专利名称：取代的苯并二氢吡喃衍生物及其抗肿瘤用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗增殖与促凋亡化合物。更具体的，本发明涉及基于取代的苯并二氢 吡喃的化合物及衍生物，及其作为细胞抗增殖，促凋亡及免疫调节的用途。
背景技术：
抗癌治疗中最大的挑战在于所述治疗剂的选择性，有效的抗癌药物必须对恶性细 胞有高度的选择性，同时对正常细胞无有害作用。不幸的是，迄今为止，已知大多数抗癌药， 尤其是化学治疗剂家簇的抗癌药，具有高毒性，这导致患者体内所不希望的副作用，以及悲 哀的是这种副作用通常如此严重，以至于患者无法忍受这种副作用，引起患者一般健康状 况的恶化，或者消极的影响患者的生活质量，开发更具选择性和无毒性的治疗剂已成为寻 求新的抗癌治疗的新趋势。由于微量营养素代表对正常细胞和组织具有有益作用的天然化合物，所有人们将 巨大的希望赋予将其作为治疗剂。这些微量营养素之一是维生素E的酸性酯。目前国内外 研究很热门的半合成维生素E衍生物酯之一是维生素E琥珀酸酯，它是维生素E酯类抗肿 瘤活性较好的酯之一，据报道是无毒的。细胞增殖与细胞凋亡的生物学是极其复杂的，涉及多种胞内信号传导途径和多种 相互作用的基因产物，癌症细胞可显示多种细胞增殖正常调控的缺陷，从而使它们的数量 增加。另外，癌症细胞显示与通过多步过程除去异常细胞有关的机制的缺陷，因此，失控的 细胞增殖和对引起死亡的信号途径的抑制联合起来，使癌症细胞同时具有生长和存活的优 势。细胞数量是否增加由负作用与正作用的生长调节基因产物的表达平衡，以及是否 存在功能性细胞死亡信号传递途径决定。负作用的生长调节基因能封阻在细胞循环中的细 胞，正作用生长调节基因刺激细胞循环前进。和凋亡有关的基因可以是促凋亡或抗凋亡的， 两者之间的动态平衡决定一个细胞是生存还是凋亡。大多数癌症，不论他们是雄性专一的，如前列腺或睾丸癌，或雌性专一的，如乳腺 癌、卵巢癌或宫颈癌，或他们相等的影响雄性或雌性，如肝癌、肺癌和皮肤癌，随时间产生越 来越多的基因损伤和后随事件，并最终变得高度转移性并难以治疗。已证明，手术摘除局部 癌症仅在癌症未扩散超过原发病变时是有效的，一旦癌症已扩散到其他组织和器官时，手 术程序必须补充其他更专一性的程序，来根除患病的或恶性的细胞。大部分常用治疗患病 的或恶性的细胞补充程序，如化疗或生物照射，不能局限于肿瘤细胞，并且虽然它们具有对 恶性细胞有较大的破坏作用，还是常常在一定程序上影响正常细胞。已有生育酚、生育三烯酚和维生素E的一些衍生物作为促凋亡药剂和DNA合成抑 制剂。结构上，维生素E是由苯并二氢吡喃醇头部和烷基侧链构成。针对维生素E及其衍 生物的生物学作用而言，维生素E琥珀酸酯以其特有的抗肿瘤功效和低毒性的特点引起研 究者广泛的关注。体外研究发现，a-维生素E琥珀酸酯可抑制多种肿瘤细胞的生长，其中 包括人单核细胞、人胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞、人肝癌HepG2细胞等。动物实验还
4证实维生素E琥珀酸酯可抑制B (a)P诱导的小鼠前胃肿瘤的生长；此外，a_维生素E琥 珀酸酯对裸鼠体内植入的人乳腺癌细胞、黑色素瘤细胞等的生长和转移均有抑制作用。肿 瘤的化学治疗剂大多是通过细胞毒作用杀死肿瘤细胞的，但同时对机体正常组织细胞也有 杀伤作用，因而其抗肿瘤作用的特异性差、毒副作用较大。作为肿瘤化学预防/治疗剂，维 生素E琥珀酸酯的主要特点是特异性地对肿瘤细胞生长抑制，而对正常细胞和组织却没有 毒性作用。对蛋白激酶C的研究已证实，恶性肿瘤细胞无限增殖及恶性浸润的特性通常与 PKC的激活有关。PKC亚基具有独特的结构特性，其N末端为富含半胱氨酸的锌指结构域， 易被氧化而激活PKC，促进细胞增殖和肿瘤形成；而C末端为具有反应活性的半胱氨酸，是 抗氧化剂作用的靶点，这些半胱氨酸的修饰可导致PKC的活性降低。PKC的激活需靠其自 身的磷酸化，而PKC的失活原因之一是依赖蛋白磷酸化酶2A的去磷酸化作用。a-维生素E 琥珀酸酯分子中色满环结构域一方面可与PKC的C末端半胱氨酸作用使PKC活性降低，另 一方面还可通过激活PP2A使PKC去磷酸化而失活。生育三烯酚属于类异戊二烯植物化学族，此类异戊二化合物有一个共同的甲羟戊 酸前体，含有一个亲脂链，并通过异戊二烯代谢途径代谢。目前，已证实类异戊二烯类化合 物通过抑制HMGCoA还原酶活性，表现出抑癌特性。流行病学调查显示植物性食物的摄入量 与癌症的发生有强负相关。生育三烯酚广泛存在于来源于单子叶植物的谷类、植物油等农 产品中。和其他的植物化学剂一样，提供药理学剂量有明显抗肿瘤、抗突变活性。多数研究 结果表明，生育三烯酚较生育酚抗肿瘤活性强，两者的基本化学结构相同，即长的叶绿基侧 链连接在色原烷醇环1号位上。而二者的主要区别在于叶绿基侧链是否含有不饱和键；其 次是它们各自结合在色原烷醇环上的甲基数目。因此推测生育三烯酚与生育酚侧链是否含 有不饱和键和/或甲基数目是决定生育酚与生育三烯酚抗增殖、促进细胞程序性死亡的关 键因素。现有技术的缺陷在于，缺乏在各种各样的病理生理状况下抑制不希望的或失控的 细胞增殖，而对正常细胞没有或几乎没有影响的有效办法，本发明填补本领域这一长期存 在的需要。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术中存在的不足之处，而提供一种新的取代的苯并 二氢吡喃化合物及衍生物或其药用盐或其水合物或溶剂物，所要解决的技术问题是运用 3D构效关系和苯并二氢吡喃类化合的ADMET性质来改善和创造出比目前维生素E琥珀酸酯 体内不稳定及到达肿瘤部位不理想的一系列新化合物。