专利名称：一种具有免疫抑制作用的化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于自身免疫溶血性贫血、肾炎、结缔组织以及脏器移植排斥反应的新免疫抑制性化合物。
目前开发的免疫抑制剂，其药物选择性强，专一性地调节某一免疫细胞的亚族。代表药物如环孢菌素A，能选择性抑T制辅助细胞的克隆(无性繁殖系)的增殖，在器官移植方面取得了可喜的成绩，并已广泛用于临床。然而，电发现一些副作用，如个别患者用药后有急性和慢性肾中毒、轻度震颤、神经病变、齿龈肥厚和多毛等副作用。最近发现的FK-506属于大环内酯类抗生素(C44H19NO5)，虽然实验研究结果满意，但因生产复杂，限制了临床上广泛应用。
本发明目的在于克服现有免疫抑制的各种缺点，寻找更理想代药物化合物。
本发明的化学结构如下
上述结构中C12a和C6a的H原子为反式结构。
本发明的化合物化学结构新颖，有别于迄今所有的免疫抑制剂，分子量小，结构简单，便于修饰。研究表明，本化合物的免抑制作用与环孢菌素A相似或稍强，同时有抑制肿瘤细胞的作用，有可能成为更有特点的新一代免疫抑制剂。
体内、体外药效学试验显示，本化合物具有好的免疫抑制作用，其细胞免疫强度与当今临床上广泛使用的免疫抑制剂--环孢菌素A相当，其体液免疫抑制作用明显优于环孢菌素A，同时其急性毒性很低，LD50(口服)为1000mg/kg，比治疗剂量10mg/kg大100倍，所以有望开发成为一个新的免疫抑制药物。
本化合物的理化性质如下(1)黄色针晶(2)元素分析C19H18O5实验值C69.58 H5.60(3)分子量及分子式
图1为本发明的质谱图本化合物的质谱，在m/z326处有(M+)的分子离子峰；因此可确定其分子式C19H18O5，分子量326。
(4)紫外吸收光谱图2为本发明紫外吸收光谱图。
在232nm处有一特征性的吸收峰；在350nm处出现一个肩峰。
(5)红外吸收光谱图3为本发明红外吸收光谱。
用KBr溶剂法测定，其主要吸收极大波数如下3400，1690，1640(cm-1)。
(6)核磁共振谱图4为本发明核磁共振谱使用400M Hzin，在DMSO-d6中测定的1H的核磁共振谱如图4所示。
(7)溶解性溶于甲醇、乙醇、丙酮，不溶于水、石油醚。
(8)熔点170℃(分解)(9)旋光度[α]250＝+150(c1×10-4M eOH)(10)TLCRf值(silica ge160M erck5715)苯-甲醇＝9∶1 Rf＝0.43氯仿-甲醇＝9∶1Rf＝0.48(11)单晶X光衍射图5为本发明分子结构图将单晶(晶体大小0.3×0.3×0.4mm)置于NICOLET R3M/EX射线衍射仪上，用石墨晶体单色器λ＝1.5417810×10-10m。晶体数据属正文晶系，空间群为P212121，晶胞参数为a＝9.275(4)，b＝10.994(5)，c＝15.683(7)×10-10m。晶胞内分子数z＝4，体积v＝1599.1×10-30M3。应用SHELXTL程序分析块矩阵最小二乘方法修正结构参数，差值电子密度法确定氢原子的坐标，最终的偏离因子R＝0.0683，分子结构如图5所示。
生物学性质本化合物对枯草菌6633和金葡萄菌15等有弱抗菌活性。
免疫抑制作用一、细胞免疫抑制作用1、对T-淋巴细胞增殖的影响实验结果表明，不同剂量K-C和CyA一样对丝裂原ConA刺激T-淋巴细胞增殖有明显抑制作用，它们的抑制率分别为20.7％、47.2％、71.7％和18.9％、52.8％、84.9％，二药在相同剂量情况下，抑制T-细胞增殖的作用程序无统计学差异。
2、对小鼠DNFB所致迟发性超敏反应和大剂量环磷酰胺所致增强型迟发性超敏反应的作用。
不同剂量(12.5，25，50mg/kg/d×g)K-C可明显抑DNFB制所致的迟发性超敏反应及环磷酰胺增强的DNFB迟发性超敏反应，其作用强度与相同剂量的CyA无统计学差异。
3、对心脏和皮肤移植存活期的影响。
本化合物和环孢菌素A一样对心脏和皮肤移植物的存活期能显著延长，表明本化合物和环孢菌素A对移植物排斥反应有抑制作用。
4、本化合物对腹腔渗出细胞吞噬作用的影响。
CyA和K-C高剂量组与对照组相比吞噬作用不存在统计学上的差异。提示CyA和K-C对巨噬细胞吞噬作用可能无影响。
二、体液免疫抑制作用1、本化合物对脾细胞分泌抗体的作用。
致敏对照与致敏溶剂组溶血素含量均较非致敏组含量高，提示致敏动物抗体含量高，致敏溶剂组与致敏对照组相比较其溶血素含量无统计学差异，提示溶剂对脾细胞抗体生成无明显影响。环孢菌素A和本化合物高、中、低三个剂量组溶血素含量均比致敏对照组低(P＜0.001)，提示两药对脾细胞抗体生存存在抑制作用。而且，本化合物三个剂量对抗体的生成作用影响较环孢菌素A弱。
2、本化合物对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响。
3、本化合物对小鼠活化B淋巴细胞所致脾细胞增殖的影响。
由上述2、3实验结果表明本化合物比CyA具有更好的体液免疫抑制作用。
权利要求
1.一种具有免疫抑制作用的化合物，其特征在于该化合物具有下述结构
全文摘要
本发明涉及一种用于自身免疫溶血性贫血、肾炎、结缔组织以及脏器移植排斥反应的新免疫抑制性化合物。试验证明,本发明具有分子量小,结构简单,便于修饰等特点。研究表明,本化合物的免抑制作用与环孢菌素A相似或稍强,同时有抑制肿瘤细胞的作用,有可能成为更有特点的新一代免疫抑制剂。
文档编号A61K31/12GK1196348SQ9810190
公开日1998年10月21日 申请日期1998年5月12日 优先权日1998年5月12日
发明者王南金 申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所