专利名称：亲脂性抗氧化剂化合物防止类视黄酸诱导的uva－介导的氧化反应的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及本发明涉及保护皮肤使之不受紫外线(UV)A照射的氧化作用的伤害的方法，所说的保护作用由类视黄酸(retinoid)的使用所诱导。具体地说，本发明涉及向皮肤局部施用类视黄酸的方法，所说的物质降低或消除类视黄酸诱导的紫外线A-介导的氧化作用。
2．背景信息已知类视黄酸具有对皮肤有益的作用，这些物质例如，视黄酸(也被称为维生素A或tretinoin)，视黄醇，和视黄醇棕榈酸酯(retinolpalmitate)。例如，它们已用于经口服和局部施用来治疗痤疮。
关于类视黄酸充当光保护剂或光老化修复剂的能力，存在不一致的证据。类视黄酸已经显示出在高浓度下能充当防老化剂，保护皮肤使之不受日光的伤害并防止由抗坏血酸和铁起始的脂质过氧化作用的诱导作用[Das等，神经化学杂志(1989)52:585-588；Khettab等，生物化学(1988)70:1709-1713；Geesin等，Arch生物化学生物物理(1990)278:350-355]。太阳的紫外线照射对皮肤产生急性和慢性作用的一种方式牵涉到产生一类反应性氧(reactive oxygenspecies)，其通过包括脂质过氧作用化在内的许多不同的机制引起病理现象[Shea等，“非电离辐射和皮肤”，皮肤的生理学、生物化学和分子生物学，1991 LA Goldsmith编，牛津大学出版社纽约，vol.2,pp910-927]。的确，自由基和脂质过氧化作用的产生已经与在包括皮肤在内的许多组织中的老化相联系。[Machlin，等，FASEBJ(1987)1:441-445；EmeritⅠ，“自由基和皮肤的老化”，自由基和老化，1992。I Emerit和B Chance编，Birkhauser Verlag Base:瑞士，p328-341；De Quiroga等，“抗氧化剂、脂质过氧化作用和老化之间的关系”，自由基和老化，1992.I Emerit和B Chance编，Birkhauser Verlag Base瑞士，pp.109-123；Yagi,K.,“皮肤中的脂质过氧化”，反应性氧物种在皮肤中的生物学作用，1987.O.Hayaishi,S.Imamura,Y.Miyachi编，Elsevier纽约，pp.109-116]。因而，类视黄酸阻止由抗坏血酸和铁起始的脂质过氧化作用的诱导作用的能力似乎表明类视黄酸抗由UVA-介导引起的氧化性损伤的潜能。
然而，也已经报道了类视黄酸产生不受欢迎的副作用。已报道类视黄酸减少个体产生UV-介导的红斑的暴露时间，导致对阳光增加的敏感性[Szaniawska等，肿瘤(1988)35:191-195；Collins等，美国皮肤病学杂志(1986)14:274；Ferguson等，药物治疗(1989)40:123-135；和Auffret等，美国皮肤病学杂志(1990)23:321-322]。不是所有的研究都能被研究证实[Diffey等，美国皮肤病学杂志(1986)12:119-121；和Wong等，美国皮肤病学杂志(1986)14:1095-1096]。另外，维生素A已显示出在大鼠中能够增加四氯化碳的肝毒性副作用[Elsisi等，毒理学应用药理学(1993)119:295-301]。
在有关类视黄酸对氧化事件的影响的相互矛盾的报告的情况下，申请人研究了类视黄酸UVA诱导的脂质过氧化作用的影响。这一研究导致令人惊奇地发现，类视黄酸对UVA-介导的氧化性损伤起作用，但是，当与某些亲脂抗氧药剂结合起来使用时，它们的作用可以被降低。
