专利名称：二苯乙烯类化合物及其在制备用于治疗和预防前列腺肥大有关疾病的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及二苯乙烯类化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、前药。本发明还涉及所述二苯乙烯类化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、前药的新用途，尤其是在制备用于治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的药物中的用途。本发明还涉及包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的方法。
背景技术：
前列腺肥大是指因性激素分泌减少或炎性增生导致前列腺内纤维细胞增生，压迫尿道而引起的一系列症状的疾病。前列腺肥大在更年期的发生率相当高，应进行早期预防和治疗。前列腺肥大更是男性老年人极为常见的疾病，据临床医学统计数字表明50岁以上男子中，良性前列腺肥大(benign prostatic hypertrophy，BPH)的发病率约为40％～50％，而65岁以上老年男子中BPH的发病率高达60％～65％。随着我国已迈入“老龄化社会”，估计全国患有前列腺肥大及其它前列腺相关疾病的人约有上千万之众。因此这是一个极应重视的问题。
据我国学者研究结果表明很多传统天然药物亦有缓解前列腺肥大症病人的尿频、尿急症状的效果，虽然这些传统天然药物可望成为未来的前列腺肥大症天然治疗药物，但是开发针对前列腺肥大有关疾病具有确切疗效的药物仍然是本领域技术人员努力探索的研究课题。
发明内容
本发明的目的提供一类新的可用于治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的药物。本发明人发现，本发明式I化合物具有良好的治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的作用，从而可用于前列腺肥大有关疾病的治疗和预防。本发明人基于上述发现而得以实现本发明。
发明简述 本发明第一方面提供以下的式I化合物
其中， R1、R2、R3、和R4各自独立地选自H，羟基，直链或支链的C1-6烷基，羟基取代的C1-6烷基，C1-6烷基氧基，C6-10芳基(例如苯基或萘基)，含糖的苷例如-O-葡糖基(即，-O-glucosyl，例如-O-β-D葡糖基)，葡糖基(即，-glucosyl)，或其药学可接受的盐、溶剂合物、前药。
在本发明第一方面式I化合物的一个实施方案中，其中所述的R1、R2、R3、和R4各自独立地选自H，羟基，C1-6烷基氧基，-O-葡糖基。
在本发明第一方面式I化合物的一个实施方案中，其中所述的式I化合物选自下表所示化合物
根据本发明第一方面任一项的式I化合物，其可用于治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病。
在本发明第一方面的式I化合物的一个实施方案中，其中所述的前列腺肥大是良性前列腺肥大。
本发明第二方面提供了一种植物提取物，其中包含至少一种以下的式I化合物
其中， R1、R2、R3、和R4各自独立地选自H，羟基，直链或支链的C1-6烷基，羟基取代的C1-6烷基，C1-6烷基氧基，C6-10芳基(例如苯基或萘基)，含糖的苷例如-O-葡糖基(即，-O-glucosyl，例如-O-β-D葡糖基)，葡糖基(即，-glucosyl)，或其药学可接受的盐、溶剂合物、前药。
在本发明第二方面植物提取物的一个实施方案中，其中所述的R1、R2、R3、和R4各自独立地选自H，羟基，C1-6烷基氧基，-O-葡糖基。
在本发明第二方面植物提取物的一个实施方案中，其中所述的式I化合物选自下表所示化合物
在本发明第二方面植物提取物的一个实施方案中，其中包含选自以下的至少一种化合物 3，4’，5-三羟基茋， 3，3’，4’，5-四羟基茋-4’-O-β-D-葡萄糖苷， 3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷， 3，5-二羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷，和 3，4’，5-三羟基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷。
