虽然认为与NRlO结合、且阻碍IL-31与NRlO结合的抗体对治疗炎症性疾病有效， 但为了在临床上使用抗NRlO抗体，免疫原性低的抗体是必需的。另外，为了发挥好的治疗 效果，人们希望开发与NRlO的结合活性或中和活性高的抗体。需要说明的是，本发明的在先技术文献如下。专利文献1 :W000/75314专利文献2 :W003/060090非 专 禾Ij 文 献 1 IL-31 is associated with cutaneous lymphocyteantigen-positive skin homing T cells in patients with atopic dermatitis. , JAllergy Clin Immunol. 2006Feb ； 117 (2) :418_25·
发明内容
发明所要解决的课题本发明鉴于上述背景而设，其课题在于提供抗NRlO抗体以及含有抗NRlO抗体的 药物组合物。解决课题的方法本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究。本发明人等成功地获得了对NRlO 具有有效的中和活性的抗NRlO抗体。并且，本发明人等成功地在维持抗体活性不变的情况 下将抗体人源化。本发明人等还成功地制作了药物动力学提高、与抗原的结合活性增强、稳 定性提高和/或免疫原性风险降低的抗体。该抗体作为炎症性疾病治疗药有效。本发明涉及抗NRlO抗体、以及含有抗NRlO抗体的药物组合物，更具体而言，本发 明包含以下[1] [15]的发明。
[1]抗体，该抗体识别NRlO的结构域1。[2] [1]所述的抗体，其特征在于该抗体具有中和活性。[3] [1]或[2]所述的抗体，该抗体是人源化抗体。[4]以下(1) ⑶中任一项所述的抗NRlO抗体(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包括具有SEQ IDNO :1记载的 氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :2记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO :3记载 的氨基酸序列的CDR3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 4记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包括具有SEQ IDNO 5记载的 氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :6记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO :7记载 的氨基酸序列的CDR3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 8记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。[5]以下(1) ⑶中任一项所述的抗NRlO抗体(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包括具有SEQ IDNO 9记载的 氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :10记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID N0:11记 载的氨基酸序列的CDR3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 12记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包括具有SEQ IDNO 13记载 的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :14记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO 15 记载的氨基酸序列的⑶R3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 16记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与(1) (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。[6]以下(1) ⑶中任一项所述的抗NRlO抗体(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包括具有SEQ IDNO 17记载 的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :18记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO 19 记载的氨基酸序列的⑶R3 ；
(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 20记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包括具有SEQ IDNO 21记载 的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :22记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO 23 记载的氨基酸序列的⑶R3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 24记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。[7]以下(1) ⑶中任一项所述的抗NRlO抗体(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包括具有SEQ IDNO 25记载 的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :26记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO 27 记载的氨基酸序列的⑶R3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 28记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包括具有SEQ IDNO 29记载 的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :30记载的氨基酸序列的⑶R2、具有SEQ ID NO 31 记载的氨基酸序列的⑶R3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 32记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。