鱼腥草多糖及其衍生物及其制备方法和药物用图
【技术领域】
[0001] 本发明属中药领域，涉及鱼腥草多糖，具体涉及鱼腥草中天然均一多糖及其衍生 物，及其制备方法和在制备抗补体药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 补体系统的正常激活在消灭外来微生物、清除肌体内损伤或死亡的细胞和组织、 维持机体的平衡中起着重要的作用。然而该系统的非正常激活会引起人体免疫系统的过度 反应，造成人体自身正常组织的损伤，参与多种疾病的病理过程。研究显示，与补体过度激 活相关的慢性疾病有类风湿性关节炎、老年性痴呆、系统性红斑狼疮（SLE)以及器官移植 后的排斥反应等；而在多器官功能衰竭综合症，如缺血性再灌注、急性心肌梗死、急性呼吸 窘迫综合征（ARDS)等急性疾病中，补体的过度激活也起了重要作用。
[0003] 目前临床上广泛使用的糖皮质激素、环磷酰胺、甲胺蝶吟等免疫抑制剂虽然对某 些与补体过度激活相关的疾病有一定治疗作用，但由于该类药物并非专一的补体抑制剂， 选择性差，长期应用会降低机体的防御机能，导致抗感染能力下降，易继发感染和使潜在病 灶扩散，产生多种并发症和副作用。因此临床上急需高效、低毒、专一的新型补体抑制剂。
[0004] 天然药物中广泛存在具有抗补体作用的活性成分，国内外已完成部分天然药物如 麻黄、巴戟天、人参、杜仲等的筛选，发现自然界中广泛存在的某些多糖、蛋白质、多肽、黄 酮、留类、砲类和生物碱等化合物具有显著的抗补体活性，已从人参、姜黄、芍药、柴胡、川考 和甘草等植物中分出一系列有抗补体活性的酸性多糖和中性多糖。
[0005] 鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的带根全草，是一种常 用的清热解毒中药，用于肺炎、上呼吸道感染、流感、肝炎等病的治疗。药理研究表明，鱼腥 草具有抗菌、抗病毒、镇痛、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗过敏、利尿、心肌保护等药理作用。 研究发现，鱼腥草粗多糖抗补体活性显著，且具有防治急性肺损伤和解热药效，但迄今，尚 未见对鱼腥草中抗补体活性均一多糖的分离制备和活性的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供天然药物中具有抗补体作用的活性成分，具体涉及鱼腥草多 糖及其衍生物及其制备方法和在制备补体抑制药物中的用途。
[0007] 本发明对常用清热解毒中药鱼腥草的水提物进行分离得到三个均一多糖，分别命 名为HC-PS1、HC-PS2和HC-PS3,并对三个多糖分别进行了硫酸化、羟乙基化和羧甲基化的 衍生化分析，经体外实验证实所述的鱼腥草多糖及其衍生物具有显著的补体抑制活性，且 与肝素的活性相当，可作为抗补体药物进行开发。
[0008] 本发明中，所述的中药鱼腥草是三白草科Saururaceae蕺菜属植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.的全草。
[0009] 本发明所述的鱼腥草多糖HC-PS1、HC-PS2和HC-PS3的结构特征描述如下：
[0010] (I)HC-PSl是主要由七种单糖组成的杂多糖，糖残基摩尔比为鼠李糖（Rha):阿拉 伯糖（Ara):甘露糖（Man):葡萄糖（Glc):葡萄糖醛酸（GlcA):半乳糖（Gal):半乳糖醛酸 (GalA) = 1. 0:3. 0:3. 9:2. 5:2. 4:6. 1:3. O ;分子量为 274530Da ;比旋度[a ]D25= -30. 0 (c 0.3, H2O);蛋白含量：1.41 % ;糖醛酸含量：24. 08% ;糖含量94. 60% ;不含硫酸基；其主要 连接方式有：末端、1，5-连接的阿拉伯糖等，1，3, 6-连接和1，4, 6-连接的甘露糖等，末端、 1，4-连接、1，3-连接、1，3, 6-连接、1，4, 6-连接的葡萄糖等，末端、1，4-连接和1，6-连接的 半乳糖等，1，4-连接的半乳糖醛酸等，此外还含有少量末端连接的鼠李糖，其中以末端连接 的阿拉伯糖，1，4, 6-连接的甘露糖和末端、1，4-连接的半乳糖（或半乳糖醛酸）为主；
[0011] (2)HC-PS2是主要由五种单糖组成的杂多糖，糖残基摩尔比为 Man:Glc:GlcA:Gal:GalA = 1. 0:0· 3:1. 7:0. 7:4. 6 ;分子量为 7928Da ;比旋度[a ]D25 = -12. 8 (cO. 3, H2O);蛋白含量：1. 89% ;糖醛酸含量：65. 64% ;糖含量93. 10% ;不含硫酸 基；其主要连接方式有：末端连接的阿拉伯糖等；末端、1，6-连接和1，4, 6-连接的甘露糖 等，1，4-连接、1，3-连接和1，6-连接的葡萄糖等，1，4-连接的葡萄糖醛酸等，末端、1，4-连 接、1，3, 4-连接、1，4, 6-连接、1，3, 6-连接的半乳糖等，末端、1，4-连接、1，3, 4-连接的半 乳糖醛酸等，此外还含有少量末端连接的鼠李糖，其中以1，4-连接的葡萄糖（或葡萄糖醛 酸）和末端、1，4-连接、1，3, 4-连接的半乳糖（或半乳糖醛酸）为主；
