丙型肝炎病毒抑制剂的制造方法与工艺

丙型肝炎病毒抑制剂本申请大体上涉及抗病毒化合物且更具体地涉及可抑制丙型肝炎病毒(HCV)所编码的NS5A蛋白的功能的化合物、包含上述化合物的组合物及抑制NS5A蛋白的功能的方法。HCV是主要的人类病原体，其在世界范围内感染约1.7亿人—约为1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些感染有HCV的个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，其包括肝硬化和肝细胞癌。目前护理HCV的标准使用PEG化的干扰素与利巴韦林的组合，其在实现持续的病毒响应不具有最优的成功率并引起多种副作用。因此，就开发用于设法解决这种尚未满足的医学需要的有效疗法而言，存在明显和长期以来的需要。HCV是正链RNA病毒。基于对所推断的氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛类似性，已将HCV归类为黄病毒科(Flaviviridaefamily)中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体，其所含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的开放读码框而编码所有已知的病毒专属性蛋白。由于缺乏校对能力的所编码的依赖于RNA的RNA聚合酶的高错误率，在整个HCV基因组的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已表征了至少6种主要的基因型且已描述了多于50种的在世界范围内分布的亚型。HCV遗传异质性的临床重要性已经证明单一疗法治疗过程中发生突变的倾向，因此需要使用其它治疗选择。基因型对发病和治疗的可能的调节效应仍是难以确定的。单链HCVRNA基因组的长度为约9500个核苷酸且具有单一的开放读码框(ORF)，其编码由约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，该多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶所裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV而言，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。第一种病毒蛋白酶被认为是金属蛋白酶且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-端区域内的丝氨酸蛋白酶(在本申请中也称为NS3蛋白酶)且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎发挥多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子且可能有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3-NS4A复合物的形成对于适当的蛋白酶活性是必要的，其导致裂解事件的蛋白水解效率增加。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B(在本申请中也称为HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，其在复制酶复合物中参与HCV与其它HCV蛋白(其包括NS5A)的复制。需要用于治疗感染HCV患者的化合物，其选择性地抑制HCV病毒复制。具体地，需要有效抑制NS5A蛋白功能的化合物。HCVNS5A蛋白参见例如下列参考文献：S.L.Tan,etal.,Virology,284:1-12(2001)；K.-J.Park,etal.,J.Biol.Chem.,30711-30718(2003)；T.L.Tellinghuisen,etal.,Nature,435,374(2005)；R.A.Love,etal.,J.Virol,83,4395(2009)；N.Appel,etal.,J.Biol.Chem.,281,9833(2006)；L.Huang,J.Biol.Chem.,280,36417(2005)；C.Rice,etal.,WO2006093867。在第一个方面，本申请提供式(I)化合物或其药用盐：其中L选自键、A和A’独立选自条件是A和A’中的至少一个不是其中表示与X和X’的连接点且表示与L的连接点；且其中Z为任选含有一个、两个或三个氮原子的六元芳族环；R2选自氢、烷基和卤素；且R3选自氢、烷氧基、烷基、氰基、卤素和卤代烷氧基；X和X’独立选自其中每个基团被画成碳原子与A或A’连接且氮原子与羰基连接且其中n为0、1或2；s为0、1、2、3或4；Y选自Si(R4)2、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4和C(R4)2；条件是当n为0时，Y选自CH2、CHR4和C(R4)2；且每个R4独立选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、-NRaRb和烷硫基，其中所述烷基可任选与环上的另一个碳原子形成稠合的三元至六元环或桥接的四元或五元环；或可任选与它所连接的碳形成螺环的三元至六元环，其中每个所形成的环系统任选含有一个或两个氧原子，且其中每个所形成的环系统任选取代有一个或两个独立选自烷基和卤素的基团；条件是当Y为NR4时，R4不是卤素、羟基或-NRaRb；R为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、经环烷基取代的杂环基、乙烯基环烷基、杂环基乙烯基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；R’为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、经环烷基取代的杂环基、乙烯基环烷基、杂环基乙烯基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；Ra和Rb独立选自氢和烷基；Rc和Rd独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR”和-C(NCN)NRxRy，其中R”选自烷基和未取代的苯基，且其中所述芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分进一步任选取代有一个-NReRf基团；且其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基及所述杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基；Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基；且Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’和Ry’独立选自氢和烷基。在第一个方面的第一个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为在第一个方面的第二个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L选自在第一个方面的第三个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键。在第一个方面的第四个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键且A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环。在第一个方面的第五个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键；A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环；且X和X’各自为其中n、s和Y如就式(I)所述。在第一个方面的第六个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键；A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环；且X和X’各自为其中n为1或2；s为1、2或3；且Y选自O、CH2、CHR4和C(R4)2。