[8]以下(1) (20)中任一项所述的抗体可变区或抗体(1)重链可变区(H17)，其中包含 SEQ ID NO 196 记载的 CDRl、SEQID NO 197 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 11 记载的 CDR3 ；(2)重链可变区(H19)，其中包含 SEQ ID NO 176 记载的 CDRl、SEQID NO 197 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 11 记载的 CDR3 ；(3)重链可变区(H28、H42)，其中包含 SEQ ID NO 196 记载的 CDRl、SEQ ID NO 197 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(4)重链可变区(H30、H44)，其中包含 SEQ ID NO 9 记载的 CDRl、SEQ ID NO 197 记载的 CDRR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(5)重链可变区(H34、H46)，其中包含 SEQ ID NO 176 记载的 CDRl、SEQ ID NO 197 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；
(6)重链可变区(H57、H78)，其中包含 SEQ ID NO 9 记载的 CDRl、SEQ ID NO 198 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(7)重链可变区(H71、H92)，其中包含 SEQ ID NO 176 记载的 CDRl、SEQ ID NO 198 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(8)重链可变区(H97、H98)，其中包含 SEQ ID NO 9 记载的 CDRl、SEQ ID NO: 199 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(9)轻链可变区(Lll)，其中包含 SEQ ID NO 200 记载的 CDRl、SEQID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(10)轻链可变区(L12)，其中包含 SEQ ID NO 201 记载的 CDRUSEQID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(11)轻链可变区(L17)，其中包含 SEQ ID NO 202 记载的 CDRUSEQID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(12)轻链可变区(L50)，其中包含 SEQ ID NO 203 记载的 CDRUSEQID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(13)抗体，该抗体包含(3)的重链可变区和(11)的轻链可变区；(14)抗体，该抗体包含(4)的重链可变区和(11)的轻链可变区；(15)抗体，该抗体包含(5)的重链可变区和(11)的轻链可变区；(16)抗体，该抗体包含(6)的重链可变区和(11)的轻链可变区；(17)抗体，该抗体包含(7)的重链可变区和(11)的轻链可变区；(18)抗体，该抗体包含(8)的重链可变区和(12)的轻链可变区；(19)抗体，该抗体是在(13) (18)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸 被取代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(13) (18)中任一项所述的抗 体具有同等活性；(20)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与(13) (18)中任一项所述的抗体所结 合的表位相同。[9]议下⑴ (32)中任一项所述的抗体可变区或抗体
(1)重链可变区(H17)，其中具有SEQIDNO204记载的氨基画？序列；
(2)重链可变区(H19)，其中具有SEQIDNO205记载的氨基画？序列；
(3)重链可变区(H28)，其中具有SEQIDNO206记载的氨基画？序列；
(4)重链可变区(H30)，其中具有SEQIDNO207记载的氨基画？序列；
(5)重链可变区(H34)，其中具有SEQIDNO208记载的氨基画？序列；
(6)重链可变区(H42)，其中具有SEQIDNO209记载的氨基画？序列；
(7)重链可变区(H44)，其中具有SEQIDNO210记载的氨基画？序列；
(8)重链可变区(H46)，其中具有SEQIDNO211记载的氨基画？序列；
(9)重链可变区(H57)，其中具有SEQIDNO212记载的氨基画？序列；
(10)重链可变区(H71)，其中具有SEQ ID NO:213记载的氨基丨酸序列
(11)重链可变区(H78)，其中具有SEQ ID NO:214记载的氨基丨酸序列
(12)重链可变区(H92)，其中具有SEQ ID NO:215记载的氨基丨酸序列
(13)重链可变区(H97)，其中具有SEQ ID NO:216记载的氨基丨酸序列
8
(19)抗体(H28L17，该抗体含有
(20)抗体(H30L17，该抗体含有
(21)抗体(H34L17，该抗体含有
(22)抗体(H42L17，该抗体含有
(23)抗体(H44L17，该抗体含有
(24)抗体(H46L17，该抗体含有
(25)抗体(H57L17，该抗体含有
(26)抗体(H71L17，该抗体含有
(27)抗体(H78L17，该抗体含有
(28)抗体(H92L17，该抗体含有
(29)抗体(H97L50，该抗体含有
(30)抗体(H98L50，该抗体含有
(31)抗体该抗体是在(19) ((14)重链可变区(H98)，其中具有SEQ ID NO 217记载的氨基酸序列(15)轻链可变区(Lll)，其中具有SEQ ID NO 218记载的氨基酸序列(16)轻链可变区(L12)，其中具有SEQ ID NO 219记载的氨基酸序列(17)轻链可变区(L17)，其中具有SEQ ID NO 220记载的氨基酸序列(18)轻链可变区(L50)，其中具有SEQ ID NO 221记载的氨基酸序列
