专利名称：：调节细胞因子活性的方法；相关药剂的制作方法
技术领域：
：本发明一般涉及哺乳动物细胞因子的用途。更具体地，本发明公开了IL-27受体的受体亚基。
背景技术：
：免疫系统保护个体免于传染物，例如细菌、多细胞有机体以及癌症。该系统包括几种类型的淋巴样细胞和髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、树状突细胞(DCs)、嗜酸性细胞、T细胞、B细胞和嗜中性粒细胞。这些淋巴样细胞和髓样细胞通常产生称为细胞因子的信号蛋白。免疫应答包括炎症，即免疫细胞在身体的全身或尤其局部的积聚。作为对传染物或异物的反应，免疫细胞分泌细胞因子，其依次调节免疫细胞增殖、发育、分化或迁移。免疫应答有时会导致病理学后果，即炎症病变。这些与免疫细胞和细胞因子有关的炎症病变包括，例如银屑病、类风湿性关节炎、克隆(氏)病和动脉粥样硬化(参见，例如Abbas等(eds.)(2000)CellularandMolecularImmunology，W.B.SaundersCo.，Philadelphia，PA；Oppenheim和Feldmann(eds.)(2001)CytokineReference，AcademicPress，SanDiego，CA；Kaufmann等(2001)Immunobiol.204603-613；Saurez和Schultz-Cheery(2000)Dev.Comp.Immunol.24269-283；vanReeth和Nauwynck(2000)Vet.Res.31187-213；Garcia-Sastre(2001)Virology279375-384；Katze等(2002)Nat.Rev.Immunol.2675-687；vanReeth(2000)Vet.Microbiol.74109-116；Tripp(2003)Curr.Pharm.Des.951-59)。IL-27为异二聚体细胞因子，包含两种不同的亚基，结构类似于IL-12、IL-23和CNTF/sCNTFR异源二聚体那些。IL-27的两个亚基为p28和EB病毒-诱导的因子3(EBI3)。IL-27由例如抗原呈递细胞(APCs)，例如单核细胞和树状突细胞(DCs)的表达。表达的IL-27依次刺激CD4+未致敏的T细胞的增殖。而且，IL-27与IL-12协同作用刺激CD4+未致敏的T细胞产生干扰素γ(IFNγ)、TH1型的细胞因子。IL-27也正向调节T-bet，一种特定地用于TH1型免疫应答的转录因子，与此一致，IL-27向下调节GATA-3，一种特定地用于TH2-型免疫应答的转录因子。脂多糖(LPS)诱导单核细胞和单核细胞衍生的DCs表达IL-27的两个亚基，表明IL-27在天然免疫中起作用(Takeda等(2003)J.Immunol.1704886-4890；Lucas等(2003)Proc.Natl.Acad.SciUSA.10015047-15052；Pflanz等(2002)Immunity16779-790；Hashimoto等(2000)Blood962206-2214)。IL-27受体包含TCCR(也称为WSX-1；WSX-1/TCCR)。由于受损的TH1型免疫应答，TCCR/WSX-1基因剔除(knockout)的小鼠的(TCCR/WSX-1KO小鼠)，例如减少了IFNγ生成、增加对细胞内病原体例如利什曼原虫属、李斯特菌属和锥虫属的易感性、TH1型T细胞依赖性抗体(IgG2a亚型)生成的较低生成、对杆菌反应的异常肉芽肿生成、TH1型T细胞依赖性抗体(IgG2a亚型)生成的较低生成。结核病、结节病和克隆(氏)病为涉及TH1型应答和肉芽肿生成的病变。肉芽肿生成存在于这些疾病所涉及的位点。来自患有结核病、结节病和克隆(氏)病的患者的肉芽肿表达IL-27的两个亚基(参见，例如Chen等(2000)Nature407916-920；Yoshida等(2001)Immunity15569-578；Trinchieri等(2003)Immunity19641-644；Larousserie等(2004)J.Pathol.202164-171；Brombacher等(2003)TRENDSImmunol.24207-212)。发现了包括IL-27的免疫途径的微小变异，其显然取决于对用于攻击宿主的病原体的识别，和取决于选择用于对感染的免疫应答研究的时间点。例如，对WSX-1/TCCR基因剔除小鼠的某些研究证实，小鼠能抗细胞内寄生物(Toxoplasma)的感染，小鼠产生了过量的IFNγ生成，而IFNγ的生成保持了正向调节，导致了致命性炎症(Chen等(2000)Nature407916-920；Villarino等(2003)Immunity19645-655；Hamano等(2003)Immunity19657-667)。根据Trinchieri等，supra，IL-27单独在起始的TH1型应答中没有表现出具有主要作用，但是，反而，其刺激了早期IFNγ生成，且不严重影响T细胞至TH1型分化。对于治疗炎症和免疫病变例如银屑病、关节炎和癌症，存在不能满足的需要，这些病症抵抗免疫系统的根除。本发明通过提供使用IL-27或IL-27受体的方法实现了这种需要。发明概述本发明部分基于发现了IL-27或IL-27受体的激动剂或拮抗剂调节了大量免疫和炎性病症的应答。本发明提供了调节免疫病变或病症的方法，包括给药有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激动剂或拮抗剂，其中所述病变或病症包含a)皮肤的炎性病症；b)关节炎；c)克隆(氏)病；d)气道高反应性或炎症；e)动脉粥样硬化；或f)非由EB病毒引起的癌症或肿瘤。本发明也提供上述的方法，其中拮抗剂抑制或阻止IL-27与受体的结合，所述受体包含WSX-1/TCCR和gpl30的异二聚体结合物。在另一个方面，本发明提供上述的方法，其中皮肤的炎性病症包含银屑病或特应性皮炎；其中关节炎包含类风湿性关节炎；骨关节炎；或银屑病关节炎；其中气道高反应性或炎性病变包含哮喘；变态反应；或慢性阻塞性肺疾患(COPD)。也提供其中癌症或肿瘤包含乳腺癌；结肠癌；或黑素瘤的上述的方法；以及其中激动剂抑制或改善包含癌症或肿瘤的病变的上述的方法；和其中癌症或肿瘤表达与正常、对照组织相比可见增加量的a)p28；b)EBI3；或c)或WSX-1/TCCR的上述方法。在另一方面，本发明提供了其中拮抗剂改善a)皮肤的炎性病症；b)关节炎；c)克隆(氏)病；d)气道高反应性或气道炎症；或e)动脉粥样硬化的上述方法。在另一个实施方案中，本发明提供了调节免疫病变或病症的方法，其包含给药有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激动剂或拮抗剂，其中病变或病症包含a)皮肤的炎性病症；b)关节炎；c)克隆(氏)病；d)气道高反应性或炎症；e)动脉粥样硬化；或f)非由EB病毒引起的癌症或肿瘤；其中激动剂包含IL-27；IL-27hyperkine；p28；EBI3；或核苷酸；或其中核苷酸编码IL-27hyperkine；p28；EBI3；p28和EBI3；WSX-1/TCCR；或WSX/1/TCCR和gpl30的上述方法；以及其中拮抗剂包含抗体特异性结合下述物质的结合组合物IL-27；p28；EBI3；WSX-1/TCCR；或gpl30和WSX-1/TCCR的结合物的上述方法；和其中来自抗体的结合组合物包含下述物质多克隆抗体；单克隆抗体；人源化抗体或其片段；Fab、Fv或F(ab′)2片段；抗体的肽模拟物；或可见标记物(detectablelabel)的上述方法。也提供其中拮抗剂包含a)衍生自WSX-1/TCCR的可溶性受体；b)小分子；或c)核苷酸的上述方法；以及其中核苷酸特异性地与编码如下物质的多核苷酸p28；EBI3；或WSX-1/TCCR杂交的上述方法；或其中核苷酸包含反义核苷酸或小干扰RNA(siRNA)的上述方法。本发明的另一方面是其中给药激动剂增加了或给药拮抗剂降低了RANKL；TNFα；TEASRL；IL-1α或β；OX40；或APRIL的表达的上述方法。也提供诊断上述免疫病症或病变的方法，包括使结合组合物与生物学样品接触，其中结合组合物特别地结合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的结合物；或c)编码p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸；和测定或确定结合组合物与生物学样品的特异性结合。而且，本发明也提供诊断上述描述的免疫病症或病变的药盒，包括隔室和结合组合物，其特异性结合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的结合物；或c)编码p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸。优选实施方案的详细说明如本文(包括附加的权利要求)使用的词语的单数形式例如″一个″和″该″包括它们相应的复数参考，除非上下文有另外明确的指示。本文引用的所有引用文献以其与每个出版物或专利申请所特定和独立地指出引入作为参考的同样的范围引入本文作为参考。I.定义当将″激活″、″刺激″和″治疗″应用于细胞或受体时，其可具有相同的含义，例如激活、刺激或治疗细胞或含有配体的受体，除非上下文或明确地另有指明。″配体″包含天然和合成的配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白质和衍生自抗体的结合组合物。″配体″也包含小分子，例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。″激活″指可当受到内部机制和外部或环境因素调节时的细胞激活作用。″应答″，例如细胞、组织、器官或有机体的应答包括生物化学或生理学行为的改变，所述生物化学或生理学行为例如生物隔室的浓度、密度、粘着力或迁移、基因表达的速率或分化的状况，其中所述改变与激活、刺激或治疗相关，或者与内部机制例如遗传表演程序相关。分子的″活性″可以描述为或指分子与配体或与受体结合后的催化活性；或者指刺激基因表达或者细胞信号传导、分化或成熟的能力；抗原的活性，调节其它分子的活性等等。分子的″活性″也可以指调节或保持细胞与细胞之间相互作用的能力，例如粘连，或指保持细胞结构例如细胞膜或细胞骨架的活性。″活性″也可以指特定的活性，例如[催化活性]/[mg蛋白]或[免疫活性]/[mg蛋白]，生物隔室中的浓度等。″增殖活性″包括促进，必需时用于，或特别相关于，例如，正常细胞分裂，以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移和血管生成。当将″给药″和″处理″应用于动物、人类、试验受试者、细胞、组织、器官或体液时，指将外源性药物、治疗剂、诊断剂、化合物或组合物与动物、人类、受试者、细胞、组织、器官或体液接触。″给药″和″处理″也可以指，例如治疗、安慰剂、药动学、诊断学、研究和试验方法。″细胞的处理″包含使试剂与细胞接触，以及试剂与液体接触，其中液体与细胞接触。″给药″和″处理″也指通过试剂、诊断的、结合组合物或通过其它细胞的体外和体内处理，例如对细胞的处理。当将″处理″应用于人类、牲畜或研究受试者时，指治疗学处理、预防或预防性措施，指研究或诊断学应用。当将″处理″应用于人类、牲畜或研究受试者或细胞、组织或器官时，其包括L-27激动剂或IL-27拮抗剂与人类或动物受试者、细胞、组织、生理学隔室或生理学体液接触。″细胞的处理″也包括其中IL-27激动剂或IL-27拮抗剂与IL-27受体(异源二聚体ofWSX-1/TCCR和gpl30)接触的情形，例如在液相或胶质相，以及其中激动剂或拮抗剂与液体接触的情形，例如其中液体与细胞或受体接触，但是其中还没有证实激动剂或拮抗剂与细胞或受体接触。″结合组合物″指能与靶点结合的分子、小分子、大分子、抗体、其片段或其类似物，或可溶性受体。″结合组合物″也可指能结合到靶点的分子的结合物，例如非共价结合物，电离的分子，和共价的或非共价改性的分子，例如通过磷酸化、酰化、交联、环化或有限的卵裂改性。″结合组合物″也可以指能结合到靶点的与稳定剂、赋形剂、盐、缓冲液、溶剂或添加剂结合的分子。″结合″可以定义为结合组合物与靶点的关联，其中关联的结果是降低了结合组合物的正常布朗(氏)运动，在这种情况下，结合组合物可以溶解或悬浮在溶液中。″保守修饰的变体″应用于氨基酸和核苷酸序列。