根据本发明第二方面任一项的植物提取物，其是从选自以下的植物提取得到的葡萄科植物例如葡萄属、蛇葡萄属；豆科植物例如落花生属、决明属、槐属；百合科植物例如藜芦属；桃金娘科植物例如桉属，蓼科植物例如藏边大黄、河套大黄、天山大黄、华北大黄或虎杖。
根据本发明第二方面任一项的植物提取物，其是从选自以下的植物提取得到的蓼科植物例如藏边大黄、河套大黄、天山大黄、华北大黄或虎杖。
根据本发明第二方面任一项的植物提取物，其是从选自以下的植物提取得到的藏边大黄、河套大黄、天山大黄、华北大黄或虎杖。
根据本发明第二方面任一项的植物提取物，其是从选自以下的植物提取得到的藏边大黄、河套大黄、华北大黄或虎杖。
根据本发明第二方面任一项的植物提取物，其是通过以下方法获得的i)使用90-98％乙醇(例如约95％乙醇)提取，ii)用乙醚或氯仿脱脂，iii)用乙酸乙酯萃取或洗脱处理，和任选的再用正丁醇萃取，iv)进行硅胶柱层析(例如用60-100目硅胶)，用乙酸乙酯洗脱和/或用乙酸乙酯-甲醇梯度(例如4∶1～2的梯度)洗脱。在一个实施方案中，经上述硅胶柱层析洗脱得到的提取物进一步用丙酮或者用丙酮-水重结晶，可以得到本发明第一方面的式I化合物。因此上述包括提取、脱脂、萃取或洗脱、层析、重结晶的方法可以作为制备本发明第一方面式I化合物的方法。
本发明第三方面提供了制备本发明第一方面任一项所述式I化合物或者本发明第二方面任一项所述植物提取物的方法，其包括以下步骤i)使用90-98％乙醇(例如约95％乙醇)提取，ii)用乙醚或氯仿脱脂，iii)用乙酸乙酯萃取或洗脱处理，和任选的再用正丁醇萃取，iv)进行硅胶柱层析(例如用60-100目硅胶)，用乙酸乙酯洗脱和/或用乙酸乙酯-甲醇梯度(例如4∶1～2的梯度)洗脱，得到含有本发明式I化合物的植物提取物；经上述硅胶柱层析洗脱得到的提取物进一步用丙酮或者用丙酮-水重结晶，可以得到本发明第一方面的式I化合物。
本发明第四方面提供了本发明第一方面任一项所述式I化合物或者本发明第二方面任一项所述植物提取物在制备用于治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的药物中的用途。
在本发明第四方面的用途的一个实施方案中，其中所述的前列腺肥大是良性前列腺肥大。
本发明第五方面提供了一种药物组合物，其包含至少一种本发明第一方面任一项所述的式I化合物或者至少一种本发明第二方面任一项所述植物提取物，以及任选的药学可接受的载体。
根据本发明第五方面任一项所述的药物组合物，其中包含治疗和/或预防有效量的至少一种本发明第一方面任一项所述的式I化合物或者至少一种本发明第二方面任一项所述植物提取物。
根据本发明第五方面的药物组合物，其可用于治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病。
在本发明第五方面的药物组合物的一个实施方案中，其中所述的前列腺肥大是良性前列腺肥大。
本发明第六方面提供了一种治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的方法，其包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明第一方面任一项的式I化合物或者本发明第二方面任一项所述植物提取物。
在本发明第六方面的方法的一个实施方案中，其中所述的前列腺肥大是良性前列腺肥大。
发明详述 下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
根据本发明，本发明的式I化合物可来自于天然植物或通过合成得到。例如式I化合物可从天然植物如葡萄科的葡萄属、蛇葡萄属；豆科的落花生属、决明属、槐属；百合科的藜芦属；桃金娘科的桉属，蓼科植物的藏边大黄、河套大黄、天山大黄、华北大黄或虎杖等中提取分离得到。
在本发明的结构式I中，其中的亚乙烯基为反式结构，为了命名方便，苯环上的碳原子根据以下结构所示标示
根据本发明，本发明所述术语“前列腺肥大有关疾病”是指与前列腺肥大相关的疾病、病症、病情等，或者是指因前列腺肥大所致的并发症、继发症等。在本发明的一个实施方案中，所述术语“前列腺肥大有关疾病”是指与前列腺肥大。
根据本发明，本发明所述术语“前列腺肥大”优选是指良性前列腺肥大。
根据本发明，本发明中所用术语受试者意指哺乳动物如人类。
