备出鱼用儿茶素新型保健制品（即本发明的鱼用制剂），本发明所得的 制剂适合水产养殖使用，本发明能充分发挥儿茶素的生物活性，服务于我国水产养殖业的 健康发展。
【附图说明】
[0040] 下面结合附图对本发明的实施结果作进一步详细说明。
[0041] 图1是儿茶素EGCG的标准色谱图；
[0042] 图2是空白血浆的色谱图；
[0043] 图3是本发明所述的新型胶囊饲喂后鲫鱼血浆色谱图；
[0044] 图4是实施例1的儿茶素新型胶囊组EGCG浓度一时间曲线图；
[0045] 图5是普通儿茶素颗粒料组EGCG浓度一时间曲线图；
[0046] 图6是腹腔注射组EGCG浓度一时间曲线图；
[0047] 其中峰1为儿茶素EGCG色谱峰。
【具体实施方式】
[0048] 实施例1、一种鱼用儿茶素制剂的制备方法，依次进行以下步骤：
[0049] 1)、儿茶素溶液的配制：准确称取儿茶素EGCG于洁净容量瓶中，向其中加入一定 量超纯水，超声振动（50Hz的超声频率），使其溶解，然后用超纯水定容，从而配制成浓度为 10mg/mL的儿茶素EGCG液体。
[0050] 2)、采用PEG1000作为吸收促进剂，准确量取一定量的PEG1000加入上述儿茶素 EGCG液体中，使PEG1000的终浓度为20% (质量％ )。
[0051] 然后加入占儿茶素EGCG液体0. 4% (质量％ )的亚硫酸钠作为抗氧化剂，再加入 占儿茶素EGCG液体1. 0% (质量％ )的混合氨基酸，最后加入PEG4000 (作为半固体胶凝 剂）直至PEG4000的终质量浓度为20% ;
[0052] 上述混合氨基酸由茶氨酸和甘氨酸按照1 :9的重量比例混合而得。
[0053] 上述整个步骤2)在磁力搅拌（200转/分）下进行。
[0054]3)、液体灌装胶囊的制备：将步骤2)配制的磁力搅拌（200转/分）下呈低粘度的 儿茶素溶液按照每粒胶囊l.OmL灌装于胶囊壳中，上述液体在胶囊中会自然凝固形成半固 体状态，可防止液体外渗。
[0055] 实施例2、一种鱼用儿茶素制剂的制备方法，依次进行以下步骤：
[0056] 1)、同实施例1;
[0057]2)、采用PEG400作为吸收促进剂，准确量取一定量的PEG400加入上述儿茶素EGCG 液体中，使PEG400的终浓度为20% (质量％ )。
[0058] 然后加入占儿茶素EGCG液体0. 4% (质量％ )的亚硫酸钠作为抗氧化剂，再加入 占儿茶素EGCG液体0. 5% (质量％ )的混合氨基酸，最后加入PEG4000 (作为半固体胶凝 剂）直至PEG4000的终质量浓度为5% ;
[0059] 上述混合氨基酸由茶氨酸和甘氨酸按照1 :9的重量比例混合而得。
[0060] 3)、液体灌装胶囊的制备：将步骤2)配制的磁力搅拌（100转/分）下呈低粘度的 儿茶素溶液按照每粒胶囊1.OmL灌装于胶囊壳中，凝固后可以防止液体外渗。
[0061] 实施例3、一种鱼用儿茶素制剂的制备方法，依次进行以下步骤：
[0062] 1)、同实施例1;
[0063]2)、采用PEG3000作为吸收促进剂，准确量取一定量的PEG3000加入上述儿茶素 EGCG液体中，使PEG3000的终浓度为20% (质量％ )。
[0064] 然后加入占儿茶素EGCG液体0· 4% (质量％ )的亚硫酸钠作为抗氧化剂，再加入 占儿茶素EGCG液体2. 0% (质量％ )的混合氨基酸，最后加入PEG4000 (作为半固体胶凝 剂）直至PEG4000的终质量浓度为30% ;
[0065] 上述混合氨基酸由茶氨酸和甘氨酸按照1 :9的重量比例混合而得。
[0066] 3)、液体灌装胶囊的制备：将步骤2)中配制的磁力搅拌（400转/分）下呈低粘度 的儿茶素溶液按照每粒胶囊1.OmL灌装于胶囊壳中，凝固后可以防止液体外渗。
[0067] 将上述案例所得（以实施例1为例）的新型鱼用制剂按照上述评价方法进行检 测，其对应结果如下：
[0068] 以日本岛津高效液相色谱，两元高压栗，紫外/可见检测器，大连伊利特Hypersil 803(：18柱（54111，25011111^4.6臟)，流动相为乙腈：0.1%柠檬酸水溶液=10:90 ;柱温 30°C，波长280nm;流速为1.OmL·minS进样量为20yL。
[0069] 步骤1)所得处理血浆中EGCG在0. 5-500mg/L浓度范围内标准曲线为Y= 12037X+560.3(r= 0.9999)，在标准曲线范围内高、中、低浓度儿茶素EGCG回收率均大于 85%以上，日内精密度和日间精密度均小于8%，见表1。
[0070] 表1.血浆中EGCG的回收率和精密度（η= 5)
[0071]
[0073] 根据上述筛选所得的口服液辅料及配方，制备的新型鱼用胶囊制剂灌胃后，于不 同时间点采血，检测血浆中儿茶素EGCG含量，并绘制血浆EGCG浓度-时间曲线，利用3Ρ97 药物动力学软件计算血浆EGCG浓度-时间曲线下面积（AUC)。实施例1所得新型鱼用胶囊 制剂不同时间点血浆儿茶素EGCG浓度-时间数据见图4,根据3P97药物动力学软件计算可 知其AUC为39. 31mg·h/L。同理，实施例2所得新型鱼用胶囊制剂的AUC为21. 38mg·h/ L。实施例3所得新型鱼用胶囊制剂的AUC为12. 03mg·h/L。