至于特定的核苷酸序列，保守修饰的变体指其编码相同的或基本上相同的氨基酸序列的那些核苷酸，或当核苷酸没有编码氨基酸序列时，指基本上相同的核苷酸序列。由于遗传密码的简并，大量功能性相同的核苷酸可以编码任意给定的蛋白。至于氨基酸序列，技术人员应当认识到对核苷酸、肽、多肽或蛋白质序列的单独取代是″保守修饰的变体″，其中该取代基取代了保守的氨基酸的编码序列中的氨基酸或小百分比的氨基酸。提供了功能类似的氨基酸的保守置换表是本领域已知的。保守置换的一个实例为在下述组的一个氨基酸与相同组中的另一个氨基酸的互换(授予Lee等的U.S.专利No.5,767,063；Kyte和Doolittle(19S2)J.Mol.Biol.157105-132)(1)疏水性正亮氨酸、Ile、Val、Leu、Phe、Cys或Met；(2)中性亲水性Cys、Ser、Thr；(3)酸性Asp、Glu；(4)碱性Ash、Gln、His、Lys、Arg；(5)影响链定位的残基Gly、Pro；(6)芳族Trp、Tyr、Phe；(7)小氨基酸类Gly、Ala、Ser.″衍生的″可用于描述，例如从母肽、寡肽或多肽例如抗体中衍生肽、寡肽或多肽的结构。在本文中，衍生的包含，例如肽结构，其中肽具有和其母体中发现的序列相同的序列的肽结构，例如其中所述肽与母体相同，但是在母体的N-末端、C-末端或N-和C-末端具有截断，或具有截断和融合，或仅仅具有融合。衍生的也指所述肽具有和母体中发现的相同的序列，但是具有保守的氨基酸改变，或具有缺失或插入，其中缺失或插入保持着母体内固有的肽的生物学性质。″衍生的″包含其中肽或多肽为使用母体作为起始原料合成的情形，和其中肽或多肽使用母体的结构作为引导重新合成的情形。″有效量″或″治疗有效量″指足够改善病变或生理学病症的征兆或迹象的足够量，或允许或促进病变或生理学病症的诊断的足够量。对于特定的患者或牲畜对象的有效量可根据因素例如受治疗的病症、患者的全面健康状态、给药途径或剂量和副作用的严重性来改变(参见，例如授予Netti，etal.的U.S.专利No.5,888,530)。有效量可以是能避免显著的副作用或毒性作用的最大剂量或服药规定。该作用将导致诊断措施、参数或可测征兆改善了至少5％、通常至少10％、更通常至少20％、最通常至少30％、优选至少40％、更优选至少50％、最优选至少60％、理想地至少70％、更理想地至少80％、最理想地至少90％、其中100％定义为正常受试者显示的诊断参数(参见，例如Maynard等(1996)AHandbookofSOPsforGoodCliriicalPractice，InterpharmPress，BocaRaton，FL；Dent(2001)GoodLaboratoryandGoodClinicalPractice，UrchPubl.，London，UK)。根据上下文，″外源性″指在有机体、细胞或人体外生成的物质。根据上下文，″内源性″指在细胞、有机体或人体内生成的物质。″病变″指病理学状态，或者与病理学状态相关或易患病理学状态的病症。″传染性病变″指，例如由微生物、细菌、寄生虫、病毒等引起的病变，以及对病变的不适当的、无效的病理学免疫应答。″致癌的病变″包含癌症、转化细胞、肿瘤、displasia、血管生成、转移等，以及对病变的不适当的、无效的病理学免疫应答。″有效量″指，例如足够改善病变、病症或病理学状态的征兆或迹象的IL-27激动剂、IL-27拮抗剂、结合化合物或结合组合物的量。″有效量″也包含足够允许或促进病变、病症或病理学状态的征兆或迹象的诊断的IL-27激动剂、拮抗剂或结合化合物或组合物的量。″抑制剂″和″拮抗剂″或″活化剂″和″激动剂″指抑制或活化分子分别地例如用于激活，例如配体、受体、辅助因子、基因、细胞、组织或器官。例如基因、受体、配体或细胞的调节剂为改变基因、受体、配体或细胞活性的分子，其中活性可以为其调节性质中的活化、抑制或改变。所述调节剂可以单独起作用，或者其可利用辅助因子，所述辅助因子例如蛋白、金属离子或小分子。抑制剂为降低、阻断、预防、延迟活化、失活、脱敏或下调例如基因、蛋白、配体、受体或细胞的化合物。活化剂为增加、活化、促进、增加活化、致敏或上调例如基因、蛋白、配体、受体或细胞的化合物。抑制剂也可以定义为降低、阻断或钝化组成性活性(constitutiveactivity)失活的组合物。″激动剂″为与目标作用引起或促进目标活性增加的化合物。″拮抗剂″为与激动剂起对抗作用的化合物。拮抗剂预防、降低、抑制或中和了激动剂的活性。拮抗剂也可预防、抑制或降低靶点的组成的活性，甚至当其中不存在确定的激动剂时。为了检查抑制作用的程度，例如，用可能的激活剂或抑制剂处理包含给定的蛋白质、基因、细胞或有机体的样品或分析品，并与不含有抑制剂的对照样品相比较。对照样品，即不用拮抗剂处理，指定相对活性值为100％。当与对照品比较，活性值为约90％或更少、典型地为85％或更少、更典型地为80％或更少、最典型地为75％或更少、通常为70％或更少、更通常为65％或更少、最通常为60％或更少、典型地为55％或更少、更一般为45％或更少、最一般为40％或更少、优选为35％或更少、更优选为30％或更少、更优选为25％或更少、最优选为小于25％时，获得了抑制作用。当与对照相比，活性值为约110％、通常至少120％、更通常至少140％、更通常至少160％、一般至少180％、更一般至少2倍、最一般至少2.5倍、通常至少5倍、更通常至少10倍、优选至少20倍、更优选至少40倍、最优选超过40倍高时，获得了激活作用。激活作用或抑制作用的终末点可按如下检测。例如，细胞、生理学体液、组织、器官和动物或人类受试者的激活、抑制和对治疗的应答可通过终末点来检测。该终末点可包含预定量或百分比的，例如炎症、致肿瘤性或细胞脱颗粒或细胞分泌物的标记，例如细胞因子、毒性氧或蛋白酶的释放。该终末点可包含，例如预定量的离子流或离子转移；细胞迁移；细胞粘着；细胞增殖；转移的潜力；细胞分化；表型的改变，例如与炎症、细胞凋亡、转化、细胞周期或转移相关的基因表达的改变(参见，例如，Knight(2000)Ann.Clin.Lab.Sci.30145-158；Hood和Cheresh(2002)NatureRev.Cnacer291-100；Timmme等(2003)Curr.DrugTargets4251-261；Robbins和Itzkowitz(2002)Med.Clin.NorthAm.861467-1495；Grady和Markowitz(2002)Annu.Rev.GenomicsHum.Genet.3101-128；Bauer等(2001)Glia36235-243；Stanimirovic和Satoh(2000)BrainPathol.10113-126)。抑制作用的终末点通常为对照的75％或更少，优选为对照的50％或更少，更优选为对照的25％或更少，最优选为对照的10％或更少。通常，激活作用的终末点为对照的至少150％，优选为对照的至少两倍，更优选为对照的至少四倍，最优选为对照的至少10倍。″表达″指由特定的基因编码的mRNA或多肽的量度。表达的单位可以是，例如mRNA或多肽/mg蛋白分子的数量的量度，mRNA或多肽/细胞的分子数量的量度，按细胞、组织、细胞提取物或组织提取物的表达测定。表达的单位可以是相对的，例如与来自对照和试验动物的信号的比较，或特异性地用于mRNA或多肽的试剂对非特异性用于mRNA或多肽的试剂的信号的比较。″杂交″为当在超过至少约30个核苷酸的伸展后存在至少约55％同源性，优选在超过约25个核苷酸的伸展后存在至少约75％的同源性，最优选在超过约20个核苷酸的伸展后存在至少约90％的同源性时，特异性地或选择性的典型地发生(参见，例如Kanehisa(1984)NucleicAcidsRes.12203-213)。在严格条件下的杂交，例如，第一核苷酸与第二核苷酸的杂交的严格条件为(1)使用低离子强度和高温度用于洗涤，例如，在50℃下使用0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠；(2)在杂交期间于42℃使用变性剂，例如甲酰胺，例如，50％(vol/vol)甲酰胺和0.1％牛血清清蛋白/0.1％Ficoll(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mMpH6.5的磷酸钠缓冲液和750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠；(3)在42℃下，使用50％甲酰胺、5XSSC(0.75MNaCI，0.075M柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH6.8)、0.1％焦磷酸钠、5XDenhardt′s溶液、超声处理的鲑鱼精液DNA(50ng/ml)、0.1％SDS和10％葡聚糖磷酸酯，并在42℃下用0.2XSSC和0.1％SDS洗涤；或者(4)在55℃下，使用10％葡聚糖磷酸酯、2XSSC(氯化钠/柠檬酸钠)和50％甲酰胺的缓冲液体，然后在55℃下用包含0.1XSSC的EDTA进行高严格地洗涤(授予Botstein等的U.S.专利No.6,387,657)。用于核苷酸杂交的严格条件为盐、温度、有机溶剂和高液试剂(chaotropicagent)的函数。严格的温度条件通常包括高于约30℃的温度、更通常高于约37℃的温度、典型地高于约45℃的温度、更典型地高于约50℃的温度、优选高于约65℃的温度、更优选高于约70℃的温度。严格的盐条件将一般低于约1M、更一般低于约500mM、通常低于约400mM、更通常低于约300mM、典型地低于约200mM、优选低于约100mM、更优选低于约80mM、甚至低于约20mM。然而，参数的组合比任一单一参数的调节更为重要。(Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31349-370)。″免疫病症″或″免疫病变″包含，例如病理学炎症、炎性病变和自体免疫病变或疾病。“免疫病症″也指感染、持久感染和增生病症，例如癌症、肿瘤和血管生成，包括抗免疫系统根除(irradication)的感染、肿瘤和癌症。″癌性的病症″包括，例如，癌症、癌细胞、肿瘤、血管生成和癌前期的病症，例如发育异常。″炎性病变″指其中病理学结果全部或部分来自免疫抗原数量改变、迁移速率的改变或免疫系统细胞的活化改变的病变或病理状态。免疫系统的细胞包括例如，T细胞、B细胞、单核细胞或巨噬细胞、抗原呈递细胞(APCs)、树状突细胞、小神经胶质细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性细胞、肥大细胞或任意其它与免疫学相关的特异性细胞，例如，生成细胞因子的内皮或上皮细胞。″炎性病变″指其中病理学结果全部或部分来自免疫系统的细胞数量增加和/或活化增加的病变或病理状态，所述细胞例如T细胞、B细胞、单核细胞或巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、树状突细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞嗜酸性细胞，或肥大细胞。″基因剔除″(KO)指至少部分由基因编码的多肽表达的部分或全部降低，所述多肽例如IL-27的亚基p28或EBI3，其中基因为单一细胞、选择的细胞和所有哺乳动物细胞内。KO也包含其中生物学功能降低，但是其中表达没有必然地降低的实施方案，例如p28KO多肽包含其包含有嵌入性激活的肽、寡肽或多肽的表达的p28多肽。编码序列或调整序列的破坏包含在基因剔除技术中。细胞或哺乳动物可以是″杂合的基因别除″，其中内源性基因的一个等位基因被分裂。此外，细胞或哺乳动物可以是″纯合的基因剔除″，其中内源性基因的两个等位基因被分裂。″纯合的基因剔除″不意味着将基因组中的两个等位基因的分裂限定于相同的技术(identicaltechniques)或限定于相同的结果(identicaloutcomes)。其中一个或两个p28等位基因都被基因剔除的哺乳动物也都包括在本发明的范围内。″配体″指，例如小分子、肽、多肽和相关的膜或膜结合的分子，或其结合物，其可以作为受体的激动剂或拮抗剂起作用。″配体″也包含非激动剂或拮抗剂的药剂，但是其可以结合受体而不显著地影响其生物学性质，例如信号(signaling)或粘合。而且，″配体″包括，例如通过化学或重组方法，已经改变为膜结合的配体的可溶性变体的膜结合的配体。按照常规，当配体膜结合在第一细胞上时，受体通常存在于第二细胞上。第二细胞可以与第一细胞具有相同或不同的特性。