在第一个方面的第七个实施方案中，本申请提供式(I)化合物或其药用盐，其中L为键；A和A’各自为其中Z为任选含有一个氮原子的六元芳族环；且X和X’各自为其中n为1；s为1、2或3；且Y选自CH2、CHR4和C(R4)2。在第一个方面的第八个实施方案中，R和R’各自为(NRcRd)烷基，其中每个(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、经环烷基取代的杂环基或螺环杂环基，其中所述二环烷基和二环杂环基任选取代有一个或两个卤素基团。在第一个方面的第九个实施方案中，每个(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有螺环杂环基，其中螺环杂环基为经由一个碳原子与三元饱和碳环邻接的含有一个氧原子的六元饱和环。在第二个方面，本申请提供式(II)化合物或其药用盐：其中L选自键、A和A’独立选自其中每个基团被画成咪唑环与X连接且六元环与L连接，且其中Z为任选含有一个、两个或三个氮原子的六元芳族环；R2选自氢、烷基和卤素；且R3选自氢、烷氧基、烷基、氰基、卤素和卤代烷氧基；X和X’独立选自其中每个基团被画成碳原子与A或A’连接且氮原子与羰基连接且其中n为0、1或2；s为0、1、2、3或4；Y选自NH、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4和C(R4)2；条件是当n为0时，Y选自CH2、CHR4和C(R4)2；且每个R4独立选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRaRb，其中所述烷基可任选与环上的另一个碳原子形成稠合的三元至六元环或桥接的四元或五元环；或可任选与它所连接的碳形成螺环的三元至六元环，其中所形成的环系统任选取代有一个或两个独立选自烷基和卤素的基团；条件是当Y为NR4时，R4不是卤素、羟基或-NRaRb；R为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；R’为(NRcRd)烷基，其中所述(NRcRd)烷基中的烷基部分取代有二环烷基、稠合的二环杂环基、氧代环烷基或螺环杂环基，其中所述二环烷基、二环杂环基、氧代环烷基和螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基；Ra和Rb独立选自氢和烷基；Rc和Rd独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR”和-C(NCN)NRxRy，其中R”选自烷基和未取代的苯基，且其中所述芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分进一步任选取代有一个-NReRf基团；且其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基及所述杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基；Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基；且Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’和Ry’独立选自氢和烷基。在第三个方面，本申请提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐和药用载体。在第三个方面的第一个实施方案中，所述组合物还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第三个方面的第二个实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第三个方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、聚乙二醇化干扰素λ、同感干扰素、干扰素α2A和成淋巴细胞样干扰素τ。在第三个方面的第四个实施方案中，本申请提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐、药用载体和至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷-5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。在第三个方面的第五个实施方案中，本申请提供一种组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐、药用载体和至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白和IMPDH。在第四个方面，本申请提供在患者中治疗HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐。在第四个方面的第一个实施方案中，所述方法还包括在给药式(I)化合物或其药用盐前、在给药式(I)化合物或其药用盐后或与给药式(I)化合物或其药用盐同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第四个方面的第二个实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第四个方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A和成淋巴细胞样干扰素τ。在第四个方面的第四个实施方案中，本申请提供在患者中治疗HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐且在给药式(I)化合物或其药用盐前、在给药式(I)化合物或其药用盐后或与给药式(I)化合物或其药用盐同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、肌苷-5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。在第四个方面的第五个实施方案中，本申请提供在患者中治疗HCV感染的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐且在给药式(I)化合物或其药用盐前、在给药式(I)化合物或其药用盐后或与给药式(I)化合物或其药用盐同时给药至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种可有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCVNS5A蛋白和IMPDH。本申请其它方面可包括本申请所述实施方案的适合组合。其它方面和实施方案可参见本申请提供的描述。在此对本申请的描述应当被视为符合化学成键规则和原理。在一些情况下，可能需要移除氢原子以在任何给定位置容纳取代基。应当理解的是，本申请所涵盖的化合物为就用作药物而言具有适当稳定性的那些化合物。预期分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义与其在该分子的其它位置的定义无关。例如，当s为2时，则两个R4基团可相同或不同。将本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献以引用的方式全部并入本申请中。在不一致的情况下，以本发明(包括定义)为准。如本说明书中所用，以下术语具有如下指定的含义：除非上下文另有明确说明，本申请使用的单数形式“不定冠词(a)”、“不定冠词(an)”和“定冠词(the)”包括复数指代。除非另有说明，否则本申请所有芳基、环烷基和杂环基均可如其各自定义中的每种情况中所述而被取代。例如，芳基烷基中的芳基部分可如术语“芳基”的定义中所述而被取代。本申请使用的术语“烯基”是指具有二个至六个碳原子、含有至少一个碳-碳双键的直链或支链基团。本申请使用的术语“烯基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烯基。本申请使用的术语“烯基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烯基氧基。本申请使用的术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基。