本发明的目的是通过以下措施实现的申请人:根据本一系列化合物的3D、4D、5D、6D构效关系的基础知识，结合计算机对 化合物的ADMET性质模拟而对苯并二氢吡喃的母核进行一系列结构变化，通过大量辛苦的 创造性劳动与多次试验结果得到由以下通式(I)表示的一种取代的苯并二氢吡喃化合物 及衍生物或其药用盐或其水合物或溶剂物 其中R选自氢原子或C1 C6的直链或支链烷烃、甲氧酰基异丙基或甲氧酰基氧基 异丙基、甲氧酰基异丁基或甲氧酰基氧基异丁基、甲氧酰基特丁基或甲氧酰基环丁基 ’η为 1 5，表示为单键或双键。优选R为氢原子或甲氧酰基异丙基或甲氧酰基异丁基，η为2 3。本发明的另一目的是提供实施本发明的最佳形式化合物I1 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯；I2 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)_丙基磷酸酯；I3 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯
并二氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸酯；I4 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯
并二氢吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸酯；I5 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双_ (异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I6 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)-丙基磷酸[双_ (异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I7 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双_ (异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I8 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氢吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸[双_(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯I9 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；I10 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)-丙基磷酸[双_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；I11 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氢吡喃-6-基氧基)_乙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；I12 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氢吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸[双_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；本发明的又一目的是提供实施本发明的最佳形式化合物中化合物I1 I4的可药 用盐为钠盐或钾盐或氨丁三醇盐或叔丁胺盐或葡甲胺盐或乙醇胺盐或乙二胺盐或哌嗪盐 或赖氨酸盐或精氨酸盐，作为盐存在时，上述化合物无论形成哪种盐都包含在本发明范围
6之内。以上述通式(I)表示的本发明一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物及其盐， 特别是最佳形式化合物I1 I12，可以以水合物或溶剂物的形式存在，无论哪一种都包含在 本发明范围之内。作为获得的溶剂物的溶剂，有甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醚寸。本发明提供生育酚、生育三烯酚衍生物及其同系物，利用醚键将良好的药代团连 接于生育酚、生育三烯酚化合物中，可产生新的内用抗癌化合物。本发明药代动力学设计的化合物具有提高的治疗指数，并且是癌细胞生长的强大 抑制剂，即它们具有高的抗肿瘤活性而具有极小的副作用。可用本发明的这些化合物和方法治疗肿瘤病，肿瘤病的代表为卵巢癌、喉癌、子宫 内膜癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、睾丸癌、前列腺癌、神经胶质瘤、纤维肉瘤、骨髓瘤、白 血病、结肠癌、肾癌、胰脏癌和鳞状细胞癌。可通过口腔、外用、眼内、鼻内、胃肠道外、静脉内、肌肉内、皮下和任何其它合适途 径施用本发明的化合物及组合物，施用的剂量可视年龄、疾病的临床阶段和程度，或个体的 遗传因素、部位、重量、同时治疗的种类，病理或恶性状况的性质而定。