一种米托蒽醌雌激素靶向peg修饰脂质体及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物脂质体领域，尤其涉及一种米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体 及其应用。
【背景技术】
[0002] 米托蒽醌在临床上是一种经典的化疗药物，化学结构属蒽醌类化合物，对乳腺癌、 白血病、淋巴瘤、前列腺癌等具有抗肿瘤疗效，尤其是对难治性、顽固性乳腺癌和白血病疗 效显著，近来又被用作免疫抑制剂而用于多发性硬化症的治疗中。由于其在临床应用过程 中存在着骨髓抑制、剂量限制性心脏毒性、胃肠毒性以及脱发等严重毒副作用，限制了其临 床应用和治疗效果。
[0003] 脂质体作为药物载体用于肿瘤的化学治疗日渐成熟，作为药物载体具有如下优 点：保护药物在循环系统中不被降解，降低药物在肾脏中的清除率，延长药物在体内代谢的 半衰期，在机体内具有生物可降解性，不会对机体产生免疫反应及各种毒副作用等。目前已 有药物脂质体制剂获得批准在临床上使用。
[0004] 普通脂质体通过静脉系统给药后，在体循环代谢过程中被巨噬细胞识而主要分 布在诸如肝、脾等网状内皮系统组织器官中，以至于不能有效到达药物所作用的靶组织或 靶器官，制备长循环脂质体可改善上述药代动力学行为，长循环脂质体中的PEG化脂质体 又被成为隐形脂质体或空间稳定脂质体，PEG作为一种极性分子，在代谢过程中减少了单 核-巨噬系统对其摄取，从而延长了脂质体在体内的循环时间，进而增强了药物的生物利 用度。
[0005] 为了进一步提高药物的治疗效果并降低其毒性反应，近年来在普通脂质体或长循 环脂质体表面链接能够主动靶向肿瘤的靶向配体，即配体靶向脂质体。它能够增加药物的 溶解性，延长药物在体内的代谢时间，提高药物在靶组织中的浓度而提高药物的疗效，减少 药物在非靶组织的蓄积而降低药物的毒副作用。
[0006] 近年来研宄表明，雌激素受体在多种肿瘤细胞中高表达，并且具有高度特异性，因 此成为药物载体系统的重要作用靶点。有临床研宄结果表明，子宫内膜癌雌激素膜受体表 达阳性率为85. 2%，子宫内膜正常组的阳性率仅为9. 5%;在几种喉病变组织中，雌激素受 体分布有显著差异，在不典型增生中仅20%阳性，在乳头状瘤中40%阳性，在喉癌中78% 阳性；在胃癌组织中，雌激素受体阳性率为52%，而在慢性胃炎中无雌激素受体表达；在乳 腺癌肿瘤组织中，雌激素受体表达达到70-80 %，正常乳腺细胞仅表达15-25 % ;在慢性淋 巴细胞白血病中，其表达率为73% ;儿童急性淋巴细胞白血病患者的骨髓单核细胞雌激素 受体的a和0型的阳性表达率为56. 7%和76. 7%，明显高于对照组的20%和6. 7% ;目 前发现雌激素受体存在于人髓细胞白血病细胞（HL-60)的质膜上，它的表达伴随整个细胞 周期；在上皮性卵巢癌中，雌激素受体的表达率为80%，显著高于良性卵巢肿瘤44. 4% 和正常卵巢组织的25% ;正常大肠粘膜中雌激素受体阳性率为38. 1%，相应癌组织的雌激 素受体阳性率为71. 4%;在非小细胞肺癌组织中，雌激素受体阳性表达率为69. 7%，而在 男性肺良性肿瘤组织及正常男性肺组织中无阳性表达；甲状腺癌中雌激素受体表达率为 66. 7%，甲状腺良性变化的患者雌激素受体表达为22. 2%。
[0007] 米托蒽醌脂质体目前所报道的都是常规脂质体制剂，原料昂贵，体内代谢时间短， 肿瘤部位药物浓度低。因此本领域利用雌激素受体与其配体间的特异性高亲和力，在脂质 体中载入特异性识别雌激素受体的片段和长效PEG分子，研制出一种具有长循环和肿瘤特 异性靶向的米托蒽醌脂质体载药系统，这种载药系统的建立同时可以广泛携带临床上目前 使用的多数亲水、亲脂及兼性化疗药物，并针对临床上多种高表达雌激素受体的恶性肿瘤 进行治疗，具有广泛良好的应用前景。
【发明内容】
[0008] 本发明提供一种雌激素受体靶向的抗癌药物PEG化脂质体制剂，及其制备方法， 具有包封率高、载药量高、粒径分布均一、稳定性好等特征。其目的是有效运载药物到达肿 瘤靶部位，延长药物体内循环时间，提高药物的治疗效果，降低药物的毒副作用。