本申请使用的术语“烷氧基烷基”是指取代有一个、两个或三个烷氧基的烷基。本申请使用的术语“烷氧基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基烷基。本申请使用的术语“烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基。本申请使用的术语“烷基”是指衍生自含有一个至六个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。在本申请化合物中，当R4为烷基时，所述烷基可任选与相邻碳原子形成三元至六元稠合环，得到如下所示的结构：其中m选自1、2、3和4，其中z为0、1或2，且其中每个Rs为独立选自烷基、卤素和卤代烷基；或其中所述烷基可任选与环上的另一个碳原子形成四元或五元桥接环，得到如下所示的结构：其中m选自0或1，其中z为0、1或2，且其中每个Rs为独立选自烷基、卤素和卤代烷基；或其中所述烷基可任选与其连接的碳原子形成三元至六元螺环，得到如下所示的结构：其中m选自1、2、3或4，其中z为0、1或2，且其中每个Rs为独立选自烷基、卤素和卤代烷基的Rs。本申请使用的术语“烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷基。本申请使用的术语“烷基羰基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基羰基。本申请使用的术语“烷基硫基”是指通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。本申请使用的术语“烷基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的烷基。本申请使用的术语“芳基”是指苯基或二环稠环系统(其中所述环中的一者或两者为苯基)。二环稠环系统由与四至六元芳族或非芳族碳环稠合的苯基组成。本申请芳基可通过基团中的任何可取代碳原子与母体分子部分连接。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本申请芳基任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二个芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基、氧代和-P(O)OR2，其中每个R独立选自氢和烷基；且其中所述芳基烷基和所述杂环基烷基中的烷基部分为未取代的，且其中所述第二个芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述杂环基及所述杂环基烷基与所述杂环基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。本申请使用的术语“芳基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分连接的芳基。本申请使用的术语“芳基烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷氧基。本申请使用的术语“芳基烷基”是指取代有一个、两个或三个芳基的烷基。所述芳基烷基中的烷基部分进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的其它基团：烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和-NRcRd，其中所述杂环基进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、-NRxRy和氧代。本申请使用的术语“芳基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷基。本申请使用的术语“芳基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基。本申请使用的术语“芳基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的芳基。本申请使用的术语“芳基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基氧基。本申请使用的术语“芳基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的芳基。本申请使用的术语“二环烷基”是指具有五个至十二个碳原子和零个杂原子的饱和的稠合、桥接或螺环二环烃环系统。本申请二环烷基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基。如本文中所使用的术语“羰基”是指-C(O)-。如本文中所使用的术语“羧基”是指-CO2H。如本文中所使用的术语“氰基”是指-CN。本申请使用的术语“环烷基”是指具有三个至七个碳原子和零个杂原子的饱和单环烃环系统。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。本申请环烷基任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和-NRxRy，其中所述芳基和所述杂环基进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和硝基。本申请使用的术语“(环烷基)烷基”是指取代有一个、两个或三个环烷基的烷基。本申请使用的术语“环烷基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的环烷基。本申请使用的术语“环烷基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的环烷基氧基。本申请使用的术语“环烷基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的环烷基。本申请使用的术语“环烷基取代的杂环基”是指取代有一个或两个环烷基的饱和单环杂环基。本申请使用的术语“乙烯基环烷基”是指：其中m为1、2或3。本申请使用的术语“甲酰基”是指-CHO。本申请使用的术语“稠合二环杂环基”是指含有一个、两个或三个独立选自氮、氧和硫的杂原子，与三元至五元饱和碳环稠合的四元、五元、六元或七元饱和或不饱和环。本申请杂环基可通过基团中的碳原子或氮原子与母体分子部分连接。本申请二环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、螺环基、卤素和卤代烷基。如本文中所使用的术语“卤素”是指Cl、Br、F或I。本申请使用的术语“卤代烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的卤代烷基。本申请使用的术语“卤代烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的卤代烷氧基。本申请使用的术语“卤代烷基”是指取代有一个、两个、三个或四个卤素原子的烷基。本申请使用的术语“杂环基”是指含有一个、两个、三个或四个独立选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元环。四元环具有零个双键，五元环具有零个至两个双键，且六元和七元环具有零个至三个双键。术语“杂环基”还包括如下二环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或四至六元芳族或非芳族碳环稠合；及桥接二环基团，诸如7-氮杂二环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂二环[2.2.2]辛-2-基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基和2-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基。本申请杂环基可通过基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分连接。杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、氧杂环丁基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基和硫吗啉基。