提高Atoh1表达的化合物的制作方法

专利名称：提高Atoh1表达的化合物的制作方法
技术领域：
本发明概括地提供化合物、药物组合物、以及它们的使用方法，该方法包括在生物 细胞中导致Atohl基因(例如，Hathl)表达增加的方法。更具体地说，本发明涉及得益于 Atohl表达增加的疾病和/或疾患的治疗。
背景技术：
最常见类型的听力损失之一是由毛细胞损失造成的感音神经性耳聋，该毛细胞 是在耳蜗中负责将声音转导成电信号的感觉细胞。人类出生时内耳每个耳蜗只包含大约 15,000个毛细胞，然而这些细胞会由于各种遗传或环境因素而损失，这种损失或受损的细 胞不能被替换。然而，转录因子Atohl的过度表达，可诱导耳蜗的感觉器官Corti器上的 表皮细胞分化成毛细胞(Zheng 和 Gao，Nat Neurosci 2000 ；3 580-586 ；Kawamoto 等人， J Neurosci2003 ；23 4395-4400 ；Gubbels 等人，Nature 2008 ；455 :537_541)。Atoh-I 的 表达也起着推动其他细胞，例如肠细胞，进入分化状态的作用(Aragaki等人.，Biochem. Biophys. Res. Comm. 2008年4月；368 (4) :923_929)，并且Atoh-I的过度表达会降低结肠癌 细胞的增殖(Leow 等人，Ann N Y Acad Sci. 2005 年 11 月；1059 174-83)。发明概述本发明特征在于本文所述的化合物，和包含这些化合物的组合物。例如，本发明特 征在于包含了能够增加细胞内Atohl表达的本文公开的一种或多种化合物，或其药学上可 接受的盐，和药学上可接受的载体的药物组合物。该组合物可配制用于施用于患者。因此， 本发明包含该药物组合物，以及适用于保存在组织培养物中的细胞或组织的浓缩原液和组 合物，以及所述化合物和组合物的使用方法。如果该组合物是药学上可接受的(即无毒的)，其可以包括药学上可接受的载体， 诸如缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液)、氨基酸、脲、醇、抗坏血酸、磷脂、多肽、EDTA、氯化钠(如 生理盐水)、脂质体、甘露醇、山梨醇、水、甘油或其组合。也可包括防腐剂和染料。在一些具 体实施方案中，该组合物是无菌的。此处所述的化合物可用于改变保存在细胞培养物中细胞的特征(例如，在体外)， 并且所述化合物和/或经处理的细胞可以施用于需要治疗的患者。例如，治疗患者的方法 可以按包含下列步骤的方法进行(a)选择需要治疗的患者，以及(b)将有效治疗量的本文 所述的化合物(例如，制造用于施用的化合物)施用于该患者。药物组合物可以全身施用 (如口服或肠胃外)。具体而言，可静脉内、肌内、腹膜内、舌下、直肠、阴道、透皮、皮下或通 过吸入施用该组合物。当口服施用时，该组合物可配制成片剂(如，压制片)、丸剂、糖浆、悬 浮液、乳液或胶囊。当肠胃外施用，该组合物可配制成锭剂、滴剂(如耳滴液)、溶液，灌肠剂、栓剂或喷雾剂。该组合物也可以使用导管或泵施用。所述组合物也可以局部施用(例如，向耳或需要细胞分化和/或Atohl表达的其 他部位)。为了向耳部施用，可通过注射入耳蜗的腔(luminae)，注射入内耳道听觉神经干 和/或注射入鼓阶来施用药物组合物。更加具体地，可通过鼓室内注射，应用于(即注射 入)外耳、中耳或内耳，通过耳圆窗注射，或通过耳蜗囊注射来施用药物组合物。还可以使 用导管或泵将药物组合物施用于患者(例如，局部地向中耳和/或内耳)。需要治疗的患者可患有或有风险发展为，与听觉毛细胞的损失有关的听力障碍或 不平衡疾患。虽然本发明不限于通过任何特定机制起作用的化合物，可在治疗有效地增加 了患者内耳(或其它靶组织(例如，肿瘤))中AtOhl基因在细胞中的表达，或有效地提高 患者内耳中具有听觉毛细胞特征的细胞数目之处使用该组合物。听觉毛细胞可以是外部或 内部的听觉毛细胞。需要治疗的患者也可患有或有风险发展为癌症。癌症可能是胃肠癌(例如，食道 癌、胆囊癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、小肠癌、大肠癌、结肠癌或直肠癌)。需要治疗的患者也可患有或有风险发展为小脑颗粒神经元缺乏、关节病和/或骨 关节炎。在一个具体实施方案中，治疗患有听力障碍或不平衡疾患的患者的方法可以由包 括下述步骤的方法施行(a)任选地选择需要治疗的患者，(b)获得能够分化为听觉毛细胞 的细胞群体，(c)将细胞群体在体外与有效量的本文所述的一种或多种化合物接触足以使 得该群体中有分化的听觉毛细胞特征的细胞数目增加的时间，和(d)将细胞群体或其亚群 (subset)(例如，更高度分化的细胞亚群)施用于患者的耳部。能够分化为听觉毛细胞的细 胞群体可以包括干细胞、诱导多能性干细胞(IPS)、祖细胞、支持细胞、Deiters细胞、柱细 胞、内指状细胞、顶盖细胞(tectal cell)、Hensen细胞和生殖细胞。干细胞可以是成体干 细胞(例如，源于内耳、骨髓、间质、皮肤、脂肪、肝脏、肌肉或血液的干细胞)、胚胎干细胞或 从胎盘或脐带获得的干细胞。如同干细胞一样，祖细胞可以来自内耳、骨髓、间质、皮肤、脂 肪、肝脏、肌肉或血液。施用细胞群体可以按下述步骤完成(a)将细胞注入耳蜗腔，注入内 耳中的听觉神经干，或注入鼓阶，或(b)在耳蜗植入物内植入这些细胞。在使用细胞治疗的 患者任何方法中，它们也可使用一种或多种本化合物治疗，反之亦然。如前文所述，药物组 合物可以全身或局部施用。本发明的其他方法包括增加体外细胞群体中具有听觉毛细胞特征的细胞数目的 方法。这些方法可以实施如下获得能够分化为听觉毛细胞的细胞群体，将体外(例如， 在细胞培养物中)细胞群体与有效量的本文所述的一种或多种化合物接触足以使得细胞 群体中具有听觉毛细胞特征的细胞数目增加的时间。能够分化成毛细胞的细胞群体包括 选自由以下组成的组的细胞干细胞、iPS细胞、内耳干细胞、成体干细胞、骨髓源干细胞、 胚胎干细胞、间质干细胞、皮肤干细胞、脂肪源性干细胞、祖细胞、内耳祖细胞、支持细胞、 Deiters细胞、柱细胞、内指状细胞、顶盖细胞、Hensen细胞和生殖细胞。本发明还包括本文所述的化合物作为药物的用途，和在制备用于治疗或预防本文 所述疾患的药物的用途。例如，该药物可在用于治疗或预防与毛细胞损失相关的听力损失 或不平衡，或与不期望的细胞增殖相关的病症的方法中使用。另外，本发明包括所述化合物 在治疗本文所述的疾患中的用途，所述疾患例如与听觉细胞损失相关的听力损失，或与不期望的细胞增殖相关的病症。该药物可以是本文所述的任何形式，并可以单独施用或与另 外的治疗或活性剂结合使用。此外，本文还提供试剂盒(例如，包括上文描述的药物组合物以及信息材料的试 剂盒，或包含本文所述的化合物以及信息材料的试剂盒)。试剂盒中的细胞可以按照上文描 述的方法制备，而且任一种试剂盒都可包含附加材料，例如适用于药物组合物或细胞群体 施用的装置，例如，适用于插入受治疗者内耳的无菌灵活套管。此外，本发明所包括由本文所述的方法制备的细胞或细胞群体。本发明还包括使用本文所述的化合物中的一种或多种作为药物，例如，可以用于 治疗与听觉毛细胞损失相关的听力障碍或不平衡疾患，和/或与异常细胞增殖相关的病症 的药物。本发明也包括本文所述的化合物中的一种或多种用于治疗与听觉毛细胞损失相 关的听力障碍或不平衡疾患和/或异常细胞增殖相关的疾患的用途。定义本文使用的术语“异常增殖”定义为任何类型的细胞的任何不期望的过度增殖，其 中所述细胞没有受到正常细胞周期发展的限制，并且其中所述增殖可导致肿瘤或任何癌症 的发展。本文使用的术语“治疗”是指其中疾病或病症的一种或多种症状被改善或其他有 益地改变的任何方法。正如本文所使用的，特定疾患的症状的改善是指可以归因于通过本 发明的组合物和方法的治疗的，或与该治疗相关的任何减轻，无论是永久或暂时的，持久或 短暂的。本文中所用的术语“有效量”和“有效治疗”，是指本文所述的一种或多种化合物或 药物组合物作用一段时间(包括急性或慢性地施用，以及周期性或连续性地施用)后，在其 施用状况下有效产生预期效果或生理结果的量或浓度。