发明概要因此，本发明的一个目的是提供一种向皮肤施用类视黄酸而降低或消除类视黄酸诱导的UVA-介导的对皮肤的损伤(包括脂质过氧化作用)的方法。
本发明的另一个目的是提供一种局部组合物，当对人皮肤应用时，该组合物提供类视黄酸的有益作用，从而保护皮肤使之不受类视黄酸诱导的UVA-介导的损伤(包括脂质过氧化作用)。
在一个实施方案中，本发明涉及一种向哺乳动物皮肤局部施用类视黄酸的方法，所说的物质降低或消除类视黄酸诱导的UVA-介导的氧化作用，该方法包括向哺乳动物皮肤局部施用类视黄酸组合物，所说的组合物含有安全与有效量的所说类视黄酸和安全与有效量的亲脂性抗氧化剂。
本发明的各种其它目的与优点从本发明的附图和随后的描述会变得清楚。
附图简要描述
图1显示了不同的培养平板对暴露于太阳模拟光下的人皮肤成纤维细胞的脂质过氧化作用的产生的影响。细胞通过Corning 75 cm2瓶盖或通过有或没有盖的Costar 100mm组织培养皿暴露于太阳模拟光下。采用灯的太阳模拟器排列，将三份培养物暴露在增加数量的MED下。
图2显示了具有不同培养材料的光源的光谱剂量分布。给出了三个细胞培养条件的光谱剂量分布，所说的培养条件与在以前(参见图1)描述的采用灯的太阳模拟器排列的脂质过氧化作用测定法中一致。
图3显示了F40 350BL灯的光谱辐照度。给出了Sylvania F40350BL灯的光谱辐照度(98％WA,2％UVB)。
图4个显示了Schott滤膜的吸收光谱。测定并显示了各种WG滤膜的吸收值。
图5显示了用图4中描述的Schott滤膜所产生的光谱剂量分布。
图6显示了用Sylvania F40 350BL荧光灯与图4和5中所描述的Schott滤膜组合所产生的的示差谱。这些谱代表当一个滤膜与系列中的下一个滤膜比较时所产生的谱的差异。
图7显示了在图4-6中描述的Schott滤膜存在或不存在下，在人皮肤成纤维细胞(HSF)和Swiss 3T3细胞(S3T3)中产生的脂质过氧化作用。
图8显示了人皮肤成纤维细胞(HSF)和Swiss 3T3小鼠成纤维细胞(S3T3)的脂质过氧化作用谱。这些作用谱是用图6和7的信息确定的。
图9显示了利用图6中描述的Sylvania F40 350BL荧光的灯产生的示差谱。其突出地给出从图6选择的波长(290-310nm)。
图10显示了单独地的Westinghouse FS40太阳灯的光谱辐照度。
图11显示了暴露于Westinghouse FS40太阳灯下对人皮肤成纤维细胞中脂质过氧化作用产生的影响。三份培养物暴露于增加数量的MED下。
图12显示了类视黄酸对UVA-诱导的脂质过氧化作用的影响。利用Sylvania F40 350BL灯，将Swiss 3T3小鼠成纤维细胞(S3T3)(A)和人皮肤成纤维细胞(B)暴露于60焦耳/cm2下。
图13显示了视黄酸对UV-诱导的脂质过氧化作用的影响的剂量和波长依赖性。三份培养物采用灯的太阳模拟器排列照射指定数量的MED或者在100mM视黄酸的存在下照射焦耳/cm2UVA的指定水平。
图14显示了在存在或不存在Schott滤膜下产生的类视黄酸对脂质过氧化作用的水平的影响。
图15个显示了类视黄酸对在Swiss 3T3细胞中的脂质过氧化作用的背景水平的影响。三份培养物用类视黄酸的指定浓度与类型处理，并且保持在远离灯的铝箔下(NO UV)或保持在灯下(FOIL)。
图16显示了用视黄酸处理的Swiss 3T3细胞的脂质过氧化作用的作用谱。
图17个显示了在甲醇中的所有反式视黄酸的50μM溶液的吸收光谱。
图18显示了丁基化的羟基茴香醚，丁基化的羟基甲苯和抗坏血酸(asborbate)对视黄酸和UVA在Swiss 3T3细胞上的脂质过氧化作用的产生的协同作用的影响。