本申请杂环基任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、第二个杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基和氧代，其中所述芳基烷基和所述杂环基烷基中的烷基部分为未取代的，且其中所述芳基、所述芳基烷基中的芳基部分、所述芳基羰基中的芳基部分、所述第二个杂环基和所述杂环基烷基与所述杂环基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。本申请使用的术语“杂环基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分连接的杂环基。本申请使用的术语“杂环基烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基烷氧基。本申请使用的术语“杂环基烷基”是指取代有一个、两个或三个杂环基的烷基。所述杂环基烷基中的烷基部分进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的其它基团：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRcRd，其中所述芳基进一步任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRxRy。本申请使用的术语“杂环基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基烷基。本申请使用的术语“杂环基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基。本申请使用的术语“杂环基乙烯基”是指：其中A为含零个其它双键的五元至七元单环杂环，且其中和表示与-NRcRd基团和母体分子部分的连接点。本申请使用的术语“杂环基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的杂环基。本申请使用的术语“杂环基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基氧基。本申请使用的术语“羟基”是指-OH。本申请使用的术语“羟基烷基”是指取代有一个、两个或三个羟基的烷基。本申请使用的术语“羟基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的羟基烷基。本申请使用的术语“硝基”是指-NO2。本申请使用的术语“-NRcRd”是指通过氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rc和Rd。Rc和Rd独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR’和-C(NCN)NRxRy，其中R’选自烷基和未取代的苯基，且其中所述芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分进一步任选取代有一个-NReRf基团；且其中所述芳基、所述芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基中的芳基部分、所述杂环基和所述杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分进一步任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。本申请使用的术语“(NRcRd)烯基”是指其中Rc及Rd如本申请中所定义且各Rq独立地为氢或C1-3烷基。本申请使用的术语“(NRcRd)烷基”是指取代有一个、两个或三个-NRcRd基团的烷基。所述(NRcRd)烷基中的烷基部分进一步任选取代有一个或两个选自以下的其它基团：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、环烷基、杂环基、杂环基羰基、羟基和(NReRf)羰基；其中所述杂环基进一步任选取代有一个、两个、三个、四个或五个独立选自以下的取代基：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。本申请使用的术语“-NReRf”是指通过氮原子与母体分子部分连接的两个基团Re和Rf。Re和Rf独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基。本申请使用的术语“(NReRf)烷基”是指取代有一个、两个或三个-NReRf基团的烷基。本申请使用的术语“(NReRf)烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的(NReRf)烷基。本申请使用的术语“(NReRf)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NReRf基团。本申请使用的术语“(NReRf)磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的-NReRf基团。本申请使用的术语“-NRxRy”是指通过氮原子与母体分子部分连接的两个基团Rx和Ry。Rx和Ry独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx’Ry’)羰基，其中Rx’及Ry’独立选自氢和烷基。本申请使用的术语“(NRxRy)烷基”是指取代有一个、两个或三个-NRxRy基团的烷基。本申请使用的术语“(NRxRy)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NRxRy基团。本申请使用的术语“(NRx’Ry’)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NRx’Ry’基团。本申请使用的术语“氧代”是指＝O。本申请使用的术语“氧代环烷基”是指取代有氧代的环烷基。本申请使用的术语“螺环杂环基”是指分别经由一个或两个单个碳原子与一个或两个任选含有一个氧原子的三元至五元饱和环邻接的含有一个、两个或三个独立选自氮、氧或硫的杂原子的四元、五元、六元或七元饱和或不饱和环。本申请杂环基可通过基团中的任意碳原子或氮原子与母体分子部分连接。本申请螺环杂环基任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：烷基、卤素和卤代烷基。本申请使用的术语“螺环基”是指通过单个碳原子与母体分子部分邻接的三元、四元或五元饱和环。本申请使用的术语“磺酰基”是指-SO2-。本申请使用的术语“烷硫基”表示通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。在本申请化合物中存在不对称中心。取决于手性碳原子周围的取代基的构型，这些中心以符号“R”或“S”表示。应当理解的是，本申请涵盖具有抑制NS5A的能力的所有立体化学异构形式或其混合物。化合物的单独立体异构体可由含有手性中心的市售原料以合成方式制备，或通过制备对映异构产物的混合物继而分离(诸如转化为非对映异构体的混合物继而分离或重结晶、色谱技术或直接在手性色谱柱上分离对映异构体)来制备。特定立体化学的起始化合物可为市售的或可通过本领域已知的技术来制备且解析。本申请某些化合物还可按不同的稳定的可分离的构象形式存在。由于围绕不对称单键的受限旋转(例如因为位阻或环张力)而导致的扭转不对称性可使不同的构象异构体得以分离。本申请包括这些化合物的每种构象异构体及其混合物。本申请化合物也可按互变异构体存在；因此本申请也包括所有互变异构体形式。术语“本申请化合物”及等同表达方式意在包括式(I)化合物及其药用对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，在上下文允许的情况下，当提及中间体时，其意在包括它们的盐。本申请意欲包括存在于本申请化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。通过一般举例而非限制的方式，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。本申请同位素标记的化合物可如下制备：一般通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请描述类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替其它情况下使用的未标记的试剂。