(3)的重链可变区和(17)的轻链可变区
4)的重链可变区和(17)的轻链可变区
5)的重链可变区和(17)的轻链可变区
6)的重链可变区和(17)的轻链可变区
7)的重链可变区和(17)的轻链可变区
8)的重链可变区和(17)的轻链可变区
9)的重链可变区和(17)的轻链可变区
10)的重链可变区和(17)的轻链可变区
11)的重链可变区和(17)的轻链可变区
12)的重链可变区和(17)的轻链可变区
13)的重链可变区和(18)的轻链可变区
14)的重链可变区和(18)的轻链可变区 0)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸
被取代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(19) (30)中任一项所述的抗 体具有同等活性；(32)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与(19) (30)中任一项所述的抗体所结 合的表位相同。[10] [4] [9]中任一项所述的抗NRlO抗体，该抗体是人源化抗体。[11]以下(1) (32)中任一项所述的抗体重链、抗体轻链或抗体(1)重链(H17)，其中具有SEQ ID NO 222记载的氨基酸序列(2)重链(H19)，其中具有SEQ ID NO 223记载的氨基酸序列(3)重链(H28)，其中具有SEQ ID NO 224记载的氨基酸序列(4)重链(H30)，其中具有SEQ ID NO 225记载的氨基酸序列(5)重链(H34)，其中具有SEQ ID NO 226记载的氨基酸序列(6)重链(H42)，其中具有SEQ ID NO ,221记载的氨基酸序列(7)重链(H44)，其中具有SEQ ID NO 228记载的氨基酸序列(8)重链(H46)，其中具有SEQ ID NO 229记载的氨基酸序列(9)重链(H57)，其中具有SEQ ID NO 230记载的氨基酸序列(10)重链(H71)，其中具有SEQ ID NO 231记载的氨基酸序列(11)重链(H78)，其中具有SEQ ID NO 232记载的氨基酸序列(12)重链(H92)，其中具有SEQ ID NO 233记载的氨基酸序列(13)重链(H97)，其中具有SEQ ID NO 234记载的氨基酸序列(14)重链(H98)，其中具有SEQ ID NO 235记载的氨基酸序列(15)轻链(Lll)，其中具有SEQ ID NO 236记载的氨基酸序列
(16)轻链(L12)，其中具有SEQ ID NO 237记载的氨基酸序列(17)轻链(L17)，其中具有SEQ ID NO 238记载的氨基酸序列(18)轻链(L50)，其中具有SEQ ID NO 239记载的氨基酸序列(19)抗体(H28L17，该抗体包含⑶的S链和(17)的轻链
(20)抗体(H30L17，该抗体包含⑷的S链和(17)的轻链
(21)抗体(H34L17，该抗体包含(5)的S链和(17)的轻链
(22)抗体(H42L17，该抗体包含(6)的S链和(17)的轻链
(23)抗体(H44L17，该抗体包含(7)的S链和(17)的轻链
(24)抗体(H46L17，该抗体包含⑶的S链和(17)的轻链
(25)抗体(H57L17，该抗体包含(9)的S链和(17)的轻链
(26)抗体(H71L17，该抗体包含(10)的:惹链和(17)的轻链
(27)抗体(H78L17，该抗体包含(11)的:惹链和(17)的轻链
(28)抗体(H92L17，该抗体包含(12)的:惹链和(17)的轻链
(29)抗体(H97L50，该抗体包含(13)的:惹链和(18)的轻链
(30)抗体(H98L50，该抗体包含(14)的:惹链和(18)的轻链(31)抗体，该抗体是在(19) (30)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸 被取代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(19) (30)中任一项所述的抗 体具有同等活性；(32)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与(19) (30)中任一项所述的抗体所结 合的表位相同。[12]药物组合物，其中含有[1] [11]中任一项所述的抗体。[13] [12]所述的药物组合物，该药物组合物是炎症性疾病治疗药。[14]炎症性疾病的治疗或预防方法，该方法包括给予[1] [11]中任一项所述 的抗体的步骤。[15] [1] [11]中任一项所述的抗体在炎症性疾病治疗药的制造中的应用。
图1是显示小鼠抗体NS18、NS22、NS23、NS33的重链可变区的氨基酸序列的图。图2是显示小鼠抗体NS18、NS22、NS23、NS33的轻链可变区的氨基酸序列的图。图3是显示杂交瘤培养上清对hNR10/h0SMR/BaF3细胞增殖的抑制的曲线图。图4是显示杂交瘤培养上清对CynNR10/Cyn0SMR/BaF3细胞增殖的抑制的曲线图。图5是显示嵌合NS22的活性评价(BaF)的曲线图。图6是显示嵌合NS22的活性评价(DU-145)的曲线图。图7是显示嵌合NS22的IL-31竞争活性评价的曲线图。图8是显示抗NRlO抗体的NRlO结合竞争活性的曲线图。图9是显示人源化NS22 (HOLO)的IL-31竞争活性的曲线图。图10是利用阳离子交换色谱评价人源化抗NRlO抗体HOLO的恒定区对异质性的 影响的图。图11是显示在不大幅降低人源化抗NRlO抗体与NRlO的结合的情况下可以降低可变区的等电点的突变体的IL-31竞争活性评价的曲线图。图12是利用阳离子交换色谱评价抗IL-6受体抗体恒定区对异质性的影响的图。图13是通过DSC评价抗IL-6受体抗体恒定区对变性峰的影响的图。图14是利用阳离子交换色谱评价抗IL-6受体抗体中新型恒定区M14对异质性的 影响的图。图15是利用阳离子交换色谱评价抗IL-6受体抗体中新型恒定区M58对异质性的 影响的图。图16是通过DSC评价抗IL-6受体抗体中新型恒定区M58对变性峰的影响的图。图17是显示huPMl-IgGl和huPMl-M58在人FcRn转基因小鼠体内的血浆中滞留 性的评价结果的图。图18是显示各抗体的使用了 BaF/NRlO的生物活性的曲线图。图19是利用阳离子交换色谱分析所得的各修饰抗体的热加速品(点线)和未加 速品(实线)，并比较在热加速前后分解物生成的图。箭头显示确认发生变化的基本组分 (basic component)峰位置。图20是显示各变体的活性评价(BaF)的曲线图。图21是显示Ha401La402、HOLO的活性评价(BaF)的曲线图。