发明详述本发明涉及一种向皮肤施用类视黄酸而降低或消除类视黄酸诱导的UVA-介导的氧化作用(包括脂质过氧化作用)和脂质过氧化作用产生的产物对皮肤的损伤的方法。本发明也涉及对人类和类似的敏感动物皮肤局部施用类视黄酸组合物的方法。本发明由这一惊人的发现导致类视黄酸对UVA-介导的氧化性损伤起作用，但是它们的损伤作用可以由与亲脂抗氧药剂一起局部施用类视黄酸所降低。
在本发明的方法中，皮肤接收类视黄酸的有益作用，而降低和/或消除类视黄酸诱导的UVA-介导的氧化性损伤。其是通过将组合物局部施用于皮肤完成的，所说的组合物含有降低和/或消除类视黄酸引起的UVA-介导的氧化性损伤有效的量类视黄酸以及有效的量的亲脂性抗氧化剂。类视黄酸引起UVA-介导的氧化作用包括但不限于脂质过氧化作用和由脂质过氧化作用产生的产物，如交联剂。
已经发现亲脂性抗氧化剂在预防由类视黄酸引起的UVA-介导的氧化作用引起的皮肤损伤上有效。优选的亲脂性抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸基-6-棕榈酸酯，丁基化的羟基茴香醚(BHA)和丁基化的羟基甲苯(BHT)。
抗坏血酸基棕榈酸酯以前显示在无毛小鼠中预防UVB诱导的皱纹上无效[Bissett等，Photodermatol Photoimmunol Photomed(1990)7:56-62]。然而，其已经显示出保护内皮细胞使之免受脂质过氧化作用的细胞毒作用[Kaneko等，Arch生物化学生物物理(1993)304:176-180]。还没有报道对抗坏血酸基-棕榈酸酯对UVA-介导的事件的影响的任何检测结果。
BHA也已显示出在预防脂质体中UVC诱导的脂质过氧化作用上有效[Pelle等，Arch生物化学生物物理(1990)283:234-240]。此外，已经发现BHA在阻止UVB-或PUVA-诱导的鸟氨酸脱羧酶活性(与肿瘤形成相关)上有效[Kono等，皮肤病学脂质(1992)19:389-392；Black等，光化学光生物学(1986)43:403-408]，然而，BHA对UVB-诱导的光致癌作用无效[Black等，光化学光生物学(1986)43:403-408]。没有有关BHA对其它UVA-介导的事件的影响的任何结果的报道。
在三种优选的亲脂性抗氧化剂中，已经见对BHT的最大量的研究。存在有关口服BHT提供抗急性和慢性UVB暴露作用保护作用的能力的大量报道[Koone等，J Invest Dermatol(1986)87:343-347；Black等，光化学和光生物物理学(1980)1:119-123；Peterson等，J Invest Dermatol(1980)75:408-410；Black等，光化学光生物学(1984)40:69-35；Black等，光化学光生物学(1991)53:707-716；Black等光化学光生物学(1986)43:403-408]，所说的暴露作用包括光致癌作用，鸟氨酸脱羧酶活性的红斑和诱导作用。此外，BHT已显示出在预防UVA-[Bose等，Radiat Res(1993)133:340-344]和UVC-[Pelle等，Arch生物化学生物物理(1990)283:234-240]诱导的脂质体中的脂质过氧化作用有效。还没有报道抗动物或培养细胞中的UVA-介导的氧化作用的BHT活性的任何证明。
在本发明中，包含亲脂性抗氧化剂的类视黄酸组合物局部施用于皮肤，保护皮肤使之免受类视黄酸诱导的UVA-介导的氧化作用的损伤。局部组合物中所使用的类视黄酸的量和本发明的方法可以在较大的范围内变化，取决于类视黄酸组合物施用于皮肤的治疗用途。优选地，类视黄酸以重量约0.001-约3.0％的量存在，更优选地以重量约0.025-约0.5％的量存在。
