一种单分散荧光磁性纳米探针及制备和应用的制作方法
本发明涉及纳米探针技术领域，具体涉及一种单分散荧光磁性纳米探针及制备和应用。
背景技术：
随着发病率和死亡率的增加，癌症已经成为中国人群死亡的首要原因和主要的公共健康问题。统计数据表明，中国2015年有4292,000例癌症新发病例，2814,000例癌症死亡，肺癌成为最常见癌症，也是癌症死亡的首要原因。胃癌、食管癌和肝癌也是常见癌症，在癌症死亡原因中排在前列。由于癌症没有指定的位置，它可以发生在内脏的任何一部分，癌症及癌前病变的症状具有隐匿性和无特异性，且潜伏期较长，一旦发现已到晚期或者转移，导致患者无法治愈而死亡。因此，早期预警及体内癌细胞示踪对潜伏期病人至关重要。
随着近现代医学技术的发展，纳米材料在医学中的应用已进入一个快速发展时期。尤其是在肿瘤学科的研究不断加深，在成像检测、靶向给药、光动力治疗和光热治疗等领域具有广泛的应用前景。因此开发诊断-治疗一体化多功能纳米探针成为了一个研究热点。
磁共振成像可对人体各部位多角度、多平面成像，能更客观更具体地定位定性病灶，对全身各系统疾病的诊断、早期预警及术后观察均有很大的价值。相对于其它的无创伤成像技术，如:核医学成像、光学成像、超声成像等，具有高空间分辨力、无射线检查、软组织对比度好等优点，非常适合应用于分子成像学的研究。但MR成像在肿瘤切除过程中随着非切除部分的减少，其检测的精确度也逐渐降低，且检测费昂贵、扫描时间较长，让病人难以耐受。
电子激发态光敏剂不仅能产生细胞毒性作用，还能在转变为基态过程时发出荧光，形成光学图像。因此光敏剂既能作为光动力疗法用药，又能作为成像造影剂。光敏剂荧光检测是一种较为灵敏的技术，能够识别组织的微细结构，且精确度不会随着非切除部分的减少而降低。但不具有高空间分辨力、软组织对比度等特点。
光动力治疗是指在光敏剂参与下，在光的作用下，使有机体细胞或生物分子发生机能或形态变化，导致细胞损伤和坏死。光动力疗法是一项肿瘤治疗的新技术，由于其独特的优点和良好的兼容性，必将成为肿瘤诊断和治疗中一支新的生力军，在肿瘤的综合治疗中发挥重要作用。
目前，有研究者将磁共振显像与光敏剂荧光显像的优势结合设计出荧光磁性纳米探针，但其没对系列不同粒径的探针核形成的探针性能进行对比，如不同粒径的探针在病变细胞中的分布的差异、在动物体内分布的差异、对正常组织(如：肝，脾等)损害的差异及肿瘤部位的滞留时间差异等方面进行研究。为了寻找荧光磁性纳米探针与细胞微妙作用机理、减小荧光磁性纳米探针对正常组织(如：肝，脾等)的损害，增长在肿瘤部位的滞留时间，提高肿瘤治疗效果，需要对不同粒径的荧光磁性纳米探针进行比较，充分发掘其在生物医学领域的应用潜力。
技术实现要素：
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种制备简单、靶向效率高的单分散荧光磁性纳米探针及制备和应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种单分散荧光磁性纳米探针，所述磁性纳米探针包括负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子、PEG修饰的靶分子以及超支化大分子NPO，所述负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子、PEG修饰的靶分子以及超支化大分子NPO的摩尔比为(0.0005～1)：(1～10)：(0.5～2)，所述负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子包括光敏剂和Fe3O4载体，所述光敏剂和Fe3O4载体的质量比为(1～5)：(4～20)。
本发明以尺寸小、粒径分布均匀、磁性能优异的四氧化三铁磁性纳米粒子为探针核，经两亲性聚合物修饰，得到分散性优良的羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子；再经PEG化的靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子修饰，并负载光敏剂药物，即构成制备工艺简单、靶向效率高、生物相容性好、提高疏水性抗肿瘤药物的疗效及表面尺寸效应增强成像与光动力治疗的荧光磁性纳米探针。
相比与传统方法，采用系列不同粒径的四氧化三铁磁性纳米粒子，通过共价偶联将PEG化的靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子连结到磁性纳米粒子表面，提高磁性纳米粒子的生物相容性和功能性。得到的药物载体(简称：Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc)中PEG和超支化大分子NPO构成的外壳阻止磁性纳米颗粒的团聚和蛋白质吸附，增加磁性纳米颗粒血液循环时间和体内靶细胞的内在化效率。癌细胞表面富含靶分子受体，将靶分子偶联在纳米探针上，可高效地结合癌细胞表面的靶点，定向地进入细胞，准确地示踪癌细胞或肿瘤的位置，有助于成像诊断和癌症治疗。
所述的光敏剂选自二氢卟吩e6、吲哚菁绿、青色素5.5及阿霉素中一种或多种；
所述Fe3O4载体的的粒径为3～15nm。
所述的靶分子选自抗体(如：CD44，CD45，Her2等)、抗体片段、生长因子(如：VEGF)、环状RGD、奥曲肽、AP缩氨酸、tLyp-1缩氨酸、透明质酸HA或4-氨基苯基β-D-吡喃葡萄糖苷中的一种或多种。这些靶分子具有特异性靶向作用，在靶细胞膜表面具有高表达位点，可以使探针药物高效地识别并杀伤靶细胞。
所述的超支化大分子NPO的分子量为大于等于5000，其一端为氨基，另外的支化端为羟基。超支化大分子NPO一端的氨基与Fe3O4@P-COOH纳米粒子表面的羧基共价偶联后，形成酰胺键。另外支化端的羟基促进纳米探针的水溶性及生物相容性。
一种如上所述的单分散荧光磁性纳米探针的制备方法，包括以下几个步骤：
(1)将乙酰丙酮铁、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚混合，在N2保护下反应，反应结束后冷却至室温，过滤得到的磁性纳米粒子溶于氯仿中，得到氯仿溶液，待用；
(2)在步骤(1)所得的氯仿溶液中加入两亲性聚合物，混合均匀后蒸发溶剂，得到的固体溶解于SBB12缓冲溶液中，该SBB12缓冲溶液为50mM硼酸溶液用NaOH溶液调pH至12后的溶液，将溶有固体的SBB12缓冲溶液浓缩离心得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)将Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中的羧基活化，然后加入PEG修饰的靶分子，反应一段时间后加入超支化大分子NPO，反应得到带靶分子和超支化大分子的Fe3O4@P-NPO/PEG-TM分散液；
(4)将步骤(3)所得带靶分子和超支化大分子的Fe3O4@P-NPO/PEG-TM分散液与光敏剂溶液混合、振荡反应，然后离心纯化，即得所述单分散荧光磁性纳米探针。
步骤(1)所述乙酰丙酮铁、油酸、油胺及十六烷二醇的摩尔比为(0.5～4)：(1.5～12)：(1.5～12)：(2.5～20)，所述二苯醚的体积与所述乙酰丙酮铁的摩尔量之比为(5～40)mL：(0.5～4)mol；
所述反应分两个阶段，第一阶段的反应温度为150～250℃，反应时间为1～3h，第二阶段的反应温度为280～350℃，反应时间为0.5～1.5h。
分步设定反应温度，使得反应可控，产物更加均匀。
步骤(2)所述两亲性聚合物的合成步骤为：将聚(异丁烯-alt-马来酸酐)、十二胺以(0.05～1)：(0.01～2)的摩尔比混合，溶于四氢呋喃中，超声10～20s后，加热至65℃并搅拌8～12h，然后将四氢呋喃蒸发，并溶于氯仿中，得到浓度为0.1M的两亲性聚合物；使用该两亲性聚合物，可以使油相中合成的Fe3O4磁性纳米粒子转入水相，并且使纳米粒子表面含有大量羧基，为探针下一步合成做好准备；