配体或受体也可以是完全细胞内的，即，其可存在于细胞溶质、细胞核或某些细胞内隔室中。所述配体或受体可以改变其位置，例如从细胞内隔室转移到质膜的外表面。配体和受体的结合物称为″配体受体合成物″。当配体和受体参与信号通路时，配体存在于信号通路的上游位置，而受体存在于信号通路的下游位置。″第一多肽链″和″第二多肽链″指没有通过典型的肽键连接的两个多肽链。典型地，第一多肽链包含N-末端和C-末端，第二多肽链包含另一个N-末端和另一个C-末端，即，总共有两个N-末端和两个C-末端。第一多肽链可以由第一载体编码，同时第二多肽链可以由第二载体编码。第一多肽链和第二多肽链可以由一个载体编码，其中第一启动子可以与第一多肽链连接进行，第二启动子可以与第二多肽链连接进行，或者，在另一实施方案中，第一和第二多肽链的表达都可以与相同的启动子操作连接。″灵敏性″，例如，受体对配体的灵敏性指配体与受体结合，在受体中，或者在特别地与受体相关的事件或分子中产生了可见的改变，例如与受体相关的蛋白的构象改变、磷酸化、与受体相关的蛋白质的性质和数量，或者由或与受体相关的基因表达的改变。提供″小分子″用于治疗肿瘤和癌症的生理学和病变。″小分子″定义为具有分子量小于10kD，典型地小于2kD，优选小于1kD的分子。小分子包括，但不限于无机分子、有机分子、包含无机组分的有机分子，包含放射性原子的分子、合成的分子、肽模拟物和抗体模拟物。作治疗用时，与大分子相比，小分子可以更容易地透过细胞，不易于降解、不易于诱导出免疫应答。小分子例如抗体和细胞因子的肽模拟物，以及小分子毒素已被公开(参见，例如Cassetetal.(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.181251-1256；Apostolopoulos等(2002)Curr.Med.Chem.9411-420；Monfardini等(2002)Curr.Phare.Des.82185-2199；Domingues等(1999)Nat.Struct.Biol.6652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371603-608；授予Stewart，etal的U.S.专利No.6,326,482)。″可溶性受体″为水溶性，且存在于例如细胞外液、细胞内液中，或与细胞膜有点相关的受体。可溶性受体还指改变为水溶性的受体。″结合的特异性″″结合的选择性″等，指预定的配体和预定的受体之间的结合作用，其有助于人们区别预定的配体和其他的配体，或者有助于区别预定的受体和其他的受体。当“特异性”或“选择性”结合指配体/受体、抗体/抗原、或其它结合对时，其指决定在蛋白质和其它生物制剂的异质群体中决定蛋白质存在的结合反应。因此，在指定的条件下，特定的配体结合到特定的受体上，而不结合样品中存在的其它大量的蛋白质。衍生自抗体的抗原结合位点的抗体或结合组合物结合到其抗原上，所述抗原具有与其他任一抗原的亲和力相比，至少两倍大、优选至少十倍大，更优选至少20倍大，最优选至少100倍大的亲和力。在一个优选的实施方案中，抗体将具有大于约1091升/mol的亲和力(参见，例如Munsen等(1980)Analyt.Biochem.107220-239。II.概述本发明提供用于调节或治疗大量免疫病症和病变，例如银屑病、类风湿性关节炎、克隆(氏)病(CD)和某些癌症的方法。提供用于治疗和诊断以p28、EBI3、IL-27和WSX-1/TCCR的异常表达为特征的病变的方法。先回顾一下IL-27、IL-27受体和其亚基的生理学和免疫学。简而言之，已经发现IL-27或其一个亚基在干扰素γ(IFNγ)应答、T细胞分化、EB病毒诱导的病变、妊娠和溃疡性结膜炎(但不是克隆(氏)病)中起作用。详细来说，IL-27影响涉及TNFα-刺激的DCs的T细胞分化通路，其中TNFα-刺激的DCs接触未致敏的T细胞，促进未致敏的T细胞分化为产生的IFNγ-的T细胞。如果在TNFα-刺激的DC与未致敏的T细胞接触期间存在IL-27，这将促进T细胞产生IFNγ。因此，IL-27有助于未致敏的THl-类T细胞的DC-依赖性分化。IL-27也起干扰素β(IFNβ)作用。未成熟的树状突细胞(DCs)和成熟的DCs表达EBI3受到大量细胞因子的刺激。这些细胞因子包括干扰素-β(IFNβ)，IFNβ治疗是在CD40L和IFNγ组合之后(参见，例如Nagai等(2003)I.Immufzol.1715233-5243；vanSeventer等(2002)J.Neuroimmunol.13360-71)。EBI3看来在EB病毒-诱导的病变中起作用。在感染EB病毒的B细胞中表达EBI3，感染导致单核细胞增多。EBI3，由Hodgki淋巴瘤衍生的细胞系表达，存在于某些鼻咽癌中，已建议对肿瘤或病毒使用EBI3来抑制对抗与EB病毒相关的肿瘤，即，某些Hodgkin淋巴瘤和鼻咽癌的免疫应答。简而言之，已提出EBI3具有免疫抑制或TH2-促进功能(参见，例如Devergne等(1996)J.Virol.701143-1153；Niedobitek等(2002)J.Pathol.198310-316)。IL-27对妊娠起特定作用。IL-27在子宫中于怀孕开始后表达，其中该细胞因子的表达存在于子宫的NK细胞内。EBI3，IL-27的一个亚基，显示出胎盘即分化的trophoblasT细胞表达增加，且发现在妊娠期间于血清中其量增加(参见，例如，Croy等(2003)Reproduction126149-160；Zhang等(2003)Biol.Reproduction69404-411；Devergne等(2001)Am.J.Pathol.1591763-1776)。准备一只EBI3基因剔除小鼠(EBI3KO小鼠；EBI3-/-小鼠)来确定例如，免疫系统的生理学结果。EBI3KO小鼠表明不变的NKT细胞(iNKTcells)和CD4+T细胞中显示了改变。EBI3KO引起iNKT细胞的数量减少。施用EBI3KO后，随着细胞活化增加，来自脾脏的CD4+T细胞表明更多的IFNγ生成，但是IL-4减少。这些效应表明EBI3KO促进了THl-类应答，EBI3有助于TH2-型反应。EBI3KO减少了iNKT细胞的数量，按每个细胞计，也降低了iNKT细胞生成IL-4的能力。EBI3KO小鼠也开始抗结肠炎，其由对唑酮诱导的结肠炎的研究证实，唑酮诱导的结肠炎是TH2-型免疫应答介导的结肠炎模型，然而，EBI3KO小鼠不抗TH1型结肠炎模型。类似地，在另一个表明EBI3在TH2型结肠炎中起作用的研究中，EBI3已经提高了活性的溃疡性结肠炎的表达，该结肠炎为其中TH2-型应答支配的而不是THl型应答支配的的活性克隆(氏)病(Christ等(1998)Gastroentrol.115307-313；Niedobitek等(2002)J.Patlaol.198310-316)。WSX-1/TCCR表达于CD4+T细胞、CD8+T细胞和CD19+B细胞(参见，例如Sprecher等(1998)Biochenn.Biophys.Res.Cofnmun.24682-90)。本发明确认了gpl30为IL-27受体的亚基。gpl30为受体亚基，其为IL-6细胞因子族共享的受体亚基。因此，gpl30为IL-6、白血病抑制因子(LIF)、IL-11、制瘤素M、睫状神经营养因子CNTF)、心营养素-1(CT-1)、心营养素类细胞因子(CLC)和病毒IL-6同系物的亚基。已经证实了gpl30的可溶性变体(参见，例如Hammacher等(1998)J.Biol.Chem.27322701-22707；Hammacher等(2000)Biochem.J.34525-32；Sanchez-Cuenca等(1999)Immunol.Today2057-59；Gadient和Patterson(1999)StemCells17127-137；Peters等(1996)J.Exp.Med.1831399-1406；Muller-Newen(2003)ScienceSTKE2003，pe40)。本发明提供治疗和诊断克隆(氏)病的方法。克隆(氏)病是一种慢性炎性病变，其可影响胃肠道例如小肠或结肠的任意区域。克隆(氏)病包括瘘管病变，而其它的肠道炎性病变，溃疡性结肠炎包括浅的、溃疡性病损。克隆(氏)病的病理学包括炎性细胞因子，例如IL-1IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)。克隆(氏)病与溃疡性结膜炎的区别在于克隆(氏)病通常涉及IFN、IL-2和IL-12在早期增加的TH1型反应，而后者增加TNFα和IL-18。与克隆(氏)病相比，溃疡性结膜炎中存在IL-5、IL-6、IL-10和IL-13表达增加，其中细胞因子模式类似于TH2-型应答的变化。克隆(氏)病和溃疡性结膜炎进一步的区别在于，在前者中粘膜区域的T细胞抗细胞凋亡，而在后者中，粘膜区域的T细胞更易于受Fas-介导的细胞凋亡。NOD2基因的突变与人类克隆(氏)病有关，然而″白细胞抗原区域基因″和MUC3基因与人类溃疡性结肠炎有关。THl-类和TH2-型炎性肠病的机制区别由可得到的TH-1类和TH-2类小鼠模型两者的事实突出显示。例如，给定CD45RBhighCD4+T细胞的小鼠发展THl-细胞-介导的病变，与人类克隆(氏)病相似。炎性肠病的TH2-推动(driven)模型可使用TCRα基因剔除小鼠(参见，例如Ardizzone和Porro(2002)J.hat.Med.252475-496；Madsen(2002)Gastroentrol.1232140-2144；Bouma和STrober(2003)Nat.Rev.Immunol3521-533；Stallmach等(1998)Immunol.Todayl9438-441；Yamamoto等(2000)J.Immunol.1644878-4882；Targan等(1997)NewEngl.J.Med.3371029-1035；Simpson等(1998)J.Exp.Med.1871225-1234；Beutler(2001)Immunity155-14)。本发明提供治疗和诊断银屑病和其它皮肤炎症病变，例如接触过敏的方法。银屑病，一种影响全球人数约2％的常规病变，包括皮肤和脓疱区域的脱皮。在美国的银屑病患者中，约一百万人需要紫外疗法或免疫抑制疗法。约10％的银屑病患者也发展成为银屑病关节炎，一种使人虚弱的病症。银屑病包括皮肤中角质化细胞的过度增殖和白细胞的浸润。银屑病的炎症由例如T细胞、单核细胞和巨噬细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞和抗原呈递细胞(APCs)例如树状突细胞和朗氏细胞调节(参见，例如Yu等(2002)Dermatol.20494-99；Jiang等(2001)Int.J.Dermatol.40699-703).角质化细胞过度增殖部分起因于IL-2、IFNγ、TNFβ、IL-5和其它细胞因子的不适当的表达。先天反应，例如包括细菌的脂多糖(LPS；糖脂类)已经涉及银屑病的病理学部分(参见，例如Bos和DeRie(1999)ImmunologyToday2040-46；Ellis等(2001)NewEngl.J.Med.345248-255；Bhalerao和Bowcock(1998)HumanMol.Genetics71537-1545；vandeKerkhof(2000)Clin.Exp.Dermatol.25165；Tanaka等(2000)Brit.J.Dermatol.143728-732；Nickoloff(1999)J.Clin.Invest.1041161-1164；Curry等(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.127178-186；Travers等(1999)J.Clin.Invest.1041181-1189；Greaves和Weinstein(1995)NewEngl.J.Med.332581-588；Robert和Kupper(1999)NewEngl.J.Med.3411817-1828；Bos和DeRie(1999)Immunol.Today2040-46)；Shimizu等(2002)Histochem.CellBiol.118251-257，Gottleib等(1995)NatureMed.1442-447，Abrams等(2000)J.Exp.Med.192681-693；Yu等(2002)Dermatology20494-99)。