专利名称：含有鸦片样拮抗剂和钙盐的药物组合物及其在治疗内啡肽介导的疾病中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及鸦片拮抗剂和钙盐一起在制备治疗与内啡肽有关的疾病的药物中的应用。
本发明也涉及含有作为活性成分的鸦片拮抗剂和其钙盐以及可有可无的蛋白酶、前列腺素和维生素C和K的供人和兽使用的药物组合物。本发明的组合物可以是由各部分组成的药盒形式，它由分开的剂量形式组成并用于同时或顺序给予上文所述的活性成分。
在黑色-纹状体系统和许多其它神经结构中神经元可合成低核重量的化合物，内啡肽，其具有与吗啡的菲(phenantrene)生物碱几乎相同的作用。这些内源性的吗啡样物质(内啡肽)在每个动物(包括人)的中枢神经系统中起重要的生物作用。
由氨基酸(从5到31)序列组成的内源性鸦片样肽(脑啡肽和内啡肽)存在于下丘脑、大脑和脊柱中以及内分泌腺(肾上腺、垂体、卵巢、睾丸)中，和胃肠系统、肌肉-骨骼系统和免疫系统。直到现在为止所知道的内啡肽的功能是多重性的；最熟悉的是吗啡样镇痛作用、影响行为的作用、神经调节功能。
这些肽在如记忆、对紧张的反应、疼痛的传递、食欲的调节、体温、呼吸频率、性欲、免疫性等功能中也起显著作用。
普通存在于哺乳动物中枢神经系统内外的内啡肽至少通过三种不同的前体物来衍生pre pro opiome lanocortine(POMC)、前脑啡肽的原A(pre-pro-enkephalineA)和前脑啡肽原B，它们产生三类与此相关的肽，具有非常确定的生物活性。
尤其是，pre-pro-oiomelanocortine作为溶胞过程的结果分化到各种组织中，产生α-、β-和γ-内啡肽，前脑啡肽原子A产生甲硫啡肽和亮啡肽而前脑啡肽原B是α-新-内啡肽、β-新-内啡肽和dinorphine的前体。这些肽在各组织中的作用和分布已被广泛地进行了研究，特别具有参考意义的是其与鸦片样受体相互作用的能力。
事实上，内啡脑已被称作防护剂，能够在遭受不同类型和病因紧张的器官中诱导分析和镇静作用。
例如，在外伤、神经过敏、内分泌、代谢或感染疾病、身体疲劳、分娩、失眠、外科手术、饮食或药物中毒等之后，注意到内啡肽的产生增加。
发现内啡肽在生物体中以与受体结合的形式存在于各组织和器官中而以游离形式存在于血浆和液体中。例如通过鸦片样拮抗剂如纳洛酮、纳曲酮及衍生物和类似物相对于增加产生、减少分解代谢或竞争性地从结合内啡肽的受体中移出，可增加游离和结合内啡肽之间的比率。
如果不通过代谢机制快速除去游离的内啡肽，它分别会再与受体结合，诱导一系列生化作用，损害细胞代谢、干扰(interphere)神经功能并诱导影响器官的病理作用。
现已令人惊奇地发现给予鸦片样拮抗剂和钙离子能够有效地拮抗所述疾病作用；使得对于以高游离和结合内啡肽水平为特征的疾病(下文称作与内啡肽有关的疾病)的人和兽的临床治疗来说是有用的。
本发明的有效性与理论没有任何关系，提出的假设是在生理和病理情况下，组织和循环系统中高浓度的内啡肽与Ca++代谢物相互作用并且与所有相关的或相依赖的功能相互作用。事实上，假定当内啡肽增加到生理所限定的边缘时，流入和流出细胞的Ca++在某种程度上降低，结果使得血钙增加时细胞内和组织内的钙缺乏。同时，可能由增加细胞内钙需求的信号引起外部钙的补充而进一步损伤组织，使得结合的内啡肽积累。
换句话说，当不同的生理或病理疾病诱导循环的内啡肽内源性地增加时，后者结合到一种或多种结构或器官的鸦片样受体上。而与任何器官中神经受体结合的内啡肽的正常浓度的存在是生理性的，相反地，结合的内啡肽的增加诱导积累大量的这些神经调节剂，它结合大量的受体，形成一种“内啡肽云雾”，使得改变神经，肌肉结构或任何具有内啡肽受体的细胞的膜电势和渗透性。细胞渗透性的改变主要影响钙通道的活性和机能并继而影响所有相关的活性和功能。