上述化合物具有多种潜在用途，例如在生物活性测定中作为标准物和试剂。在稳定的同位素的情况下，上述化合物可具有有利地改变生物学、药理学或药物动力学性质的潜能。本申请化合物可按药用盐的形式存在。本申请使用的术语“药用盐”表示本申请化合物的盐或两性离子形式，其是水溶性或水可分散性的或是油溶性或油可分散性的且在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症(这与合理的益处/风险比是相称的)且就其所预期的用途而言是有效的。盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备或可通过使合适的碱性官能团与合适的酸反应来单独制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、枸橼酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、萘-2-磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成药用加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和枸橼酸。碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间如下制备：使羧酸基团与合适的碱例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐反应或与氨或有机伯、仲或叔胺反应。药用盐中的阳离子包括锂离子、钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铝离子及无毒的胺阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺和N,N’-二苄基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。当治疗有效量的式(I)化合物及其药用盐可按化学原料的形式来给药而用于治疗时，活性成分可按药物组合物的形式来提供。因此，本申请还提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)化合物或其药用盐及一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物及其药用盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂就与制剂中的其它成分相容而言必须是可接受的且对其接受者必须是没有害处的。本申请另一个方面还提供了制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。术语“治疗有效量”是指各种活性组分的总量，所述总量足以显示出有意义的患者益处例如病毒载量的持续减少。所述术语当用于单独给药的一种活性成分时是指该成分的单独量。所述术语当用于组合时是指各种活性成分引起治疗效果的组合量而不论是组合给药、先后给药或同时给药。式(I)化合物及其药用盐如上所述。一种或多种载体、一种或多种稀释剂或一种或多种赋形剂就与制剂中的其它成分相容而言必须是可接受的且对其接受者必须是没有害处的。本申请另一个方面还提供了制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药用盐与一种或多种药用载体、稀释剂或赋形剂混合。本申请使用的术语“药用盐”表示这样的化合物、物质、组合物和/或剂型：其在合理的医药判断范围内适用于与患者的组织接触而不引起过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症(这与合理的益处/风险比是相称的)且就其所预期的用途而言是有效的。药物制剂可按单位剂量形式来提供，其在每个单位剂量中含有预定量的活性成分。本申请化合物的以下剂量水平即约0.01至约150毫克/千克(“mg/kg”)体重/天且优选约0.05至约100mg/kg体重/天在对由HCV介导的疾病进行预防和治疗的单一疗法中是典型的。通常，本申请药物组合物将每天给药约1次至约5次或可按连续输注的形式来给药。上述给药可用作慢性或急性疗法。可与载体物质组合以制备单一剂型的活性成分的量将随以下因素而变化：所治疗的病症、所述病症的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗的持续时间及患者的年龄、性别、体重和状态。优选的单位剂量制剂是以下那些单位剂量制剂，其含有上述每天剂量或亚剂量或其合适分数的活性成分。通常，治疗始于基本小于化合物最佳剂量的小剂量。然后剂量以小的增幅增加直到实现对病情的最佳效果。通常，化合物按以下浓度水平来给药是最期望的，所述浓度水平通常将提供有效的抗病毒结果而不引起任何有害或有毒的副作用。当本申请组合物包含本申请化合物与一种或多种其它治疗药物和/或预防药物的组合时，所述化合物和所述其它药物通常都可按以下剂量水平存在，所述剂量水平为在单一疗法给药方案中通常给药的剂量的约10至150％，且更优选为约10至80％。可对药物制剂进行调整以通过任何合适的途径来给药，所述途径为例如口服(包括口腔或舌下)途径、直肠途径、经鼻途径、局部(包括口腔、舌下或透皮)途径、阴道途径或胃肠外(包括皮下注射或输注、皮内注射或输注、肌内注射或输注、关节内注射或输注、滑膜内注射或输注、胸骨内注射或输注、鞘内注射或输注、病灶内注射或输注、静脉内注射或输注或皮内注射或输注)途径。上述制剂可通过药学领域已知的任何方法例如通过将活性成分与一种或多种载体或一种或多种赋形剂组合来制备。优选口服给药或经注射给药。适于口服给药的药物制剂可按以下形式来提供：离散的单位形式例如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫剂或搅打剂；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂。例如，就以片剂或胶囊剂的形式进行口服给药而言，可将活性药物组分与口服无毒的药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等组合。粉末剂如下制备：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体例如可食用的碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。胶囊剂如下制备：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶壳中。可将助流剂和润滑剂例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。还可加入崩解剂或增溶剂例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。另外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、玉米增甜剂、天然胶和合成胶例如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂例如如下配制：制备粉末混合物，制粒或预压，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备：将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质及任选的粘合剂(例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶或聚乙烯基吡咯烷酮)、溶解延迟剂(例如石蜡)、吸收促进剂(例如季胺盐)和/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可如下制粒：用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液润湿且挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片机来处理且结果是不完全成形的预压片破裂成颗粒。颗粒可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑以防止与片剂成形模具粘附。然后将经润滑的混合物压制成片剂。