本发明使用的一种或多种化合物或药物组合物的有效量包括促进Atohl表达 增加的量；促进一个或多个细胞全部或部分分化以治疗某种将得益于Atohl表达增加的 疾病的量，例如，阻止或延缓得益于Atohl表达增加的一种或多种疾病的发病、延缓得益于 Atohl表达增加的一种或多种疾病的进展、缓解得益于Atohl表达增加的一种或多种疾病 的影响，或普遍地改善被诊断为得益于Atohl表达增加的一种或多种疾病的患者的预后的 量，该疾病例如一种或多种本文所述的疾病。例如，在听力衰退的治疗中，能提高听力至任 何程度或者阻滞听力衰退的任何症状的化合物将是治疗有效的。例如在异常细胞增殖的治 疗中，能减少细胞的增殖、减小肿瘤大小、降低转移、降低血管向所述肿瘤增殖的化合物都 是治疗有效的。化合物的治疗有效量并不是要求治愈疾病，而是为疾病提供治疗。在整个说明书中，术语“患者”是用于描述根据本发明的方法提供治疗的动物、人 类或非人类。包括兽医和非兽医应用。该术语包括，但不局限于，鸟类，爬行类，两栖类和 哺乳动物类，例如，人类、其他灵长类动物、猪、啮齿类如小鼠和大鼠、兔、豚鼠、仓鼠、牛、马、 猫、狗、绵羊和山羊。典型的患者包括人类、家畜和家养宠物，如猫和狗。术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘的任何基团。—般而言，并且除非另有说明，否则取代基(基团)前缀名是通过以下衍生自母 体氢化物(i)将母体氢化物中的“烷(ane)”替换为后缀“基(yl)”、“二基(diyl)”、“三基(triyl)”、“四基(tetrayl)”等；或(ii)将母体氢化物中的“e”替换为后缀“基(yl) ”、“二基(diyl)”、“三基(triyl)”、“四基(tetrayl)”等。(在此，当指定具有自由价的原子时， 该原子的给定价数与母体氢化物中任何确定的价数一样低)。本文全文也使用可接受约定 名称(contracted names)，如金刚烷基、萘基、蒽基、菲基、呋喃基、吡啶基、异喹啉基、喹啉 基和哌啶基，以及通用名，如乙烯基、烯丙基、苯基和噻吩基。稠环、双环、三环、多环的取代 基编号和命名遵守使用常规编号/编码系统。术语“烷基”是指可以是直链或支链的，包含指定数目的碳原子的饱和烃链。例如， C1-C6烷基表示，该基团可能含有1到6(1和6包含在内)碳原子。任何原子都可以，例如， 被一个或多个取代基(例如，诸如描本文所述的任何Ra的定义中描述的那些)任选地取代。 烷基的例子包括，但不局限于甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。术语“卤代烷基”是指其中至少有一个氢原子被卤代取代的烷基。在一些实施方 案中，多于一个氢原子(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14)被卤代取代。在一些 实施方案中，氢原子可以各自被相同的卤素取代(如氟)，或氢原子可以被不同卤素的组合 取代(如氟和氯)。“卤代烷基”还包括其中所有的氢都被卤代取代的烷基部分(有时本文 称全卤代烷基，例如，全氟烷基，如三氟甲基)。任何原子可以，例如，由一个或多个取代基 (例如，像本文所述的任何Rb的定义中描述的那些)任选地取代。术语“芳烷基”是指其中烷基氢原子被芳基取代的烷基部分。烷基部分碳之一作 为芳烷基与其它部分的连接点。任何环或链原子可以，例如，由一个或多个取代基(例如， 像本文所述的任何Re的定义中描述的那些)任选地取代。“芳烷基”的非限制性实例，包括 苄基，2-苯乙基和3-苯丙基。术语“杂芳烷基”是指其中烷基氢原子由杂芳基取代的烷基部分。烷基碳之一作 为芳烷基与另一个部分的连接点。杂芳烷基包括其中烷基部分上多于一个氢原子由杂芳基 取代的基团。任何环或链原子可，例如，由一个或多个取代基(例如，像本文所述的任何Re 的定义中描述的那些)任选地取代。杂芳烷基可以包括，例如，2-吡啶基乙基。术语“烷氧基”和“卤代烷氧基”分别是指-0-烷基和-0-卤代烷基基团。术语“苯 氧基”是指-ο-苯基基团。术语“杂环基”指含有独立地选自0、N或S的一个或多个(如1-4个)杂环原子的 完全饱和的单环、双环、三环或其他多环系。杂原子或环碳原子是杂环基取代基与另一个部 分的连接点。任何原子可，例如，由一个或多个取代基(例如，像本文所述的任何化的定义 中描述的那些)任选地取代。杂环基可以包括，例如，四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基(哌 啶子基)、哌嗪基、吗啉基(吗啉代)、吡咯啉基和吡咯烷基。术语“环烷基”是指完全饱和的单环、双环、三环或其他多环烃基。任何原子可以， 例如，由一个或多个取代基(例如，像本文所述的任何Re的定义中描述的那些)任选地取 代。一个环碳原子作为一个环烷基与另一个部分的连接点。环烷基部分可以包括，例如，环 丙基、丁烷基、环戊烷基、环己基，环庚基、金刚烷基和降冰片基(norbornyl)(双环[2. 2. 1]
庚基)。术语“环烯基”是指部分不饱和的单环、双环、三环或其他多环烃基。一个环碳(如饱和的或不饱和的)是环烯基取代基的连接点。任何原子可以，例如，由一个或多个取代基 (例如，像本文所述的任何Re的定义中描述的那些)任选地取代。环烯基部分可以包括，例如，环己烯基、环己二烯基或降冰片烯基。术语“芳基”是指芳族单环或双环的烃环系统，其中任何环原子可以，例如，通过一 个或多个取代基(例如，像本文所述的任何Rd的定义中描述的那些)任选地取代。芳基部 分可以包括苯基和萘基。术语“杂芳基”指含有独立地选自0、N或S(以及其一氧化物和二氧化物，例如， N—0_、S(0)、S02)的一个或多个(如1-6个)杂原子环原子的芳族单环或双环烃基。任何 原子可以，例如，由一个或多个取代基(例如，像本文所述的任何Rd的定义中描述的那些) 任选地取代。杂芳基可以包括，吡啶基、噻吩基、呋喃基(呋喃基)、咪唑基、异喹啉基、喹啉 基和吡咯基。符号C(O)是指通过双键与氧原子相连的碳原子。术语“氧代”是指双键的氧，即 =0。术语“取代基”是指例如，烷基、卤代烷基、环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、环烯 基、芳基或杂环基基团的任何原子上“取代”的基团。一般而言，当特定变量的定义包括氢 和非氢(卤代、烷基、芳基等)的可能性时，术语“非氢取代基”是统指该特别变量中的非氢 可能性。符号，如“被从1-5个Rd任选地取代的C6-Cltl芳基”(等等)，旨在包括未取代的 C6-C10芳基和被从1-5个Rd取代的C6-Cltl芳基。使用没有修饰语“任选地取代”或“取代” 的取代基(基团)前缀名，如烷基，应被理解为特定的取代基是未被取代。然而，使用没有 修饰语“任选地取代”或“取代”的“卤代烷基”，仍然被理解为其中至少一个氢原子被卤代 取代的烷基。为了阐述方便，还应理解，如果在本说明书(包括权利要求书)中，基团被定义为 “如同本文任何处所定义”(或类似的)，该特定基团的定义包括，本说明书中首次出现和最 广泛通用的定义，以及任何地方描述的任何亚通用的(sub-generic)和具体的定义。本申请涉及2004年8月31日提交的美国临时专利申请号60/605，746,2005年8 月30日提交的国际申请号PCT/US2005/030714、2004年11月15日提交的美国申请序列号 10/989，649、2007年12月12日提交的美国申请序列号11/953，797、2008年8月7日提交的 美国申请序列号12/187，543、2006年11月15日提交的美国临时申请序列号60/859，041、 2007年11月14日提交的国际申请号PCT/US2007/084654、2008年9月18日提交的美国申 请序列号12/233.017、2008年11月24日提交的美国临时申请序列号60/859，041，上述各 项全部内容通过参考弓I入本文。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技 术人员的通常理解相同的含义。本文描述了本发明使用的方法和材料；另外，也可使用本领 域熟知的适合的方法和材料。材料、方法和实例仅是示例性的，且无意限制。本文提及的所 有出版物、专利申请、专利、段落、数据库条目和其他参考资料全部通过参考引入。一旦发生 冲突，以本说明书为准，包括定义。本发明的其他特征和优点根据以下的详细阐述和附图、以及权利要求中，将是显 然的。