根据本发明，术语“烷基”是指包含1-6个碳原子的直链或支链的低级烃基，其中可以含有一个或多个双键或三键，优选是饱和的烷基。本发明烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、烯丙基、丙烯基、丙炔基，优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、新戊基。
本发明式I化合物可通过例如本发明提及的从植物中提取的方法获得，也可以通过采用本领域技术人员已有的知识通过化学合成方法得到。本发明植物提取物是通过本发明教导的方法或本领域技术人员已知的方法提取得到。在本发明提取或合成式I化合物或植物提取物的方法中，反应所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。以上反应方案中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。或者，本领域技术人员也可以根据本发明第三方面方法制备得到本发明未具体列举的其它式I化合物或者包含这些式I化合物的植物提取物。
根据本发明，化学结构式中的术语“Glc”表示葡糖基。
根据本发明，二苯乙烯类衍生物可按已知方法配成肠道或非肠道给药的制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂等。
本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。根据本发明，所述的“组合物”可以与“药物组合物”互换使用。
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物或提取物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～50mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天，例如介于0.1～10mg/kg体重/天，例如介于0.01～0.1mg/kg体重/天，例如介于10～50mg/kg体重/天。在口服用药的情况下，对于人用剂量，0.01～100mg/kg体重/天的剂量是比较优选的，0.01～50mg/kg体重/天的剂量是更加优选的，0.01～10mg/kg体重/天的剂量是更进一步优选的。本发明植物提取物也具有与上述式I化合物相同的特征，例如上述针对式I化合物的使用剂量，也适用于本发明的植物提取物，当然，在确定植物提取物的剂量时，其可按含有相应式I化合物相当的量使用。例如在式I化合物以5mg/kg体重/天给予人用的剂量下，采用含有式I化合物的植物提取物给药时，该植物提取物的剂量为其中含有5mg/kg/天的式I化合物的量。
本发明人惊奇地发现，式I化合物或者含有式I化合物的植物提取物可以有效地用于预防和/或治疗前列腺肥大有关的疾病。
具体实施例方式 下面通过具体实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
实施例13，4’，5-三羟基茋(化合物S)的制备 取虎杖饮片，加8倍量95％乙醇回流提取三次，每次2小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩物用水分散，乙醚萃取脱酯，而后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。分别回收，得到乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位。乙酸乙酯部位进行硅胶柱层析(60-100目)，以乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，得S粗品(即本发明的植物提取物)，丙酮重结晶即得。正丁醇部位进行硅胶柱层析，乙酸乙酯梯度洗脱，可得S粗品(即本发明的植物提取物)，丙酮-水重结晶即得。