无论什么时候持续高浓度的内啡肽，不良的代谢过程都从神经末端开始。在急性过程中，钙进入的阻滞和细胞内钙的代谢产生可能致命改变的代谢调节，这是通过除去“内啡肽云雾”并继而急剧地改变膜电势并在血流中缺乏适量钙的情况下从前述阻滞的细胞中进入钙血流中产生的。
假定“内啡肽雾”首先降低细胞和组织的机能和反应性，此后由一种存在于细胞壁上的阻滞的Ca++通道引起不正常的活性。
内部和外部钙的阻滞引起影响细胞同由质网和线粒体中内部沉淀的Ca++的代谢，这样其代谢活性至少部分可被保护。同时细胞外部钙增加(增加的血钙)引起神经肌肉的毒性。
在低钙血的情况下，给予本发明的钙可预防由细胞中流出钙(已经因Ca++的丧失而减少)而进入血流，这种流入血流的结果是更严重地损伤细胞并引起疾病。
在任何情况下，上文所报告的机制的证实是独立的，以前从未公开或假定，本发明能够出人意料地治疗由内啡肽介导的疾病。
除中枢神经系统外，在生物体中广泛分布有内啡肽受体，所以可通过本发明治疗或缓解的疾病包括中枢神经系统疾病如截瘫、神经传导阻滞、早老性痴呆、大脑局部缺血、多发性硬化；骨肠道疾病如溃疡、过敏性肠综合症；心血管疾病如梗死、脓毒性休克；皮肤疾病如白斑、牛皮癣、脱发、皮炎、外伤和烧伤；内分泌和生殖泌尿疾病如LUF综合症、卵巢微多囊瘤(ovaric micro poly cystosis)、阳萎、血促性腺激素过多(hyperprolattinemia)、垂体(hypophysary)侏儒症、间隙膀胱炎、primary amenhorrea。
本发明也可有益地用于治疗炎症、感染性疾病、肌肉-骨骼系统疾病如骨质疏松、关节炎、骨炎、骨膜炎、肌病、自身免疫疾病。
本发明通常对于保护或重新建立天然组织-或细胞-修复中的那些疾病来说会产生有益的作用。
在兽医中(除上文所述的人疾病之外)，本发明可用于治疗特殊的疾病，如牛的产后休克(puerpreal shock)、狗和猫的病毒感染(细小病毒感染、温热)、MMA综合症(子宫炎-乳腺炎-无乳)、Mulberry’s心脏病、反刍动物的腹中积气、Hoflund综合症、骨关节损伤如骨折、多关节炎、骨软化、佝偻病体质、髋发育不良。
本发明也可用于诱导和控制哺乳动物、鱼和鸟的再生活性、诱导马和狗的黄体消散并改善其运动能力；也用于避孕。
鸦片样拮抗剂的选择将取决于某些因素如动力、效力、安全性、药理危险率等。例如对于急性病来说，优选使用作用快且半衰期短的药物如纳洛酮，而对于慢性疾病来说，会优选使用长时间持续的药物如纳曲酮。
本发明可使用的其它鸦片样拮抗剂包括二丙吗啡(dipremorphine)、纳布啡、β-氯代纳曲宁(betachloronaltrexonine)、纳曲连氮(naltrexonazine)、naloxazone纳美芬、β-呋纳曲胺(beta-funaltrexamine)、ICI174、864、7-亚苄基纳曲酮、(7-benzylidenenaltrexone(BNTX))、纳曲醚(naltrindole)、norbinaltorphimine、norbinaltorphamine、纳曲烯(naltribene(NTB))、普罗法朵、quadazocine、naloxonazine D-Pen-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-NH2(CTOP)、MR-2266、5’-异硫腈酸钠曲醚酯(naltrindole-5’-isothiocyanate(5’-NTII))、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、右啡烷(dextrophane)、甲基纳曲酮(methylnaltrexone(MNTX))、DALCE(D-Ala2，Leu5，Cys6-脑啡肽)、甲基纳洛酮(methylnaloxonium)、布马佐辛和LY274614。
无论如何，使用任何具有鸦片样拮抗活性的化合物是可能的。