[0012] (3)HC_PS3是主要由五种单糖组成的杂多糖，糖残基摩尔比为 Man:Glc:GlcA:Gal:GalA = 1. 0:0· 5:0. 4:1. 2:0. 4 ;分子量为 216384Da ;比旋度[a ]D25 =-62.8(c 0.3, H2O);蛋白含量：1.53% ;糖醛酸含量：20. 19% ;糖含量93.73 % ;不含 硫酸基；其主要连接方式有：末端、1，5-连接的阿拉伯糖等；1，3, 4-连接、1，4, 6-连接和 1，3, 6-连接的甘露糖等；末端、1，4-连接、1，3-连接和1，4, 6-连接的葡萄糖等；末端、 1，4-连接、1，6-连接的半乳糖等；此外还含有少量末端连接的鼠李糖。其中以1，3, 4-连接 的甘露糖，1，4-连接的葡萄糖和1，4-连接的半乳糖为主。
[0013] 本发明所述的鱼腥草多糖（HC-PS1、HC-PS2和HC-PS3)通过下述方法制备：
[0014] 鱼腥草以95 %乙醇冷浸提取，滤过，用热水提取，滤过，浓缩，离心，上清液加入4 倍体积的95%乙醇，静置，离心去上清，沉淀以水复溶，减压回收，除去乙醇；复溶液再以三 氯醋酸去游离蛋白，离心，上清液调至中性，浓缩，透析，冷冻干燥即得粗多糖。粗多糖加蒸 馏水溶解，离心，上清液分次用DEAE-cellulose柱（Cl 1型）层析进行初步分离。以蒸馏水、 0. 4、0. 8、1. 2和2. Omol/L的NaCl溶液洗脱，收集各流份，根据糖显色反应和紫外检测的结 果合并相同流分，浓缩，透析及冷冻干燥得5个次级组分：Hl，H2, H3, H4和H5。取具有显著 抗补体活性的H3和H4进一步分离；
[0015] 将H3加蒸馏水溶解，离心，上清液分次用Sephacryl S-400柱（100X2. 5cm)层析 分离。蒸馏水洗脱，收集各流分；根据吸光度和抗补体活性检测结果合并相同流分，浓缩及 冷冻干燥得多糖H3-PS1和H3-PS2 ;将H3-PS1和H3-PS2分别加蒸馏水溶解，离心，上清液 分别分次用Sephacryl S-300柱（100X1. 6cm)层析分离。蒸馏水洗脱，根据吸光度和抗补 体活性检测结果合并相同流分，浓缩及冷冻干燥得多糖HC-PSl和HC-PS2 ;
[0016] 将H4加0. 15mol/L的NaCl溶液溶解，离心，上清液分次用Superdex-200柱 (100 X I. 6cm)层析分离，0· 15mol/L·的NaCl溶液洗脱，根据吸光度和抗补体活性检测结果 合并相同流分，浓缩及冷冻干燥得多糖HC-PS1、HC-PS2和HC-PS3。
[0017] 本发明分别制备了鱼腥草多糖（HC-PSUHC-PS2和HC-PS3)的硫酸化、羟乙基化和 羧甲基化衍生物，并通过IR光谱比较验证了各衍生化产物的结构；经体外试验证实，鱼腥 草多糖HC-PSl、HC-PS2和HC-PS3及其衍生物对补体经典和旁路途径激活所引发的细胞溶 血均有明显的抑制，即有明显的抗补体作用。
[0018] 本发明中，HC-PSl及其硫酸化、羟乙基化和羧甲基化衍生物的CH5。值（经典 途径50 %抑制溶血所需供试品的浓度）分别为0. 295±0. 032mg/mL、0. 128±0. 024mg/ !1^、0.243±0.04411^/1^和0.241±0.03811^/1^4?5。值（旁路途径50%抑制溶血所需供 试品的浓度）分别为 〇· 318±0· 023mg/mL、0. 084±0· 012mg/mL、0. 186±0· 013mg/mL 和 0. 085±0. 006mg/mL ;
[0019] 本发明中，HC-PS2及其硫酸化、羟乙基化和羧甲基化衍生物的CH5。值分别 为 0.183±0.017mg/mL、0.091±0.020mg/mL、0.248±0.034mg/mL 和 0.202±0.022mg/ mL;AP5。值分别为 0.219±0.018mg/mL、(X 068±(X 008mg/mL、(X118±(X011mg/mL 和 0. 075±0. 008mg/mL ;
[0020] 本发明中，HC-PS3及其硫酸化、羟乙基化和羧甲基化衍生物的CH5。值分别 为 0.271±0.026mg/mL、0.137±0.029mg/mL、0.299±0.040mg/mL 和 0.260±0.014mg/ mL;AP5。值分别为 0.314±0.025mg/mL、0.080±0.007mg/mL、0.213±0.010mg/mL 和 0. 073±0. 002mg/mL ;
【附图说明】