鉴定 化合物S为白色针晶，mp253-255℃。易熔于甲醇、乙醇、丙酮等。FeCL3反应绿色，紫外灯下呈蓝紫色荧光。UVλmaxMeOH(nm)216，303。IR(KBr)cm-13240，1880，1585，965。1H NMR(丙酮-d6)δ8.79(1H，Br.s，4′-OH)，8.48(2H，Br.s，3，5-OH)，7.36(2H，dd，J＝2.4/8.5Hz，H-2′，6′)，6.95(1H，d，J＝16.2Hz，H-β)，6.81(1H，d，J＝16.2Hz，H-α)，6.78(2H，dd，J＝2.4/8.5Hz，H-3′，5′)，6.77(2H，d，J＝2.2Hz，H-2，6)，6.48(1H，t，J＝2.4Hz，H-4)。13C NMR(丙酮-d6)δ159.47(C-3，5)，158.08(C-4′)，140.73(C-1)，129.78(C-1′)，128.98(C-2′，6′)，128.60(C-α)，126.74(C-β)，116.29(C-3′，5′)，105.47(C-2，6)，102.51(C-4)。EI-MS m/z228(M+，100)，227(M+-1)，211(M+-OH)，181，157，115，91，76。化合物S鉴定为3，4′，5-三羟基茋(3，4′，5-trihydroxystilbene)，即白藜芦醇(resveratrol)。
3，4′，5-三羟基茋(resveratrol) 实施例23，3’，4’，5-四羟基茋-4’-O-β-D-葡萄糖苷(化合物S-1)的制备 取藏边大黄根及根茎，加8倍量95％乙醇回流提取三次，每次2小时。合并提取液，减压浓缩。醇提物以硅藻土分散，干燥。以氯仿洗去脂溶性成分，继以乙酸乙酯洗脱，得到乙酸乙酯可溶部分。该部分进行硅胶柱层析(60-100目)，以乙酸乙酯洗脱，继以乙酸乙酯/甲醇(4∶1～2)洗脱，即得粗品(即含有化合物S-1的本发明的植物提取物)，粗品经水-丙酮重结晶即得S-1。
鉴定 化合物S-1为白色无定形粉末(稀丙酮)，mp.138-140℃。紫外灯光下呈蓝紫色荧光，Molisch反应阳性。1H NMR(丙酮-d6)δppm7.14(1H，d，J＝8.5Hz，H-5′)，7.06(1H，d，J＝2.1Hz，H-2′)，6.97(1H，d，J＝16.3Hz，H-β)，6.94(1H，dd，J＝2.1/8.5Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J＝16.3Hz，H-α)，6.52(2H，d，J＝2.1Hz，H-2，6)，6.24(1H，t，J＝2.1Hz，H-4)，4.79(1H，d，J＝7.5Hz，anomeric-H)，3.9-3.3(sugar-H)；13C NMR(丙酮-d6)δppmaglycone 159.5(C-3，5)，148.5(C-4′)，146.0(C-3′)，140.3(C-1)，134.2(C-1′)，128.6(C-α，β)，119.3(C-5′)，118.9(C-6′)，114.2(C-2′)，105.6(C-2，6)，104.0(C-4)，glucosyl102.9(C-1″)，77.8(C-3″)，77.1(C-5″)，74.4(C-2″)，70.9(C-4″)，62.2(C-6″)。1HNMR和13CNMR数据与Yoshiki Kashiwada等(2Yoshiki Kashiwada etal.Chem.Pharm.Bull.1988，36(4)1545)报道的数据一致，化合物E1鉴定为3，3′，4′，5-四羟基茋-4′-O-β-D-葡萄糖苷(Piceatannol-4′-O-β-D-glucopyranoside)。
3，3’，4’，5-四羟基茋-4’-O-β-D-葡萄糖苷(Piceatannol-4′-O-β-D-glucopyranoside) 实施例33，3’，5-三羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(化合物S-2)的制备 取河套大黄根及根茎，与实施例2所述相同或相似的方法进行，即可得到含有化合物S-2的植物提取物或者经重结晶得到化合物S-2。
鉴定 化合物S-2为白色针状结晶(稀甲醇)，mp.228-230℃。紫外灯光下呈蓝紫色荧光，Molisch反应阳性。1H NMR(丙酮-d6)δppm7.07(1H，d，J＝2.0Hz，H-2′)，7.02(1H，d，J＝16.5Hz，H-β)，6.96(1H，dd，J＝2.0/8.3Hz，H-6′)，6.90(1H，d，J＝7.9Hz，H-5′)，6.89(1H，d，H＝16.5Hz，H-α)，6.77(1H，Br.s，H-2)，6.66(1H，Br.s，H-2)，6.48(1H，t，J＝1.8Hz，H-4)，4.90(1H，d，J＝7.7Hz，anomeric-H)，3.82(3H，s，-OCH3)，4.0-3.3(sugar-H)；13C NMR(丙酮-d6)δppmaglycone160.1(C-5)，159.5(C-3)，148.4(C-4′)，147.5(C-3′)，140.5(C-1)，131.5(C-1′)，129.5(C-β)，127.2(C-α)，119.7(C-6′)，113.3(C-2′)，112.5(C-5′)，108.0(C-2)，106.5(C-6)，103.8(C-4)，56.2(-OCH3)；葡糖基101.9(C-1″)，77.7(C-3″，5″)，74.4(C-2″)，71.1(C-4″)，62.5(C-6″)。