银屑病关节炎、特应性皮炎和哮喘都与银屑病有关(McInnes等(2001)J.Immunol.1764075-4082；Welp等(1989)Hautarzt40496-500)。本发明提供治疗和诊断动脉粥样硬化和其它方面的心血管疾病的方法。免疫细胞，例如肥大细胞、树状突细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞对动脉粥样硬化的病理学有贡献。肿瘤坏死因子、白细胞介素-1和其它细胞因子与例如动脉粥样硬化、心血管疾病和发作的病因学有关(参见，例如，Huang等(2002)Cardiovasc.Res.55150-160；Kelley等(2000)Mol.Med.Today6304-308；Aicher等(2003)Circulation107604-611；Ozmen等(2002)Histol.Histopathol.17223-237；Wanders等(1994)Trahspl.Int.7Suppl.1S371-S375；Hallenbeck(2002)NatureMed.81363-1368；Young等(2002)Thromb.Haemost.88554-567；Loppnow等(2001)Shock13-9)。另外，本发明提供治疗和诊断关节炎，例如类风湿性关节炎、银屑病关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎和强直性脊柱炎的方法。类风湿性关节炎(RA)为关节的慢性、破坏性疾病，特征在于炎症和滑液增生。该疾病不能治愈，可导致伤残。CD4+T细胞浸润关节，且刺激IL-1、IL-6和TNFα的生成。生成的细胞因子刺激成纤维细胞、破骨细胞和软骨细胞释放蛋白水解酶，其依次使关节软骨降解。肥大细胞是参与RA病理学的主要免疫细胞。肥大细胞生产了肿瘤坏死因子-α(TNFα)，其引起炎症级联反应，促进了IL-1和IL-6的表达。肥大细胞也活化了蛋白水解酶，使软骨基质降解。关节炎的小鼠模型可用，例如胶原诱导的关节炎(CIA)、TNF过表达小鼠和IL-lα过表达小鼠(Choy和Panayi(2001)NewEngl.J.Med.344907-916；Woolley(2003)NewEngl.J.Med.3481709-1711；Niki等(2001)J.Clin.Invest.1071127-1135；Feldmann和Maini(2001)Annu.Rev.Immunol.19163-196)。本发明提供了治疗和诊断哮喘和变态反应的方法。寄生虫引起的感染，例如，曲霉或一钩虫属与患有哮喘和变态反应的人类相关。而且，曲霉或一钩虫属引起的感染，或用寄生虫抗原的治疗，已被用于哮喘和变态反应的模型研究。对寄生虫变应原的免疫应答存在于阶段，例如早期阶段和晚期阶段(参见，例如Hurst等(2001)J.Immunol.1664922-4930；Hurst等(2002)J.Im77tunol.169443-453；Mehrad等(1999)J.Immunol.1621633-1640；Soubani和Chandrasekar(2002)Chest1211988-1999；Schuh等(2002)FASEBJ.161313-1315；Greenberger(2003)FrontBiosci.8sll9-s127；Gibson等(2003)Eur.Respir.J.21582-588；Black等(2001)J.AppLPhysiol.90571-578；Palmer等(2002)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1651489-1493；Zou等(2002)GenomeBioL320.1-20.13；Abraham等(1999)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1591205-1214；Jones等(1998)Can.J.Physiol.Pharmacol76210-217；Wright等(1999)J.Pharmacol.Exp.Therapeutics2891007-1014；D′Brot等(1989)Am.Rev.Respir.Dis.139915-920)。本发明也涉及治疗和诊断肺病，包括那些包含气道高反应性的方法，例如，用IL-27拮抗剂来治疗。气道高反应性(airwayhyperreactivity)，也称为气道高反应性(airwayhyperresponsiveness)，其涉及刺激应答产生的不适当的气道缩小，特征在于气道的多种病变，例如哮喘、变应性鼻炎、支气管炎、细支气管炎和可能的慢性阻塞性肺疾患(COPD)。高反应性可以由例如呼吸道感染、吸烟和呼吸道变应原引起。哮喘，一种可致命的慢性病变，影响了约七分之一的美国儿童，是超过15％的儿科急症的原因。该病的症状包括呼吸急促和粘液分泌过多(参见，例如，Crain等(1995)Arch.Pediatr.Adolesc.Med.149893-901；Grunig等(1998)Science2822261-2263；Crystal等(eds.)(1997)TheLung，Vols.1-2，2nded.，Lippincott-Raven，Phila，PA；Holgate等(2001)Allergy，2nded.，Mosby，NewYork；Marone(1998)Immunol.Today195-9；Barnes和Lemanske(2001)NewEngl.J.Med.344350-362)。气道高反应性以气道中T细胞、嗜酸性细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞和抗原呈递细胞(APC)的浸润为特征。肺的APC包括DC、B细胞和肺泡的巨噬细胞，其中每个都可表达细胞因子和导致气道高反应性(参见，例如Lawrence等(1998)J.Pharm.Exp.Thera.284222-227；Alexis等(2001)Am.J.Physiol.LungCellMol.Physio.280L369-L375；Akabari等(2002)NatureMedicine81024-1032；MacLean等(1999)Am.J.Respir.CellMol.Biol.20379-387；Hamelmann等(1999)Am.J.Respir.CellMol.Biol.21480-489；Gonzales等(2000)AnnalsInternalMedicine133981-991；Li等(2002)PulmoraaryPharmacol.Therapeutics15409-416；Zimmermann，tal.(2003)J.AllergyClin.Immunol.111227-242；Riffo-Vasquez和Spina(2002)Pharmacol.Therapeutics94185-211)。COPD为涉及巨噬细胞、嗜中性粒细胞和T细胞例如CD8+T细胞浸润细支气管的病变。COPD，北美洲引起死亡的第四大病因，特征在于气道平滑肌的增厚和气道的炎症。这种反应的出现是由于单核细胞、巨噬细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和嗜中性粒细胞对肺的浸润。肺泡的巨噬细胞，在COPD中提高表达细胞因子，依次促进了炎症和增加了免疫细胞的活化。COPD包括慢性支气管炎和气肿。气肿的特征在于薄壁组织、气隙末梢的末端细支气管的永久性破坏(参见，例如Hautamaki等(1997)Science2772002-2004；Barnes(2000)Chest11710S-14S；Barnes(2003)Annu.Rev.Med.54113-129；Jeffery(1998)Thorax53129-136；Barnes(2000)NewEngl.J.Med.343269-280)。本发明也包括癌症治疗和诊断方法。注意到IL-27已显示可治疗小鼠肿瘤(Hisada等(2004)CaneerRes.641152-1156)。本发明提供使用IL-27增加TNFα、IL-lα和OX40生成的方法，这些细胞因子与抗肿瘤的适当的免疫应答相关和与肿瘤衰退相关。本发明提供使用IL-27刺激包含免疫因子例如TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX4的抗肿瘤免疫应答生成来治疗癌症的方法。肿瘤通常由CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润。具有T细胞的肿瘤的较高浸润有时与患者的良好预后有关，例如在黑素瘤和结肠直肠癌的情况下。对肿瘤的免疫应答的问题是T细胞可以是不完全活化的、免疫缺乏的或灭活的(Dalerba等(2003)Crit.Revs.OncologyHematology4633-57；Ladanyi等(2004)Clin.CancerRes.10521-530；Toomey等(1999)Immunol.Invest.2829-41)。IL-lα、IL-lβ和TNFα具有抗肿瘤功效，其导致抗肿瘤的增强的免疫应答。发现大量肿瘤类型表达IL-lα。TNFα的抗肿瘤，例如，由对肿瘤的直接细胞毒性引起，但是也可以经由活化巨噬细胞、CD8+T细胞和嗜中性粒细胞引起。相反地，在一定的条件下，IL-1和TNFα可具有致肿瘤(pro-tumor)功效。IL-1可诱导能促进肿瘤生长和侵袭力的因子的分泌。IL-1的生成可导致自泌激活、增加倾袭力。TNFα、IL-lα和IL-lβ可刺激某些肿瘤例如卵巢癌的生长(参见，例如Chen等(1998)CancerRes.583668-3676；Woods等(1998)CancerRes.583132-3141；Apte和Voronov(2002)Sem.CancerBiol.12277-290；Woodward等(2002)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.433144-3152；Smith等(1990)CancerRes.503146-3153；Wu等(1993)CancerRes.531939-1944；Noorda等(2003)Cancer981483-1490；Bazzoni等(2001)CancerRes.611050-1057；Kamada等(2000)CancerRes.606416-6420；Kaneda等(1998)CancerRes.58290-295；Gnant等(1999)CancerRes.594668-4674；Suganuma等(1999)CancerRes.594516-4518)。OX40为一种配体，然而OX40R为其相应的受体。OX40/OX40R介导的信号在抗肿瘤应答中起作用。OX40和OX40R在浸润肿瘤的T细胞中正向调节，但是在外周血T细胞中没有正向调节。通过施予OX40配体触发OX40/OX40R信号可导致多种肿瘤的排斥反应。已经发现人类乳腺癌和黑素瘤包含OX40-表达的T细胞，并在抗肿瘤应答中涉及OX40/OX40R(参见，例如，Morris等(2001)BreastCancerRes.Treat.6771-80；Hurwitz等(2000)Curr.Opin.Immunol.12589-596；Ladany等(2004)Clin.CancerRes.10521-530)。至于癌症，用于治疗癌症、肿瘤、转移和血管生成的多种调节免疫应答方法都是有效的。这些方法包括用细胞因子或抗-细胞因子抗体治疗，所述细胞因子或抗-细胞因子抗体例如IL-2、IL-12、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、IFNγ、粒巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)和转化生长因子(TGF)。当癌细胞可产生能促进其自身生长和自身存活的细胞因子时，抗细胞因子抗体可以是适宜的治疗剂(参见，例如Ramirez-Montagut等(2003)Oncogene223180-3187；Braun等(2000)J.Immunol.1644025-4031；Shaw等(1998)J.Immunol.1612817-2824；Coussens和Werb(2002)Nature420860-867；Baxevanis等(2000)J.Immunol.1643902-3912；Shimizu等(1999)J.Immunol.1635211-5218；Belardelli和Ferrantini(2002)TRENDSImmunol.23201-208；Seki等(2002)J.Immunol.1683484-3492；Casares等(2003)J.Immunol.1715931-5939；Oft等(2002)NatureCellBiol.4487-494)。