所述氯仿溶液中的磁性纳米粒子与加入两亲性聚合物的摩尔比为1：(5-100)；
浓缩得到的Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液的浓度为3～20μM
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子的合成步骤为：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为(0.5～1):(0.5～1)混合于含5～20mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应2-5h；反应结束后，加入100～200mgNaH(60％矿物油)反应10～30min；逐滴加入含2.1～8.4mL缩水甘油的5～20mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于5～10mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析24～48h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成0.5～1g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
步骤(3)所述活化的工艺如下：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液加入EDC/NHS溶液，加入的EDC/NHS的摩尔量与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中羧基的摩尔量之比为1：(1～1.5)，然后在5～30rpm/min的转速下旋转混合20～30min；
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9(用NaOH滴定pH为9的硼酸溶液)缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为30转/分；按PEG与靶分子的摩尔比为1：(1～3)加入靶分子，在30～40℃下振荡1～3h或20～30℃下在旋转器上旋转12～24h。
加入PEG修饰的靶分子后反应的条件为30～40℃下振荡1～3h或20～30℃下在旋转器上旋转12～24h；
加入超支化大分子NPO后反应的条件为30～40℃下振荡1～3h或20～30℃下在旋转器上旋转12～24h。选用上述温和的反应条件，利于反应充分，并且不会造成Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液团聚。
步骤(4)所述光敏剂溶液的浓度为2-5mg/mL；
加入的光敏剂的加入质量与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液的摩尔量之比为：(2.5-5)mg：(0.5-10)mmol；
所述反应的温度为30～40℃，时间为24～48h，振荡的速度为80～200rpm。
一种如上所述的单分散荧光磁性纳米探针的应用，所述纳米探针用于制备靶向成像癌细胞的成像剂或用于制备靶向治疗癌症的药物。
PEG和超支化大分子NPO构成的外壳阻止磁性纳米颗粒的团聚和蛋白质吸附，增加磁性纳米颗粒血液循环时间和体内靶细胞的内在化效率。癌细胞表面富含靶分子受体，将靶分子偶联在纳米探针上，可高效地结合癌细胞表面的靶点，定向地进入细胞，准确地示踪癌细胞或肿瘤的位置，有助于成像诊断和癌症治疗。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在以下几方面：
(1)备简单，快捷，成本低，只需使用几种常见的试剂即可制得：通过两亲性聚合物修饰的磁性纳米粒子与PEG化的靶分子和一端的氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO共价偶联，可以直接制得单分散生物相容性优良的纳米探针；
(2)制得的纳米探针平均尺寸为3.5-20nm，且粒径分布均匀；
(3)制得的纳米探针靶向效率高、提高疏水性抗肿瘤药物的水溶性及摄取量；
(4)表面尺寸效应增强双模态成像与光动力治疗效果。
附图说明
图1为本发明的荧光磁性纳米探针的透射电镜图片；
图2为本发明的荧光磁性纳米探针的荧光光谱图；
图3为本发明的荧光磁性纳米探针的在动物体内的荧光成像照片；
图4为本发明的荧光磁性纳米探针在荷瘤小鼠组和空白对照组肿瘤部位的核磁成像照片；
图5为本发明的荧光磁性纳米探针对荷瘤小鼠肿瘤的治疗曲线；
图6为本发明的经荧光磁性纳米探针治疗后的荷瘤小鼠体重变化曲线。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：0.5:1.5:1.5:2.5的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及5mL二苯醚混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至150℃并持续加热1h，随后加热至280℃，并在该温度反应0.5h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度2000rpm，5min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
取1mmol聚(异丁烯-alt-马来酸酐)、0.2mmol十二胺溶解在装有10mL四氢呋喃的圆底烧瓶中，超声20s后，加热至65℃并搅拌过夜，次日将四氢呋喃蒸发掉后，聚合物定溶于5mL氯仿中获得0.1M的双亲性聚合物；
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:5混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于3mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到3μM的Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转20min，转速为5转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在30℃下振荡1h或20℃下在旋转器上旋转12h，其中，NPO的分子量为大于等于5000。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转20min，转速为5转/分；按PEG与靶分子的摩尔比为1：1加入靶分子，在30℃下振荡1h或20℃下在旋转器上旋转12h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为0.5:0.5混合于含5mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应2h；反应结束后，加入100mgNaH(60％矿物油)反应10min；逐滴加入含2.1mL缩水甘油的5mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于5mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析24h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成0.5g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物二氢卟吩e6：