在类视黄酸组合物中存在并且施用于皮肤细胞的亲脂性抗氧化剂的量可以变化，只要存在降低或消除类视黄酸诱导的UVA-介导的氧化性作用(包括脂质过氧化作用)对皮肤的损伤足够量的抗氧化剂。优选地，抗氧化剂以约.0001％-约10％(w/w)的量存在于组合物中，更优选地以约.01-约1％(w/w)的量存在，更优选地以约.1-约.5％的量存在。
本发明的类视黄酸组合物可以制成各种产物类型。组合物可以是固体，液体或气溶胶形式，只要它们适于局部施用。例如，组合物可以配制成脂质体制剂、润肤剂、液体、霜剂、凝胶、软膏、微滴乳状液或溶液。
有助于本发明的目的或通常用于局部化妆品或医学组合物中的其它典型的皮肤护理药剂与添加剂也可以包括在用于本发明中的类视黄酸组合物中。各种维生素也可以包括在本发明的光保护性组合物中。这样的维生素的例子包括但不限于微生物A和其衍生物，维生素B2，生物素，泛酸，维生素D，维生素E和它们的组合体。
下列例子包括在本文中是为了进一步地说明本发明的实施，无意于用来限制本发明。
实施例细胞培养按照如下把小鼠Swiss 3T3(S3T3)和人皮肤成纤维细胞(HSF)的单层培养物在适当的培养基上培养至汇合。将S3T3细胞和HSF在包含10％小牛血清的Dulbecco’s改进的Eagle培养基(DMEM)中培养。
实施例1培养材料对脂质过氧化作用的产生的影响为了确定太阳模拟光是否可以产生对培养中的细胞的氧化作用，用Sylvania F40 350BL灯(98％UVA)和Westinghouse FS40太阳灯(大约50％UVA,50％UVB)组合模拟正常的太阳光谱照射新生期人皮肤成纤维细胞。
如上所述在Corning 75cm2组织培养瓶或100mm Costar培养皿中培养新生期人皮肤成纤维细胞培养物。然后通过使用具有Sylvania F40 350BL灯和Westinghouse FS40太阳灯(50％UVA,50％UVB)6∶5混合的灯泡的太阳模拟器排列照射培养物。
在照射以后，进行脂质过氧化作用测定。简言之，用橡皮细胞帚刮削照射平板，并且在dounce匀浆器上使细胞和溶液均匀。取小份蛋白质抽提物进行总蛋白质测定[Lowry等，生物化学杂志(1951)193:265-275]。抽提物的其余部分以三氯乙酸沉淀。通过在沸腾30分钟之前，将上清液与0.5％硫代巴比土酸溶液组合以双份测定上清液的丙二酸二醛(malondialdehyde)含量。测定样品在532 nm的吸收值。利用报道的消光系数确定丙二酸二醛水平[Wilbur等，Arch生物化学生物物理(1949)23:305-313]。
当培养物在Corning 75cm2组织培养瓶中培养时，产生指示细胞脂质过氧化作用水平增加的丙二酸二醛水平的剂量依赖性增加(图1)。当细胞在Costar 100mm培养皿中培养时，与Corning瓶相比，等剂量的UV照射时产生脂质过氧化作用水平降低(图1)。当移走Costar皿的盖子照射细胞时，在所试验的剂量下没有见到UV对所照射的细胞中脂质过氧化作用水平的任何作用(图1)。
为了了解通过利用不同的培养材料产生的不同的结果，检测了渗入不同培养平板的光线的频谱。以Optronics 742型光谱辐射计在250和400 nm之间以2nm间隔测定用于照射细胞的Sylvania F40350BL荧光灯的光谱功率分布。用辐照度乘以用于覆盖细胞的Costar盖的穿透率，以测定光源对细胞的辐照度。在每一波长处的辐照度乘以定标器值(代表时间)以便整体上等于80 J/cm2。
