专利名称：取代的苯甲酰胺类化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及通式I取代的苯甲酰胺类及其在医药中的用途。
自身免疫疾病是由于免疫系统对内源性结构的反应结果所致。在该过程中，对内源性组织正常存在的耐受性被中止。抗体，特别是T-淋巴细胞和单核细胞/巨噬细胞，在各种自身免疫疾病的病理过程中起着重要的作用。活化了的单核细胞/巨噬细胞分泌众多不同的炎症中间介质，它们直接或间接地造成了受自身免疫疾病影响的组织的损坏。而单核细胞/巨噬细胞的活化是受与T-淋巴细胞的相互作用或者是通过细菌产物如脂多糖(LPS)所影响。由各种细胞产物诱导的单核细胞/巨噬细胞和粒细胞的活化一般常常是炎症反应的特征。
由于对动物的众多实验以及初期的临床试验，在炎症细胞因子(例如白介素IL-12)和抗-炎症细胞因子(例如，白介素IL-10)之间的平衡对炎症和自身免疫疾病的发生，与发展的重要性已被明确的加以记载。在疾病的各种动物模型如风湿性关节炎，多发性硬化症，糖尿病，以及皮肤和粘膜的炎症疾病中，IL-12的病理生理学作用是明显的(Immunol.Today 16/8383-387，1995；J.Immunol.1554661-4668，1995；J.Exp.Med.1821281-1290，1995；J.Exp.Med.187/4537-546，1998)。上述各疾病可通过应用IL-12而被引发，而在抑制了内源性IL-12之后，则疾病过程明显地受到遏止并继而使动物痊愈。
在炎症肠疾患，如患有节段性回肠炎的患病动物和病人中，在肠的发炎部位有着明显增加的T-细胞的活性。该T-细胞活性的特征在于在损伤部位中IL-12和IFN-γ的表达增加。而另一方面，免疫抑制性细胞因子IL-10在损伤部位也明显减少(Immunity 3171-174，1995；J.Exp.Med.1821281-1290，1995；Eur.J.Immunol.261156-1163；Eur.J.Immunol.28379-389，1998)，免疫抑制的细胞因子IL-10对发生炎症肠道疾患的意义显然可从下面事实中看到，即IL-10失去效能，则小鼠发生了自发性结肠炎(Immunity 3171-174，1995)，在肠的固有膜中IFN-γ-生成的T-细胞的激活基本上取决于局部生成的IL-12。在一种过敏原-诱导的结肠炎的动物模型中，已表明，存在的严重结肠炎可用抗体除去IL-12。用抗体抑制IL-12导致在数日内发生临床和病理组织的正常化。在接受抗-IL-12治疗的小鼠固有膜的T-细胞中再也检测不到IFN-γ进一步的生成。(J.Exp.Med.1821281-1290)。
在人体中初步应用重组IL-10证实了抗-炎症性质。对健康受试者施用IL-10后，用LPS激活活体内的单核细胞，形成的炎性细胞因子TNF-α和IL-1减少了65至95％(J.Immunol.1545492-5499，1995)。对患有甾体-不显效的节段性回肠炎的患者应用IL-10导致临床症状的改善(Gastroenterology，113383-389)。最近，也报导了对患有牛皮癣的三位患者皮下应用IL-10，结果疾病的症状得到改善。而且，形成的IL-12和TNF以及在单核细胞表面分子的表达也下降(J.Clin.Invest.101783-794)。在人体中应用抗体以对抗IL-12现在即将进行。
简言之，可以这么说，IL-10的缺乏或者IL-12的过量决定了众多炎症疾病的病理生理。试图正常化IL-10/IL-12的平衡有着巨大的治疗潜在价值。