图1A-1H是酚类化合物或其衍生物的通用结构。图1I-1K是特定的酚类化合物及其衍生物的结构。图2A-2F是苯甲酰胺化合物或相关化合物的通用结构。图2G-2I是特定苯甲酰胺化合物或相关化合物的结构。图3A-3X是包含一个或多个杂环的化合物的通用结构。图3Y-3ZZ是包含一个或多个杂环的特定化合物的结构。图4A-4G是包含一个或多个苯环的化合物的通用结构。图4H-4I是包含一个或多个苯环的特定化合物的结构。图5A-5E是包含连接到五元杂环系统的酰胺基团的化合物的通用结构。图5F和5G是包含连接到五元杂环系统的酰胺基团的特定化合物的结构。图6A-60是包含稠合到另一个环系统的五元杂环系统的化合物的通用结构。图6P-6V是包含一个五元杂环系统并与另一个环系统融合的特定化合物的结构。图7A-7C是吡啶化合物的通用结构，而图7D是嘧啶化合物的通用结构。图7E-7F是特定的吡啶或嘧啶化合物的结构。图8A和8B是苯胺化合物或苯胺衍生物的通用结构。图8C是苯胺化合物或苯胺衍生物的特定结构的结构。图9-116是显示了在具有由Mathl增强子和最小启动子控制的稳定表达荧光素酶基 因的HEK细胞中Mathl的表达(见实施例1)的线图。图中所示化合物编号对应图1到图8中 标出的化合物结构。采用在实施例1和实施例2中介绍的高通量筛选方法，测定Mathl活性。图117A和117B是显示进行优化高通量筛选的实验结果的图。图118A和118B是显示进行优化高通量筛选的重复实验的散点图。图119是显示Mathl活化的柱状图，该活化在暴露于所示化合物的细胞中，使用实 施例1和实施例2中描述的Mathl荧光素酶报告测定进行评估。图1到图8中提供这些化 合物的结构。这些化合物的初始Atohl活化结果可参见图9-114。图120A是显示Mathl活化的柱状图，该活化在暴露于所示化合物的细胞中，使用 实施例1和实施例2中描述的Mathl荧光素酶报告测定进行评估。图1到图8中提供这些 化合物的结构。这些化合物的初始Atohl活性结果可参见图9-114。图120B显示了图117A中所示化合物的结构。图120C显示了在暴露于所示化合物的细胞中AtohlmRNA表达。图121A和121B是未处理的细胞(A)和接触了化合物(Cp)Cp. -0000540的细胞⑶ 的照片。阳性染色毛细胞特异性标记物Mathl-GFP和肌球蛋白7a的细胞群用箭头表示。发明详述此外，本发明提供涉及用于治疗本文所述病症的患者的化合物和/或药物组合物 的化合物和方法。虽然治疗方法不局限于其中特定的潜在细胞事件发生的那些，但本化合 物和组合物可提高受治疗者和/或细胞的Atohl基因的表达，从而导致细胞分化成为，例 如，听觉毛细胞。Atoh-IAtohl蛋白同系物1 (Atohl或atonal)是编码包含基本的螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域的蛋白的原神经基因，该蛋白似乎在果蝇(Drosophila)神经系统发育中起决定细 胞命运的重要作用(Jarman等人，Cell，73 :1307_1321，1993)。Atohl是进化上保守的，是在 赤拟谷盗(Tribolium castenium，红色面粉甲虫(red flour beetle))、红鳍东方飩(Fugu rubripes，河豚鱼(puffer fish))、鸡(Cathl)、小鼠(Mathl)和人类(Hathl)中鉴别的同 源物(Ben-Arie等人，Hum. Mol. Gene.，5 1207-1216，1996)。这些同源物每个都包含长度相 同并且与Atohl bHLH结构域有高度序列同源性的bHLH结构域。例如，Hathl和Mathl基因 的长度几乎相同。这些分子也有高度相似的核苷酸序列(86%同源性)和高度相似的bHLH 氨基酸序列(89% )。Cathl的bHLH结构域分别与Hathl和Mathl的bHLH结构域有97% 和95%的同源性。Cathl的bHLH与Atohl bHLH结构域有67%的同源性。相比之下，果蝇 的其他编码蛋白的bHLH结构域只共享40% -50%的序列同源性。每个哺乳动物Atohl同源物起活化E box(CANNTG(SEQ ID NO 1))依赖性转录的 转录因子的功能(Arie 等人，Hum. Mol. Genet.，9 1207-1216，1996 ；Akazawa 等人，J. Biol. Chem.，270 :8730_8738，1995)，并且在神经组织和胃肠(GI)道中起决定细胞命运的重要正 调节子的功能。Zoghbi等人(美国公开号2004/0237127)描述了将上述编码Atohl同源物的核酸 用于治疗耳聋、骨关节炎和异常细胞增殖的用途。如本文所使用的，"Atohl“是指任何以及所有Atohl相关的核酸或蛋白序列，并 且包括分别与Atohl核酸或氨基酸序列直向同源或同源(homologous)的或与Atohl核酸 或氨基酸序列具有明显序列相似性的任何序列，因此，术语“Atohl”包括其他哺乳动物同 源物，例如，人类、小鼠、大鼠等等。序列可以存在于任何动物中，包括哺乳动物(例如，人 类)。Atohl核酸和氨基酸序列的实例包括但不限于，Atohl (例如，分别为NM_001012432. 1 和 NP_001012434. 1)(黑猩猩(Pan troglodytes))、Hathl (例如，NM_005172. 1 和 NP_005163. 1)(智人(Homo sapiens) )、Mathl (例如，NM_007500. 4 和 ΝΡ_031526· 1) (小家鼠(Mus musculus))、Atohl (NM_001109238. 1 和 NP_001102708. 1)(褐鼠(Rattus norvegicus))、Atohl (XM_001102247. 1 和 ΧΡ_001102247· 1)(猕猴(Macaca mulatta))、 Atohl (ΝΜ_001098099. 1 和 ΝΡ_001091568· 1)(黄牛(Bos taurus))、Atohl (XM_544986. 2 和 XP_544986. 2)(家犬(Canis lupus familiaris))和Cathl (例如，U61149. 1 和AF467292. 1) (Gallus gallus)，以及所有能用来指代这些蛋白的其他同义词，例如，atonahatonal同源 物l、Athl和螺旋-环-螺旋蛋白Hathl。而且，在动物中可存在多个同源序列或相似序列。 见，例如，GeneID :474(智人)、GeneID :11921 (小家鼠)、GeneID :461380 (黑猩猩)、GeneID 5OOl56 (褐鼠)、GeneID =7O4893 (称猴)、GeneID =539I58 (黄牛)和 GeneID :487864(家 犬)。与人类Atohl 序列(参见 Genbank Acc. Nos. NM_005172. 1 和 NPJW5I63. 1)有显 著序列相似性(即，整条序列相似性大于80 %，例如，至少是85 %、90 %、95 %、99 %或更高) 的任何序列都可以用于本方法。为了测定两条核酸序列同源性的百分比，为最优比较的目 的，进行序列比对(按照最优比对的目的的需要，将缺口引入第一和第二氨基酸或核酸序 列之一或两者，并且为了达到比较的目的可以弃去非同源序列)。比对为了比较目的比对 的参考序列的长度的至少80% (在一些实施方案中，参考序列长度的大约85%、90%、95% 或100%)。然后比较相应的核苷酸位置的核苷酸。