给出了采用以上所描述的灯太阳模拟器排列在脂质过氧化作用实验(图1)中限定的三种细胞培养条件(图2)下的光谱剂量分布。在这些条件下，用等量的UVB时，Corning瓶比Costar皿接受40％以上的UVA。未覆盖的皿甚至接收更少的UVA(Corning瓶比未覆盖的Costar皿接收140％以上的UVA)。这些结果表明UVA很可能在这些培养细胞中起到有选择地诱导脂质过氧化作用的作用。因而，所有尔后的实验(除指明的外)仅采用Sylvania F40 350B1灯完成(参见图3，使用这些光的光谱辐照度)，因为它们产生由98％的UVA和小量UVB(2％)组成的光谱。
实施例2测定脂质过氧化作用产生的作用谱为了测定对诱导脂质过氧化作用起作用的由F40 350BL灯产生频谱部分，如上所述，添加一些Schott滤膜(其吸收图4中所示的不同波长的能量)，采用Sylvania F40 350BL灯通过瓶盖照射在60mm培养皿中生长的HSF和S3T3细胞的铺满培养物。
通过利用一系列长路径滤膜(long pass filter)确定作用谱，以估价两个邻近滤膜之间的剂量差，两个滤膜之间的被评价的反应的差被归因于那一波段在两个滤膜之间的总的能量差的比例。将邻近滤膜的光谱剂量分布相减，以确定不同光谱剂量的差。对各邻近滤膜对完成这一过程。加合这些不同剂量分布以确定不同剂量带(参见图6)。
如上所述测定各滤膜对的每单位蛋白质含量的脂质过氧化作用水平，通过减去邻近对的水平确定各滤膜对的脂质过氧化作用的差。将滤膜对的过氧化作用差除以不同剂量带，以确定对各不同带的单位剂量有贡献的过氧化作用水平，表明过氧化作用对那一波段的绝对灵敏度。加合所有波段的绝对灵敏性，将各单个灵敏性除以总数，以确定各波段的灵敏度的百分比。将相对灵敏度作为不同波长带的函数作图，以说明UV光谱的哪一个部分在引起脂质过氧化作用中最有效。
用具有扩散反射附件(diffuse reflectance accessory)的Cary 2300分光光度计测定用于作用谱测定的Schott长路径滤膜的光谱吸收。将250和400 nm之间以2 nm间隔的波长的吸收率转化成百分透射。为了测定传送至覆有滤膜的细胞的光谱剂量分布，在各波长处用合适的Schott滤膜的透射率乘以具有Costar盖的光源的光谱剂量分布。也加合每个这样的分布，以确定通过滤膜向细胞传送的总能量。这些滤膜的吸收说明连续滤膜的较高波长的增加的吸收模式。图5中显示了从灯所产生的光谱减去各滤膜的吸收值后所形成的光谱剂量分布。如所显示的，具有增加的波数的滤膜的使用使所形成的光谱的吸收最大移动到较高波长处，并且消除较低波长的照射。
一个滤膜与下一个的光谱差异(图6)用来确定在从一个滤膜到下一个的各步骤中所涉及的脂质过氧化作用的量。
图7中显示了利用在图4-6中所描述的滤膜产生的脂质过氧化作用的量。如所显示的，脂质过氧化作用的水平随着具有增加的波数和吸收在光谱UVA区的较高的波长的滤膜的使用而降低。为了确定各滤膜对脂质过氧化作用的影响的贡献，每一滤膜变化的脂质过氧化作用变化必须除以由连续滤膜产生的示差谱(图6)。这一计算结果在图8中显示，并且代表光谱各部分对用Sylvania F40 350BL荧光灯所观察到的脂质过氧化作用的影响的贡献。
如所说明的，与不使用滤膜相比，在使用WG280滤膜时产生的脂质过氧化作用的变化代表在人皮肤成纤维细胞和Swiss 3T3细胞中的脂质过氧化作用的产生重要的光谱区。另外，从WG345滤膜到WG360滤膜的变化也代表明显对这一作用有贡献的区。各种这样的过渡的示差光谱产生具有十分靠近345 nm的最大吸收峰，表明存在对脂质过氧化作用的UV-依赖性产生重要的生色团，其具有十分靠近345 nm的最大吸收峰。有趣的是，具有非常邻近于两个鉴定的峰的峰的示差光谱不太敏感，有助于特异性地鉴别在光谱UVA区的重要的波长。