因此，本发明的目的是研制新的免疫调节剂，它们并不导致一般的免疫抑制，而是影响IL-10/IL-12的平衡正常化。
现在已发现，对欲研制的物质的这些要求已为特定的取代苯甲酰胺类所满足。
因此，本发明提供了式I取代的苯甲酰胺类，
其中R1代表了相应于式COOR4的基团，这里R4表示具有1至6C原子的直链或支链烷基；或相应于式CONR5R6的基团，这里R5和R6为相同或不同，并表示具有1至6C原子的烷基(直链或支链)，或或者与N原子一起，表示吡咯烷、哌啶、六亚甲基亚胺或吗啉环；R2表示氯、氟、CF3，和具有1至3C原子的烷基或氢，和R3表示羟基，具有1至6C原子的烷基或烷氧基(直链或分支的并可任意被OH-，烷氧基，酯基或具有1至6C原子的开链或环状酰胺基取代)，或CH2-NR5R6基，这里R5和R6如前定义。
本发明的化合物可以是外消旋形式或纯的对映体形式或与药学上相匹配的酸形成盐的形式。
优选的取代的苯甲酰胺为下述化合物，其中R1基团代表相应于式COOR4的基团，这里R4表示具有1至6C原子的直链或支链烷基；或相应于式CONR5R6的基团，这里R5和R6与N原子一起表示为吗啉环；R2为H而R3表示为羟基或基团CH2-NR5R6，这里R5和R6与N原子一起表示为吗啉环。
特别优选的是，2-(吗啉代-4-羰基)-N-(1-吗啉代-4-基甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)苯甲酰胺和N-(1-羟基-2，6-二氧代哌啶-3-基)邻氨甲酰苯甲酸-甲酯。
相应于通式I的化合物可按下法制得首先，以已知方法，将相应于式IIa或IIb的羧酸转换为酯(R1＝COOR4)或酰胺(R1＝CONR5R6)。本发明的化合物可由此从羧酸IIb获得。然后再按已知方法，将不代表羟基的基团R3引入到相应地由羧酸IIa得到的这些化合物中，例如与多聚甲醛和相应于式HNR5R6的仲胺曼尼期反应。
本发明还提供了应用相应于式I的取代的苯甲酰胺类作为药物，特别是作为免疫调节剂。本发明的物质明显地抑制了由LPS-激活的人单核细胞产生的炎性细胞因子IL-12。另一方面，该组物质又增加了由LPS-激活的人单核细胞产生的抗-炎性细胞因子IL-10。这样就使得本发明的新物质不同于已知的免疫调节剂，如甾体和磷酸二酯酶抑制剂(它们抑制了IL-12的合成也抑制了IL-10的合成)。由于它们特征的免疫调节活性(抑制IL-12，增加IL-10)，因此本发明的物质适用于治疗和/或预防炎症，特别是皮肤和粘膜及血管的炎症，以及用于治疗和/或预防自身免疫疾病。
这些疾病包括，特别是，皮肤的炎症(例如，特应性皮炎，牛皮癣，湿疹)，呼吸道的炎症〔例如，支气管炎，肺炎，支气管哮喘，ARDS(成年人呼吸窘迫综合症)，结节病，硅肺/纤维变性〕，胃肠道的炎症(例如，胃十二脂肠溃疡，节段性回肠炎，溃疡性结肠炎)，还有一些疾病如肝炎，胰腺炎，盲肠炎，腹膜炎，肾炎，口疮溃疡，结膜炎，角膜炎，眼色素层炎，鼻炎。
自身免疫疾病包括，例如，关节炎类型的疾病(例如，风湿性关节炎，HLA-B27，及有关的疾病)，还有多发性硬化症，青少年糖尿病或红斑性狼疮。
其他的适应症为脓毒病，细菌性脑膜炎，恶病质，移植排斥反应，移植物-对-宿主的反应，以及重灌注综合症和动脉粥状硬化。
本发明的药物包括至少一个通式I化合物和另外的载体，填充剂，溶剂，稀释剂，染料和/或粘合剂。辅助物质的选择和使用的量取决于药物是口服，静脉，腹膜内，皮内，肌肉内，鼻内，颊内或局部给药而定。供口服给药的适宜制剂为片剂，咀嚼片，糖锭剂，胶囊剂，颗粒剂，滴剂，汁液剂或糖浆剂。溶液剂，混悬剂，可立即重新配制的无水制剂和喷雾剂适宜于胃肠道外和局部给药和吸入用。在一种支持薄膜上或一种硬膏上，并有时加入一种促进透过皮肤试剂的以溶解形式的本发明化合物的一种延效制剂，为适宜的透皮给药剂型的例子。从口服或透皮制剂形式中延缓释放本发明的化合物也是可能的。