当占据第一条序列中的某个位置的核苷酸，与第二条序列相应位置的核苷酸相同时，认为该分子在该位置是相同的。两条序列的 同源性百分比是所述序列共享的相同位置的数目的函数，为了得到两条序列的最优比对， 还需要将缺口的数目和每个缺口的长度考虑进去。两条序列的序列比较和同源性百分比的测定，可以用数学算法完成。例如，两条氨 基酸序列间的同源性百分比可以用Needleman和Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48 :444_453) 算法确定，该算法已经并入GCG软件包的GAP程序中，使用Blossum 62评分矩阵，缺口罚分 12、缺口延伸罚分4，以及移码缺口罚分5。化合物本发明提供能够增加细胞中Atohl表达的化合物。在一些实施方案中，Atohl表 达的增加是显著增加。在一些实施方案中，Atohl表达的增加可以是，例如，大约在基线 以上 1-10 %、11-20 %、21-30%、31-40%、41-50%、51-60%、61-70%、71-80%、81-90%、 91-100 %,101-200 201-300 301-400 401-500 501-1000 %,1001-10000 10001-100000%之间或更高。Atohl的增加也可以表示为成倍增加，例如，其中100%的增 长是一倍增长，1000%的增长是10倍增长等等。可选地或此外，Atohl表达的增加足以促进 细胞的分化，例如，非听觉毛细胞(即，不是听觉毛细胞的细胞，例如，祖细胞或干细胞)分 化成为或趋于听觉毛细胞。可用于本文所述的任何方法的化合物是酚类化合物(或它们的硫类似物，例如， 苯基硫醇)，或这些化合物衍生的化合物，如苯基醚(或硫醚)，例如，直链或环状苯基醚。 例如，这些化合物可以用图1A-1H中所示的那些结构一般表示，并且具体示例于图1I-1K中 所示那些结构。任何酚类化合物(或硫类似物)，可以是中性或盐的形式，例如，其锂盐、钠 盐、钾盐或钙盐。这些酚类化合物及衍生物(或它们的硫类似物)，由图IA中的结构表示，其中R2、 R3> R4> R5和R6各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子且任选地 包含一个或多个N、0、S或F原子的部分；X为0(见图1B)或S (见图1C)；而且R1是H或包 含至多16个碳原子且任选地包含一个或多个N、0、S或F原子的部分。例如，包含至多16 个碳原子且任选地包含一个或多个为N、0、S或F原子的部分可以是烷氧基或三氟甲基。对于图1D，在特定的实施方案中，R1和R2共同定义一个或多个环系统，每个环系统 包含至多16个碳原子且任选地包含一个或多个N、0、S或F原子。对于图1E，在特定的实施方案中，R1是H ；即该化合物是酚类。对于图1F-1H，在某些实施方案中，酚类衍生物是环醚衍生物。例如，可通过引入 羰基(见图1F)和/或碳-碳双键(见图1G，其包含两者)，使得分子的环醚部分变刚性。 在其它实施方案中，可通过在环醚系统上引入第二环系统，使得这些环醚衍生物变刚性。在 特定的实施方案中，图IF的结构代表环醚衍生物，其中R8、R9、R1(1和R11各自独立地为H、F、 Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子且任选地包括一个或多个N、0、S或F原子 的部分。在其他特定的实施方案中，图IG的结构表示环醚衍生物，其中R12和R13各自独立 地为H、F、Cl、Br、I、0H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部 分。在其他特定实施方案，图IH的结构表示环醚衍生物，其中R14和R15共同定义一个或多 个环系统，每个环系统包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分， R16> R17和R18各自独立地为H、F、Cl、Br、I、0H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。本化合物是酰胺化合物和/或其相关化合物。这些化合物可以用图2A-2F所示的 那些结构一般表示，并且具体示例于图2G-2I中所示那些结构。任何所述酰胺或其相关化 合物可以是中性或盐的形式。所述苯甲酰胺化合物和/或其衍生物可以用图2A的结构表示，其中R2(1、R21、R22、R23 和R24各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多 个N、0、S或F原子的部分；并且R24和R26各自独立地为H或包含至多16个碳原子和任选 地一个或多个N、0、S或F原子的部分。在图2A的化合物中，R24和R25可以共同定义一个或多个环系统，每个环系统包含 至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子。这些化合物可以用图2B中的结构 表示。例如，这些化合物可以有如图2C和2D所示的结构，其中R27、R28、R29、R31和R32各自独 立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或 F原子的部分；且R26是H或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的 部分。其他苯甲酰胺相关的化合物及其衍生物，由图2E和2F中的结构描述，其中R33、 R34、R35> R36和R37各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选 地一个或多个N、0、S或F原子的部分；R39、R40, R41和R42各自独立地为H或包含至多16个 碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。本化合物是或可以包括，一个或多个杂环系统，如3、4、5、6或7元环系统，该环系 统包括一个以上杂原子，如0、S、或N。例如，一个或多个环系统可以包括1、2、3、4或甚至 5个杂原子，如0、S或N。在许多实施方案中，环系统是芳族。例如，这些化合物可以用图 3A-3X中所示的结构一般表示，并且具体示例于图3Y-3ZZ中所示那些结构。是或包含一个 或多个环系统的任何所述的化合物，可以是中性或盐的形式。是或者包括一个或多个杂环系统的化合物如图3A的结构表示，其中R43和R44各自 独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S 或F原子的部分；并且X为0(图3B)或S(图3C)。是或包含一个或多个杂环系统的化合物如图3D的结构表示，其中R45，R46和R48各 自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、 S或F原子的部分；而且R47和R49各自独立地为H、或包含至多16个碳原子和任选地一个 或多个N、0、S或F原子的部分。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3E的结构表示，其中R5(1、R51、R52和R53 各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、 0、S或F原子的部分；而且X为0 (图3F)或S (图3G)。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3H的结构表示，其中R55、R56和R57各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、 S或F原子的部分；而且R54是H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F 原子的部分。例如，在具体实施方案中，R54和R55可以共同定义一个或多个环系统，每个环 系统包含至多16个碳原子和任选地一个或多个为N、0、S或F原子，如图31所示。