在光谱的UVB区中，人皮肤成纤维细胞也显示另一个生色团。这一作用可以由在图9中很好地显示的相应于297和303 nm的灯的剂量分布中小峰产生。UVB对人皮肤成纤维细胞中的脂质过氧化作用的产生的这一作用进一步由Westinghouse FS40太阳灯(用于用单独的这一灯产生的剂量分布)的使用所显示(参见图10)。利用UVB占优势的FS40太阳灯，仍然可以在人皮肤成纤维细胞中以剂量依赖的方式诱导脂质过氧化作用，如图11所示。
实施例3类视黄酸对UVA诱导的脂质过氧化作用的影响为了确定类视黄酸的抗氧化剂活性是否降低UVA-诱导的脂质过氧化作用，在存在或不存在各种类视黄酸下将两种不同的细胞类型暴露于UVA。惊人地是，所有三种试验的类视黄酸(所有-反式视黄酸，所有-反式视黄醇以及视黄醇乙酸酯)都刺激脂质过氧化作用产生。
在存在或不存在以上描述的类视黄酸下，利用Sylvania F40 350BL灯通过盖以60焦耳/cm2UVA照射在60mm培养皿中培育的正常的人皮肤成纤维细胞和小鼠成纤维细胞细胞系Swiss 3T3。
通过类视黄酸处理S3T3细胞(图12A)，脂质过氧化作用增加2.5倍到4倍。当需要更高浓度的视黄醇和视黄醇乙酸酯达到脂质过氧化作用的相同的水平时，视黄酸在这些细胞中最活跃。相反，在人皮肤成纤维细胞中，与以视黄醇处理所观察到的相比，视黄酸不刺激更大量的脂质过氧化作用(图12B)。
类视黄酸对UV诱导的脂质过氧化作用的这一作用表现出剂量和波长依赖性，如图13所示。当在100μM视黄酸中培养的培养物用增加MED数量的灯的太阳模拟器组照射时，发现对过氧化作用有极少的影响甚至没有影响。然而，当视黄酸处理的培养物以增加量的UVA照射时，可见脂质过氧化作用水平的剂量依赖性增加。
为了确定对类视黄酸对UVA诱导的脂质过氧化作用的影响起作用的波长，如上所述对这一现象的作用谱进行测定。简言之，利用Schott滤膜，与单独UVA比较(图14和图7)，在视黄酸，视黄醇或视黄醇乙酸酯存在下(图14)在Swiss 3T3细胞中测定脂质过氧化作用的水平。对所有试验的类视黄酸，以类视黄酸处理S3T3细胞产生类似的但不相同的模式。
用连续滤膜的脂质过氧化作用的产生的丧失与由单独UVA产生的模式十分不同。使用WG 280滤膜在类视黄酸处理的细胞中不产生脂质过氧化作用的水平上的降低。相反，当使用WG 280滤膜时，产生脂质过氧化作用上一致的显著增加，说明一些波长(大概在光谱的UVB区发现的)能够抑制类视黄酸在其它发射光谱的部分存在下诱导氧化产物产生的能力。WG280滤膜的这一作用是对类视黄酸处理的细胞是特异性的，由于在不存在类视黄酸的情况下，S3T3细胞不显示出脂质过氧化作用的相同的增加。
在这些实验期间所观察到的类视黄酸的另一个作用是产生脂质过氧化作用的不依赖于UV的机理。当利用1mM视黄醇或视黄醇乙酸酯处理时，保持在铝箔下远离灯的对照培养物仍然产生比较高的脂质过氧化作用水平(参见图15)。这一作用可以由所使用的类视黄酸产生，由于视黄酸不产生惊人的作用，然而，与所使用的其它类视黄酸比较，缺乏作用仅仅是因为需要较低水平视黄酸诱导脂质过氧化作用也是可能的。在包覆在箔中但保持在灯下的样品中，脂质过氧化作用的增加的背景水平甚至更高，可能表明由灯的热产生的这一作用的温度依赖性。
由于在视黄醇和视黄醇乙酸酯处理的培养物中对脂质过氧化作用的这一不依赖于UV的作用，仅仅如上所述测定了视黄酸诱导的作用的作用谱。如图16中所示，与在未处理的S3T3细胞中所产生的相比，视黄酸产生十分不同的作用谱。阻断UVB(WG280和WG230)波长的滤膜抑制脂质过氧化作用的产生。由采用WG360和WG375滤膜之间的差异的最大的作用所说明的至360-375之间的峰的缓慢上升类似于视黄酸的吸收光谱(参见图17)。400以上的波长的大的贡献可以由吸收峰产生，这一吸收峰是在可见区由这些研究中使用的Sylvania灯产生的。