可以胶囊、片剂、溶 液、混悬液、软胶囊等用于口服形式，溶液、混悬液与脂肪乳剂等无菌液体形式注射给药， 优选用任何惰性载体与合适的增溶剂，如盐水或磷酸盐缓冲液，或其它化合物中使用的本 发明具有合适溶解性的载体，如乙醇、丙酮或DMSO。特别考虑，可用新的本发明基于苯并二氢吡喃的化合物及其衍生物制备药物组合 物。就此，药物组合物含有本发明新颖化合物和药学上可接受的载体。本领域一般技术人 员不需要试验即可确定施用本发明的化合物或衍生物的剂量和途径。以用上述通式(I)表示的本发明一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，可以 以水合物或溶剂物的形式存在，无论哪一种都包含在本发明范围之内。作为获得的溶剂物 的溶剂，有甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇等。
通过参考在附图中说明的本发明化合物的一般制造方法，其中获得、简要总结在 详细的、更特定的本发明描述可被理解为本发明的上述特征、优点和目的，这附图构成了本 说明书的一部分。然而还注意，
了本发明的优选例，因此不被看着是限制本发明。图1实施本发明化合物的一般制造方法。
本发明的再一目的是提供实施本发明化合物的一般制造方法(图1)上述的制造方法，只表示制造本发明的通式((I)化合物的方法之一例。本发明 化合物的制造方法并不仅限于这些方法，在本说明书的实施例中，由于更具体地说明了本 发明化合物的制造方法，所以，本领域的人员，根据上述说明和具体实施例的说明，根据需 要，对此加以适当的修改，就能制造出包括在上述通式(I)的化合物或它们的盐。本发明的优点本发明针对设计和有效使用能专一性靶向癌细胞，并下调生长刺激信号、或上调 生长抑制信号、或下调存活信号和/或上调死亡信号的新颖化合物，更具体地，本发明创造 了激活生长抑制因子、触发死亡信号传递途径并抑制DNA合成的新颖化合物，并确定了其
-^ ΚδΟΟΜΗζ,αχη/ΓΙ^,ρρπι)δ 0. 91 0. 96(12扎双重峰，23、24、26、27号氢)；δ 1. 38 1. 45 (3Η，多重峰，25、 28、29 号氢)；δ 1. 38 1. 67(18Η，多重峰，11、12、13、15、16、17、19、20、22 号氢)；δ 1. 69 1. 72 (3Η，多重峰，21 号氢)；δ 1. 86 (2Η，三重峰，8 号氢)；δ 2. 11,2. 24,2. 36 (9Η，单峰，30、 32、33 号氢)；δ2· 78 (2Η，三重峰，7 号氢)；δ 4. 62 4. 8I (4Η，三重峰，34、35 号氢)；特征。本发明具有重要的产业化应用开发价值，是对人类研究抗肿瘤药物的重大贡献本 发明提供的制备方法原料安全易得、生产所需设备普通、生产方法简单易行，具有良好的市 场前景。
具体实施例方式下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本 发明范围的限制。实施例1 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢口比 喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯(化合物II)的制备在500ml三口圆底烧瓶中，安装电动搅拌器、温度计，向其中加入43g天然维生素E 和250mlDMF，搅拌下，加入Ilg细粉状的氢氧化钠固体，在10°C 15°C下搅拌20min，通过 恒压加料漏斗滴入18g 2-溴乙醇，保持温度10°C 15°C剧烈搅拌15小时，然后用IN的盐 酸溶液调节PH值8 9，并用400ml X 2的乙醚萃取，合并萃取液，饱和氯化钠溶液IOOml X 2 洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，浓缩至干，得浅黄色固体35g，收率75 %，直接用 于下一步反应。於250ml三口圆底烧瓶，安装电动搅拌器、温度计，向其中加入60ml吡啶，冷却至 0°C 5°C，滴入25ml三氯氧磷，搅拌，然后滴入34g上步所得的产物溶于20ml吡啶的溶液， 滴入完毕，保持室温搅拌6小时，薄层鉴别反应完全，然后滴入3. 5N的盐酸溶液70ml，搅拌 15min，静置，抽滤，固体用水洗涤至中性，用80%乙醇重结晶，真空50°C干燥，得类白色固 体 32g，收率 81. 3%。HPLC 含量 98. 3%。
MS :m/z (M+) 554. 39 (100% )实施例2 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)-丙基磷酸酯(化合物I2)的制备用实施例1相同的方法，使用3-溴丙醇代替2-溴乙醇，合成了目标化合物。
1H-WR(SOC)MHz, CDC1/TMS，ppm)δ 0. 89 — 0. 97 (12Η,双重峰，23、24、38、39 号氢)；δ 1. 42 1. 56 (3Η,多重峰，25、 40、41 号氢)；δ 1. 39 1. 62(18Η，多重峰，11、12、13、15、16、17、19、20、22 号氢)；δ 1. 69 — 1. 72 (3Η，多重峰，37 号氢)；δ 1. 91 (2Η，三重峰，8 号氢)；δ 2. 21,2. 30,2. 39 (9Η，单峰，42、 43、44 号氢)；δ 2.83 (2Η，三重峰，7 号氢)；δ 4. 62 4. 81 (6Η，三重峰，34、35、45 号氢)；MS :m/z (M+) 568. 42 (100% )实施例3 (+) -2，5，7，8-四甲基-(2R- (4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷 基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯(化合物I3)的制备用实施例1相同的方法，使用生育三烯酚代替维生素E，合成了目标化合物。