[0009] 本发明还公开了上述脂质体的制备方法，适用于工业化生产。
[0010] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0011] 一种米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体，其制备原料包括米托蒽醌、磷脂、胆固 醇、聚乙二醇化磷脂、雌酮-聚乙二醇化磷脂，所述雌酮-聚乙二醇化磷脂的结构如下所 示：
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[0013]其中，n= 12 ~228。
[0014] 本发明的米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体的制备方法，包括如下步骤：
[0015] (1)雌酮活化酯的制备：按照（10~150) : (10~200) : (50~300) : (1~10)的 摩尔比将雌酮、丁二酸酐、三乙胺及4-二甲氨基吡啶溶解在二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈或二 氧六环中，室温下搅拌反应24~48小时，减压蒸干溶剂，冰水浴下加入适量蒸馏水并调节 pH至1~5。静置后析出产物，干燥得雌酮活化酯，反应收率为50%~95%，反应式如下：
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[0017] (2)雌酮-聚乙二醇化磷脂的合成：将上述雌酮活化酯、羟基苯并三唑（HOBT)与 缩合剂，例如二环己基碳二亚胺（DCC)、羰基二咪唑（⑶I)、l-乙基-(3-二甲基氨基丙基） 碳酰二亚胺盐酸盐（EDC)等以（1~20) : (1~20) : (1~20)的摩尔比溶于二氯甲烷，在室 温下反应〇. 5~5h后加入与雌酮活化酯摩尔比为（1~10) : (1~10)的氨基聚乙二醇二 硬脂酸磷脂酰乙醇胺，室温下反应5~20小时后滤除沉淀，溶液减压浓缩，加入适量乙醚沉 淀，干燥得终产物，反应收率为40 %~70%，反应式如下：
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[0019] (3)硫酸铵梯度法制备米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体：
[0020] 1)取40~80重量份的磷脂、5~45重量份的胆固醇、5~40重量份的聚乙二醇 化磷脂溶于甲醇中，旋转蒸发除去有机溶剂，然后加入硫酸铵水溶液充分水化，透析，加入 0. 5~10重量份的米托蒽醌孵育后透析，再加入0. 1~20重量份的雌酮-聚乙二醇化磷脂 孵育，过膜后即得米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体制剂。
[0021] 2)取40~80重量份的磷脂、5~45重量份的胆固醇、5~40重量份聚乙二醇化 磷脂、0. 1~20重量份的雌酮-聚乙二醇化磷脂溶于甲醇中，旋转蒸发除去有机溶剂，加入 硫酸铵水溶液充分水化，透析，加入〇. 5~10重量份的米托蒽醌孵育后透析，过膜后即得米 托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体制剂。
[0022] (4)高压均质法制备米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体：
[0023] 取40~80重量份的磷脂、5~45重量份的胆固醇、5~40重量份的聚乙二醇化磷 脂及0. 1~20重量份的雌酮-聚乙二醇化磷脂溶于二氯甲烷中，旋转蒸发除去有机溶剂， 然后加入0. 5~10重量份的米托蒽醌水溶液充分水化，高压均质后得米托蒽醌雌激素靶向 PEG修饰脂质体制剂。
[0024] (5)冷冻干燥法制备米托蒽醌雌激素靶向PEG修饰脂质体：
[0025] 取40~80重量份的磷脂、5~45重量份的胆固醇、5~40重量份的聚乙二醇化 磷脂及〇. 1~20重量份的雌酮-聚乙二