按2.5g:10mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc载体分散于1mL的去离子水中，在30℃下以200rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为24h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc@Ce6。
经检测，得到的磁性纳米探针包括负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子、PEG修饰的靶分子以及超支化大分子NPO，负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子、PEG修饰的靶分子以及超支化大分子NPO的摩尔比为0.0005：1：0.5，负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子包括光敏剂和Fe3O4载体，光敏剂和Fe3O4载体的质量比为1：20。
其中Fe3O4载体的的粒径为3nm。
对上述制得的Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc@Ce6进行检测，通过气光学照片可知，荧光纳米探针静置一年以上，仍然分散均匀，且具有很强的荧光；图1的a、b、c分别为本实施例制得的荧光磁性纳米探针在不同分辨率下的透射电镜图片，可知，荧光磁性纳米探针具有优良的分散性，经共价偶联后，没出现团聚现象；图2本实施例制得的荧光磁性纳米探针的荧光光谱图，可知，在探针载体Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc中包裹光敏剂后，具有很强的荧光强度，可以用于体内荧光成像；且由于尺寸效应，探针核的粒径直接影响载药量和探针的荧光强度。
将上述制得的荧光磁性纳米探针尾静脉注射于荷瘤小鼠体内，进行靶向双模态成像与光动力治疗，注射后不同时间内，观察探针在裸鼠体内的分布情况，核磁成像与荧光成像进行肿瘤共定位，更准确的示踪有助于成像诊断和癌症治疗，图3显示了荧光磁性纳米探针在其体内的荧光成像照片，A为注射前的荧光成像照片，B为注射3天后的荧光成像照片，可知，探针可在术前术后准确地示踪肿瘤；图4显示了空白对照组(尾静脉注射150微升PBS溶液3天后的荷瘤小鼠)和实验组(尾静脉注射荧光磁性纳米探针(按5mg/kg包覆荧光药物的剂量注射)3天后的荷瘤小鼠)肿瘤部位的核磁成像照片，可知，荧光磁性纳米探针具有良好的造影效果，并且滞留时间可长达3天，为术前术后观察提供准确的信息。且与荧光成像(图3)相结合，共定位肿瘤位置及示踪病灶边界；图5显示了荧光磁性纳米探针对荷瘤小鼠肿瘤的治疗曲线，可知，荧光磁性纳米探针可以有效地靶向肿瘤并抑制肿瘤的生长；图6显示了经荧光磁性纳米探针治疗后的荷瘤小鼠体重变化曲线，可知，在治疗过程中，裸鼠的重量基本保持不变，表明探针对老鼠的副作用很小。
实施例2
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：4:12:12:20的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及40mL二苯醚(或二苄醚)混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至250℃并持续加热3h，随后加热至350℃，并在该温度反应1.5h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度3500rpm，20min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
取0.05mmol聚(异丁烯-alt-马来酸酐)、0.01mmol十二胺溶解在装有25mL四氢呋喃的圆底烧瓶中，超声20s后，加热至65℃并搅拌过夜，次日将四氢呋喃蒸发掉后，聚合物定溶于5mL氯仿中获得0.1M的双亲性聚合物；
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:100混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于15mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到浓度为20μM的Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为30转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在40℃下振荡3h或30℃下在旋转器上旋转24h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为30转/分；按PEG与靶分子的摩尔比为1：1.5加入靶分子，在40℃下振荡3h或30℃下在旋转器上旋转24h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为1:1混合于含20mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应5h；反应结束后，加入200mgNaH(60％矿物油)反应30min；逐滴加入含8.4mL缩水甘油的20mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于10mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析48h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成1g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物吲哚菁绿ICG：
按5mg:0.5mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc载体分散于1mL的去离子水中，在40℃下以80rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为48h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc@ICG。
经检测，得到的磁性纳米探针包括负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子、PEG修饰的靶分子以及超支化大分子NPO，负载光敏剂ICG的Fe3O4磁性纳米粒子、PEG修饰的靶分子以及超支化大分子NPO的摩尔比为1：10：2，负载光敏剂的Fe3O4磁性纳米粒子包括光敏剂和Fe3O4载体，光敏剂和Fe3O4载体的质量比为5：4。
其中Fe3O4载体的的粒径为15nm。
实施例3
