专利名称：五指毛桃在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及五指毛桃在制备治疗乳腺肿瘤药物中的应用。
背景技术：
乳腺癌是一种通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤，是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。据资料统计，乳腺癌发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10%。它的发病常与遗传有关，40-60岁之间、绝经期前后的妇女发病率较高，仅约1-2%的乳腺患者是男性。有关乳腺癌病因的研究，国内外学者在流行病学和实验室方面取得了许多进展，但迄今为止，其病因尚未完全弄清，各种危险因素在乳腺癌发病中的作用仍在探索中。研究乳腺癌及其相关因素，目的是寻找发病原因，提示高危因素，监护高危人群，以期作到三早(早发现、早诊断、早治疗)和干预控制，为乳腺癌的预防和治疗开辟新的途径。多数学者认为，月经处潮早、第一胎生育年龄晚、绝经年龄晚、有乳腺癌家族史、有乳腺良性疾病史、以及乳腺癌病人的对侧乳房是乳腺癌发病的高危因素。与乳腺癌相关的其他因素有婚姻、哺食、膳食、生活习惯、肥胖、某些药物、精神因素和病毒因素等。因此，乳腺癌是多种因素在一定条件下综合作用的结果。对乳腺癌的治疗一般有以下几种方法:(1)手术治疗的进展早期乳腺癌比例的增高和年轻病例的增加，促使手术治疗既要重视外科根治，又要兼顾患者生活质量。保乳治疗、前哨淋巴结活检(SLNB)、术后乳房重建等都是目前乳腺癌外科治疗的热点。(2)化学药物治疗进展自从紫杉类化疗药问世后，一直是化疗的一线药物，再辅以其他药物来联合或序贯治疗。紫杉类单药的无进展生存(PFS)和总体生存(OS)分别在6个月和I年左右，联合方案的PFS和OS则分别提高至I年和2年。(3)放射治疗的进展保乳治疗已经成为早期乳腺癌治疗的标准模式，而放疗则是保乳治疗的重要组成部分。可明显提高保乳治疗者的局部肿瘤控制率，并为提高患者远期生存率奠定基础。全乳照射或全乳照射加瘤床补量一直是保乳术后乳腺放疗的主导模式。但研究发现无论放疗如否，保乳术后局部复发大多数发生在原发肿瘤瘤床及其附近，这种复发模式为保乳术后部分乳腺照射奠定了基础。目前三维适形放疗、调强适形放疗是乳腺癌保乳治疗的主要手段。(4)内分泌治疗进展绝经后雌激素受体(ER)阳性的转移性乳腺癌患者，可选用非茁体类芳香化酶抑制剂(Al)如来曲唑阿那曲唑，如果治疗失败，可使用茁体类Al如依西美坦(IES)。除上述进展外，其他如靶向治疗、基因芯片在预测预后中的应用、蛋白质组学在诊疗中的应用等，都取得一定的成果。目前乳腺癌的治疗趋势为用小手术代替“毁损性手术”靶向性放疗代替涉及区域淋巴结的大野照射较小强度及靶向性治疗代替大剂量化疗。从中医角度，乳腺癌在中医被称为“乳岩”，也有称为“乳石痈”、“石榴翻花发”、“乳栗”等。凡结块如石、溃后状似岩洞者称曰“岩”，而患生于乳房者称为“乳岩”。隋代巢元方《诸病源候论》所载乳石痈“结核如石”即是对本病的早期记录。中医认为，乳腺癌的主要病因和发病机制在于:肝气郁结、冲任失调、毒热蕴结、气血两虚。肝气郁结，肝经失于疏泄，气血壅滞，则乳络不畅、乳房结块。先天不足，或多产房劳，肝肾亏虚，冲任失养，致乳络不荣，乳房肿块质硬。气火痰热结聚肝胃二经，经脉瘀滞化生乳岩，毒热蕴结，致肿块破溃、浸淫秽臭。乳岩日久，气血耗伤，贫血消瘦，疼痛难忍，五脏俱衰。乳腺癌的中医治疗原则主要包括扶正和祛邪两个方面，具体表现为疏肝解郁、调补冲任、清热解毒、益气养血，以及疏肝清热、清肝解郁、养血调肝、益气养荣、清气化痰、补益气血、健脾和胃、滋补肝肾、活血养血等多种具体治疗方法。其中目前，扶正培本、活血化瘀等法在乳腺癌治疗中受到广泛重视。五指毛桃(Radix Fici Hirtae)来源于桑科粗叶格Ficus hirta Vahl,为华南地区常用的中药材，别名五爪龙、土五加皮、土北芪等。《中华人民共和国药典》(1977年版第一部)记载，五爪龙味辛、甘，性平，有健脾补肺、利湿舒筋功能。五指毛桃益气而不作火，补气而不提气，扶正而不碍邪，兼能祛痰平喘、化湿行气、舒筋活络，更加适合岭南多湿的气候特点，民间认为功用和北芪相当，固有“南芪”之称。五指毛桃作为华南地区习用中药材，现代药理实验证明有止咳、祛痰、平喘等的作用。临床上在治疗呼吸道疾病、妇科疾病、重症肌无力上均有一定疗效。同时，五指毛桃还有增强免疫力的功效，符合中医扶正祛邪的作用。