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3J的结构表示，其中R57、R59和R6tl各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、 S或F原子的部分；而且R58是H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F 原子的部分。例如，在具体实施方案中，R58和R59可以共同定义一个或多个环系统，每个环 系统包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子，如图3K所示。例如，在 具体实施方案中，R57及R6tl可以共同定义一个或多个环系统，每个环系统包含至多16个碳 原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子，如图3L所示。例如，在具体实施方案中，R57和 R60与R58和R59可以共同每个定义一个或多个环系统，每个环系统包含至多16个碳原子和 任选地一个或多个N、0、S或F原子，如图3M所示。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3N的结构表示，其中U62和R64各 自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、 S或F原子的部分；而且R63是H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F 原子的部分。例如，在具体实施方案中，R61和R62可以共同定义一个或多个环系统，每个环 系统包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子，如图30所示。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3P中的结构表示，其中R65和R66各自 独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S 或F原子的部分；而且X为0 (图3Q)或S (图3R)。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3S中的结构表示。其中R67、R68和R69 各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、 0、S或F原子的部分；且X为0 (图3T)或S (图3U)。是或包含一个或多个杂环系统的化合物由图3V中的结构表示，其中Rto、R71和R72 各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、 0、S或F原子的部分；且X为0 (图3W)或S (图3X)。可以在本文所述的任何方法中使用的本化合物，是或包含一个或多个苯环，如稠 合苯环系统，例如，是类黄酮、香豆素或其他类似系统的一部分的稠合苯环系统。例如，这种 化合物通常可以用图4A-4G所示的结构表示，并且具体示例于图4H和41中所示的那些结 构。是或包含一个或多个环系统的任何所述的化合物可以是中性或盐的形式。是或包含一个或多个苯环系统的化合物由图4A中的结构表示，其中R74、R75, R76, R77、R78和R79各自独立地为H、F、Cl、Br、I、0H、CN、N02、或包含至多16个碳原子和任选地一 个或多个N、0、S或F原子的部分。例如，在具体实施方案中，R76和R77可以共同定义一个或 多个环系统，每个环系统包含至多16个碳原子和任选地一个或多个为N、0、S或F原子，如 图4B所示。例如，图4B中的化合物可以用图4C和4D中的化合物表示，其中R81、R82、R83和 R84各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个 N、0、S或F原子的部分。例如，在其他具体实施方案中，其中R76和R77共同定义一个或多个 环系统，该化合物可以由图4E-4G中的那些结构表示，其中R85、R86、R87和R88各自独立地为 H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子 的部分；且R89是H或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。在一些实施方案中，可用于本文所述的任何方法的化合物，包含结合到五元杂环 系统的酰胺基，例如，包含多于一个杂原子(如0、S或N)的杂环系统。例如，一个或多个环 系统可以包含1、2、3、4或甚至5个杂原子，如0、S或N。在许多实施方案中，环系统是芳族。例如，这种化合物通常可以图5A-5E中所示的那些结构表示，并且具体示例于图5F-5G中所 示的那些结构。是或包含一个或多个环系统的任何所述的化合物可以是中性或盐的形式。在某些实施方案中，包含结合到五元杂环系统的酰胺基的化合物由图5A中的结 构表示，其中R92> R93和R94各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原 子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且R9tl和R91各自独立地为H、或包含至多 16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且X为0(图5B)或S(图5C)。 例如，在一些具体实施方案中，R9tl和R91可以共同定义一个或多个环系统，其中包含至多16 个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分(见图5D)。在其他某些实施方案中，包含结合到五元杂环系统的酰胺基的化合物由图5E中 的结构表示，其中R97和R98各自独立地为!^、(1、81~、1、0!1、^而2、或包含至多16个碳原 子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；而且R95、R96和R99各自独立地为H、或包含 至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。在一些实施方案中，可用于本文所述任何方法的化合物，包含融合到一个或多个 其他环系统的五元杂环系统，如，定义一个或多个4-、5-、6-、7_或8元环系统的环系统。例 如，这种化合物可以用图6A-60所示的那些结构一般表示，并且具体示例于图6P-6V中所示 那些结构。是或包含一个或多个环系统的任何所述的化合物，可以是中性或盐的形式。在一些实施方案中，包含融合到一个或多个其他环系统的五元杂环系统的化合物 由图 6A 表示，其中 R1(1。、R101 > R102> R103> R104 和 R105 各自独立地为 H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2, 或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；而且X为S (见图6B) 或0(见图6C)。在其它实施方案中，包含融合到一个或多个其他环系统的五元杂环系统的化合物 由图 6D 表示，其中 R106、R107> R108> R109> Rno> R 111、Rll2、Rll3、Rl 14 禾口 尺115 各自独立地为 H、F、Cl、 Br、I、0H、CN、N02、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且 X为S(见图6E)或0(见图6F)。