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：2:10:10:15的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及30mL二苯醚(或二苄醚)混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至200℃并持续加热2h，随后加热至300℃，并在该温度反应1h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度3000rpm，10min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:50混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于10mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1.2，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为20转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.2，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为20转/分；按PEG与葡萄糖的摩尔比为1：2加入葡萄糖，在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为0.8:0.8混合于含12mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应3.5h；反应结束后，加入150mgNaH(60％矿物油)反应20min；逐滴加入含5mL缩水甘油的12mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于5-10mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析36h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成0.8g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物DOX：
按3:12的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc载体分散于1mL的去离子水中，以150rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为36h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3000rpm、30min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc@DOX。
实施例4
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：1:3:3:5的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚(或二苄醚)混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至180℃并持续加热1.5h，随后加热至300℃，并在该温度反应1h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度2800rpm，10min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:20混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于8mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为10转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡1.5h或室温下在旋转器上旋转15h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为10转/分；按PEG与透明质酸HA的摩尔比为1：1加入透明质酸HA，在37℃下振荡1.5h或室温下在旋转器上旋转20h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为0.5:1混合于含5-20mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应3h；反应结束后，加入120mgNaH(60％矿物油)反应15min；逐滴加入含4mL缩水甘油的8mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于5-10mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析24h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成0.5g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物青色素5.5(Cy5.5)/Ce6：
按3mg:7mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-HA载体分散于1mL的去离子水中，以300rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为24h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3500rpm、20min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-HA@Cy5.5/Ce6。
实施例5
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：3:10:10:15的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚(或二苄醚)混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至230℃并持续加热2.5h，随后加热至300℃，并在该温度反应1.2h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度3000rpm，15min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1：30混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于12mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1.3，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为20转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.2，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为20转/分；按PEG与tLyp-1缩氨酸的摩尔比为1：1.3加入tLyp-1缩氨酸，在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为1:0.5混合于含15mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应4h；反应结束后，加入180mgNaH(60％矿物油)反应25min；逐滴加入含6mL缩水甘油的20mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于8mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析40h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成1g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物Ce6：
按4:18的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-tLyp-1载体分散于1mL的去离子水中，以100rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为40h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3200rpm、35min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-tLyp-1@Ce6。