发明内容
本发明通过细胞实验首次发现，五指毛桃提取物对人乳腺癌细胞Bcap-37具有一定的抑制作用，同时具有在体内及体外诱生肿瘤坏死因子(TNF)的作用，可用于制备治疗乳腺癌药物。
其中，所述五指毛桃经过醇提、浓缩，其三氯甲烷、正丁醇及水溶性部位具有抑制人乳腺癌细胞株Bcap-37作用。所述五指毛桃经过醇提、浓缩，其三氯甲烷、正丁醇及水溶性部位具有诱生TNF的作用，能够特异性地杀伤肿瘤细胞。
图1显示了五指毛桃不同提取部位的制备方法。
具体实施例方式下面结合附图和具体实验证明本发明具有的技术效果。实验一、五指毛桃不同提取部位体外抗人乳腺癌细胞株Bcap-37作用的研究I材料与仪器1.1受试样品五指毛桃提取物A (石油醚部位)、五指毛桃提取物B (三氯甲烷部位)、五指毛桃提取物C (乙酸乙酯部位)、五指毛桃提取物D (正丁醇部位)、五指毛桃提取物E (水溶性部位)，由东莞广州中医药大学中医药数理工程研究提供，制备方法见附图。1.2细胞株人乳腺癌髓样细胞株Bcap-37 (中国科学院上海细胞生物学研究所)1.3 试剂RPM1-1640培养基(美国Sigma公司)，胰蛋白酶(美国Serva公司)，FCS (新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司)、DMSO(二甲基亚砜)等。氯化钠注射液、吐温-80 (天津市化学试剂工厂)。1.4 仪器CO2恒温培养箱(日 本三洋公司)、超净工作台(北京半导体设备厂)、倒置显微镜、低速离心机(北京医用离心机厂)、酶联免疫仪(Thermo Labsystems)、电热高温消毒箱(上海医疗仪器厂干燥箱)、冰箱(_20°C 4°C )、培养瓶、96孔平底细胞培养板(USA Deta)、离心管、培养皿，尖嘴吸管，石英蒸馏嚣、液氮罐，恒温水浴箱等。2方法与结果5个样品组各设3个不等浓度，A、B、C用含有DMSO的生理盐水充分溶解，D用含有吐温-80的生理盐水配制，E用生理盐水配制，以相应空白溶液为对照。采用RPM1-1640培养液，含青霉素10万U/L、链霉素10万U/L、10%新生小牛血清(FCS, 56°C灭活30min)，缓冲液凋pH至约7.2，将待测细胞株配成单个细胞悬液。取对数生长期细胞以0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA消化后，用培养液稀释至浓度4 5X 104/mL，接种于96孔板，每孔加入190 μ L。设溶剂对照，只加完全培养液，不加细胞。每个剂量设3个平行孔，常规培养24h后，加入不同剂量的受试样品，在37°C饱和湿度、5% CO2培养箱中培养48h后，每孔加入50 μ L冰冻的50%三氯醋酸。4°C固定Ih后，用自来水洗去三氯醋酸、培养基、小分子量代谢产物以及血清蛋白。将培养板纸在空气中干燥，用0.44% SRB(ff/V，I %醋酸溶解)对三氯醋酸固定的细胞染色30min，随后用I %醋酸洗去游离染料，置于空气中干燥样品；每孔加入150 μ L 10mmol/L Tris,轻轻振荡,直至染料全部溶解。于564nm波长处测OD值，测定时减去空白对照，按下列公式计算抑瘤率:抑瘤=(1-实验组OD值/对照组OD值)XlOO%2.3结果五指毛桃不同提取部位对人乳腺癌细胞株Bcap-37作用有明显差异，结果见表I。表I五指毛桃不同提取部位对人乳腺癌细胞株Bcap-37的抑制率)
权利要求
1.五指毛桃在制备抗肿瘤药物中的应用。
2.五指毛桃在制备治疗乳腺肿瘤药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述五指毛桃经过醇提、浓缩，其三氯甲烷、正丁醇及水溶性部位具有抑制人乳腺癌细胞株Bcap-37作用。
4.五指毛桃在体内诱导肿瘤坏死因子中的应用。
5.五指毛桃在体外诱导肿瘤坏死因子中的应用。
6.根据权利要求4或5所述应用，其特征在于所述五指毛桃经过醇提、浓缩，其三氯甲烷、正丁醇及水溶性部位具有诱生TNF的作用，能够特异性地杀伤肿瘤细胞。
全文摘要
本发明公开了五指毛桃在制备抗肿瘤药物中的应用。实验中发现，五指毛桃的提取物具有体外抗人乳腺癌细胞株Bcap-37的作用，并能在体内及体外诱生肿瘤坏死因子(TNF)，具有抗肿瘤的作用。
文档编号A61K36/60GK103156922SQ20111041205
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月9日 优先权日2011年12月9日
发明者陈楚镇 申请人:河源市金源绿色生命有限公司