也可将本申请化合物与可自由流动的惰性载体组合且在不经历制粒或预压步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明或不透明的由以下包衣层构成的保护性包衣：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。口服流体例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶解在经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的媒介物来制备。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂)等。当合适时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。制剂也可例如如下制备以延长或维持释放：将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中。式(I)化合物及其药用盐也可按脂质体递送系统的形式来给药，所述脂质体递送系统为例如小单层脂囊、大单层脂囊和多层脂囊。脂质体可由各种磷脂例如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱来形成。式(I)化合物及其药用盐也可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独载体来递送。化合物也可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。上述聚合物可包括聚乙烯基吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或取代有棕榈酰基的聚氧化乙烯聚赖氨酸。另外，化合物可与可用于实现药物受控释放的一类生物可降解的聚合物偶联，所述聚合物为例如聚乳酸、聚ξ-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。适于透皮给药的药物制剂可按离散的贴剂形式来提供，其意在与接受者的表皮保持紧密接触以保持延长的时段。例如，如在PharmaceuticalResearch1986,3(6),318中所一般描述的，活性成分可从贴剂中通过离子电渗法来递送。可将适于局部给药的药物制剂配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。就治疗眼部或其它外部组织例如口和皮肤而言，制剂优选以局部用软膏剂或乳膏剂的形式来施用。当配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡或水可混溶性软膏剂基质一起使用。可选择地，可将活性成分与水包油型乳膏剂基质或油包水型基质一起配制成乳膏剂。适于局部给药至眼部的药物制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶解或混悬在合适的载体尤其是水性溶剂中。适于在口中局部给药的药物制剂包括锭剂、含锭剂和口腔洗剂。适于直肠给药的药物制剂可按栓剂或灌肠剂的形式来提供。适于鼻部给药的其中载体为固体的药物制剂包括一系列粉末，其以吸入方式来给药即从接近鼻部的装有粉末的容器中经由鼻道而快速吸入，所述粉末的粒径为例如20-500微米。适于以鼻喷雾剂或滴鼻剂的形式进行给药的其中载体为液体的制剂包括活性成分的水溶液或油溶液。适于吸入给药的药物制剂包括由微细颗粒构成的粉尘或气雾，其可通过各种类型的计量剂量的加压的气雾器、喷雾器或吸入器来产生。适于阴道给药的药物制剂可按阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式来提供。适于胃肠外给药的药物制剂包括：水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与所预期的接受者的血液等渗的溶质；及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。所述制剂可按单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶的形式来提供且可在冷冻干燥的(冻干的)状态下贮存，其仅需要在使用前即时加入无菌液体载体例如注射用水。现用现配的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉末剂、颗粒剂和片剂来制备。应当理解的是，除以上具体提及的成分外，在考虑到所涉及的制剂类型的情况下，制剂还可包含本领域常规的其它物质，例如适于口服给药的那些制剂可包含矫味剂。术语“患者”包括人类及其它哺乳动物。术语“治疗”是指：(i)在可能易患疾病、障碍和/或病症但尚未诊断患有所述疾病、障碍和/或病症的患者中预防所述疾病、障碍和/或病症的发生；(ii)抑制所述疾病、障碍和/或病症即阻止其发展；及(iii)缓解所述疾病、障碍和/或病症即引起所述疾病、障碍和/或病症的消退。本申请化合物还可与环孢菌素给药，例如环孢菌素A。环孢菌素A在临床试验中已显示对HCV具有活性(Hepatology2003,38,1282；Biochem.Biophys.Res.Commun.2004,313,42；J.Gastroenterol.2003,38,567)。下表1列出了可与本申请化合物一起给药的化合物的一些示例性实例。本申请化合物可在联合疗法中与其它具有抗HCV活性的化合物同时或分开给药或通过将各种化合物组合成组合物来给药。表1本申请化合物还可用作实验室试剂。化合物可用于提供以下研究工具，所述研究工具用于设计病毒复制测定、验证动物测定系统和进行结构生物学研究以进一步提高对HCV疾病机理的认识。另外，本申请化合物可用于建立或确定其它抗病毒化合物的结合位点(例如通过竞争性抑制)。本申请化合物还可用于处理或防止物质的病毒污染且因此降低了与这些物质(例如血液、组织、手术器械和手术外衣、实验室仪器和实验室外衣及采血或输血装置和物质)发生接触的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险。当式(I)化合物通过合成性过程或通过代谢性过程(包括发生在人体或动物体内(在体内)的那些代谢性过程或发生在体外的过程)来制备时，本申请意在包括这样的式(I)化合物。本申请使用的缩写(尤其包括在以下示例性方案和实施例中使用的缩写)是本领域技术人员公知的。所使用的一些缩写如下：ca.表示约；ACN或MECN表示乙腈；TFA表示三氟乙酸；min或mins表示分钟；EtOAc或EtOAc或EA表示乙酸乙酯；DCM表示二氯甲烷；Hex表示己烷；THF表示四氢呋喃；DMSO表示二甲基亚砜；Et3N或TEA表示三乙胺；TBS-Cl表示叔丁基二甲基氯甲硅烷；Et2O表示乙醚；MeOH表示甲醇；EtOH表示乙醇；rt或RT表示室温或保留时间(上下文决定)；Rt表示保留时间；Ts表示对甲苯磺酰基；Ph表示苯基；LiHMDS表示二(三甲基甲硅烷基)氨基锂；Me表示甲基；iPr2EtN、DIEA或DiPEA表示二异丙基乙基胺；h或hr或hrs表示小时；ON表示过夜；TBS表示叔丁基二甲基甲硅烷基；DMF表示N,N-二甲基甲酰胺；pTsOH表示对甲苯磺酸；AcOH表示乙酸；HATU表示O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；BOC表示叔丁氧基羰基；DME表示1,2-二甲氧基乙烷；DMAP表示N,N-二甲基氨基吡啶；HOBT表示1-羟基苯并三唑；及EDC表示1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。本申请现将连同某些实施方案来描述，而这些实施方案不是意在限制本申请范围。相反地，本申请涵盖可包括在权利要求书范围内的所有可选形式、变化形式和等价形式。因此，包括具体实施方案在内的以下实施例将说明本申请一种具体实施，其中应当理解的是，所述实施例意在说明某些实施方案且被呈现以提供据信是关于其操作和概念性方面的最有用和容易理解的描述。原料是从商业来源得到的或通过本领域普通技术人员已知的公认文献方法制备的。