III.激动剂、拮抗剂和结合组合物本发明提供使用IL-27的激动剂和拮抗剂的方法。IL-27的激动剂包含例如IL-27、IL-27变体、突变蛋白质、hyperkine或其肽模拟物、WSX-1/TCCR或gp130的激动剂抗体和编码这些激动剂的核苷酸。IL-27的拮抗剂包括，例如，IL-27的抗体、p28或EBI3的抗体、WSX-1/TCCR或gpl30的阻断抗体、基于WSX-1/TCCR或gpl30的亚基胞外区的可溶性受体、其肽模拟物和编码这些拮抗剂的核苷酸。也可以使用抗-个体遗传型(anti-idiotpic)抗体。本发明提供使用p28的激动剂和拮抗荆、p28和EBI3结合物的激动剂和拮抗剂、WSX-1/TCCR的激动剂和拮抗剂、gp130的激动剂和拮抗剂、WSX-1/TCCR和gpl30的激动剂和拮抗剂的方法。I27hyperkine包含，例如，包含p28和EBI3的多肽序列的融合蛋白，其中p28和EBI3存在于一个连续的多肽链中。p28和EBI3的序列可以在连续多肽链中是任意顺序。所述融合蛋白可在一个连续的多肽链中包含联结子序列，其存在于p28和EBI3和序列之间。使用VectorNTISuite用Parker曲线很容易地于发现增加的抗原性区域，该区域可用于抗体增殖(Informax，Inc，Bethesda，MD)。p28、EBI3、WSX-1/TCCR和gpl30的抗体为已知的(参见，例如，Pflanz等(2004)J.Immunol.1722225-2231；Larousserie等(2004)J.Pathol.202164-171；Devergne等(2001)Am.J.Pathol.1591763-1776；Autissier等(1998)Int.Immunol.101881-1889)。也涉及特异性结合p28和EBI3结合物的抗体，和特异性结合WSX-1/TCCR和gpl30结合物的抗体。也提供了对应于WSX-1/TCCR和gpl30的胞外区的可溶性受体。成熟的人类WSX-1/rCCR的胞外域包含GenBankBC028003或NM004843的氨基酸序列的氨基酸33至514。该胞外域包括经典的细胞因子结合域，也包含三个纤连蛋白(FN)域。本发明提供包含细胞因子结合域和无、一个或三个FN域的可溶性受体(参见，例如Hui等(2000)Cytokine12151-155)。基于这些胞外区的受体不限于这些明确的N-末端和C-末端氨基酸，但可以稍长或稍短，例如不限于一个、两个、三个或更多的氨基酸，只要基本上保留配体的结合性质。也包含基于可溶性受体的融合蛋白，例如，用促进纯化和稳定性，或用于提供功能域，例如有毒的多肽。可制备单克隆的、多克隆的和人源化抗体(参见，例如Sheperd和Dean(eds.)(2000)MonoclonalAntibodies，OxfordUniv.Press，NewYork，NY；Kontermann和Dubel(eds.)(2001)AntibodyEngineering，Springer-Verlag，NewYork；Harlow和Lane(1988)AntibodyAlaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，pp.139-243；Carpenter等(2000)J.Immunol.1656205；He等(1998)J.Immunol.1601029；Tang等(1999)J.Biol.Chem.27427371-27378；Baca等(1997)J.Biol.Chem.27210678-10684；Chothia等(1989)Nature342877-883；Foote和Winter(1992)J.Mol.Biol.224487-499；授予Vasquez等的U.S.专利No.6,329,511)。也包含抗体的突变蛋白质和变体和可溶性受体，例如聚乙二醇化或引起突变形成以除去或替换脱酰氨基天冬酰胺残基。对抗体的增殖而言，抗原的纯化不是必须的。通过DNA运载体免疫接种进行免疫接种，参见，例如Wang，etal.(1997)virology228278-284。另外，动物也可以用承受相关抗原的细胞来免疫。然后，脾细胞可以从免疫的动物中分离，脾细胞可以与骨髓瘤细胞系融合产生杂交瘤(Meyaard等(1997)Immunity7283-290；Wright等(2000)Immunity13233-242；Preston等(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918)。通过功能性化试验或生物试验，可筛选生成的杂交瘤产生想要的抗体，所述试验即，不依赖拥有纯化的抗原的试验。用细胞免疫可证实Dekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)ExcipientToxicityandSafety，MarcelDekker，Inc.，NewYork，NY).选择用于治疗的给药方式取决于某些因素，包括实体的血清或组织更新率，症侯的水平、实体的免疫原性和在生物基质中对靶细胞的易趋性。优选地，给药方式使递送给患者的治疗量最大化，其与可接受的副作用水平一致。因此，递送的生物量部分取决于具体的实体和受治疗的病症的严重性。选择适宜剂量的抗体、细胞因子和小分子的指南是已知的(参见，例如Wawrzynczak(1996)AntibodyTherapy，BiosScientificPub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(ed.)(1991)MonoclonalCytokinesandArthritis，MarcelDekker，NewYork，NY；Bach(ed.)(1993)MonoclonalAntibodiesandPeptideTherapyinAutoimnauneDiseases，MarcelDekker，NewYork，NY；Baert等(2003)NewEngl.J.Med.348601-608；Milgrom等(1999)NewEngl.J.Med.3411966-1973；Slamon等(2001)NewEngl.J.Med.344783-792；Beniaminovitz等(2000)NewEngl.J.Med.342613-619；Ghosh等(2003)NewEngl.JMed.34824-32；Lipsky等(2000)NewEngl.J.Med.3431594-1602)。抗体、抗体片段和细胞因子可通过连续输注或通过，例如每天、每周间隔服药或每周1-7次提供。药量可以通过静脉、皮下、局部、口服、鼻腔、直肠、肌内、脑内或吸入提供。优选的剂量方案为包含最大剂量或避免显著的不想要的副作用的剂量。总共每周剂量通常为至少0.05μg/kg体重、更通常至少0.2μg/kg、最优选通常至少0.5μg/kg、典型地至少1μg/kg、更典型地至少10μg/kg、最典型地至少100μg/kg、优选至少0.2mg/kg、更优选至少1.0mg/kg、最优选至少2.0mg/kg、理想地至少10mg/kg、更理想地至少25mg/kg、最理想地至少50mg/kg(参见，例如，Yang等(2003)NewEngl.J.Med.349427-434；Herold等(2002)NewEngl.J.Med.3461692-1698；Liu，etal.(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67451-456；Portielji，etal.(20003)CancerImmunol.Immunother.52133-144)。小分子治疗剂例如肽模拟物、天然产物或有机化学品的想要的剂量与用于抗体或多肽的量相同，以moles/kg体重计。小分子治疗荆想要的血浆浓度与用于抗体的约相同，以moles/kg体重计。用于具体患者的有效量可根据多种因素而改变，所述因素例如治疗的病症、患者的整体健康状态、给药的方法、途径和剂量、和副作用的严重性(参见，例如Maynard等(1996)AHandbookofSOPsforGoodClinicalPractice，InterpharmPress，BocaRaton，FL；Dent(2001)GoodLaboratoryandGoodClinicalPractice，UrchPubl.，London，UK)。典型的牲畜、试验和研究受试者包括猴、狗、猫、大鼠、小鼠、兔、荷兰猪、马和人。适宜剂量由临床医师例如，利用参数或已知因素或影响治疗的本领域可能因素或影响治疗的预测因素来确定适宜剂量。通常，剂量开始略微少于最佳剂量，随后按小剂量不断增加，直到获得相对于任意消极地副作用而言想要的最佳剂量。重要的诊断措施包括那些症状，例如产生的炎症或炎症细胞因子的水平。优选地，将要使用的生物学剂量得自类似于用于治疗的目标动物的相同种类，因而，使对试剂的体液应答降低至最低。与第二治疗剂共治疗或治疗的方法是本领域已知的，所述第二治疗剂例如细胞因子、类固醇、化学治疗剂、抗生素或放射物(参见，例如Hardman等(eds.)(2001)GoodmanandGilman′sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，10thed.，McGraw-Hill，NewYork，NY；Poole和Peterson(eds.)(2001)PharmacotherapeuticsforAdvancedPracticeApracticalApproach，Lippincott，Williams&Wilkins，Phila.，PA；Chabner和Longo(eds.)(2001)CancerChemotherapyandBiotherapy，Lippincott，Williams&Wilkins，Phila.，PA)。典型地，治疗有效量将减少症状至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％，最优选至少50％。给药途径为，例如，经由局部或皮下施用，通过静脉内、腹膜内、脑内、肌内、眼内、动脉内、脑脊髓内、患处内或肺部途径注射或输注、通过缓释系统或者移植物(参见，例如Sidmanetal.(1983)Biopolymers22547-556；Langer等(1981)J.Biomed.Mater.Res.15167-277；Langer(1982)Chem.Tech.1298-105；Epstein等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA823688-3692；Hwang等(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA774030-4034；U.S.专利Nos.6,350466和6,316,024)。本发明提供治疗或诊断增殖的方法。上述病症或病变，例如，子宫、宫颈、乳腺、前列腺、睾丸、阴茎、胃肠道例如食道、口咽、胃、小肠或大肠、结肠或直肠、肾、肾细胞、膀胱、骨、骨髓、皮肤、头或颈、皮肤、肝、胆囊、心脏、肺、胰腺、唾液腺、肾上腺、甲状腺癌、脑、神经节、中枢神经系统(CNS)和周围神经系统(PNS)和免疫系统例如，脾脏或胸腺的癌症。本发明提供治疗例如免疫原性肿瘤、非免疫原性肿瘤、潜伏性(dormant)肿瘤、病毒诱导的癌症例如上皮细胞癌、内皮细胞癌、鳞状上皮细胞癌、乳头瘤病毒、腺癌、淋巴瘤、癌、黑素瘤、白血病、肉瘤、畸胎癌、化学诱导的癌症、转移和血管生成的方法。本发明也涉及对肿瘤细胞或癌细胞抗原减少的耐受性，例如通过调节调整T细胞(Treg)的活性(参见，例如Ramirez-Montagut等(2003)Oncogle223180-3187；Sawaya等(2003)NewEngl.J.Med.3491501-1509；Farrar等(1999)J.Imrnunol.1622842-2849；Le等(2001)J.Immunol.1676765-6772；Cannistra和Niloff(1996)NewEngl.J.Med.3341030-1038；Osborne(1998)NewEngl.J.Med.3391609-1618；Lynch和Chapelle(2003)NewEngl.J.Med.348919-932；Enzinger和Mayer(2003)NewEngl.J.Med.3492241-2252；Forastiere等(2001)NewEngl.J.Med.3451890-1900；Izbicki等(1997)NewEngl.J.Med.3371188-1194；Holland等(eds.)