化合物S-2鉴定为3，3′5-三羟基-4′-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(3，3′，5-trihydroxy-4′-methyloxy stilbene-3-O-β-D-glucoside，即rhaponticin)。
3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(rhaponticin) 实施例43，5-二羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(化合物S-3)和3，4’，5-三羟基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(化合物S-5)的制备。
分别和/或同时取华北大黄根及根茎及虎杖，与实施例2所述相同或相似的方法进行，即可得到含有化合物S-3和/或S-5的植物提取物或者经重结晶得到化合物S-3和/或S-5。
化合物S-3为无色针晶(丙酮)，mp210℃。紫外灯光下呈蓝紫色荧光，Molisch反应阳性。UVλmaxMeOH(nm)216，296。IR(KBr)cm-13455，3320(OH)，1595，1505，830，772，675。1H NMR(丙酮-d6)δppm7.51(2H，d，J＝8.6Hz，H-2′，6′)，7.08(1H，d，J＝16.6Hz，H-α)，6.94(1H，d，J＝16.6Hz，H-β)，6.91(1H，d，J＝8.6Hz，H-3′，5′)，6.70(2H，Br.s，H-2，6)，6.35(1H，t，J＝2.2Hz，H-4)，4.81(2H，d，J＝7.6Hz，anomerica-H)，3.76(3H，s，OCH3)，3.3-3.9(6H，m，sugar-H)；13C NMR(丙酮-d6)δ159.2(C-5)，158.5(C-3)，159.0(C-4′)，139.0(C-1)，129.2(C-1′)，128.0(C-β)，127.3(C-2′，6′)，126.0(C-α)，114.5(C-3′，5′)，107.2(C-6)，104.8(C-2)，103.0(C-4)，55.2(OCH3)葡糖基101.8(C-1″)，74.0(C-2″)，77.2(C-3″)，70.8(C-4″)，76.8(C-5″)，61.8(C-6″)。FAB-MS m/z404(M+)，242(M+-Glc)。以上数据与敏德等(1敏德等.中国中药杂志，1998，23(8)486)报道的数据一致，因此，S-3鉴定为3，5-二羟基-4′-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(3，5-dihydroxy-4′-methyloxy stilbene-3-O-β-D-glucoside，即desoxyrhaponticin)。
3，5-二羟基-4′-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(desoxyrhaponticin) 化合物S-5为白色长针晶(丙酮-水)，mp228-230℃。易溶于丙酮。紫外灯光下呈蓝紫色荧光，Molisch反应阳性。UVλmaxMeOH(nm)220，303。IR(KBr)cm-13510，3310，2975，2923，2880，1610，1589，1516，1450，1360，1320，1250，1170，1075，965，840。