图22是显示H17L11、HOLO的活性评价(BaF)的曲线图。图23是显示H19L12、HOLO的活性评价(BaF)的曲线图。图24是显示H0L12和H0L17的使用了 BaF/NRlO的生物活性的曲线图。图25-1是显示各变体的活性评价(BaF)的曲线图。图25-2是图25-1的续图。图26是人/小鼠野生型和嵌合NRlO-E⑶的模式图。图27是利用蛋白质印迹法检测结合结构域的照片。A是显示利用人源化抗人NRlO 抗体检测到的结果的照片，B是显示利用小鼠抗人NRlO抗体检测到的结果的照片，C是显示 利用抗Myc抗体检测到的结果的照片。利用抗人NRlO抗体只在hhh、hhm、hmm中检测到结 合抗原，_、mmh、mhm中无法确认到结合。图28-1是显示H0(SEQ ID NO 50)的各变体的氨基酸序列的图。图28-2是图28-1的续图。图28-3是图28-2的续图。图29-1是显示LO (SEQ ID NO 52)的各变体的氨基酸序列的图。图29-2是图29-1的续图。
具体实施例方式NRlONRlO是与制癌蛋白M受体(OSMR)形成异源二聚体、发挥IL-31的受体作用的蛋 白。还以 glm-r(J Biol Chem 277，16831-6，2002)、GPL (J Biol Chem 278，49850-9，2003)、 IL3IRA(Nat Immunol 5，752-60，2004)等名称而已知，本发明的NRlO还包括以上述名称命 名的蛋白。对本发明的NRlO (也称作IL31RA、GPL或glm_r)的来源没有特别限定，包括来自人、小鼠、猴、其他哺乳动物的NR10，但优选为来自人、小鼠或猴的NR10，特别优选为来自人 的 NRlO。作为来自人的NR10，已知有多个剪接变体(W000/075314)。上述剪接变体中， NR10. 1的特征在于包括662个氨基酸，具有跨膜区。此外，NR10. 2是包括252个氨基酸 序列的、不具有跨膜区的可溶性受体样蛋白。另一方面，作为发挥跨膜型受体蛋白作用的 NRlO剪接变体，已知有NR10. 3和IL31RAv3。本发明中的人NRlO只要与制癌蛋白M受体 (OSMR)形成异源二聚体、且发挥IL-31受体作用即可，没有特别限定，优选的NRlO例如有 NR10. 3(也称作 ILRAv4 (NatImmunol 5，752-60，2004))和 IL31RAv3。NR10. 3 (IL31RAv4)包 括 662 个氨基酸(W000/075314，Nat Immunol 5，752-60，2004)，IL31RAv3 包括 732 个氨基 酸(GenBank 检索号NM_139017)。IL31RAv4 的氨基酸序列见 SEQ ID NO :79，IL31RAv3 的 氨基酸序列见SEQ ID NO :80ο另一方面，作为来自小鼠的NR10，例如有包含SEQ ID NO 81 记载的氨基酸序列的蛋白。作为来自食蟹猴的NR10，例如有包含SEQ IDNO :66记载的氨基 酸序列的蛋白。抗体(序列)作为本发明的抗NRlO抗体的优选方式，有下述㈧ ⑶中的(1) (8)中任一 项所述的抗NRlO抗体。(A) NS18(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包括具有SEQ ID NO 1 (HCDRl)记载的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :2(HCDR2)记载的氨基酸序列的⑶R2、 具有SEQ ID NO :3(HCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 4 (VH)记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包括具有SEQ ID NO 5 (IXDRl)记载的氨基酸序列的⑶Rl、具有SEQ ID NO :6(IXDR2)记载的氨基酸序列的⑶R2、 具有SEQ ID NO :7(LCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 8 (VL)记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与(1) (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。(B) NS22(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包括具有SEQ ID NO 9 (HCDRl)记载的氨基酸序列的⑶R1、具有SEQ ID NO :10 (HCDR2)记载的氨基酸序列的 CDR2、具有SEQ ID NO :11 (HCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 12 (VH)记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包括具有SEQ ID NO 13 (IXDRl)记载的氨基酸序列的⑶R1、具有SEQ ID NO 14 (LCDR2)记载的氨基酸序列的
12CDR2、具有SEQ ID NO :15(LCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 16 (VL)记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。对上述1个或多个氨基酸被取代、缺失、添加和/或插入的具体例子没有特别限 定，可以列举以下的修饰。将SEQ ID NO 9的重链⑶Rl中第3位的Ile取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Val。将SEQ ID NO 9的重链⑶Rl中第4位的Met取代成其他氨基酸。对对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有He。将SEQ ID NO 9的重链⑶Rl中第4位的Met取代成其他氨基酸。对对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Leu。将SEQ ID NO 9的重链⑶Rl中第3位的Ile取代成其他氨基酸。对取代后氨基 酸没有特别限定，优选的例子有Ala。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第1位的Leu取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Glu。