(1996)CancerMedicineEncyclopediaofCancer，4thed.，AcademicPress，SanDiego，CA)。本发明提供用IL-27的激动剂或拮抗剂和用至少一种另外的治疗剂或诊断剂治疗增殖疾病、癌症、肿瘤或癌前期的病症例如发育异常的方法。一种或多种另外的治疗剂或诊断剂选自例如，细胞因子或细胞因子拮抗剂，例如干扰素-α或抗表皮生长因子受体、多柔比星、表柔比星、抗叶酸剂例如甲氨蝶呤或氟尿嘧啶、依立替康、环磷酰胺放射疗法、激素或抗激素治疗(例如雄激素、雌激素、抗雌激素、氟他胺或己烯雌酚)、外科手术、他莫昔芬、异环磷酰胺、二溴卫矛醇、烷化剂(例如，美法仑或顺铂)、依托泊苷、长春瑞滨、长春碱、长春酰胺、糖皮质激素、组胺受体拮抗剂、血管生成抑制剂、放射线、放射敏化剂、蒽环类抗生素、长春花生物碱、紫杉烷例如紫杉醇和多西紫杉醇、细胞周期抑制剂例如周期素依赖性蛋白激酶抑制剂、单克隆抗体、单克隆抗体和毒素结合物、T细胞佐剂、骨髓移植或抗原呈递细胞例如树突细胞治疗。也可提供疫苗，例如作为可溶蛋白或作为编码蛋白质的核苷酸(参见，例如，Le等(2001)J.Immunol.1676765-6772；Greco和Zellefsky(eds.)(2000)RadiotherapyofProstateCancer，HarwoodAcademic，Amsterdam；Shapiro和Recht(2001)NewEngt.J.Med.3441997-2008；Hortobagyi(1998)NewEngl.J.Med.339974-984；Catalona(1994)NewEngl.JMed.331996-1004；Naylor和Hadden(2003)Int.Immunopharmacol.31205-1215；TheInt.AdjuvantLungCancerTrialCollaborativeGroup(2004)NewEngl.J.Med.350351-360；Slamon等(2001)NewEngl.J.Med.344783-792；Kudelka等(1998)NewEngl.J.Med.338991-992；vanNetten等(1996)NewEngl.J.Med.334920-921)。V.药盒和诊断剂提供基于抗体、核苷酸杂化和PCR方法而用于炎症病变的诊断方法，所述炎症病变例如银屑病、克隆(氏)病、类风湿性关节炎、哮喘或变态反应、动脉粥样硬化和癌症。本发明提供IL-27的多肽、其片段、IL-27的核苷酸和其片段的多肽在例如用于包含流行性感冒A的病毒病变和的诊断和呼吸道和粘膜组织的病变的诊断中的诊断药盒。也提供用于检测IL-27和其代谢产物和分解产物的结合组合物，包含抗体或抗体片段。典型地，所述药盒含有包含IL-27多肽或其抗原片段、其结合组合物的隔室或核苷酸，例如核苷酸探针、引物或分子或分子导引(molecularbeacon)(参见，例如，Rajendran等(2003)NueleicAcidsRes.315700-5713；Cockerill(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.1271112-1120；Zammatteo等(2002)Biotech.Aranu.Rev.885-101；Klein(2002)TrendsMol.Med.8257-260)。一种诊断方法可包含来自患者例如测试受试者的样品与结合组合物接触，结合组合物特别地结合IL-27的多肽或核苷酸或IL-27受体。该方法还包含使来自对照受试者、正常状态受试者或来自测试受试者的正常组织或体液的样品与结合组合物接触。而且，该方法另外可包含比较特定结合到测试受试者的组合物与特定结合到正常状态受试者、对照受试者或来自测试受试者的正常组织或体液的结合物。可比较测试样品或测试受试者的表达或活性与来自对照样品或对照受试者的表达或活性。对照样品可包含，例如患有免疫病变的患者中非感染样品或非发炎组织。可提供来自对照受试者或对照样品的表达或活性作为预定值，例如从对照受试者的统计学适宜组获得。该药盒包含，例如试剂和隔室、试剂和使用说明或含有试剂的隔室和使用说明。所述试剂可以包含IL-27的激动剂或拮抗剂，或其抗原片段、结合组合物、有义方向核苷酸或反义方向的核苷酸。测定测试化合物的药盒可包含对照化合物、标记化合物，和从联合的标记化合物中分离游离标记化合物的方法，所述化合物例如从生物学样品获得或从化学库中获得。对照化合物可包含IL-27或IL-27受体多肽的片段，或编码IL-27或IL-27受体的核苷酸。所述片段包含零个、一个、两个或更多的抗原片段。“标记”的组合物直接或间接通过分光镜法、光化学法、生化法、免疫化学法、同位素法或化学方法检测。例如，有用的标记物包括32P、33P、35S、14C、3H、125I、稳定的同位素、荧光染料、高电子密度试剂、酶作用物、附加表位或酶，例如用于酶连免疫测定或fluorettes(Rozinov和Nolan(1998)Chem.BioL5713-728)。可使用生物物质进行诊断测定，所述生物物质例如活细胞、细胞提取物、溶胞产物、固定细胞、细胞培养物、体液或法医样品。用于诊断或药盒目的的共轭抗体包含偶合到染料、同位素、酶类和金属偶合的抗体，参见，例如LeDoussal等(1991)NewEngl.J.Med.146169-175；Gibellini，etaL(1998)J.ImmunoL1603891-3898；Hsing和Bishop(1999)NewEngt.J.Med.1622804-2811；Everts等(2002)NewEngl.J.Med.168883-889。存在各种测试方式，例如放射免疫测定法(RIA)ELISA和切片试验(labonachip)(U.S.专利Nos.6,176,962和6,517,234)。基因表达数据可用于诊断和治疗疾病和病理状态的的工具(参见，例如LiandWong(2001)GenoineInformatics123-13；Lockhart等(1996)NatureBiotechizol.141675-1680；Homey等(2000)J.Immunol.1643465-3470；Debets等(2000)J.Immunol.1654950-4956)。VI.用途本发明提供使用IL-27和IL-27受体的激动剂和拮抗剂用于诊断、预防和治疗免疫和炎症病变的方法，所述免疫和炎症病变包含皮肤病、胃肠道病、关节病、血管系统病例如银屑病、克隆(氏)病、类风湿性关节炎、哮喘、变态反应、COPD、气道高反应性、和动脉粥样硬化。本发明也包含治疗或增强癌症例如乳腺癌和黑素瘤期间不适当的或不足的免疫应答的方法。提供给药IL-27激动剂或拮抗剂来调节例如银屑病、克隆(氏)病、类风湿性关节炎、哮喘、变态反应、动脉粥样硬化和癌症中的免疫应答或对细胞应答的方法，其中给药为给予例如细胞、体液、组织、器官、动物患者或人类患者。许多用于纪录炎症病变例如银屑病、克隆(氏)病和类风湿性关节炎的生物标记物的方法是已知的(参见，例如Bresnihan(2003)ArthritisRes.Ther.5271-278；Barnero和Delmas(2003)Curr.Opin.Rheumatol.15641-646；Gionchetti等(2003)Dig.Dis.21157-167；Wiik(2002)AutoilninuneRev.167-72；Sostegni等(2003)AlimentPharmacol.Ther.17(Suppl.2)11-17)。生物标记物和用于纪录癌症的方法也已已知(参见，例如，Alison(ed.)(2001)TheCancerHandbook，Grove′sDictionaries，Inc.，St.Louis，MO；Oldham(ed.)(1998)PrinciplesofCancerBiotherapy，3rd.ed.，KluwerAcademicPubl.，Hingham，MA；Thompson等(eds.)(2001)TextbookofMelanoma，MartinDunitz，Ltd.，London，UK；Devita等(eds.)(2001)CancerPrinciplesandPfacticeofOncology，6thed.，Lippincott，Phila，PA；Holland等(eds.)(2000)Holland-FreiCancerMedicine，BCDecker，Phila.，PA；Garrett和Sell(eds.)(1995)CellularCancerMarkers，HumanaPress，Totowa，NJ；MacKie(1996)SkinCancer，2nded.，Mosby，St.Louis；Moertel(1994)NewEngl.JMed.3301136-1142；Engleman(2003)Semin.Oncol.30(3Suppl.8)23-29；Mohr等(2003)Onkologie26227-233)。参照下述的实施例可最好地理解本发明的广阔的范围，其并不意味着将本发明限制于具体的实施方案.实施例I.通用方法在生物化学和分子生物学中的标准方法已经公开(参见，例如Maniatis等(1982)MolecularCloning，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning，3rded.，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；Wu(1993)RecombinantDNA，Vol.217，AcademicPress，SanDiego，CA)。标准方法也描述于Ausbel等(2001)CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vols.1-4，JohnWileyandSons，Inc.NewYork，NY，其中描述了在细菌细胞和DNA诱变中的克隆(Vol.1)，在哺乳动物细胞和酵母中的克隆(Vol.2)，配糖体和蛋白表达(Vol.3)，和生物信息学(Vol.4)。用于蛋白纯化的包含免疫沉淀作用、层析、电泳、离心分离和结晶作用的方法已经公开(Coligan等(2000)CurrentProtocolsinProteinScience，Vol.1，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork).化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的生成、蛋白质的糖基化已经公开(参见，例如Coligan等(2000)CurrentProtocolsinProteinScience，Vol.2，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork；Ausubel等(2001)CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vol.3，JohnWileyandSons，Inc.，NY，NY，pp.16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich，Co.(2001)ProductsforLifeScienceResearch，St.Louis，MO；pp.45-89；AmershamPharmaciaBiotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，pp.384-391)。生成、纯化和分裂多克隆的和单克隆的抗体的方法已经公开(Coligan等(2001)CurrentProtcolsinImmunology，Vol.1，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork；Harlow和Lane(1999)UsingAntibody，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；HarlowandLane，supra).