1H NMR(丙酮-d6)δppm8.89(1H，Br.s，4′-OH)，8.86(1H，Br.s，5-OH)，7.35(2H，dd，J＝2.4/8.5Hz，H-2′，6’)，7.20(1H，d，J＝16.2Hz，H-β)，6.84(1H，d，J＝16.2Hz，H-α)，6.78(2H，dd，J＝2.4/8.5Hz，H-3′，5’)，6.73(1H，Br.s，H-6)，6.62(1H，Br.s，，H-2)，6.45(1H，Br.s，H-4)，4.88(1H，d，J＝7.7Hz，anomerica-H)，3.8-3.2(sugar-H)；13C NMR(丙酮-d6)δppm160.10(C-3)，159.33(C-5)，158.19(C-4′)，140.73(C-1)，129.64(C-1′)，129.56(C-2′，6′)，128.70(C-α)，126.33(C-β)，116.31(C-3′，5′)，108.00(C-2)，106.49(C-6)，103.72(C-4)，葡糖基101.90(C-1″)，77.76(C-3″)，77.64(C-5″)，74.57(C-2″)，71.26(C-4″)，62.48(C-6″)。FAB-MSm/z389(M+-H)，242(M+-Glc)。因此，化合物S-5鉴定为3，4′，5-三羟基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(3，4′，5-trihydroxystilbene-3-O-β-D-glucoside)，即虎杖苷(ploydatin)。
3，4’，5-三羟基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷(ploydatin) 实验例1生物活性的测定 下述的生物学实验中，主要观察了上述本发明代表性的化合物对丙酸睾酮所致去势大鼠前列腺增生模型的防治作用，以保列治为阳性对照药，对其治疗效果进行了初步评价。
实验选用6-7周，体重120--150g大鼠，取除了正常对照组外，各组动物经戍巴比妥钠ip麻醉后，无菌切除双侧睾丸，经一周自然恢复后，动物按体重大小随机分为模型对照组、阳性对照药组和受试药组。除正常对照组外，其余大鼠每日SC丙酸睾酮0.5mg/只0.1ml，每天一次，连续4周。正常动物SC等体积生理盐水。每组10只大鼠。给药途径灌胃给药，每天一次，连续灌胃4周，所获结果如下 (1)对尿流率的影响 在未次给后30min后，给予2ml/100g体重水负荷，即将动物置于代谢笼中，分别测定2h和6h内的尿量，结果见表1。
表1S-2对丙睾酮诱导去势大鼠前列腺增生排尿流率的影响
注1、#模型组与正常对照组比较，###p＜0.001； 2、＊给药组与模型组比，＊p＜0.05、＊＊p＜0.01、＊＊＊p＜0.001。
上述结果显示正常组动物水负荷后2小时内尿排出量约为50％，约为负荷量的一半。模型组动物水负荷后2小时内尿排出量明显减少，尿排出量只有33.7％，两者差异十分显著(p＜0.001)，提示大鼠前列腺增生后尿流速有明显减慢。经S-2和保列治防治的大鼠，前2小时内的尿排出量为43-49％，明显高于模型组(p＜0.001)。水负荷后2-6小时内尿排出量各组间没有明显差别。但水负荷后6小时内尿总排出量，给药组明显或非常明显地高于模型组(p＜0.05或p＜0.001)。
(2)对前列腺湿重及系数的影响 动物麻醉放血后称尸重，解剖，取前列腺背侧叶和腹侧叶，称重并计算系数，结果列于表2。
表2S-2对丙酸睾酮诱导去势大鼠前列腺湿重及系数的影响
注1、#模型组与正常对照组比较，###p＜0.001； 2、＊给药组与模型组比，＊p＜0.05、＊＊＊p＜0.001。
表中结果显示模型组前列腺各叶和总重量(湿重)及其系数均非常显著地大于正常对照组(p＜0.001)。大鼠灌服保列治1.0mg/kg和S-250-150mg/kg，均可明显减轻大鼠前列腺重量和系数，与模型组比两者非常显著(p＜0.01-0.001)。S-2150mg/kg剂量组对前列腺总湿重减轻的效果与阳性药保列治1.0mg/kg效果相似，但背侧叶湿重明显小于保列治。
(3)对前列腺体积及系数的影响 将上述各组动物的前列腺称重后，用排水法再测量体积，结果列于表3。
表3S-2对丙酸睾酮诱导去势大鼠前列腺体积及系数的影响
注1、#模型组与正常对照组比较，###p＜0.001； 2、＊给药组与模型组比，＊p＜0.05、＊＊＊p＜0.001。
由表3中的结果可见，各组动物的前列腺体积的变化规律基本上与前列腺湿重一致，仍以150mg/kg的S-2组动物前列腺背侧叶体积为最小。
(3)对前列腺干重及系数的影响 各组动物前列腺背侧叶及腹侧叶测量体积后，置于60℃烤箱中烘烤16h后称干重，并计算前列腺干重系数，结果见表4。
表4S-2对丙酸睾酮诱导去势大鼠前列腺干重及系数的影响
注1、#模型组与正常对照组比较，###p＜0.001； 2、＊给药组与模型组比，＊p＜0.05、＊＊＊p＜0.001。
结果显示保列治1.0mg/kg和S-2均能显著降低前列腺干重及干重系数。其中150.0mg/kg的S-2对前列腺增生的抑制作用最少不亚于阳性药保列治。