1H-WR(SOi)MHz, CDC1/TMS，ppm)δ 1. 79 1. 86(12Η,双重峰，23、24、26、27 号氢)；δ 5. 51 5. 56 (3Η,多重峰， 13、17、22 号氢)；δ 1. 98 2· 31(12Η,多重峰，11、12、15、16、19、20 号氢)；δ 2. 34 (3Η,单 峰，21 号氢)；δ 2. 01 (2Η，三重峰，8 号氢)；δ 2. 11,2. 24,2. 30 (9Η，单峰，32、33、30 号氢)； δ 2· % (2Η，三重峰，7号氢)；6 4.45 4.62(4扎三重峰，34、35号氢)；MS :m/z (M+) 548. 76 (100% )实施例4 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷 基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸酯(化合物I4)的制备用实施例3相同的方法，使用3-溴丙醇代替2-溴乙醇，合成了目标化合物。
MS :m/z (M+) 562. 40(100% )实施例5 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯二钠盐(化合物I1)的制备於250ml三口圆底烧瓶，安装电动搅拌器、温度计，加入IOg化合物I1和200ml无 水乙醚，搅拌，室温下，加入3. 5g甲醇钠，搅拌1小时，过滤，固体用少量乙醚洗涤，真空50°C 干燥即得化合物I1的二钠盐。化合物12、13、I4的二钠盐及化合物Ip 12、13、I4的氨丁三醇盐、赖氨酸盐、精氨酸 盐、钾盐等如法炮制。实施例6 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡
喃-6-基氧基)_乙基磷酸[双_(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物I5)的制备 在N2保护下在反应器中加入1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP) 200g、上步制备的化合物
三乙胺15g，搅拌30min，然后加入氯甲基_2_丙基碳酸酯30g，搅拌加热至55 650C，在该温度下控制不会把反应器物料搅飞溅的情况下，搅拌反应6h。用HPLC跟踪确认 反应完全后，将混合物用乙酸乙酯150ml稀释，冷却至25°C，尽量快速冷却，并保持反应器 内物料温度在25°C，在该温度搅拌约30min。将混合物中固体过滤，滤渣用乙酸乙酯150ml 洗涤，在15 25°C将有机相合并，并用水(150mlX2)提取，分相，合并水相用乙酸乙酯 (150ml X 2)进行逆提取，合并全部有机相，室温搅拌下用水200ml洗涤(防乳化)，无水硫 酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液真空浓缩至干，真空50°C干燥，得淡黄色油状液体，室温固 化为固体10. 5g，收率73. l%o HPLC含量98. 0%。 1H-WR(SOi)MHz, CDC1/TMS，ppm)δ 0.93 1.05(12H，双重峰，侧链支链甲基氢)；δ 1. 38 1. 40 (3Η，多重峰，侧链 叔碳氢)；δ 1.41 1. 70 (18Η，多重峰，侧链亚甲基氢)；δ 1. 72 1. 80 (3Η，多重峰，2号 甲基氢)；δ 1.89 (2Η，三重峰，3号亚甲基氢)；δ2. 12、2. 21、2. 30(9Η，单峰，5，7，8号氢)； δ 2. 93 (2Η，三重峰，4号氢)；δ 4. 60 4. 76 (4Η，三重峰，乙基侧链号氢)；δ 1. 38 (12Η，双 重峰，异丙基甲基氢)；S 5. 67 5.72 (2Η，多重峰，异丙基叔碳氢)MS :m/z (M+) 786. 52 (100% )实施例7 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢口比 喃-6-基氧基)_丙基磷酸[双_(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物I6)的制备参照实施例6的合成法，使用化合物I2代替化合物I1，制得目标化合物。
11
实施例8 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基 _(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷
基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双-(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物 I7)的制备参照实施例6的合成法，使用化合物I3代替化合物I1，制得目标化合物。