条件1起始％B＝0结束％B＝100梯度时间＝2min停止时间＝3min流速＝1mL/min波长＝220nm溶剂A＝10％ACN/90％H2O/0.1％TFA溶剂B＝90％ACN/10％H2O/0.1％TFA柱＝Phenomenex-LunaC18,30×2,3μ条件2起始％B＝0结束％B＝100梯度时间＝2min停止时间＝3min流速＝4mL/min波长＝220nm溶剂A＝0.1％TFA/10％甲醇/90％水溶剂B＝0.1％TFA/90％甲醇/10％水柱＝Phenomenex-Luna3.0×50mmS10条件3起始％B＝0结束％B＝100梯度时间＝4min停止时间＝5min流速＝0.8mL/min波长＝220nm溶剂A＝10％ACN/90％H2O/0.1％TFA溶剂B＝90％ACN/10％H2O/0.1％TFA柱＝Phenomenex-LunaC18,50×2,3μ条件4起始％B＝2结束％B＝98梯度时间＝1min停止时间＝1.5min流速＝0.8mL/min波长＝220nm溶剂A＝100％H2O/0.05％TFA溶剂B＝100％ACN/0.05％TFA柱＝WatersAcquitySDS条件5起始％B＝0结束％B＝100梯度时间＝2min停止时间＝3min流速＝1mL/min波长＝220nm溶剂A＝0.1％TFA/10％甲醇/90％水溶剂B＝0.1％TFA/90％甲醇/10％水柱＝Phenomenex-Luna2.0×30mm3μm条件6起始％B＝10结束％B＝100梯度时间＝30min停止时间＝33min流速＝1mL/min波长＝220nm溶剂A＝10mMamm.bicarb(pH＝9.5)/95％水/5％甲醇溶剂B＝10mMamm.bicarb(pH＝9.5)/5％水/95％甲醇柱＝XbridgePhenyl3.5μm,3.0×150mm条件7起始％B＝10结束％B＝100梯度时间＝15min停止时间＝18min流速＝1mL/min波长＝220nm溶剂A＝0.1％TFA/95％水/5％乙腈溶剂B＝0.1％TFA/5％水/95％乙腈柱＝XbridgeC183.5μm,3.0×150mm条件8起始％B＝0结束％B＝100梯度时间＝4min停止时间＝5min流速＝0.8mL/min波长＝220nm溶剂A＝10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA溶剂B＝90％MeOH/10％H2O/0.1％TFA柱＝Phenomenex-LunaC18,50×2,3μ柱温箱＝40℃条件9起始％B＝10结束％B＝50梯度时间＝20min停止时间＝25min流速＝1mL/min波长1＝220nm波长2＝254nm溶剂A＝5％ACN/95％H2O/0.1％TFA溶剂B＝95％ACN/5％H2O/0.1％TFA柱＝WatersSunfireC18,150×4.6,3.5μ(低pH)条件10UPLC起始％B＝2结束％B＝98梯度时间＝1.5min停止时间＝2min流速＝0.8mL/min波长＝220nm溶剂A＝100％H2O/0.05％TFA溶剂B＝100％ACN/0.05％TFA柱＝WatersAcquityUPLCBEHC182.1×50mm,1.7μmCap-1Cap-1步骤a历时5h通过注射泵将重氮基乙酸叔丁酯(1.832mL,13.22mmol)在50mLCH2Cl2中的溶液滴加到2,5-二氢呋喃(9.76mL,132mmol)和乙酸铑(II)二聚体(0.058g,0.132mmol)在40mLCH2Cl2中的混合物中。然后将所得混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂。将残余物通过色谱(硅胶,0％-15％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap-1步骤a(反式异构体)(720mg)和Cap-1步骤a(顺式异构体)(360mg)，其为澄清油状物。Cap-1步骤a(反式异构体):1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm3.88(2H,d,J＝8.55Hz),3.70(2H,d,J＝8.55Hz),2.03-2.07(2H,m),1.47(1H,t,J＝3.20Hz),1.41(9H,s)；Cap-1步骤a(顺式异构体):1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm4.06(2H,d,J＝8.53Hz),3.73(2H,d,J＝8.03Hz),1.81-1.86(2H,m),1.65-1.71(1H,m),1.43-1.47(9H,m)。Cap-1步骤b在-10℃历时1h向(Cap-1步骤a(反式异构体))(700mg,3.80mmol)在15mL乙醚中的溶液中滴加LiAlH4(7.60mL,7.60mmol)(1M在THF中)。将所得混合物在-10℃搅拌1h，然后在室温搅拌1h。然后将混合物冷却至-5℃。滴加10mL罗谢尔盐(酒石酸钾钠)水溶液以淬灭反应。将混合物在室温搅拌30min，然后用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-1步骤b(380mg)，其为浅黄色油状物。产物用于下一步而无需纯化。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm3.85(2H,d,J＝8.28Hz),3.68(2H,d,J＝8.53Hz),3.45-3.55(2H,m),1.50-1.56(2H,m),1.02-1.11(1H,m)。Cap-1步骤c在-78℃向DMSO(4.82mL,67.9mmol)在CH2Cl2(70mL)中的溶液中缓慢滴加草酰氯(3.14mL,35.8mmol)。将所得混合物在-78℃搅拌15min。加入Cap-1步骤b(3.10g,27.2mmol)在35mLCH2Cl2中的溶液且将混合物在-78℃搅拌1h。然后滴加Et3N(18.93mL,136mmol)。30min后，将冷却浴移开并将反应混合物用冷的20％K2HPO4水溶液(10mL)和水淬灭。将混合物在室温搅拌15min，然后用Et2O稀释。分离各层。将水层用Et2O(2×)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶,100％CH2Cl2)来纯化，得到Cap-1步骤c(2.71g)，其为浅黄色油状物。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm9.41(1H,d,J＝4.27Hz),3.96(2H,d,J＝8.85Hz),3.80(2H,d,J＝8.55Hz),2.27-2.33(2H,m),1.93(1H,m)。Cap-1步骤d在0℃向Cap-1步骤c(2.7g,24.08mmol)在50mL水中的混合物中加入亚硫酸氢钠(2.506g,24.08mmol)和KCN(1.631g,25.04mmol)，然后加入(R)-2-氨基-2-苯基乙醇(3.30g,24.08mmol)在18mLMeOH中的溶液。将所得混合物在室温搅拌2h，然后加热至回流过夜。将混合物冷却至室温。加入100mLEtOAc。混合15min后，分离各层。将水层用EtOAc(2×)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗非对映异构体混合物通过反相HPLC(柱:WaterSunfire30×150mm,乙腈/水/NH4OAc)来纯化，得到Cap-1步骤d的两种非对映异构体。未确定每种异构体的绝对立体化学。非对映异构体1(靠后的级份)(570mg)：LC(条件1)：RT＝0.97min；LC/MS：[M+H]+C15H19N2O2分析计算值259.14；实测值259.2。Cap-1步骤e在0℃向Cap-1步骤d(非对映异构体1)(570mg,2.207mmol)在20mLCH2Cl2和20mLMeOH中的溶液中加入四乙酸铅(1174mg,2.65mmol)。将所得橙色混合物在0℃搅拌10min。然后将水(20mL)加到混合物中并将混合物用硅藻土过滤。将滤液浓缩并用25mL6NHCl水溶液稀释。将所得混合物回流4h。将混合物过滤并用CH2Cl2洗涤。将水层浓缩，得到Cap-1步骤e(盐酸盐)。粗产物用于下一步而无需进一步纯化。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm3.87-3.91(2H,m),3.73(2H,dd,J＝8.70,2.90Hz),3.55(1H,d,J＝10.07Hz),2.02-2.07(1H,m),1.94-1.99(1H,m),1.03-1.10(1H,m)。Cap-1向上述粗Cap-1步骤e在1NNaOH水溶液(10mL)中的混合物中加入碳酸氢钠(371mg,4.42mmol)。然后滴加氯甲酸甲酯(0.342mL,4.42mmol)。