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第3位的Asn取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第13位的Gln取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第14位的Lys取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Gin。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第16位的Lys取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Gin。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第17位的Gly取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 10的重链CDR2中第16位的Lys和第17位的Gly取代成其他氨基 酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第16位的Lys取代成Glru第17位 的Gly取代成Asp。将SEQ ID NO 10的重链CDR2中第14位的Lys、第16位的Lys和第17位的Gly 取代成其他氨基酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第14位的Lys取代 成Glru第16位的Lys取代成Glru第17位的Gly取代成Asp。将SEQ ID NO 10的重链CDR2中第13位的Gin、第14位的Lys、第16位的Lys和 第17位的Gly取代成其他氨基酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第13位的Gln取代成Asp、第14位的Lys取代成Glru第16位的Lys取代成Glru第17位的Gly 取代成Asp。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第10位的Ser取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 10的重链⑶R2中第13位的Gln取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Pro。将SEQ ID NO=Il的重链⑶R3中第3位的Tyr取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Leu。将SEQ ID NO 11的重链⑶R3中第10位的Met取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Leu。将SEQ ID NO 11的重链⑶R3中第11位的Asp取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Glu。将SEQ ID NO 11的重链⑶R3中第12位的Tyr取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Thr或Ser。将SEQ ID NO 11的重链CDR3中第10位的Met、第11位的Asp和第12位的Tyr 取代成其他氨基酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第10位的Met取代 成Leu、第11位的Asp取代成Glu、以及第12位的Tyr取代成Thr。将SEQ ID NO 11的重链⑶R3中第11位的Asp和第12位的Tyr取代成其他氨基 酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第11位的Asp取代成Glu、以及第12 位的Tyr取代成Thr。将SEQ ID NO 11的重链CDR3中第3位的Tyr、第11位的Asp和第12位的Tyr 取代成其他氨基酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第3位的Tyr取代成 Leu、第11位的Asp取代成Glu、以及第12位的Tyr取代成Thr或Ser。将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第1位的Arg取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Gin。将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第5位的Asn取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第1位的Arg和第5位的Asn取代成其他氨基 酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第1位的Arg取代成Glru第5位的 Asn取代成Asp0将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第8位的Ser取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Arg。将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第10位的Leu取代成其他氨基酸。对取代后的 氨基酸没有特别限定，优选的例子有Val。将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第8位的Ser和第10位的Leu取代成其他氨基 酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第8位的Ser取代成Arg、第10位的 Leu取代成Val。将SEQ ID NO 13的轻链⑶Rl中第2位的Thr取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Ala或Ser。