试验了各种抗氧化剂阻止UVA和类视黄酸的协同作用的能力，如图18所示。BHA和BHT(在100μM时)在阻止大多数(但不是全部的)脂质过氧化作用上非常有效，所说的脂质过氧化作用时在100mM视黄酸施用于以60焦耳/cm2UVA照射的培养物时产生的。然而，抗坏血酸在这些实验中时无效的。
在疏水环境中，这一UVA和类视黄酸依赖性机制明显地包括氧-来源的游离基的产生。这一结论基于亲脂性抗氧化剂，BHA和BHT，有效抵消在视黄酸存在下所产生的脂质过氧化作用的增加(图18)，而抗坏血酸没有任何作用。有趣的是，抗坏血酸似乎不显示出增强脂样物质在UVA-诱导的脂质过氧化作用上所具有的作用(如用UVA单独一样)。视黄酸和UVA对脂质过氧化作用的这一组合作用的作用谱(图16)与作为吸收所照射的能量(激发分子至能够启动脂质过氧化作用的状态)的首要生色团起作用的视黄酸一致，但不是其证明。这一理论基于来源于这些试验的视黄酸UV光谱(图17)和这一视黄酸依赖性作用的作用谱(图16)之间的相似性。这些研究的另一个有意义的发现牵涉到污染的UVB抑制UVA和类视黄酸对脂质过氧化作用的产生的组合作用的能力。这一作用在用三种所检测的类视黄酸进行的所有实验中的结果是一致的。虽然UVB抑制这一UVA-依赖性现象的机制仍不清楚，但UVB改变类视黄酸或某些其它膜结合分子的结构以阻止在膜中起始或传播脂质过氧化作用是可能的。
这样，申请人和他们的方法已阐明了类视黄酸可以引起光依赖性氧化作用(其可以牵涉到报道的由它们的药理学使用所见到的“类视黄酸-敏感性”)的机制。此外，申请人已发现了一种降低或消除这一“类视黄酸-敏感性”的方法。
为了澄清和理解的目的，已经在某种程度上详细描述了以上的发明。也明显地是，可以进行形式上和实质上的各种组合而不超越本发明的范围。
所有在上文中提及的出版物本文一并参考。
权利要求
1．一种向哺乳动物皮肤局部施用类视黄酸的方法，所说的类视黄酸降低或消除类视黄酸诱导的紫外线A-介导的氧化作用，该方法包括向哺乳动物皮肤局部施用类视黄酸组合物，所说的组合物含有有效量的所说类视黄酸和有效量的亲脂性抗氧化剂。
2．权利要求1的方法，其中所说的类视黄酸诱导的紫外线A-介导的氧化作用是脂质过氧化作用。
3．权利要求1的方法，其中所说的组合物包含约.0001％到约10％(w/w)的所说亲脂性抗氧化剂。
4．权利要求3的方法，其中所说的组合物包含约.01％到约1％(w/w)的所说亲脂性抗氧化剂。
5．权利要求4的方法，其中所说的组合物包含约.1％到约.5％(w/w)的所说亲脂性抗氧化剂。
6．权利要求1的方法，其中所说的亲脂性抗氧化剂选自下组丁基化的羟基茴香醚(BHA)，丁基化的羟基甲苯(BHT)和抗坏血酸基-6-棕榈酸酯。
7．权利要求1的方法，其中所说的组合物包含约0.001％到约3.0％(w/w)的所说类视黄酸。
8．权利要求7的方法，其中所说的组合物包含约0.025％到约0.5％(w/w)的所说类视黄酸。
9．权利要求1的方法，其中所说的组合物是固体、液体或气溶胶形式的。
10．权利要求9的方法，其中所说的组合物是配制成脂质体制剂、润肤剂、液体、霜剂、凝胶、软膏、微滴乳状液或溶液形式的。
全文摘要
本发明涉及向哺乳动物皮肤局部施用类视黄酸的方法,所说的物质降低或消除类视黄酸诱导的紫外线A－介导的氧化作用。该方法包括向哺乳动物皮肤局部施用类视黄酸组合物,所说的组合物含有有效量的所说类视黄酸和有效量的亲脂性抗氧化剂。
文档编号A61K31/232GK1215328SQ97193683
公开日1999年4月28日 申请日期1997年12月8日 优先权日1996年12月10日
发明者J·C·格辛 申请人:庄臣消费者有限公司