在某些实施方案中，包含融合到一个或多个其他环系统的五元杂环系统的化合物 由图 6G 表示，其中 R118、R119、R120> R121 > R123 各自独立地为 H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含 至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且R123是H、或包含至多16 个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。在某些实施方案中，包含融合到一个或多个其他环系统的五元杂环系统的化合物 由图6H表示，其中R124、R125> R126和R127各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至 多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且R128和R129共同定义一个 或多个环，每个环包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子。例如，图6H 中的化合物可用图61表示，其中R13。、R131、R132和R128,各自独立地为H、F、Cl、Br、I、0H、CN、 NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且R129，是H、或 包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。在其他某些实施方案中，包含融合到一个或多个其他环系统的五元杂环系统的化 合物由图 6J 表示，其中 R134、R135、R136> R137> Ri40 和 R141 各自独立地为 H、F、Cl、Br、I、OH、CN、 NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且R139是H或包 含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。例如，并参考图6K，在具体的实施方案中，R140和R141共同定义一个或多个环，每个环包括包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子。在一些实施方案中，包含融合到一个或多个其他环系统的五元杂环系统的化合物 由图 6L 表示，其中 R143、R144> R145> R146 和 R147 各自独立地为 H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包 含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；而且X为0(见图6M)或 S(见图6N)。在另外一些实施方案中，包含融合到一个或多个其他环的五元杂环系统的化合物由图60表示，其中R149、R150、R151和R152各自独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至 多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分；且R153是H、或包含至多16个 碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的部分。在一些实施方案中，可用于本文所述的任何方法的化合物，是吡啶或嘧啶。例如， 这种化合物可以用图7A-7D所示的结构一般表示，并且具体示例于图7E和7D中所示那些 结构。为吡啶或嘧啶的任何所述化合物，可以是中性或盐的形式，例如，其盐酸盐。在一些实施方案中，图7A描述了吡啶化合物，其中R155、R156、R157、R159和R16tl各自独 立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或 F原子的部分。在一些特定的实施方案中，Rire和R157(见图7B)，或Rire和R157以及R159和 R160(见图7C)共同定义一个或多个环，每个环包括包含至多16个碳原子和任选地一个或多 个N、0、S或F原子。在一些实施方案中，图7D描述了嘧啶化合物，其中R161、R162、R163和R164各自独立地 为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原 子的部分。在一些实施方案中，可用于本文所述的任何方法的化合物是苯胺或苯胺衍生物。 例如，这种化合物可以用图8A和8B所示的那些结构一般表示，并且具体示例于图8C中所 示那些结构。为吡啶或嘧啶的任何所述化合物，可以是中性或盐的形式。在一些实施方案中，图8A描述了苯胺化合物，其中R17tl、R171、R172、R173和R174各自独 立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或 F原子的部分；且R175和R176各自独立地为H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个 N、0、S或F原子的部分。在一些实施方案中，图8B描述了苯胺衍生化合物，其中R178、R179、R18tl和R181各自独 立地为H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NO2、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或 F原子的部分；且R177是H、或包含至多16个碳原子和任选地一个或多个N、0、S或F原子的 部分。在一些实施方案中，这些化合物可以具有图6G中描述的式
权利要求
一种药物组合物，其包含能够增加细胞中Atoh1表达的化合物，或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中R122是-Z-Ra。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中Z是0。
5.如权利要求3所述的药物组合物，其中Ra是C7-C11芳烷基，或包括6-11个原子的杂 芳烷基，其由1-5个Re任选地取代。
6.如权利要求3所述的药物组合物，其中Ra是C7-C11芳烷基，其由1-5个Re任选地取代。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其中Ra是苄基或苯乙基，其中它们每个的苯基部 分由1-2个Re任选地取代。
8.如权利要求2所述的药物组合物，其中R123是C6-Cltl芳基或包含5-10个原子的杂芳 基，它们每个由1-5个Rd任选地取代。
9.如权利要求2所述的药物组合物，其中R123是C6-Cltl芳基，其由1-5个Rd任选地取代。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其中R123是苯基，其由1-2个Rd任选地取代。
11.如权利要求2所述的药物组合物，其中R118、R119、R12Q和R121中的一个是卤代或NO2, 并且其他的是氢。
12.如权利要求2所述的药物组合物，其中R122是-Z-Ra，其中Ra是C7-C11芳烷基、或包含6-11个原子的杂芳烷基，其由1-5个Re 任选地取代；并且R123是C6-Cltl芳基或包含5-10个原子的杂芳基，它们每个由1-5个Rd任选地取代。
13.如权利要求2所述的药物组合物，其中R122是-Z-Ra，其中Z是0，并且Ra是C7-C11芳烷基，其由1-5个Re任选地取代；并且 R123是C6-Cltl芳基，其中由1-5个Rd任选地取代；并且 R118> RH9> R120和Rm中的每个独立地选自H、卤代和NO2。
14.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述化合物是CP-0000540，或其药学上可接受的盐。
15.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