实施例6
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：0.5:1.5:12:20的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚(或二苄醚)混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至250℃并持续加热1h，随后加热至280℃，并在该温度反应0.5h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度2000rpm，5min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:45混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于10mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转20min，转速为5转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡1h或室温下在旋转器上旋转12h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为30转/分；按PEG与AP缩氨酸的摩尔比为1：1加入AP缩氨酸，在37℃下振荡1h或室温下在旋转器上旋转12h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为0.5:0.5混合于含5mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应2h；反应结束后，加入100mgNaH(60％矿物油)反应10min；逐滴加入含2.1mL缩水甘油的5mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于5mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析24h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成0.5g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物Ce6和Cy5.5：
按3mg:6mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-AP载体分散于1mL的去离子水中，以200rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为24h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、2000rpm、20min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-AP@Ce6/Cy5.5。
实施例7
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：2:10:12:15的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚(或二苄醚)混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至200℃并持续加热1.5h，随后加热至300℃，并在该温度反应1h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度3500rpm，20min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:60混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于10mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为30转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡3h或室温下在旋转器上旋转24h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为30转/分；按PEG与环状RGD的摩尔比为1：3加入环状RGD，在37℃下振荡3h或室温下在旋转器上旋转24h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为1:0.5混合于含20mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应5h；反应结束后，加入200mgNaH(60％矿物油)反应30min；逐滴加入含6mL缩水甘油的5-20mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于10mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析48h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成1g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物Ce6和阿霉素DOX：
按5mg:7mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-RGD载体分散于1mL的去离子水中，以400rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为36h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3000rpm、30min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-RGD@Ce6/DOX。
实施例8
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：4:1.5:3:10的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至250℃并持续加热3h，随后加热至350℃，并在该温度反应1h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度3500rpm，20min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:80混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于15mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为20转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为20转/分；按PEG与生长因子的摩尔比为1：1加入生长因子，在37℃下振荡3h或室温下在旋转器上旋转24h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为0.5:1混合于含10mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应5h；反应结束后，加入150mgNaH(60％矿物油)反应20min；逐滴加入含8mL缩水甘油的20mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于10mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析24h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成0.8g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物DOX和Cy5.5：
