一种发酵中药制剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药制剂，属于中药领域，具体地说是一种以中草药为原料配制 的发酵中药制剂及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 对于骨病病症的西医治疗方法，如血栓则需活血化瘀，可使用维脑路通等西药改 善脑供血，但不适合长期服用，不良反应的报告也有逐年增多的趋势；如病灶为淤血，可通 过手术取出血块减少压迫神经，同时用维生素营养神经，但脑神经一旦损伤则几乎无法恢 复。
[0003] 中风后遗症、脑动脉硬化、脑萎缩、外伤淤血、四肢麻木、高血压、骨质增生、腰间盘 突出、跌打瘀肿及癌症疼痛诱发瘫痪的机率较大，急性期治疗后每年有大量人群因为上述 原因导致瘫痪，在未形成瘫痪前的预防或瘫痪后的治疗，都是我们医药工作者需要研究的 课题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种发酵中药制剂及其制备方法和应用
[0005] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0006] -种骨病的发酵中药制剂，将侧耳在中药原料中发酵所得，所述中药原料按重量 份数计：红花20-40份、血竭20-40份、三七20-40份、乳香20-40份、没药20-40份、川乌15-35 份、草乌15-35份、松节20-40份、马钱子20-40份、马勃15-35份、细辛15-35份、自然铜15-35 份、姜黄20-40份、灵芝15-35份、干漆20-40份、乌蛇20-40份、木瓜20-40份、土木鳖10-30份、 冰片10-30份、儿茶1-10份和王不留行20-40份;所述侧耳为Pleurotus sp.，已于2014年4月 14日保藏在"中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心"，保藏编号为CGMCC No.9060〇
[0007] 所述中药原料按重量份数计，红花20份、血竭20份、三七20份、乳香20份、没药20 份、川乌15份、草乌15份、松节20份、马钱子20份、马勃15份、细辛15份、自然铜15份、姜黄20 份、灵芝15份、干漆20份、乌蛇20份、木瓜20份、土木鳖10份、冰片10份、儿茶1份和王不留行 20份。
[0008] 所述发酵中药制剂作为外用药物，可以制成膏状、锭剂、贴剂或丸剂。
[0009] 骨病的发酵中药制剂的制备方法：
[0010] (1)按重量份数计，将红花20-40份、血竭20-40份、三七20-40份、乳香20-40份、没 药20-40份、川乌15-35份、草乌15-35份、松节20-40份、马钱子20-40份、马勃15-35份、细辛 15-35份、自然铜15-35份、姜黄20-40份、灵芝15-35份、干漆20-40份、乌蛇20-40份、木瓜20-40份、土木鳖10-30份、冰片10-30份、儿茶1-10份和王不留行20-40份的中药原料混合，待 用；
[0011] (2)将侧耳接种到上述中药原料中发酵，所得发酵物调成糊状即为发酵中药制剂；
[0012] 所述侧耳(Pleurotus sp ·)，已于2014年4月14日保藏在"中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心"，保藏编号为CGMCC No.9060。
[0013] 所述步骤(2)将侧耳按质量百分比为1-5%的量接种于中药原料中，并在35-65°C 下发酵1-7天。
[0014] 骨病的发酵中药制剂的应用，所述发酵中药制剂作为制备瘫痪的药物。
[0015] 所述发酵中药制剂作为能够治疗中风后遗症、脑动脉硬化、脑萎缩、外伤淤血、四 肢麻木、高血压、骨质增生、腰间盘突出、跌打瘀肿及癌症所引起的瘫痪的药物。
[0016] 本发明所有益技术效果
[0017] 本发明发酵中药制剂，主治中风后遗症、脑动脉硬化、脑萎缩、外伤淤血、四肢麻 木、高血压、骨质增生、腰间盘突出、跌打瘀肿及癌症疼痛，同时用于因上述疾病引起瘫痪前 的预防或瘫痪后的治疗，效果明显。其在治疗疾病或提早预防重症发生、缓解疼痛方面有很 好效果，可长期单独或配合其他药物使用，无毒副作用，对身体机能的恢复有很好的效果。
[0018] 本发明配制的发酵中药制剂有活血通络、开窍醒神、消肿止痛的功效，主治中风后 遗症、脑动脉硬化、脑萎缩、外伤淤血、四肢麻木、高血压、骨质增生、腰间盘突出、跌打瘀肿 及癌症疼痛，同时预防或治疗因患上述疾病引起的瘫痪，在治疗疾病或提早预防重症发生、 缓解疼痛方面有很好效果，可长期单独或配合其他药物使用，无毒副作用，对身体机能的恢 复有很好的效果，配制方法操作简单，可大规模生产。
【具体实施方式】
[0019]主要成分:红花、血竭、三七、乳香、没药、川乌、草乌、松节、马钱子、马勃、细辛、自 然铜、姜黄、灵芝、干漆、乌蛇、木瓜、土木鳖、冰片、儿茶和王不留行。
[0020] 功能主治:活血通络、开窍醒神、消肿止痛;主治中风后遗症、脑动脉硬化、脑萎缩、 外伤淤血、四肢麻木、高血压、骨质增生、腰间盘突出、跌打瘀肿及癌症疼痛，同时预防或治 疗因患上述疾病引起的瘫痪。
[0021] 用法用量:局部或穴位贴敷，每个用6天，间隔3天再换另一个。
[0022]规格:4g/个
[0023]於藏:密封、防热、防潮。
[0024] 实施例1