16.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
17.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
18.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
19.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
20.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物具有下式
21.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物选自 4-(4-氯苯基)-1-(5!1-吡啶并[5，4-b]吲哚_4_基)-IH-吡唑-3-胺；(6-氯-1- (2-氯苄氧基)-2-苯基-IH-苯并[d]咪唑； 6-氯-1- (2-氯苄氧基)-2- (4-甲氧基苯基)-IH-苯并[d]咪唑； 6-氯-2- (4-甲氧基苯基)-1- (4-甲基苄氧基)-IH-苯并[d]咪唑； 6-氯-1-(3，5- 二甲基苄氧基)-2- (4-氧基苯基)-IH-苯并[d]咪唑； 6-氯-1- (4-甲氧基苄氧基)-2- (4-甲氧基苯基)-IH-苯并[d]咪唑；(1-(4-甲基苄氧基)-6-硝基-2-苯基-IH-苯并[d]咪唑； 4-(1Η-苯并[d]咪唑-2基)苯酚；(2，5_ 二氯-N-((l-甲基-IH-苯并[d]咪唑-2基)甲基)苯胺；(4-(2- (1-甲基-IH-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)苯胺；(2-((2-甲氧基苯氧基)甲基)-IH-苯并[d]咪唑；(2- ((4-氟苯氧基)甲基)-1-甲基-IH-苯并[d]咪唑；(2-(苯硫基甲基)-IH-苯并[d]咪唑；(3-(6-甲基-IH-苯并[d]咪唑-2基)-2H-色烯-2-亚胺； 2_(邻甲苯氧基甲基)-1Η-苯并[d]咪唑；(2-(4-甲氧基苯基)-1-苯乙基-IH-苯并[d]咪唑 N-(6-溴苯并[d]噻唑-2-基)噻吩-2-甲酰胺； N-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-甲基-IH-吡唑-5-甲酰胺； 2_ (4-氟苄硫基)苯并[d]噻唑；(5-氯-N-甲基苯并M噻唑-2-胺； Ν-(2-(1Η-苯并M咪唑_2基)苯基)异丁酰胺；N-(6-乙酰氨基苯甲酸M噻唑-2-基)呋喃-2-甲酰胺； N-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺； 2-(苯并M噁唑-2-基硫代)-N- (2-氯苯基)乙酰胺； 5-氯-2-苯基苯并M噁唑； 5-甲基-2-间甲苯苯并[d]噁唑；(2- (4-异丁氧基苯基)-3-(萘-2-基)-2，3- 二氢喹唑啉-4 (IH)-酮；N- (2- (2- (4-氟苯基)-2-氧代乙硫基)-4-氧代喹唑啉-3 (4H)-基)苯甲酰胺；(2_ (4-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)_1，4-二氢苯并[4，5]咪唑并[l，2_a]嘧啶；(2-(3-吡啶基)-4-(4-溴苯基)-1，4-二氢苯并[4，5]咪唑并[l，2_a]嘧啶；N-仲丁基-1，7，7-三甲基-9-氧代-8，9-二氢-7H-呋喃并[3,2-f]色烯-2-甲酰胺； N-(3-氨基甲酰基-5，6- 二氢-4H-环戊二烯并[b]噻吩-2-基)呋喃-2-甲酰胺；(3-氯-N-(5-氯吡啶-2-基)苯并[b]噻吩-2-甲酰胺；(3-氯-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)苯并[b]噻吩-2-甲酰胺； N- (3- (5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-IH-吡唑-5基)乙酰胺； 2_ (萘-2-基)-IH-吲哚； 2-(吡啶-2基)-IH-吲哚；N- (2-氯苯基)-2- (1H-吲哚-3基)-2-氧代乙酰胺； 2-间甲苯基喹啉；(2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)喹啉；·2-(1Η-苯并[d] [1,2,3]三唑-1-基)-N-(2，3-二氢-IH-茚-2-基)乙酰胺；·1-苯乙醇-IH-苯并[d][1,2,3]三唑； 7- (4-氟苄氧基)-2H-色烯-2-酮；N- (2,4- 二氯苯基)-8-甲氧基-2H-色烯-3-甲酰胺； N- (3-氯苯基)-8-甲基-3，4- 二氢-1 (2H)-碳硫代酰胺； 7-甲氧基-5-甲基-2-苯基-4H-色烯-4-酮；·2-(3，4-二甲基)喹喔啉；·4-溴-N-(5-氯吡啶-2-基)苯甲酰胺；·3_氨基_6，7，8，9-四氢-5H-芳庚并[e]噻吩并[2，3_b]吡啶_2_甲酰胺； (Z)-3-甲基-N' _(烟酰氧基)苯甲亚胺酰胺； N，N- 二乙基-6-甲氧基噻吩并[2，3-b]喹啉-2-甲酰胺； 6-(4-甲氧基苯基)-1，2，3，4_四氢-1，5-萘啶；·5-溴-N-(2-(苯硫基)乙基)烟酰胺；N-(6-甲基吡啶-2-基)-2，3-二氢苯并[b][l，4] 二噁烯-6-甲酰胺； 2-(4-甲基苄硫基)噁唑[4，5-b]吡啶； N- (2-甲氧基乙基)-5-对甲苯嘧啶-2-胺； 4-(5-(苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2基)吗啉；·4-(5- (4-氟苯基)嘧啶-2基)吗啉； N- (4-溴-3-甲基)喹唑啉-4-胺； N-(4-甲氧基苯基)喹唑啉-4-胺； N- (3-甲氧基苯基)-9H-嘌呤-6-胺；N，N- 二乙基-1-间甲苯-IH-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺； (5-(4-溴苯基)呋喃-2-基)(吗啉代)甲酮； (Z) -4-溴-N'-(呋喃-2-羰氧基)苯甲亚胺酰胺； N-(4-碘苯基)呋喃-2-甲酰胺；·5-(5-(2，4-二氟苯基)呋喃-2-基)-1-(甲磺酰)-IH-吡唑；·1-(3-氨基-5-(4-叔丁基苯基)噻吩-2-基)乙酮；N- (3-氰基-4，5，6，7-四氢苯并[b]噻吩-2-基)-2-氟苯甲酰胺；N-(5-氯吡啶-2-基)噻吩-2-甲酰胺；N-(2-(4-氟苯氧基)乙基)噻吩-2-甲酰胺；·2，5-二甲基-N-苯基-1-(噻吩-2-基甲基)-IH-吡咯-3-甲酰胺；N-(3-氰基噻吩-2-基)-4_异丙氧基苯甲酰胺；·2-(4-甲氧基苯氧基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；·4- (4-甲氧基苯基)-N- (3-甲基吡啶-2-基)噻唑-2-胺； 4_ (联苯-4-基)噻唑-2-胺；·4- (4- (4-甲氧基苯基)噻唑-2基)-3-甲基异噁唑-5-胺； N- (2-甲氧基苯基)-4-苯基噻唑-2-胺；·1-(4-氨基_2-(间甲苯基氨基)噻唑-5基)-2-甲基丙烷-1-酮； 4-(4-氯苯基)-1-(5!1-嘧啶并[5，4-B]吲哚_4_基)-IH-吡唑-3-胺；2-(4-氯苯基)-6-乙基-5-甲基吡唑[1,5-a]嘧啶_7(4H)_酮； 5-甲氧基-2- (5-苯基-IH-吡唑-3-基)苯酚；(3-(4-溴苯基)-1-苯基-IH-吡唑-4-基)甲醇； ^(2，5-二氯苯基)-1_乙基-IH-吡唑-3-甲酰胺；4-氯-1-甲基-N-(2-氧代-2-苯乙基)-IH-吡唑-3-甲酰胺；N- (3- (5-叔丁基-2-甲基呋喃-3-基)-IH-吡唑-5基)苯甲酰胺； N-(5-甲基异噁唑-3-基)苯并[d][l，3]间二氧杂环戊烯-5-甲酰胺 (5-(4-溴苯基)异噁唑-3基)(吗啉代)甲酮； N- (4-溴苯基)-5-异丙基异噁唑-3-甲酰胺；5-((4-氯-2-甲基苯氧基)甲基)-3-(批啶-4-基)-1，2，4_噁二唑； 5-(2-甲氧基苯基)-3-对甲苯基-1，2，4-噁二唑；5-(苯氧甲基)-3-(吡啶-2-基)-1，2，4-噁二唑；5-(2-氯-4-甲基苯基)-3-(卩比啶-3-基)-1，2，4-噁二唑；3-(2-氯苯基)-5-对甲苯基-1，2，4-噁二唑；5-(哌啶-1-基甲基)-3-对甲苯基-1，2，4-噁二唑； 5- (4-溴苯基)-3-(吡啶-3-基)-1，2，4-噁二唑； 5- (2-溴苯基)-3- (4-溴苯基)-1，2，4-噁二唑;5-(2-溴-5-甲氧基苯基)-3-(噻吩-2-基)-1，2，4-噁二唑；3-(2-氟苯基)-N-(3-(哌啶-1-基)丙基)_1，2，4-噁二唑-5-胺； 2- (2-氯苄氧基)-N- (4-氟苯基)胼硫代酰胺；2-(甲基氨基)-N-苯乙基苯甲酰胺；4-对叔丁基-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)苯甲酰胺； 2-苯基-5-邻甲苯基-1，3，4-噁二唑；4- (3- (4-氯苯基)-4，5- 二氢-IH-1,2,4-三唑-5-基)-N, N- 二甲基苯胺； 7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)_1，IOb-二水合螺[苯并[e]吡唑并[1，5_C][1，3]噁 嗪_5，1'-环己烷]；6-氧代-2-(4- (3-(三氟甲基)苯氧基)苯基)-1，4，5，6-四氢吡啶_3_腈； 6-(4-甲氧基苯基)咪唑并[2，l-b]噻唑；2-(2-溴苯氧基)-N-(4H-1，2，4-三唑-3-基)乙酰胺；1-(二氢吲哚-1-基)-2-苯氧基乙酮；及2-(4_氯苯基)-6，7，8，9_四氢苯并[e]咪唑并[l，2_b][1,2,4]三嗪、或其药学上可接 受的盐。
22.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体选自由缓冲液、氨 基酸、尿素、醇、抗坏血酸、磷脂、多肽、EDTA、氯化钠、脂质体、甘露醇、山梨糖醇、水和甘油组 成的组。
23.一种治疗受治者的方法，所述方法包括选择需要治疗的患者，并向所述受治疗者施 用治疗有效量的权利要求1所述的药物组合物。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述需要治疗的患者患有，或有风险发展为与听 觉毛细胞损失相关的听力障碍或不平衡疾患的人，并且其中所述药物组合物局部地施用于所述受治疗者的内耳，并且增加所述患者内耳中的具有听觉毛细胞特性的细胞的数量。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述药物组合物通过注射进入耳蜗腔中的一个或多个，进入到内耳道的听觉神经干，或进入鼓阶来施用。
26.如权利要求24所述的方法，其中所述听觉毛细胞是外听觉毛细胞或内听觉毛细胞。
27.如权利要求23所述的方法，其中所述需要治疗的患者患有与异常细胞增殖相关的 疾患，并且其中所述治疗局部施用于所述增殖细胞。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述疾患是胃肠癌症。
29.如权利要求27所述的方法，其中所述疾患选自由食道癌、胆囊癌、肝癌、胰腺癌、胃 癌、小肠癌、大肠癌、结肠癌和直肠癌组成的组。
30.如权利要求23所述的方法，其中所述需要治疗的患者患有，或有风险发展为小脑 颗粒神经元缺乏、关节病或骨关节炎。
31.一种治疗患有与听觉毛细胞损失相关的听力障碍或者不平衡疾患的受治疗者的方 法，所述方法包括选择需要治疗的受治疗者；获得能够分化为听觉毛细胞的细胞群体；将所述细胞群体与有效量的权利要求1所述的化合物的至少一种在体外接触足以增 加所述群体中具有分化的听觉毛细胞特性的细胞的数量的时间；将所述细胞群体或者其亚群施用于所述患者的耳部，由此治疗所述受治疗者。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述能够分化为听觉细胞的细胞群体选自由干细 胞、祖细胞、支持细胞、Deiters细胞、柱细胞、内指状细胞、顶盖细胞、Hensen细胞和生殖细 胞组成的组。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述干细胞是成体干细胞。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述成体干细胞源自内耳、骨髓间质、皮肤、脂肪、 肝脏、肌肉或血液。
35.如权利要求32所述的方法，其中所述干细胞是胚胎干细胞或从胎盘或脐带获取的 干细胞。
36.如权利要求32所述的方法，其中所述祖细胞源自内耳、骨髓、间质、皮肤、脂肪、肝 脏、肌肉或血液。
37.如权利要求31所述的方法，其中施用所述细胞群体包括(a)将所述细胞注射到所 述耳蜗腔、注射到所述内耳道中的听觉神经干、或注射进入所述鼓阶；或者(b)将所述细胞 植入耳蜗植入物。
38.如权利要求31所述的方法，还包括向所述受治疗者施用权利要求1所述的药物组 合物。
39.如权利要求38所述的方法，其中将所述药物组合物局部地施用于所述患者的耳部。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述药物组合物的施用是通过作用于所述耳蜗 腔、所述内耳道中的听觉神经干或所述鼓阶，如果存在，作用于耳蜗植入物。
41.一种在体外增加细胞群体中具有所述听觉毛细胞特征的细胞的数量的方法，所述方法包括获得能够分化为听觉毛细胞的细胞群体，用有效量的权利要求1所述的化合物中 的至少一种在体外与所述细胞群接触足以增加所述细胞群体中具有所述听觉毛细胞特性 的细胞的数量的时间。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述能够分化为毛细胞的细胞群体选自由干细 胞、内耳干细胞、成体干细胞、源自骨髓的干细胞、胚胎干细胞、间质干细胞、皮肤干细胞、脂 肪源干细胞、祖细胞、内耳祖细胞、支持细胞、Deiters细胞、柱细胞、内指状细胞、顶盖细胞、 Hensen细胞、和生殖细胞组成的组。
43.一种细胞群体，其由权利要求41所述的方法制备。
44.一种试剂盒，其包括权利要求41所述的方法制备的细胞群体。
45.一种试剂盒，其包括权利要求1所述的药物组合物和信息材料。
46.如权利要求45所述的试剂盒，还包括适用于将所述药物组合物施用于所述受治疗 者的内耳的设备。
47.如权利要求46所述的试剂盒，其中所述装置是灵活的套管或预装的单剂量注射。
48.权利要求1-22中任一项所描述的化合物作为药物的用途。
49.权利要求1-22中任一项所描述的化合物用于制备治疗与听觉毛细胞损失相关的 听力障碍或不平衡疾患的药物的用途。
50.权利要求1-22中任一项所描述的化合物用于制备治疗与异常细胞增殖相关的疾 患的药物的用途。
51.一种权利要求1-22中任一项所述的化合物，其用于治疗与听觉毛细胞损失相关的 听力障碍或不平衡疾患。
52.一种权利要求1-22中任一项所述的化合物，其用于治疗与异常细胞增殖相关的疾患。
全文摘要
本发明一般提供化合物、药物组合物和其使用方法，其包括导致在生物细胞中Atoh1基因(如，Hath1)表达增加的方法。更具体地，本发明涉及将得益于Atoh1表达增加的疾病和/或疾患的治疗，例如，与听觉毛细胞损失有关的听力障碍或不平衡疾患，或与异常细胞增殖有关的疾患。
文档编号A61K31/341GK101990433SQ200980112358
公开日2011年3月23日 申请日期2009年2月9日 优先权日2008年2月7日
发明者乔桑俊, 乔立新, 凯瑟琳·西布, 格雷戈里·D·库尼, 艾伯特·埃奇, 马西·格里克斯曼 申请人:马萨诸塞眼科耳科诊所;布里格姆及妇女医院股份有限公司