需给予患者的有效成分的剂量则依患者的体重，给药的方法，适应症和疾病的严重程度的不同而改变。一般来说，施用式I本发明的至少一个化合物的给药剂量为1～150μg/kg。
实施例表1
表1的物质用核磁共振氢谱分析(仪器DPX 300 Avance，来自Bruken厂；300MHz；溶剂DMSO-d6；化学位移值数据单位为ppm)。实施例11.97-2.16(m，2H，CH2)；2.52-2.86(m，2H，CH2)；3.20-3.75(m，8H，CH2)；4.50-4.65(m，2H，NCH2N)；4.64-4.82(m，1H，CH)；7.49-7.66(m，3H，芳族的)；7.79-7.85(d，1H，芳族的)；8.60-8.72(d，1H，CONH)。实施例21.94-2.20(m，2H，CH2)；2.68-2.95(m，2H，CH2)；3.28-3.70(m，8H，CH2)；4.52-4.65(m，2H，NCH2N)；4.83-4.96(m，1H，CH)；7.42-7.58(m，3H，芳族的)；7.85-7.92(m，2H，芳族的)；8.85-8.89(d，1H，CONH)。实施例31.92-2.24(m，2H，CH2)；2.69-3.02(m，2H，CH2)；3.12(s，2H，CH2)；3.35-3.77(m，12H，CH2)；4.52-4.68(m，2H，NCH2N)；4.74-4.98(m，1H，CH)；7.28-7.32(d，1H，芳族的)；7.45-7.59(m，2H，芳族的)；7.74-7.80(d，1H，芳族的)；8.78-8.88(d，1H，CONH)。实施例42.01-2.18(m，2H，CH2)；2.58-2.88(m，2H，CH2)；3.79(s，3H，COOCH3)；4.70-4.80(m，1H，CH)；7.54-7.72(m，3H，芳族的)；7.77-7.81(d，1H，芳族的)；8.77-8.82(d，1H，CONH)；10.21(s，1H，NOH)。实施例51.38-1.46(m，6H，CH2)；1.96-2.16(m，2H，CH2)；2.20-2.32(m，4H，CH2)；2.60-2.92(m，2H，CH2)；3.26-3.75(m，8H，CH2)；4.57-4.70(m，2H，NCH2N)；4.72-4.88(m，1H，CH)；7.28-7.30(d，1H，芳族的)；7.43-7.57(m，2H，芳族的)；7.70-7.74(m，1H，芳族的)；8.75-8.78(d，1H，CONH)。实施例61.18-1.26(t，3H，CH3)；1.36-1.48(m，6H，CH2)；1.95-2.16(m，2H，CH2)；2.22-2.34(m，4H，CH2)；2.60-2.90(m，2H，CH2)；4.08-4.18(q，2H，OCH2)；4.55-4.68(m，2H，NCH2N)；4.70-4.80(m，1H，CH)；7.54-7.72(m，3H，芳族的)；7.78-7.83(d，1H，芳族的)；8.78-8.82(d，1H，CONH)。免疫调节剂活性的研究从外周血单核细胞(PBMC)分离出人单核细胞，该PBMC用Ficoll密度梯度离心从肝素化的全血中获得。