MS :m/z (M+) 780. 46 (100% )实施例9 (+) -2，5，7，8_ 四甲基-(2R- (4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷
基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸[双-(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物 I8)的制备参照实施例6的合成法，使用化合物I4代替化合物I1，制得目标化合物。
MS :m/z (M+) 794. 58 (100% )实施例10:(+)-2，5，7，8-四甲基-(21 -(41 ，81 ，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)_乙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合物I9)的制备参照实施例6的合成法，使用2-乙基丁氯甲酯代替氯甲基-2-丙基碳酸酯，制得
目标化合物。 MS :m/z (M+) 838. 65实施例11 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(21 -(41 ，81 ，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)_丙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合物Iltl)的制备参照实施例10的合成法，使用化合物I2代替化合物I1，制得目标化合物。
MS :m/z (M+) 852. 61实施例12 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三 烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合 物I11)的制备；
参照实施例10的合成法，使用化合物I3代替化合物I1，制得目标化合物。
MS :m/z (M+) 832. 95实施例13 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三 烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合 物I12)的制备；参照实施例10的合成法，使用化合物I4代替化合物I1，制得目标化合物。
MS :m/z (M+) 846. 67生物活性测定1、本研究应用人胃癌SGC-7901细胞验证了本发明的各化合物与维生素E琥珀酸 酯对照品抑制其生长的作用，同时.HPLC法检查DNA琼脂糖凝胶电泳诱导SGC-7901细胞发 生凋亡的结果。
所有测试细胞系均采用已建立的标准条件，所有化合物均采用乙醇溶解，然后再 稀释至0. 5%。①、材料与仪器人胃癌细胞SGC-7901，购自上海市肿瘤研究所；维生素E琥珀酸 酯自制；噻唑蓝购自Sigma公司，RPMI-1640培养基、小牛血清购自Gibco公司，高效液相色 谱仪为Waters2690型。②、细胞存活率的检测(MTT法)将SGC-7901细胞以每孔5000个接种于96孔板中，于5% CO2，培养箱中用1640 培养液常规培养24h。设对照组和化合物试验组，将试验组培养液分别换成含5，10，20ug/ ml的合成化合物应用液的培养液，连续培养6d。各剂量组每天分别取细胞8孔，加入5mg/ mlMTTO. 02ml，培养4h，吸出培养液，加入0. 2ml 二甲基亚砜(DMSO)，摇动10后，用酶标仪在 570nm波长下测定其吸光度(A)值，并以各处理组细胞每天平均A值与对照组相比，计算存 活率，绘制生长抑制曲线。③、DNA琼脂糖凝胶电泳将生长至对数生长期的SGC 7901细胞(至少1 X IO6个)，用空白对照液和5， 10，20 μ g/ml的个合成品应用液连续培养48h，收集细胞，用PBS洗涤细胞2次，常规抽提 DNA，进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA断裂后形成的梯形条带。④、结果
2、确定诱导细胞凋亡的有效浓度(EC5tl μ g/ml)选用癌细胞库中乳腺癌、HMEC, A-549、骨髓瘤、C-170、T470、HL-60、HT-29这几个 细胞进行测试，按照已建立的标准，在37°C、5% CO2、补充了胎牛血清的标准培养基中培养， 用胰蛋白酶分离粘着在塑料上的细胞，洗涤，计数，直接在实验室中使用。常规检查所有细 胞，以确认没有支原体感染。
结论本发明的化合物，通过醚键结合后的化合物对细胞凋亡的作用是极端有效 的。
权利要求
一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，其特征在于由以下通式(Ⅰ)所示的化合物或其药用盐或其水合物或溶剂物其中R选自氢原子或C1～C6的直链或支链烷烃、甲氧酰基异丙基或甲氧酰基氧基异丙基、甲氧酰基异丁基或甲氧酰基氧基异丁基、甲氧酰基特丁基或甲氧酰基环丁基；n为1～5，表示为单键或双键。FSA00000215453700011.tif,FSA00000215453700012.tif
2.根据权利要求1所述的一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，或其可药用盐、 水合物或溶剂化物，其特征在于n为1 3。