剂量和给药途径也将取决于一些因素(动物种类、体重、疾病的种类和严重程度)，这些因素将通过兽医或医生来评价。剂量通常包含大约1/10到10倍的这些药物已知的且常表明的推荐剂量。例如，在人类医学中，纳洛酮可以0.1-2mg日剂量开始给药而纳曲酮以5-50mg的日剂量开始给药，然而推荐以10-20mg纳曲酮剂量来维持治疗。
在兽医中，根据病情，可以一次或多次静脉或肌肉注射给予马和牛5-50mg的纳洛酮。在狗中，按照其大小，通常使用的剂量为0.5-1mg/kg。
在狗慢性疾病治疗中，考虑到纳曲酮的半衰期比纳洛酮长的多，活性物的代谢长达2-3天，优选口服给予5-10-20-50mg的纳曲酮。药理反应取决于所使用的剂量。事实上，小剂量仅会诱导部分受体激活而大剂量对受体具有完全和有力的作用。所以，通过调节鸦片样拮抗剂与不同类型的受体部位结合可调整药理治疗作用。
通过定量测定与受影响组织和器官结合的内啡肽可更精确地指出剂量，这种测定是通过动力学的分析方法进行的，包括在给予特定的内啡肽拮抗剂(如纳洛酮)之后，首先进行放射免疫测定和一种或多种随后的测定。给予拮抗剂前后游离内啡肽值的差别获得结合的内啡肽的值，在给予拮抗剂后进行多种测定的情况下，可获得内啡肽的结合动力学。
通过所述分析方法可获得的参数给本发明的治疗提供指导。由本发明治疗所引起的血钙的变化也可为治疗提供有用的线索。
作为钙离子的原料，所有药用相容的可溶性钙盐都可使用，如抗坏血酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄庚糖酸盐、2，5-二羟苯磺酸盐、葡萄糖烟酸盐(glucobionate)、乙酰丙酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、泛酸盐、酮戊二酸盐、硼葡萄糖酸盐(borogluconate)等。也通过已经建立的治疗方法将决定这些化合物的剂量。如参见Goodman & Gilman，“ ThePharmacological basis of therapeutics”，VII ed.，MacmillanPub.co.，P1521。
按照具体的治疗方法，可将钙盐通过口服和非胃肠道途径给药。
按照本发明的优选实施方案，鸦片拮抗剂和钙的组合物中可加入蛋白酶，它可分解游离的内啡肽，增加组合物本身的效力。合适的蛋白酶的例子(可以40到160 U.P.F.U的剂量范围给药)包括菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、蛋白酶A和K、激肽释放酶、胰肽酶E、木瓜凝乳蛋白酶、梭菌蛋白酶、胶原酶、金属肽链内切酶、无花果酶。
该组合物也可含有其它活性成分，即，前残腺素、大戟二萜醇、ATP、维生素C、左咪唑，这些药物的剂量都是已知的。
本发明混合形式或“药盒”形式的组合物的制备可使用常规赋型剂来进行，如在“Remington’s Pharmaceutical Siences hand book”，Mack Pub.Co.，NY，USA，XVII ed.中公开的那些赋型剂。
下列实施例将进一步描述本发明。
实施例1治疗受生乳热影响的奶牛奶牛的低钙血生乳热提供了一个有效的实验模型，因为牛具有非常复杂的钙代谢。
事实上，奶的分泌包括需要从循环液开始固定在乳腺中，每kg所产生的奶中大约有1克的钙，而血流中钙的总量为1.5g。作为结果，证明了特别是在乳汁分泌开始时，奶牛的钙的补充是特别有效的并且在某些情况下，有阻滞和相互作用的过程，在其它物种中的情况更严重。这发生在如β-内啡肽最大生理增长和Ca++代谢严重减少时(每个哺乳动物)的分娩期。
静脉注射5mg纳洛酮、50g硼葡萄糖酸钙、肌肉注射胰蛋白酶100uFu和糜蛋白酶27.7uFu来治疗受生乳热影响的30头母牛。
全部动物都很快恢复并且未发生胎牛死亡。
实施例2治疗受气候性生乳热影响的奶牛奶牛的生乳热有时与前胃运动性和受气候影响打嗝反射作用的同时阻滞并发。
给予一头受上文所述并发很明显气胀影响的奶牛5mg溶于50g葡萄糖酸钙的500ml无菌水的溶液中的纳洛酮而对生乳热和气胀都产生阳性作用，缓慢静脉输注250ml纳洛酮钙后，打嗝反射作用恢复且瘤胃中过量的气体排出。