用于描绘配体/受体相互作用的标准技术是已知的(参见，例如Coligan等(2001)CurrentProtcolsinImmunology，Vol.4，JohnWiley，Inc.，NewYork).用于包含荧光激活细胞分选术(FACS)的流式细胞仪的方法是已知的(参见，例如Owebs等(1994)FlowCytometryPrinciplesForClinicalLaboratoryPractice，JohnWileyandSons，Hoboken，NJ；Givan(2001)FlowCytometry，2nded.；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)PracticalFlowCytometry，JohnWileyandSons，Hoboken，NJ).适宜用于修饰核苷酸的荧光试剂是已知的，所述核苷酸包含核苷酸引物和探针、多肽和抗体，其用于作为例如诊断试剂(参见，例如MolecularProbes(2003)Catalogue，MolecularProbes，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue，St.Louis，MO)。免疫系统的组织学标准方法是已知的(参见，例如，Muller-Harmelink(ed.)(1986)HumanThymusHistopathologyandPathology，SpringerVerlag，NewYork，NY；Hiatt等(2000)ColorAtlasofHistology，Lippincott，Williams，andWilkins，Phila，PA；Louis等(2002)BasicHistologyTextandAtlas，McGraw-Hill，NewYork，NY)。使用动物模型，例如基因剔除小鼠的方法，和用于测试、评价和筛选诊断剂、治疗剂和药物试剂的方法是已知的(参见，例如，Car和Eng(2001)Vet.Pathol.3820-30；Kenyon等(2003)Toxicol.Appl.Pharmacol.18690-100；Deurloo等(2001)Am.J.Respir.CellMol.Biol.25751-760；Zuberi等(2000)J.Immunol.1642667-2673；Temelkovski等(1998)Thorax53849-856；Horrocks等(2003)Curr.Opin.DrugDiscov.Devel.6570-575；Johnston等(2002)DrugDiscov.Today7353-363)。用于确定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能性领域、糖基化位点和序列对比的软件包和数据库是已知的(参见，例如GenBank，VectorNTISuite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCGWisconsinPackage(Accelrys，Inc.，SanDiego，CA)；DeCypher(TimeLogicCorp.，CrystalBay，Nevada)；Menne等(2000)Bioinformatics16741-742；Menne等(2000)BioinformaticsApplicatiorsNote16741-742；Wren等(2002)Comput.MethodsPrograms.Biomed.68177-181；vonHeijne(1983)Eur.J.Biochem.13317-21；vonHeijne(1986)NucleicAcidsRes.144683-4690)。II.IL-27和IL-27受体的亚基的表达IL-27的亚基，即p28亚基和EBI3亚基，和IL-27受体的亚基，即WSX-1/TCCR亚基和gpl30亚基的表达可通过Taqman实时PCR分析来确定(表1)。结果证实增强的p28、EBI3和WSX-1/TCCR的表达与银屑病的关系；增强的EBI3、WSX-1/TCCR和gpl30的表达与克隆(氏)病的关系；和增强的EBI3和WSX/TCCR的表达与类风湿性关节炎的关系。也表明了增强的表达与乳腺癌、黑素瘤、结肠癌和动脉粥样硬化的关系(表1)。表1.IL-27亚基的表达和IL-27亚基，用Taqman实时PCR分析来分析，相对于泛激素(1.0)的表达做比较。续表1用能刺激大量基因表达的IL-27来处理来自脐带血的原发的人肥大细胞(表2)。IL-27引起大量与免疫病变例如银屑病、关节炎、克隆(氏)病、哮喘、变态反应和气道高反应性有关基因的表达(表2)。表2实时PCR确定在人类肥大细胞基因表达中IL-27-介导的改变″1.0″的表达改变指没有可检测到改变本发明提供治疗银屑病和其它皮肤病变例如接触过敏反应和特应性皮炎的方法。银屑病与TNFα、IL-lβ和TEASRL(配体)、TEASR(受体)的表达增加有关(表3)。抗-TNFα抗体治疗用于银屑病的治疗(参见，例如Girolomoni等(2002)Curr.Opin.InvestitDrugs.31590-1595；Zabraniecki和Fournie(2001)JointBoneSpine68106-108；Victor和Gottlieb(2002)J.DrugsDermatol.1264-275；Reich等(2002)JlnvestDermatol.118155-163)。TEASRL(a.k.a.GITRL)是包含TEASRL和TEASR的信号通路的配体，而TEASR(a.k.a.GITR)是其受体。TEASR也称为例如糖皮质激素-诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)和TNFRSF18。TEASR是肿瘤坏死因子受体超家族的一员。TEASR的激动剂通过直接刺激CD4+T细胞或CD8+T细胞，或通过阻断由T调节细胞(Treg)介导的基因恢复导致CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖。所述Treg可以是CD4+CD25+调节T细胞(参见，例如，Shimizu等(2002)NatureImmunol3135-142；McHugh等(2002)Immunity16311-323)。鉴于fIL-27刺激TEASRL的表达的能力(表2)，和与银屑病中增加的TEASRL和TEASR表达相关，本发明提供用于治疗银屑病的IL-27的拮抗剂。表3.Taqman分析TEASRL(配体)和TEASR(受体)的实时PCR表达本发明提供治疗关节炎和银屑病关节炎的方法。TNFα、RANKL和IL-lα，其在IL-27处理中表达增加的水平(表2)，刺激破骨细胞的生成，其为可消化和降解骨细胞。RANKL为核因子κB配体的受体激动剂。RANKL表达在患有银屑病关节炎的人类关节中增加。IL-lα和IL-lβ都在关节炎的病理学中起作用。本发明提供通过给药IL-27的拮抗剂来治疗关节炎例如类风湿性关节炎、骨关节炎和银屑病关节炎的方法，其中所述拮抗剂期望减少TNFα和RANKL的表达(参见，例如Reimold(2002)Curr.DrugTargetsInflamm.Allergy1377-392；Girolomoni等(2002)Curr.Opina.Investig.Drugs31590-1595；Ritchlin等(2003)J.Clin.Invest.111821-831；Nakashima等(2003)Curr.Opin.Rheumatol.15280-287；Williams等(2000)J.Immunol.1657240-7245；Arend(2001)Serein.ArthrittsRheum.30(5Suppl.2)1-6；Arend(2002)CytokineGrowthFactorRevs.13323-340)。本发明提供例如通过使用IL-27的拮抗剂来抑制OX40和/或TNFα的生成来治疗克隆(氏)病的方法(表2)。OX40的抗体改善了克隆(氏)病的动物模型，同时在患有克隆(氏)病的患者的肠中发现增加了OX40和OX40配体(OX40L)的表达(参见，例如，Totsuka等(2003)Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.284G595-G603；Souza等(1999)Gut45856-863；Stuber等(2000)EuropeanJ.Clin.Invest.30594-599)。T′α有助于克隆(氏)病，其作为一种抗-TNFα抗体用于治疗这种病变(参见，例如，Reimold(2002)Curr.DrugTargetsInflamm.Allergy1377-392)。本发明提供治疗哮喘、变态反应和其它肺病的方法。TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX40已显示对哮喘、变态反应、气道高反应性和COPD的病理学起作用。例如，OX40L缺乏的小鼠或用抗OX40L抗体处理的小鼠抵抗对模型变态原的病理反应。IL-1缺乏的小鼠也抵抗诱导气道高反应性应答的作用。TNFα在患有支气管高反应性和COPD的患者中增加(参见，例如，Nakae等(2003)Int.Immunol.15483-490；Halasz等(2002)Respir.Med.96262-267；Chung(2001)Eur.Respir.J.Suppl.3450s-59s；Hoshino等(2003)Eur.J.Immunol.333861-869)。本发明提供给药IL-27的激动剂或拮抗剂来治疗癌症的方法。已发现用IL-27治疗可刺激细胞因子或其它与抗肿瘤应答相关的信号分子的表达，所述其它信号分子例如TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX40。表达增加的p28、EBI3或WSX-1/TCCR的肿瘤实例表明对肿瘤适宜的免疫应答涉及IL-27-介导的信号，并表明自然存在的抗肿瘤应答可通过给药IL-27激动剂来增强。表达增加的p28、EBI3或WSX-1/TCCR的肿瘤实例包括乳腺癌\黑素瘤和结肠癌(表1)。在表2中的其它基因是已知的。APRIL(一种增殖性诱导配体)和BLAS是肿瘤坏死因子(TNF)配体家族的一员。淋巴细胞毒素-α和β(LTα；LTβ)为在淋巴结发育中使用的细胞因子(参见，例如，Varfolomeev等(2004)Mol.CellularBiol.24997-1006；Novak等(2002)Blood1002973-2979；Nardelli等(2002)Leuk.Lymphoma431367-1373；Shakhov等(2004)Eur.J.Immunol.34494-503；Kather等(2003)Immunology108338-345)。III.经由WSX-1/TCCR和gpl30调节IL-27信号。多种细胞因子受体蛋白与WSX-1/TCCR配对。只有WSX-1/TCCR和gpl30的组合支持的信号转导对IL-27有响应。受体亚基单独不足以支持信号转导。抗-人类gpl30抗体(抗hgpl30抗体)阻断人类NK细胞系中IL-27-介导的信号，并阻断自身CD4+T细胞的IL-27-介导的增殖。用于WSX-1/TCCR亚基的候选配偶体在大鼠pre-BBa/F3细胞中表达，并用于评价STAT1和STAT3的磷酸化。母体Ba/F3细胞系表达WSX-1/TCCR(相对于泛激素的表达为约100，000)，但是表达相对少的gpl30(相对于泛激素的表达为约3)。用gpl30转染的母体Ba/F3细胞和Ba/F3细胞可用IL-3、IL-6/sIL-6Rα或IL-27来刺激，并且其用于评价STAT1磷酸化。作为对IL-27的相应，STAT1仅用gpl30转导来磷酸化(表4)。STAT3对各种刺激的反应类似于STAT1对各种刺激的反应(没有标出)。因此，在天然表达WSX-1/TCCR的细胞中，IL-27介导的细胞信号由gpl30支持(表4)。表4.在用gpl30转染或未转染的Ba/F3细胞中STAT1的磷酸化。STATI-P用特定的抗体测定。小鼠成纤维细胞系NIH3T3表达gpl30，通过定量PCR分析确定，gpl30的表达远远高于WSX-1/TCCR的表达，即高于约1000倍(表5)。