3.根据权利要求或1或2所述的一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，其特征在 于R选自氢原子或甲氧酰基异丙基或甲氧酰基氧基异丙基、甲氧酰基异丁基或甲氧酰基 氧基异丁基、甲氧酰基特丁基或甲氧酰基环丁基。
4.根据权利要求1 3所述的一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，其特征在于 R为氢原子时，该化合物所选自的可药用碱根盐选自钠盐或钾盐或氨丁三醇盐或叔丁胺盐 或葡甲胺盐或乙醇胺盐或乙二胺盐或哌嗪盐或赖氨酸盐或精氨酸盐。
5.根据权利要求1 4所述一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物其特征在于所 述的化合物优选I1:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃_6_基氧 基)-乙基磷酸酯；I2 (+) -2，5，7，8-四甲基-(2R- (4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃_6_基氧 基)_丙基磷酸酯；I3:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸酯；I4:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸酯；I5:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃_6_基氧 基)-乙基磷酸[双-(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I6:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃_6_基氧 基)_丙基磷酸[双_(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I7:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[双_ (异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I8:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸[双_(异丙氧基酰氧基甲氧基)]酯I9:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃_6_基氧基)-乙基磷酸[双_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；110 (+) -2，5，7，8-四甲基-(2R- (4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃_6_基氧 基)“丙基磷酸[双_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；111 (+) _2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)_乙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；112 (+) _2，5，7，8-四甲基-(2R- (4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸[双-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；
6.如权利要求1 5所述的一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，其特征在于 所述化合物显示抗增殖作用，包括凋亡。DNA合成停滞、细胞循环停滞或细胞分化。
7.如权利要求1 5任一所述的一种取代的苯并二氢吡喃化合物及衍生物，其特征在 于所述的药物施用选自口腔、外用、眼内、鼻内、胃肠道外、静脉内、肌肉内或皮下。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述增殖疾病中的肿瘤选自卵巢癌、喉癌、 子宫内膜癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、睾丸癌、前列腺癌、神经胶质瘤、纤维肉瘤、骨髓 瘤、白血病、结肠癌、肾癌、胰脏癌和鳞状细胞癌。
全文摘要
本发明公开了一种如通式(I)所示的取代的苯并二氢吡喃衍生物，其中R选自氢原子或C1～C6的直链或支链烷烃、甲氧酰基异丙基或甲氧酰基氧基异丙基、甲氧酰基异丁基或甲氧酰基氧基异丁基、甲氧酰基特丁基或甲氧酰基环丁基；n为1～5，表示为单键或双键。本发明还提供了在细胞中诱导凋亡的方法，包括施用含有该化合物的组合物。本发明药代动力学设计的化合物具有提高的治疗指数，并且是癌细胞生长的强大抑制剂，它们具有高的抗肿瘤活性而具有极小的副作用。
文档编号A61P35/00GK101921294SQ20101024413
公开日2010年12月22日 申请日期2010年7月28日 优先权日2010年7月28日
发明者周亚球, 徐奎 申请人:安徽省华康医药科技开发有限责任公司