[0074] 而普通儿茶素颗粒料饲喂对照组，计算所得AUC为11. 89mg·min/L;儿茶素水溶 液腹腔注射后的AUC为5182. 25mg·min/L。
[0075] 对比例1-1、仅仅将实施例1步骤2)中的PEG1000改成PEG1500,用量不变，其余 等同于实施例1。
[0076] 对比例1-2、仅仅将实施例1步骤2)中的PEG4000改成PEG6000,用量不变，其余 等同于实施例1。
[0077] 对比例1-3、将实施例1步骤2)中的PEG1000的终浓度改成5%，其余等同于实施 例1〇
[0078] 对比例1-4、将实施例1步骤2)中的PEG1000的终浓度改成40%，其余等同于实 施例1。
[0079] 对比例1-5、将实施例1步骤2)中的PEG4000的终浓度改成5%，其余等同于实施 例1〇
[0080] 对比例1-6、将实施例1步骤2)中的PEG4000的终浓度改成30%，其余等同于实 施例1。
[0081] 对比例1-7、将实施例1步骤2)中的PEG1000的终浓度改成30%，将PEG4000的 终浓度改成10%，其余等同于实施例1。
[0082] 对比例2-1、将实施例1步骤2)中的茶氨酸和甘氨酸的混合物改成单纯的茶氨酸， 重量不变，其余等同于实施例1。
[0083] 对比例2-2、将实施例1步骤2)中的茶氨酸和甘氨酸的混合物改成单纯的甘氨酸， 重量不变，其余等同于实施例1。
[0084] 对比例2-2、将实施例1步骤2)中的茶氨酸和甘氨酸的混合物改成由茶氨酸和甘 氨酸按照1 :1的重量比例混合而得，其余等同于实施例1。
[0085] 对比例3-1、将实施例1步骤2)配制时的磁力搅拌转速改成50转/分，其余等同 于实施例1。
[0086] 对比例3-2、将实施例1步骤2)配制时的磁力搅拌转速改成600转/分，其余等同 于实施例1。
[0087] 对比试验、将上述对比例所得的鱼用制剂按照上述实施例1所对应的试验法进行 检测，所得结果如下表所述：
[0088] 表 2
[0089]
[0090] 最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明中PEG1000在10%-30%浓度范围 内促进吸收的具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的 普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的 保护范围。
【主权项】
1. 鱼用儿茶素制剂的制备方法，其特征是包括以下步骤： 1) 、儿茶素溶液的配制： 将儿茶素溶解于超纯水，配制成浓度为9~Ilmg/mL的儿茶素EGCG液体； 2) 、在儿茶素EGCG液体中加入PEG1000,直至PEG1000的终质量浓度为10%~30% ; 然后再加入抗氧化剂和混合氨基酸，最后加入PEG4000直至PEG4000的终质量浓度为 10%~20% ; 所述抗氧化剂与儿茶素EGCG液体的质量比为0. 25~0. 5%，混合氨基酸与儿茶素EGCG液体的质量比为0. 5~1. 0% ; 3) 、液体灌装胶囊的制备： 将步骤2)所得液体灌入胶囊中，得鱼用儿茶素制剂。2. 根据权利要求1所述的鱼用儿茶素制剂的制备方法，其特征是： 所述抗氧化剂为亚硫酸钠； 所述混合氨基酸由茶氨酸和甘氨酸组成，所述茶氨酸的重量含量为8~12%。3. 根据权利要求2所述的鱼用儿茶素制剂的制备方法，其特征是：所述步骤2)在 100~200转/分的搅拌转速下进行。4. 根据权利要求2或3所述的鱼用儿茶素制剂的制备方法，其特征是： 所述步骤1)中：儿茶素EGCG液体的浓度为10mg/mL; 所述步骤2)中：PEG1000的终质量浓度为20%，亚硫酸钠与儿茶素EGCG液体的质量比 为0. 4%，混合氨基酸与儿茶素EGCG液体的质量比为1. 0%，所述混合氨基酸由茶氨酸和甘 氨酸按照1 :9的重量比例混合而得，PEG4000的终质量浓度为20%。
【专利摘要】本发明公开了一种鱼用儿茶素制剂的制备方法，包括以下步骤：1)、将儿茶素溶解于超纯水，配制成浓度为9～11mg/mL的儿茶素EGCG液体；2)、在儿茶素EGCG液体中加入PEG1000，直至PEG1000的终质量浓度为10％～30％；然后再加入抗氧化剂和混合氨基酸，最后加入PEG4000直至PEG4000的终质量浓度为10％～20％；3)、液体灌装胶囊的制备：将步骤2)所得液体灌入胶囊中，得鱼用儿茶素制剂。本发明的鱼用儿茶素制剂能够提高鱼体内的儿茶素生物利用度。
【IPC分类】A61K47/34, A61P39/00, A61K9/48, A61P39/02, A61K31/353
【公开号】CN105250236
【申请号】CN201510732561
【发明人】徐爱春, 韩徐芳, 葛建
【申请人】中国计量学院
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月2日