NIH3T3细胞用编码flag-标记的小鼠WSX-1/TCCR(mWSX-1/TCCR)的逆转录病毒载体(一种对照载体)转染，或根本不用转染。仅用WSX-1/TCCR转染的细胞响应通过STAT1磷酸化的IL-27的应答(表5)。也检测STAT3的磷酸化，反应导致其与STATl的磷酸化类似，区别在于用IL-6/sIL-6Rα处理的STAT3磷酸化比用IL-27处理的STAT3磷酸化多一些。因此，在天然表达WSX-1/TCCR的细胞中，IL-27介导的细胞信号由gpl30支持(表5)。表5.在转染的NIH3T3细胞或没有用flag-标记mWSX-1转染的细胞中STAT1的磷酸化。ND表示没有监测到。STATl-P用特定的抗体测定。发现抗人类gpl30抗体(抗-hgpl30抗体)可阻断IL-27的短期或长期应答，其再一次证实，IL-27信号穿过gpl30(表6)。短期应答由人类白血病的自然杀伤细胞(NKL细胞)确定，自然杀伤细胞为通过STAT1和STAT3的酪氨酸磷酸化对IL-27应答的细胞系(Hibbert等(2003)J.InterferonCytokineRes.23513-522)。细胞用或不用抗-hgpl30抗体(抗体B-T2)培养后，再用IL-27处理(Wijdenes等(1995)Eur.J.Immunol.253474-3481).用抗-hgpl30抗体或同型对照单克隆抗体预培养NKL细胞，使用的抗体为25,500，和10,000ng/ml(表6)。用饱和量的IL-27刺激细胞，或者无刺激。对IL-27的应答，和对抗-gpl30的抑制，证实IL-27信号调节gpl30，而gpl30-调节的信号引起STAT1和STAT2的磷酸化(表6)。分离短期研究证实IL-27刺激原发人类单核细胞磷酸化STAT1和STAT3(数据没有标示)，然而，包括在t＝2h、6h和24h的时间点的时程研究表明仅仅在t＝24hIL-lβ、TNFα何IL-18的表达有可测量的增加(数据没有标示)。作为对IL-27的应答，单核细胞生成IL-27，且表达IL-27的两个亚基受体表明单核细胞可用于自刺激的自分泌通路。表6.抗gpl30抗体防止由NKL细胞的1L-27介导的细胞信号。ND表示STAT的磷酸化不能被检测到。用IL-27刺激10-20分钟。IL-27的长期作用和用这些长期作用的gpl30的依赖由自然人类T细胞的增殖试验来确定(表7)。在试验中使用之前，用FACS纯化T细胞。加入胸苷来测定增殖。T细胞接受IL-27(饱和水平)、激动(agonistic)抗-CD3受体、激动抗-CD28抗体和中和的抗IL-2抗体，如上所述。用抗-GPl30抗体或用对照抗体滴定细胞。加入[3H]胸苷来测定细胞增殖。氚化了的胸苷的最大加入量为约21,000cpm。发现最大半数抑制量为约1.0ng/ml浓度的抗gpl30抗体，然而发现最大抑制量为(7,000cpm)约30ng/ml抗-gpl30抗体(表7)。当仅仅用培养基补充细胞时，加入的氘为零，即没有监测到。表7.IL-27-依赖性T细胞增殖。(--)表示没有加入添加剂IV.材料和方法重组体hIL-6/shIL-6Rα、hIL-2和mIL-3来自R&DSystems，Inc.(Minneapolis，MN)。重组体人类和小鼠IL-27融合蛋白是市售的(Pflanz等，supra)。抗-hgpl30单克隆抗体B-T2来自InstituteofBiochemistry，RWTHAachen，Germany。抗-hWSX-1多克隆抗体来自U.S.Biological，Swampscott，MA.STAT1和STAT3的酪氨酸磷酸化形式的抗体来自CellSignaling，Beverly，MA，而可检测的全部STAT1或STAT3的抗体来自TransductionLabs，Lexington，KY，andSantaCruzBiologicals，SantaCruz，CA.在分别存在mIL-3(5ng/ml)或hIL-2(5ng/ml)的RPMI/10％胎牛血清(FCS)中培养小鼠骨髓前体BaF3细胞和人类白血病NK细胞系(NKL)。在DMEM/10％FCS中培养小鼠成纤维细胞系NIH3T3.制备并培养天然的人类原发的CD4+T细胞，如所述的(Pflanz等，supra)。由Ficoll/Hypaque离心分离从单核粒细胞中新鲜分离的人类脐带血。在添加了2％人类血清、100ng/ml干细胞因子和50ng/mlIL-6的Yseel′s培养基中培养脐带血单核细胞(GeminiBioproducts，Woodland，CA)。保养培养基约7-8周，期间每周更换培养基。在第八周，给培养基中补充1ng/ml的IL-4和10微克/ml的人类IgE。在9-10周，收集培养基，通过磁珠排除CD15、CD14、和CD11lb阳性细胞而除去残余的髓样细胞(MiltenyiBiotec，Inc.，Auburn，CA)。用FACS分析检验肥大细胞纯度(CD117+，FcepsilonRI+)为大于97％。通过Percoll密度梯度离心分离人类白血球层(buttycoat)得到原发的人单核细胞。STAT酪氨酸磷酸化测定如下。通常，在DMEM/2％FCS中使细胞受饿12小时，然后旋转和再悬浮于2.5×106细胞/ml。在37℃，用各个细胞因子以饱和浓度(100ng/ml)刺激细胞15分钟，然后在冰上冷冻5分钟，旋转和再悬浮于溶胞的缓冲液中(2xPBS，添加2mMEDTA、0.875％Brij97(Sigma，St.Louis，MO)、0.125％NP40(Sigma)、1mM钒酸钠、1mM氟化钠、完全的蛋白酶抑制剂合剂(RocheAppliedScience，Indianapolis，IN)和3mMPefabloc(RocheAppliedScience)。离心溶胞产物，用SDS-PAGE分析上清液，然后对上述描述的抗体进行蛋白质斑迹法分析。再用IL-27刺激之前，用各个抗体培养NKL细胞20分钟。逆转录病毒感染如下。如所公开的方式用编码各个诱导的受体的逆转录病毒重构物对Ba/F3和NIH3T3细胞进行感染(Kitamura(1998)Int.J.Hemato.67351-359)。简言之，通过标准的PCR技术，使编码WSX-1的成熟部分和gpl30的全部编码框的DNA从cDNA库中扩增(Clontech，MountainView，CA)。gpl30扩增子克隆进入逆转录病毒载体pMX，WSX-1扩增子克隆CD8引导肽序列的3-引子和flag-tag序列克隆入载体pMX。用这些重构的转染效率为大于80％。对原发CD4+T细胞的增殖测定如下。得到FACS分选的CD3+CD45RA细胞，用饱和量的IL-27进行增殖试验，如所述的(Pflanz等，supra)。将抗体滴入测定中。使用Sybrgreenprotocol分析cDNA库的mRNA表达(Halfon等(1998)J.Biol.Chem.27316400-16408；Bolin等(1997)J.Neurosci.175493-5502)。使用RNAeasy试剂盒由Ba/F3或NIH3T3细胞制备mRNA(Qiagen，Valencia，CA)。使用下述的正向和反向PCR引发剂。用于人gpl30的引发剂得自GenBankE06613的基质2174-2194(正向)和基质2276-2295(反向)。小鼠gpl30的引发剂来自GenBankX62646的基质1943-1965(正向)和2065-2085(反向)。用于小鼠WSX-1/TCCR的引发剂来自GenBankNM-016671的基质1054-1074(正向)和1101-1121(反向)。用于人类WSX/-/TCCR的引发剂来自GenBankBC028003的基质1665-1684(正向引发剂)和基质1726-1746(反向引发剂)。本文引用的所有引用文献以其与每个出版物、专利申请或专利所特定和独立地指出包括所有附图和图形引入作为参考的同样的范围引入本文作为参考。对本领域技术人员来显而易见的是可做出本发明的多种修改和改变以适应具体条件、材料、物质的组合物、方法、方法步骤或步骤以保护本发明的目的、精神和范围。在不背离本发明的精神和范围内，所有这修改都意味着包括在其附加的权利要求的范围内。本文描述的具体的实施方案仅仅依靠具体实施例提供，而本发明由附加的权利要求的范围限定，连同这些权利要求授权的等同物的全部范围；本发明也并不受限于已经由本文中的实施例列出的具体的实施方案。权利要求1.调节免疫病变或病症的方法，包括给药有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激动剂或拮抗剂，其中所述病变或病症包含a)皮肤的炎性病症；b)关节炎；c)克隆(氏)病；d)气道高反应性或炎症；e)动脉粥样硬化；或f)非EB病毒引起的癌症或肿瘤。2.权利要求1的方法，其中拮抗剂抑制或阻止IL-27结合到异二聚体受体上，所述受体包括WSX-1/TCCR和gpl30的结合物。3.权利要求1的方法，其中皮肤的炎性病症包含a)银屑病；或b)特应性皮炎。4.权利要求1的方法，其中关节炎包含a)类风湿性关节炎；b)骨关节炎；或c)银屑病关节炎。5.权利要求1的方法，其中气道高反应性或炎性病变包含a)哮喘；b)变态反应；或c)慢性阻塞性肺疾患(COPD)。6.权利要求1的方法，其中癌症或肿瘤包含a)乳腺癌；b)结肠癌；或c)黑素瘤。7.权利要求1的方法，其中激动剂抑制或改善包括癌症或肿瘤的病变。8.权利要求6的方法，其中癌症或肿瘤表达了与正常对照下述组织相比可见的增加量的a)p28；b)EBI3；或c)或WSX-1/TCCR。9.权利要求1的方法，其中拮抗剂改善了a)皮肤的炎性病症；b)关节炎；c)克隆(氏)病；d)气道高反应性或气道炎症；或e)动脉粥样硬化。10.权利要求1的方法，其中激动剂包含a)IL-27；b)IL-27hyperkine；c)p28；d)EBI3；或e)核苷酸。11.权利要求11的方法，其中核苷酸编码a)IL-27hyperkine；b)p28；c)EBI3；d)第一p28多肽链和第二EBI3多肽链；e)WSX-1/TCCR；或f)WSX/l/TCCR和gpl30。12.权利要求1的方法，其中拮抗剂包含来自抗体的结合组合物，其特别定地结合a)IL-27；b)p28；c)EBI3；d)WSX-1/TCCR；或e)gpl30和WSX-1/TCCR的结合物。13.权利要求12的方法，其中来自抗体的结合组合物包含a)多克隆抗体；b)单克隆抗体；c)人源化抗体，或其片段；d)Fab、Fv或F(ab′)2片段；e)抗体肽模拟物；或f)可见指示物。14.权利要求1的方法，其中拮抗剂包含a)衍生自WSX-1/TCCR的可溶性受体；b)小分子；或c)核苷酸。15.权利要求14的方法，其中核苷酸特定地与编码如下物质的多核苷酸杂交a)p28；b)EBI3；或c)WSX-1/TCCR。16.权利要求15的方法，其中核苷酸包含a)反义核苷酸；或b)小干扰RNA(siRNA)。17.权利要求1的方法，其中给药激动剂增加了下述物质的表达a)RANKL；b)TNFα；c)TEASRL；d)IL-1α或β；e)OX40；或f)APRIL。18.权利要求1的方法，其中给药拮抗剂降低了下述物质的表达a)RANKL；b)TNFα；c)TEASRL；d)IL-1α或β；e)OX40；或f)APRIL。19.诊断权利要求1的免疫病变或病症的方法，包含使结合组合物与生物学样品接触，其中结合组合物特定地结合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的结合物；或c)编码p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸；和检测或确定结合组合物与生物学样品的特定结合。20.诊断权利要求1的免疫病症或病变的药盒，包含隔室和特定结合到下述物质的结合组合物a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的结合物；或c)编码p28，EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸。全文摘要提供调节细胞因子活性的方法，例如用于治疗免疫病变和炎症疾病的目的。也提供给药IL－27和IL－27受体激动剂或拮抗剂的方法。文档编号C07K16/24GK1921886SQ200580005143公开日2007年2月28日申请日期2005年2月15日优先权日2004年2月17日发明者R·A·凯斯特林,T·K·麦克拉那汉,S·普夫兰茨申请人:先灵公司