将SEQ ID NO 14的轻链⑶R2中第1位的Asn取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 14的轻链⑶R2中第3位的Lys取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Gin。将SEQ ID NO 14的轻链⑶R2中第5位的Leu取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Glu。将SEQ ID NO 14的轻链⑶R2中第7位的Lys取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Gln或Asp。将SEQ ID NO 14的轻链CDR2中第3位的Lys、第5位的Leu和第7位的Lys取 代成其他氨基酸。对取代后的氨基酸没有特别限定，优选的例子有第3位的Lys取代成 Gin、第5位的Leu取代成Glu、第7位的Lys取代成Gin。将SEQ ID NO 15的轻链⑶R3中第5位的Glu取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 15的轻链⑶R3中第6位的Ser取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Asp。将SEQ ID NO 15的轻链⑶R3中第9位的Thr取代成其他氨基酸。对取代后的氨 基酸没有特别限定，优选的例子有Phe。上述取代可以单独进行，也可以将多个取代组合。还可以将上述取代与上述以外 的取代组合。利用这些取代，可以使抗体的药物动力学(血浆中滞留性)提高、与抗原的结 合活性增强、稳定性提高和/或免疫原性风险降低。本发明中，组合有上述取代的可变区的具体例子有具有SEQ IDNO 167的氨基酸 序列的重链可变区或具有SEQ ID NO: 168的氨基酸序列的轻链可变区。并且，组合有上述 取代的抗体的例子有包含具有SEQ ID NO 167的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO 168的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。组合有上述取代的重链可变区或轻链可变区的具体例子有以下可变区。(a)重链可变区(H17)，其中含有 SEQ ID NO 196 记载的 CDRUSEQ ID NO 197 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 11 记载的 CDR3 ；(b)重链可变区(H19)，其中含有 SEQ ID NO 176 记载的 CDRUSEQ ID NO 197 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 11 记载的 CDR3 ；(c)重链可变区(H28、H42)，其中含有 SEQ ID NO 196 记载的 CDRl、SEQ ID NO 197 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(d)重链可变区(H30、H44)，其中含有 SEQ ID NO 9 记载的 CDRl、SEQ ID NO 197 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(e)重链可变区(H34、H46)，其中含有 SEQ ID NO 176 记载的 CDRl、SEQ ID NO
197记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(f)重链可变区(H57、H78)，其中含有 SEQ ID NO 9 记载的 CDRl、SEQ ID NO 198 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；(g)重链可变区(H71、H92)，其中含有 SEQ ID NO 176 记载的 CDRl、SEQ ID NO
198记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；
15
(h)重链可变区(H97、H98)，其中含有 SEQ ID NO 9 记载的 CDRl、SEQ ID NO 199 记载的 CDR2、SEQ ID NO 184 记载的 CDR3 ；⑴轻链可变区(Lll)，其中含有SEQ ID NO 200记载的CDRUSEQ ID NO 170记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(j)轻链可变区(L12)，其中含有 SEQ ID NO 201 记载的 CDRUSEQ ID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(k)轻链可变区(L17)，其中含有 SEQ ID NO 202 记载的 CDRUSEQ ID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3 ；(1)轻链可变区(L50)，其中含有 SEQ ID NO 203 记载的 CDRUSEQ ID NO 170 记 载的 CDR2、SEQ ID NO 193 记载的 CDR3。组合有上述取代的抗体的具体例子还有以下抗体。(i)抗体，该抗体含有(C)的重链可变区和(k)的轻链可变区；(ii)抗体，该抗体含有(d)的重链可变区和(k)的轻链可变区；(iii)抗体，该抗体含有(e)的重链可变区和(k)的轻链可变区；(iv)抗体，该抗体含有(f)的重链可变区和(k)的轻链可变区；(ν)抗体，该抗体含有(g)的重链可变区和(k)的轻链可变区；(vi)抗体，该抗体含有(h)的重链可变区和(1)的轻链可变区。(C) NS23(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO 17(HCDR1)记载的氨基酸序列的⑶R1、具有SEQ ID NO :18 (HCDR2)记载的氨基酸序列的 CDR2、具有SEQ ID NO :19(HCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 20 (VH)记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO 21 (IXDRl)记载的氨基酸序列的⑶R1、具有SEQ ID NO :22 (IXDR2)记载的氨基酸序列的 CDR2、具有SEQ ID NO :23(LCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 24 (VL)记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。