分离得到后，将PBMC与针对单核细胞-特异性表面分子CD14的单克隆抗体共同孵育，并将它们与超顺磁微珠(microbead)(Miltenyi Biotech，Bergisch Gladbach)偶联。为了从PBMC的细胞混合物中对标记了的单核细胞进行阳性(positive)选择，将整个细胞混悬液加至强磁性载体基质的柱中并将该柱放在磁场中，通过这个方法，将已载有微珠的细胞连接到载体基质上，而未被标记的细胞则通过柱并被丢弃，在将基质从磁场移出后，用缓冲液将已去磁了的柱洗涤而洗脱出载有抗体的细胞。得到的该CD14-阳性单核细胞群体的纯度为约95-98％。这些单核细胞(以106细胞/ml培养基(RPMI，补充有10％胎牛血清)密度)与溶解在DMSO中的试验物质一道于37℃和5％CO2中孵育1小时。然后加入20μg/mlLPS(从E.coli得到)。24小时后，取出无细胞的培养基上清液并分析以测定细胞因子IL-12和IL-10的含量。
在细胞培养上清液中IL-12和IL-10的浓度以sandwich-ELISA方法，用二种抗-IL-12和抗-IL-10单克隆抗体进行测定(Biosource Europe，Fleurus，比利时)。也分别包括人IL-12和IL-10的标准对照曲线。IL-12 ELISA的检出极限为10pg/ml，而IL-10 ELISA为15pg/ml。
表2试验化合物对用LPS-激活的单核细胞产生的IL-12和IL-10的影响
表2中的结果表明，已知的免疫调节剂如地塞米松，己酮可可碱，环戊苯吡酮，在LPS-激活的单核细胞情况下，均抑制了IL-12和IL-10的生成。与此相比较，有羧基取代的结构相似的苯甲酰胺类(实施例1)在高剂量下只表现出一点作用。
令人惊异的是，本发明的取代的苯甲酰胺的酯(实施例4和6)和酰胺(实施例3和5)在研究的模型中表现出免疫调节剂活性。这些化合物各自在10，6和2μg/ml浓度下有力的抑制了由LPS-激活的单核细胞IL-12的合成。但不同于已知的免疫调节剂，它们却增加IL-10的合成。这种特征类型(在物质的相同浓度范围内明显的抑制IL-12，增加IL-10)表现出它们为一新类型的免疫调节剂。
权利要求
1.式I取代的苯甲酰胺类化合物，
其中R1代表了相应于式COOR4的基团，这里R4表示具有1至6C原子的直链或支链烷基；或相应于式CONR5R6的基团，这里R5和R6为相同或不同，并表示具有1至6C原子的烷基(直链或支链)，或或者与N原子一起，表示吡咯烷、哌啶、六亚甲基亚胺或吗啉环；R2表示氯、氟、CF3，或具有1至3C原子的烷基或氢，和R3表示羟基，具有1至6C原子的烷基或烷氧基(直链或分支的并可任意被OH-，烷氧基，酯基或具有1至6C原子的开链或环状酰胺基取代)，或CH2-NR5R6基，这里R5和R6如前定义。
2.按照权利要求1所述式I取代的苯甲酰胺类化合物，其特征在于，R1基团代表相应于式COOR4的基团，这里R4表示具有1至6C原子的直链或支链烷基；或相应于式CONR5R6的基团，这里R5和R6与N原子一起表示为吗啉环；R2为H而R3表示为羟基或基团CH2-NR5R6，这里R5和R6与N原子一起表示为吗啉环。
3.权利要求1或2所述式I取代的苯甲酰胺作为药物中的活性组分的应用。
4.按照权利要求3的应用，其特征在于，该药物为一种免疫调节剂。
全文摘要
本申请叙述了取代的苯甲酰胺类化合物以及它们在医药中应用,尤其可用作为免疫调节剂。
文档编号A61P37/02GK1250048SQ9912023
公开日2000年4月12日 申请日期1999年9月23日 优先权日1998年9月24日
发明者T·格尔曼, S·弗罗施, O·兹默 申请人:格吕伦塔尔有限公司