输注(500ml)结束时，症状缓解的奶牛站立。给予蛋白酶(Endozym)最终诱导游离内啡肽浓度的减少。
实施例3治疗狗由细小病毒诱导的出血性胃肠炎。
细小病毒引起的狗的胃肠炎是一种病毒传染性疾病，如果不进行治疗，通常会使动物死亡。甚至进行适当治疗时，该疾病经常是预后不好的。该疾病经常发生在小于一年的幼犬中。潜伏3-4天后，动物出现厌食、感觉抑郁、呕吐、出血性腹泻、严重脱水、休克。该疾病在2-5天内使70％的动物死亡。
输注电解质、大量的维生素C和K、抗生素、可的松等进行复合治疗后，仅15天，存活的动物可恢复健康。
用含有纳洛酮(0.5-1mg)、葡萄糖酸钙(0.5g)、维生素C(500-1000mg)、维生素K(1g)的无菌水溶液每日静脉注射来治疗受细小病毒性胃肠炎影响的40只狗。
该治疗在第二天已使病症消失，再过3-5天，则完全恢复。
实施例4治疗奶牛中由大肠杆菌引起的实质性乳腺炎实质性乳腺炎是一种由大肠杆菌引起的严重的乳腺炎。
以0.5mg/100kg体重的盐酸纳洛酮、葡萄糖酸钙(50g)和蛋白酶(Endozim)治疗10头受此疾病影响的奶牛。同时给予对该疾病具有特异性的抗生素和磺胺(sulfamidic)。第一次给药后，被治疗动物已灰复其正常的器官功能，症状完全消失。治疗持续2-3天。
实施例5治疗狗的犬瘟热每日给予0.5-1mg盐酸纳洛酮(一周)、非胃肠道给予一周的维生素C(0.5-1g/dieof one week)葡萄糖酸钙iv(0.5g/die for one week)、Endozym和维生素B1(500-1000mg)和抗生素(头孢菌素+氨基糖甙，im.一周)来治疗8只受犬瘟热影响的动物。
在每种情况下，随着神经症状的明显改进，形态得以明显改善。
2-3天后，被治疗动物改善，5-15天后，甚至内神经症状完全恢复。
实施例6在恢复过程中给予纳洛酮的作用将纳洛酮口服给予临床上健康的52岁老人(6个月前切除阑尾手术。在恢复阶段受脂肪坏死影响)，在剖腹部位因给药而在2-3小时内产生局部发痒。在后来的几天中，治愈过程由消除某些未再吸收的缝合残留部分而诱导形成小瘘管。相信，内啡肽阻碍治愈过程。
实施例7治疗LUF综合症在人类医学中，将特定形式的排卵停止称作黄体化未破裂的卵泡(Luteinized unrupted follicle)或LUF，其特征在于规律的月经流出和没有排卵的正常的黄体化过程。认为LUF综合症与不明原因的不育有关。
一名受LUF综合症影响的妇女，她以前因一年多未排卵而接受促性腺激素的治疗，其β-内啡肽的血浆浓度为50pg/ml，其它均正常。用口服纳洛酮(25mg)、钙(1g)、维生素C(2g)治疗4天后，该病人具有双排卵，开始怀孕并在到期后生出正常的小孩。
实施例8治疗狗的肌肉-骨骼系统疾病治疗一条受髋部发育异常的狗和二条肢体骨折的狗。按本发明进行药物治疗(0.2-0.5mg纳洛酮或5-10mg的纳曲酮，每48小时一次，共2-4周，250-500mg/die of钙，共一个月，可给可不给的蛋白酶和维生素C)后，动物很快(2-3天)改善其疼痛和功能状况。
在骨折部分快速形成骨痂且坚实信数为通常的一半。
实施例9在牛的循环周期中诱导黄体apoptosis用5mg纳洛酮和2g硼葡萄糖酸钙/100kg体重静注连续两天来治疗5头发情阶段(diestral phases)的周期性牛。
通过发育学(ecographg)观察到黄体的进行性损害。结束治疗4-5天后，所有被治疗的牛都有发情期。循环孕酮的浓度接近于零。结果显示内啡肽介导钙流入黄体化的细胞中，影响黄体的apoptosis过程。
实施例10治疗患有佝偻病的幼犬交替肌肉注射0.1mg/kg纳洛酮和50mg/kg的葡萄糖酸钙一个月和维生素C(250mg)1个月来治疗受佝偻病影响的12条狗。从开始治疗的两个月后，所有动物最后都得以恢复。治疗3天后，疼痛已经消失。