(D) NS33(1)抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO 25 (HCDRl)记载的氨基酸序列的⑶R1、具有SEQ ID NO :26 (HCDR2)记载的氨基酸序列的 CDR2、具有SEQ ID NO :27(HCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(2)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 28 (VH)记载的重链可变区；(3)抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO290XDR1)记载的氨基酸序列的⑶R1、具有SEQ ID NO :30 (IXDR2)记载的氨基酸序列的 CDR2、具有SEQ ID NO 31 (LCDR3)记载的氨基酸序列的CDR3 ；(4)抗体，该抗体具有SEQ ID NO 32 (VL)记载的轻链可变区；(5)抗体，该抗体具有(1)的重链可变区和(3)的轻链可变区；(6)抗体，该抗体具有(2)的重链可变区和(4)的轻链可变区；(7)抗体，该抗体是在(1) (6)中任一项所述的抗体中有1个或多个氨基酸被取 代、缺失、添加和/或插入而得到的抗体，所得抗体与(1) (6)中任一项所述的抗体具有 同等活性；(8)抗体，该抗体与表位结合，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所结合 的表位相同。在上述⑴或(3)所述的抗体中，可以使用任何构架区(FR)，但优选使用来自人的 FR0在上述⑴ ⑶所述的抗体中，恒定区可以使用任何恒定区，但优选使用来自人的恒 定区。本发明的抗体中使用的FR或恒定区的氨基酸序列，可以直接使用作为来源的原来的 FR或恒定区的氨基酸序列，也可以将1个或多个氨基酸取代、缺失、添加和/或插入等形成 不同的氨基酸序列后再使用。上述NS18的重链的氨基酸序列见SEQ ID NO :34，编码该氨基酸序列的核苷酸序 列见SEQ ID N0:33。轻链的氨基酸序列见SEQ IDNO :36，编码该氨基酸序列的核苷酸序列 见 SEQ ID NO :35οNS22的重链的氨基酸序列见SEQ SEQ ID NO :37ο轻链的氨基酸序列见SEQ SEQ ID NO :39。NS23的重链的氨基酸序列见SEQ SEQ ID NO :41ο轻链的氨基酸序列见SEQ SEQ ID NO :43。NS33的重链的氨基酸序列见SEQ SEQ ID NO :45ο轻链的氨基酸序列见SEQ SEQ ID NO :47。本发明中，“与(1) (6)中任一项所述的抗体活性同等”是指，与NR10(例如人 NR10)的结合活性和/或中和活性是同等的。本发明中，“同等”未必是指相同程度的活性， 可以是活性增强，也可以是活性降低，只要具有活性即可。作为活性降低的抗体，例如有以 下抗体与原始抗体相比，具有30%以上的活性、优选50%以上的活性、更优选80%以上的 活性的抗体。上述(1) (6)中任一项所述的抗体，只要与NRlO具有结合活性和/或中和 活性即可，在可变区(CDR序列和/或FR序列)的氨基酸序列中可以有1个或多个氨基 酸被取代、缺失、添加和/或插入。作为用于制备在氨基酸序列中有1个或多个氨基酸 被取代、缺失、添加和/或插入、且与NRlO具有结合活性和/或中和活性的抗体的氨基 酸序列的本领域技术人员所熟知的方法，已知有向蛋白中导入突变的方法。例如，本领 域技术人员可以采用位点特异性诱变法(Hashimoto-Gotoh，Τ, Mizuno，Τ, Ogasahara, Y 禾口 Nakagawa, Μ. (1995)Anoligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method
IDNO :38，编码该氨基酸序列的核苷酸序列见
IDNO :40，编码该氨基酸序列的核苷酸序列见
IDNO :42，编码该氨基酸序列的核苷酸序列见
IDNO :44，编码该氨基酸序列的核苷酸序列见
IDNO :46，编码该氨基酸序列的核苷酸序列见
IDNO :48，编码该氨基酸序列的核苷酸序列见for site-directedmutagenesis (寡脱氧核糖核苷酸定向双琥珀色法位点定向诱 变).Genel52, 271-275 ；Zoller, MJ 和 Smith, Μ. (1983)Oligonucleotide-directedmuta genesis of DNA fragments cloned into M13 vectors (DNA 片段克隆到 M13 载体的寡 聚核苷酸定向诱变)· Methods Enzymo 1. 100，468-500、Kramer, W, Drutsa, V, Jansen, HW, Kramer, B, Pflugfelder, M 禾口 Fritz, HJ(1984)The gapped duplex DNA approach to ο ligonucleotide-directedmutation construction ( Π 白勺双DNA i^J&TMM^M 苷酸定向突变结构).Nucleic Acids Res. 12，9441-9456、Kramer W 和 Fritz HJ(1987) 01igonucleotide-directed construction of mutations via gapped duplexDNA Methods (经由带缺口的双链体DNA法突变的寡聚核苷酸定向结构).Enzymol. 154， 350-367、Kunkel, TA(1985)Rapid and efficientsite-specific mutagenesis without phenotypic selection (无表型筛选的迅速及高效的位点特异性诱变法).Proc Natl Acad Sci U S A. 82,488-492)等，向与NRlO具有结合活性和/或中和活性的抗体的氨基酸序列 中导入适当突变，从而可以制备和与NRlO具有结合活性和/或中和活性的抗体功能同等的 突变体。这样，可变区中有1个或多个氨基酸发生突变、且与NRlO具有结合活性和/或中 和活性的抗体也包含在本发明的抗体中。当改变氨基酸残基时，优选突变成保存有氨基酸侧链的性质的其它氨基酸。例如， 氨基酸侧链的性质有疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)；亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、 Q、G、H、K、S、T)；具有脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)；具有含羟基侧链的氨基酸(S、T、 Y)；具有含硫原子侧链的氨基酸(C、M)；具有含羧酸和酰胺侧链的氨基酸(D、N、E、Q)；具有 含碱性侧链的氨基酸(R、K、H)；以及具有含芳香族侧链的氨基酸(H、F、Y、W)(括号内均表示 氨基酸的单字母符号)。将上述各组内的氨基酸的取代称作保守取代。