按2.5mg:6mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-生长因子载体分散于1mL的去离子水中，以500rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为48h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3500rpm、20min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-生长因子@DOX/Cy5.5。
实施例9
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：4:1.5:5:18的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至200℃并持续加热1.5h，随后加热至300℃，并在该温度反应1h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度2000rpm，20min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:60混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于10mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为20转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡3h或室温下在旋转器上旋转24h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.5，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转30min，转速为5转/分；按PEG与奥曲肽的摩尔比为1：1.5加入奥曲肽，在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为1:1混合于含15mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应3h；反应结束后，加入150mgNaH(60％矿物油)反应25min；逐滴加入含5mL缩水甘油的5-20mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于8mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析24-48h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成1g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物ICG和Cy5.5：
按3mg:10mmol的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-奥曲肽载体分散于1mL的去离子水中，以300rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为40h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3500rpm、25min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-奥曲肽@ICG/Cy5.5。
实施例10
一种单分散荧光磁性纳米探针的制备，包括以下步骤：
(1)四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将摩尔比为：2:10:10:15的乙酰丙酮铁(III)、油酸、油胺、十六烷二醇及二苯醚混合于三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，在氮气保护下混合物加热至250℃并持续加热2h，随后加热至350℃，并在该温度反应1h，反应结束后冷却至室温，所得黑色溶液利用无水乙醇反复离心沉淀3次(离心速度3500rpm，20min)，最终所得沉淀重悬于氯仿中。
(2)羧基化四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：
将步骤(1)所得磁性纳米粒子与两亲性聚合物按照摩尔比1:70混合于圆底烧瓶中，利用旋转蒸发仪缓慢地将溶剂蒸发掉，得到的固体在磁力搅拌下溶解于10mL的SBB 12缓冲溶液中，最终所得分散液采用超滤管浓缩，并利用超高速离心机除去未包被的聚合物，得到羧基化的四氧化三铁磁性纳米粒子，即得到Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液；
(3)偶联PEG化靶分子和一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子：
在Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液中加入EDC/NHS，使其满足与Fe3O4@P-COOH上羧基的摩尔比为1：1.2，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为10转/分；
PEG化靶分子和一端是氨基另外端是羟基的超支化大分子NPO与Fe3O4@P-COOH纳米粒子分散液混合反应的工艺条件为：在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转20h。
PEG化靶分子的制备：在PEG的SBB 9缓冲液中加入EDC/NHS，使其满足与PEG分子上羧基的摩尔比为1：1.2，在XH-1T型多管可调式旋转混合器上旋转25min，转速为20转/分；按PEG与抗体的摩尔比为1：3加入抗体，在37℃下振荡2h或室温下在旋转器上旋转22h。
一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO的制备：N-BOC乙二胺与缩水甘油按照摩尔比为1:1混合于含15mL二氧己烷的三颈烧瓶中并利用磁转子搅拌，混合物在90℃下反应2h；反应结束后，加入200mgNaH(60％矿物油)反应30min；逐滴加入含7mL缩水甘油的15mL二氧己烷，混合物在90℃下反应过夜，反应结束后，倒出有机相，剩余物质溶于6mL蒸馏水中，用透析袋(分子截留量为3K)透析48h，冷冻干燥得到透明状胶状产物；滴两滴浓盐酸，再加pH＝7.4的PBS溶液配制成1g/mL溶液，得到一端是氨基另外支化端是羟基的超支化大分子NPO，备用。
(4)负载光敏剂药物Ce6、DOX和Cy5.5：
按5:20的质量比将光敏剂药物与Fe3O4@P-NPO/PEG-Glc载体分散于1mL的去离子水中，以500rpm的速度搅拌使其充分混匀，搅拌时间为48h；用15mL的100K超滤管离心，去除未载上的药物，冷冻离心机的参数设为：4℃、3500rpm、30min，然后定容到原体积，重复三次离心，将未负载上的药物去除完全，得到Fe3O4@P-NPO/PEG-抗体@Ce6/DOX/Cy5.5。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
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