[0025] 1.按重量份数计，取红花20份、血竭20份、三七20份、乳香20份、没药20份、川乌15 份、草乌15份、松节20份、马钱子20份、马勃15份、细辛15份、自然铜15份、姜黄20份、灵芝15 份、干漆20份、乌蛇20份、木瓜20份、土木鳖10份、冰片10份、儿茶1份和王不留行20份的中药 原料药，混合粉碎，过100目筛，混匀制成中药混合细粉；
[0026] 2.将侧耳接种于PDA固体培养基，在20°C、培养70小时，得侧耳纯化的单菌落。
[0027] 3.将单菌落侧耳按质量分数3%接种量接种于上述中药混合细粉中，65°C发酵7 天，得到产物；
[0028] 4.上述产物经加热调成糊状制成中药膏，将制成的中药膏分装成每个4g，即得。
[0029] 所述侧耳(Pleurotus sp·)，已于2014年4月14日保藏在"中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心"，保藏编号为CGMCC No.9060,保藏单位地址为北京市朝阳区北 辰西路1号院3号。
[0030] 对所述侧耳(Pleurotus sp.)进行DNA检测：
[0031] (l)DNA 提取
[0032] 用FastDNA SPIN土壤DNA提取试剂盒（MP Biomedicals，Santa Ana,CA)提取真菌 DNA 〇
[0033] (2)PCR 扩增
[0034] PCR扩增引物：
[0037] PCR扩增程序
[0039] ⑶测序
[0040] 将PCR产物委托上海生物工程有限公司测序 [0041]基因序列结果：
[0043] (4)比对结果，经 NCBI(National Center of Biotechnology Information [www .ncbi.nlm.nih.gov])数据库比对，结果如下：Pleurotus ostreatus isolate NW42618S ribosomal RNA gene(登录号：EU622251.1)
[0044] Pleurotus ostreatus即侧耳。
[0045] 实施例2
[0046] 1.按重量份数计，取红花30份、血竭30份、三七20份、乳香20份、没药30份、川乌20 份、草乌15份、松节30份、马钱子30份、马勃20份、细辛15份、自然铜20份、姜黄30份、灵芝15 份、干漆25份、乌蛇25份、木瓜20份、土木鳖15份、冰片15份、儿茶5份和王不留行25份的中药 原料药，混合粉碎，过100目筛，混匀制成中药混合细粉；
[0047] 2.将侧耳接种于PDA固体培养基，在35°C、培养120小时，得侧耳纯化的单菌落。
[0048] 3.将单菌落侧耳按质量分数5%接种量接种于上述中药混合细粉中，65°C发酵7 天，得到产物；
[0049] 4.上述产物用香油调成糊状制成中药膏，将制成的中药膏分装成每个4g，即得。
[0050]临床前试验
[00511试验1.皮肤刺激试验
[0052]试验目的：观察给动物皮肤涂抹本发明的制剂后，对动物完整和破损皮肤所产生 的局部刺激反应情况，为临床用药的安全性提供参考。
[0053]受试药物:本发明为中药膏药剂型，成黑褐色，有粘性、溶于酒精，不溶于水。由辽 宁省中医研究院剂型研究室提供，将制剂用95%医用酒精1:0.5稀释后备用。
[0054]受试动物:体重2.0-2.5kg大耳白家兔8只，由中国医科大学实验动物中心提供，实 验动物合格证号:辽实条合字1号与辽实质合字008。
[0055]试验方法：
[0056] 1)完整皮肤刺激试验:取预先备好的健康家兔4只，雌、雄各半，脊柱两侧剪毛后使 用脱毛剂脱毛(采用现有脱毛剂）。脱毛面积为150cm 2,24小时后检查脱毛区皮肤无损伤后， 左侧脱毛区涂抹上述实施例获得的中药膏作为受试药物，右侧脱毛区涂抹95%医用酒精 lml作为溶媒对照，24小时后用75%医用酒精洗去左侧受试药物，去除受试药物后的1、24、 48、72小时，肉眼观察左侧涂抹部位有无红斑和水肿的皮肤刺激反应，在四个观察时间点 上，均未见皮肤红斑和水肿形成。根据文献（中华人民共和国卫生部药政管理局《中药新药 研究指南》，P210)评价标准，皮肤刺激反应评分标准平均分值均为0分。
[0057] 2)破损皮肤刺激试验:前期准备与试验1)完整皮肤刺激试验相同，不同点为脱毛 后，左、右侧脱毛区均用6号针头划破皮肤，以组织液渗出，不出血为度，每侧平行划破皮肤 长约1 cm的破损线三条(间隔为0.5cm)，左、右两侧皮肤的破损程度应保持基本一致，涂药及 观察同试验1)。结果根据观察，涂药区和对照区均未见皮肤红斑和水肿形成，破损皮肤24小 时后开始结痂，涂药区与对照区平均分值均为〇分。
[0058]试验结论:参照文献皮肤刺激性强度评价标准（中华人民共和国卫生部药政管理 局《中药新药研究指南》，P210)评价，本发明的发酵中药制剂对家兔完整和破损皮肤均无刺 激性。
[0059]试验2.皮肤给药的急性毒性试验
[0060]试验目的：观察给动物皮肤一次性涂抹大剂量本发明的制剂后，给药动物出现的 毒性反应和死亡情况，测定皮肤给药的最大耐受量，为临床用药的安全性提供动物急性毒 性参考。
[0061]受试药物:本发明为中药膏药剂型，成黑褐色，有粘性、溶于酒精，不溶于水。将药 剂用95%医用酒精稀释1倍，使其成为粘稠糊状，备用。
[0062]受试动物:体重18_22g昆明种封闭群小白鼠，由中国医科大学实验动物中心提供， 实验