已知具有对某一氨基 酸序列通过1个或多个氨基酸残基的缺失、添加和/或用其它氨基酸的取代进行修饰的氨 基酸序列的多肽维持其生物学活性(Mark, D. F.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1984) 81 5662-6 ；Zoller, Μ. J.和 Smith, Μ.，Nucleic Acids Res. (1982) 10 6487-500 ；Wang，Α.等 人，Science (1984) 224 1431-3 ；Dalbadie-McFarland, G.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1982) 79 :6409_13)。这样的突变体与本发明的可变区(例如CDR序列、FR序列、可变 区整体)的氨基酸序列具有至少70 %、更优选至少75 %、更优选至少80 %、进一步优选至少 85%,更进一步优选至少90%、而且最优选至少95%的氨基酸序列的同源性。本说明书中， 序列的同源性如下定义根据需要将序列整列化和导入适当的缺口，使序列同源性达到最 大，之后以残基与原始重链可变区或轻链可变区的氨基酸序列的残基相同的比例来定义。 氨基酸序列的同源性可以通过后述方法来确定。另外，可变区(CDR序列和/或FR序列)的氨基酸序列中有1个或多个氨基酸被 取代、缺失、添加和/或插入、且与NRlO具有结合活性和/或中和活性的可变区的氨基酸序 列，还可以由在严格条件下与包含编码该可变区的氨基酸序列的核苷酸序列的核酸杂交的 核酸而得到。作为用于分离在严格条件下与包含编码可变区氨基酸序列的核苷酸序列的核 酸杂交的核酸的严格的杂交条件，可以例示6M尿素、0.4% SDS、0. 5XSSC、37°C的条件或 与其同等的严格的杂交条件。采用更严格的条件、例如6M尿素、0.4% SDS、0. IXSSC的条 件、42°C时，有望分离同源性更高的核酸。分离的核酸的序列可以利用后述公知的方法来确 定。所分离的核酸的同源性，以核苷酸序列整体计，具有至少50%以上、进一步优选70%以上、更进一步优选90%以上(例如95%、96%、97%、98%、99%以上)的序列同源性。除利用上述杂交技术的方法以外，还可以利用使用根据编码可变区氨基酸序列的 核苷酸序列信息合成的引物的基因扩增法、例如聚合酶链反应(PCR)法，分离在严格条件 下与包含编码可变区氨基酸序列的核苷酸序列的核酸杂交的核酸。核苷酸序列和氨基酸序列的同源性可以根据Karl in和Altschul的算法 BLAST (Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1993) 90 :5873_7)来确定。根据该算法，开发了 被称作 BLASTN和 BLASTX 的程序(Altschul 等人，J. Mol. Biol. (1990)215 :403_10)。根据 BLAST,通 过BLASTN来分析核苷酸序列时，参数例如为分值(score) = 100、读取词长(wordlength) =12。此外，根据BLAST，通过BLASTX来分析氨基酸序列时，参数例如为分值=50、读取 词长=3。使用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用各程序的缺省参数。上述分析方法的 具体方法是公知的(参照 NCBI (National Center for Biotechnology Information)的 BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)的网址；http://www. ncbi. nlm. nih. gov)。本发明还提供与表位结合的抗体，所述表位与⑴ (7)中任一项所述的抗体所 结合的表位相同。某抗体是否与其他抗体识别相同的表位，这可以通过两者对表位的竞争来确 认。抗体间的竞争可以通过竞争结合测定来评价，其方法有ELISA、荧光能量转移测定法 (FRET)或荧光微量测定技术(FMAT(注册商标))等。与抗原结合的该抗体的量与对相同表 位竞争结合的候选竞争抗体(被检抗体)的结合能力间接相关。即，被检抗体与相同表位 的结合量或亲和性越大，该抗体与抗原的结合量越降低，被检抗体与抗原的结合量增加。具 体而言，向抗原中同时添加进行了适当标记的该抗体和应评价的抗体，利用标记检测结合 的该抗体。通过预先标记该抗体，可以容易地测定与抗原结合的该抗体量。对该标记没有 特别限定，选择对应于测定技术的标记方法。标记方法具体有荧光标记、放射标记、酶标记寸。例如，向表达NRlO的动物细胞中同时添加进行了荧光标记的该抗体和未标记的 该抗体或被检抗体，利用荧光微量测定技术检测被标记的该抗体。此处所说的“识别相同表位的抗体”是指，相对于IC5tl，被检抗体以该未标记抗体的 IC50的通常100倍、优选80倍、进一步优选50倍、更进一步优选30倍、更优选10倍高的浓 度下使该标记抗体的结合量降低至少50%的抗体，所述IC5tl是指通过未标记的该抗体的结 合使该标记抗体的结合量降低50%的浓度。与上述(1) (7)中任一项所述的抗体所结合的表位结合的抗体，在具有特别高 的中和活性方面有用。对上述(1) (8)中任一项所述的抗体没有特别限定，但优选为人源化抗体。本发明还提供编码上述㈧ ⑶中的(1) (8)中任一项所述的抗NRlO抗体 的基因。本发明的基因可以是任何基因，例如可以是DNA，也可以是RNA。抗体(人源化)本发明中的抗体的优选方式之一为与NRlO结合的人源化抗体。人源化抗体可以 利用本领域技术人员已知的方法来制造。抗体的可变区通常由夹在4个构架区(FR)中的3个互补性决定区(⑶R)构成。 CDR实质上是决定抗体的结合特异性的区。CDR的氨基酸序列富有多样性。一方面，构成FR的氨基酸序列即使在具有不同结合特异性的抗体之间往往也显示出高度同源性。因此，通 常通过移植CDR，可以将某抗体的结合特异性移植到其它抗体中。人源化抗体也称作重构(reshaped)人抗体，其是将人以外的哺乳动物、例如小鼠 抗体的CDR移植到人抗体的互补性决定区中的人源化抗体，其常规基因重组方法也是已知 的(参照欧州专利申请公开号EP125023号公报、W096/02576号公报)。具体而言，例如当CDR来自小鼠抗体时，使用多个制作成在CDR和FR两者的末端 区具有重叠部分的寡核苷酸作为引物，通过PCR法合成设计成连接小鼠抗体的⑶R和人抗 体的构架区(frameworkregion ；FR)的DNA序列(参照W098/13388号公报中所述的方法)。 连接所得的DNA和编码人抗体恒定区的DNA，接着插入到表达载体中，再将其导入宿主中， 使之产生抗体，从而得到人源化抗体(参照欧州专利申请公开号EP239400、国际专利申请
发明者井川智之, 仓持太一, 大山创平, 橘达彦, 江崎圭子, 白岩宙丈, 糟谷惠子, 角田浩行 申请人:中外制药株式会社