该结果特别令人惊奇，因为单将纳洛酮给予佝偻病幼犬在几分钟内诱导具有破伤风危象的急性低血钙，而单独给予钙盐时又诱导具有明显心动过速的呕吐。
相反地，本发明的治疗没有副作用并使得所治疗动物完全恢复健康。
实施例11治疗马的胆酸综合症(Cholic Syndrome)静脉注射0.6g葡萄糖酸钙和1.2mg纳洛酮/100kg体重未治疗受胆酸综合症影响的11匹马。治疗15-30分钟后，开始恢复，疼痛消失且eminction和排粪建立。
实施例12治疗狗的上斜眼骨营养不良肌肉注射硼葡萄糖钙(1g)和纳洛酮(1mg)30天来治疗受上斜眼骨营养不良影响的两月龄狗。该狗显示明显的临床和功能上的恢复，这是通过显示骨膜正常化和winberger症状消失的放射性检查来确定的。
权利要求
1.鸦片样拮抗剂和钙盐组合用于制备治疗由内啡肽介导的疾病的药物。
2.权利要求1的用途，鸦片样拮抗剂为纳洛酮、纳曲酮或选自二丙吗啡、纳布啡、β-氯代纳曲宁、纳曲连氮、naloxazone、纳美芬、β-呋纳曲胺、ICI 174.864、7-亚苄基纳曲酮、纳曲醚、norbinaltorphimine、norbinaltorphammine、纳曲烯、普罗法朵、quadazocine、naloxonazine、D-Pen-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-NH2、MR-2266、5’-异硫腈酸纳曲醚酯、N-甲基-D-天冬氨酸、右啡烷、甲基纳曲酮、DALCE、甲基纳洛酮、布马佐辛和LY274614。
3.权利要求1或2的用途，其中与蛋白酶组合使用。
4.人医和兽医使用的药物组合物，它含有作为活性组分的鸦片样拮抗剂和钙盐以及可有可无的选自蛋白酶、前列腺素、大戟二萜醇和维生素C和K的其它活性成分。
5.权利要求4的组合物，其中蛋白酶选自菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、摩蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、蛋白酶A和K、激肽释放酶、胰肽酶E、木瓜凝乳蛋白酶、梭菌蛋白酶、胶原醇、金属肽链内切酶、无花果酶。
6.权利要求4或5的且合物，是由同时或顺序给予活性成分的分开的剂量形式组成的药盒形式。
7.权利要求4-6的任一组合物，其中钙盐选自抗坏血酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄庚糖酸盐、2，5-二羟苯磺酸盐、葡萄糖烟酸盐、乙酰丙酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、泛酸盐、酮戊二酸盐、硼葡萄糖酸盐。
8.权利要求4-7的任一组合物，其中鸦片样拮抗剂是纳洛酮。
9.权利要求4-7的任一组合物，其中鸦片样拮抗剂为纳曲酮。
10.权利要求4-7的任一组合物，其中鸦片样拮抗剂选自二丙吗啡、纳布啡、β-氯代纳曲宁、纳曲连氮、naloxazone、纳美芬、β-呋纳曲胺、ICI 174,864、7-亚苄基纳曲酮、纳曲醚、narbinaltorphimine、norbinaltorphamine、纳曲烯、普罗法朵、quadazocine、naloxonazine、D-Pen-cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-NH2、MR-2266、5’-异硫腈酸纳曲醚酯、N-甲基-D-天冬氨酸、右啡烷、甲基纳曲酮、DALCE、甲基纳洛酮，布马佐辛和LY274614。
全文摘要
本文描述了鸦片样拮抗剂和钙盐组合用于制备治疗内啡肽介导的疾病的药物。
文档编号A61P31/04GK1151116SQ95193758
公开日1997年6月4日 申请日期1995年5月22日 优先权日1994年5月24日
发明者P·米诺雅, R·L·西奥斯西 申请人:P·米诺雅, R·L·西奥斯西