采用以上针对化合物S-2相同的方法，对化合物S、S-1、S-3和S-5或者分别包含化合物S、S-1、S-2、S-3和S-5的植物提取物进行生物活性的测定，结果表明，上述化合物或植物提取物的结果与化合物S-2的结果基本上相同或相近。
实验例2毒性的测定 小鼠灌服本发明代表性的化合物，以确定其毒性。结果见表5。
表5小鼠灌服本发明化合物最大耐受量
由表3可见，本发明化合物灌服给药的毒性较小，按WHO1977年急性毒性分级标准判断该类化合物属于低毒或实际无毒物质，安全，实用。
权利要求
1.式I化合物
其中，
R1、R2、R3、和R4各自独立地选自H，羟基，直链或支链的C1-6烷基，羟基取代的C1-6烷基，C1-6烷基氧基，C6-10芳基(例如苯基或萘基)，含糖的苷例如-O-葡糖基(即，-O-glucosyl，例如-O-β-D葡糖基)，葡糖基(即，-glucosyl)，或其药学可接受的盐、溶剂合物、前药。
2.权利要求1的式I化合物，其中所述的R1、R2、R3、和R4各自独立地选自H，羟基，C1-6烷基氧基，-O-葡糖基。
3.权利要求1或2的式I化合物，其选自
3，4’，5-三羟基茋；
3，3’，4’，5-四羟基茋-4’-O-β-D-葡萄糖苷；
3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷；
3，5-二羟基-4’-甲氧基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷；和
3，4’，5-三羟基茋-3-O-β-D-葡萄糖苷。
4.一种植物提取物，其中包含至少一种权利要求1-3任一项的式I化合物。
5.根据权利要求4的植物提取物，其是从选自以下的植物提取得到的葡萄科植物例如葡萄属、蛇葡萄属；豆科植物例如落花生属、决明属、槐属；百合科植物例如藜芦属；桃金娘科植物例如桉属，蓼科植物例如藏边大黄、河套大黄、天山大黄、华北大黄或虎杖。
6.根据权利要求4或5的植物提取物，其是通过以下方法获得的i)使用90-98％乙醇(例如约95％乙醇)提取，ii)用乙醚或氯仿脱脂，iii)用乙酸乙酯萃取或洗脱处理，和任选的再用正丁醇萃取，iv)进行硅胶柱层析(例如用60-100目硅胶)，用乙酸乙酯洗脱和/或用乙酸乙酯-甲醇梯度(例如4∶1～2的梯度)洗脱。
7.制备权利要求1-3任一项所述式I化合物或者权利要求4-6任一项所述植物提取物的方法，其包括以下步骤i)使用90-98％乙醇(例如约95％乙醇)提取，ii)用乙醚或氯仿脱脂，iii)用乙酸乙酯萃取或洗脱处理，和任选的再用正丁醇萃取，iv)进行硅胶柱层析(例如用60-100目硅胶)，用乙酸乙酯洗脱和/或用乙酸乙酯-甲醇梯度(例如4∶1～2的梯度)洗脱，得到含有式I化合物的植物提取物；经上述硅胶柱层析洗脱得到的提取物进一步用丙酮或者用丙酮-水重结晶，可以得到式I化合物。
8.权利要求1-3任一项所述式I化合物或者权利要求4-6任一项所述植物提取物在制备用于治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的药物中的用途。
9.权利要求8的用途，其中所述的前列腺肥大是良性前列腺肥大。
10.一种药物组合物，其包含至少一种权利要求1-3任一项所述的式I化合物或者至少一种权利要求4-6任一项所述植物提取物，以及任选的药学可接受的载体。
全文摘要
本发明涉及二苯乙烯类化合物及其在制备用于治疗和预防前列腺肥大有关疾病的药物中的用途。具体地，本发明涉及式I化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、前药，其中R1、R2、R3、和R4的定义如说明书所示。本发明还涉及式I化合物在治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病中的用途，包含式I化合物的药物组合物，以及使用式I化合物治疗治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的方法。本发明的式I化合物具有良好的治疗和/或预防前列腺肥大有关疾病的作用。
文档编号A61K36/482GK101781173SQ20101000014
公开日2010年7月21日 申请日期2010年1月5日 优先权日2010年1月5日
发明者唐仲雄, 杜海涛, 袁丽珍, 吴祖泽 申请人:北京三有利科技发展有限公司