将所得混合物在室温搅拌3h。将混合物用1NHCl水溶液中和，然后用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-1(100mg,两步收率21.1％)，其为浅黄色油状物。LC(条件1)：RT＝0.54min；LC/MS：[M+H]+C9H14NO5分析计算值216.09；实测值216.1；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm5.29(1H,宽单峰),3.53-4.02(8H,m),1.66-1.92(2H,m),1.08(1H,宽单峰)。Cap-2外消旋混合物Cap-2步骤a将环戊-3-烯醇(5g,59.4mmol)和Et3N(9.94mL,71.3mmol)在50mLCH2Cl2中的溶液在室温搅拌15min。然后滴加苯甲酰氯(8.28mL,71.3mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶,EtOAc/Hex0-10％)来纯化，得到Cap-2步骤a(9.25g)，其为澄清油状物。LC(条件1)：RT＝1.77min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.01-8.07(2H,m),7.55(1H,t,J＝7.40Hz),7.43(2H,t,J＝7.65Hz),5.79(2H,s),5.64(1H,tt,J＝6.93,2.60Hz),2.87(2H,dd,J＝16.56,6.78Hz),2.52-2.63(2H,m)。Cap-2步骤b向具有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中加入纯态氟化钠(5.02mg,0.120mmol)和Cap-2步骤a(2.25g,11.95mmol)。将烧瓶加热至100℃并历时5h通过注射泵缓慢加入纯态2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸三甲基甲硅烷基酯(5.89mL,29.9mmol)。将混合物在100℃搅拌过夜。然后将混合物用CH2Cl2稀释，用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap-2步骤b(异构体1)(750mg)和Cap-2步骤b(异构体2)(480mg)，其为澄清油状物。相对立体化学归属通过NOE研究来进行。Cap-2步骤b(异构体1)：LC(条件1)：RT＝1.83min；LC/MS：[M+H]+C13H13F2O2分析计算值239.09；实测值239.2；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.99-8.04(2H,m),7.56(1H,t,J＝7.32Hz),7.43(2H,t,J＝7.63Hz),5.25-5.33(1H,m),2.50(2H,dd,J＝14.04,6.71Hz),2.14-2.22(2H,m),2.08-2.14(2H,m)；Cap-2步骤b(异构体2)：LC(条件1)：RT＝1.79min；LC/MS：[M+H]+C13H13F2O2分析计算值239.09；实测值239.2；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.98-8.08(2H,m),7.53-7.59(1H,m),7.41-7.48(2H,m),5.53-5.62(1H,m),2.59-2.70(2H,m),2.01-2.11(4H,m)。Cap-2步骤c向Cap-2步骤b(异构体2)(480mg,2.015mmol)在4mLMeOH中的溶液中加入KOH(4mL,2.015mmol)(10％水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用CH2Cl2(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-2步骤c(220mg)，其为浅黄色固体。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm4.41-4.54(1H,m),2.38-2.50(2H,m),1.89-1.99(2H,m),1.81(2H,dd,J＝14.50,5.04Hz)。Cap-2步骤d将Tosyl-Cl(甲苯磺酰氯)(625mg,3.28mmol)加到Cap-2步骤c(220mg,1.640mmol)和吡啶(0.531mL,6.56mmol)在7mLCH2Cl2中的溶液中。将混合物在室温搅拌过夜，然后用CH2Cl2稀释，用水和1NHCl水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶,0-15％EtOAc/己烷)来纯化，得到Cap-2步骤d(325mg)，其为澄清油状物。LC(条件1)：RT＝1.72min；LC/MS：[M+Na]+C13H14F2NaO3S分析计算值311.05；实测值311.2；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.76(2H,d,J＝8.24Hz),7.34(2H,d,J＝8.24Hz),4.99-5.08(1H,m),2.45(3H,s),2.31-2.41(2H,m),1.84-1.94(4H,m)。Cap-2步骤e外消旋混合物向微波管中加入N-(二苯基亚甲基)甘氨酸乙酯(241mg,0.902mmol)和Cap-2步骤d(260mg,0.902mmol)在2mL甲苯中的溶液。将管密封并在N2下滴加LiHMDS(1.082mL,1.082mmol)(1N在THF中)。将所得深棕色溶液在微波中在100℃加热5h。然后将混合物用水淬灭并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap-2步骤e的外消旋混合物(240mg)，其为浅黄色油状物。将混合物用于下一步而无需分离。LC(条件2)：RT＝1.91min；LC/MS：[M+Na]+C23H24F2NO2分析计算值384.18，实测值384.35。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.63-7.70(2H,m),7.43-7.51(3H,m),7.38-7.43(1H,m),7.31-7.38(2H,m),7.13-7.22(2H,m),4.13-4.22(2H,m),3.95(1H,d,J＝6.41Hz),2.67-2.79(1H,m),2.07-2.16(1H,m),1.97-2.07(2H,m),1.90(2H,m),1.65-1.76(1H,m),1.25(3H,t,J＝7.17Hz)。Cap-2步骤f外消旋混合物向Cap-2步骤e(240mg,0.626mmol)在4mLTHF中的溶液中加入HCl(1mL,2.0mmol)(2N水溶液)。将所得混合物在室温搅拌2h。然后将混合物用EtOAc洗涤，用饱和NaHCO3水溶液中和，然后用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-2步骤f(120mg)，其为澄清油状物。LC(条件2)：RT＝0.85min；LC/MS：[M+H]+C10H16F2NO2分析计算值220.11；实测值220.26；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm4.14-4.25(2H,m),3.26(1H,d,J＝6.71Hz),2.22-2.35(1H,m),1.90-2.11(5H,m),1.79-1.90(1H,m),1.22-1.34(3H,m)。Cap-2步骤g外消旋混合物向Cap-2步骤f(120mg,0.547mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入氯甲酸甲酯(0.085mL,1.095mmol)。将所得混合物在室温搅拌1h。将混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥并浓缩，得到Cap-2步骤g(150mg)，其为白色固体。LC(条件1)：RT＝1.45min；LC/MS：[M+H]+C12H18F2NO4分析计算值278.12；实测值278.2；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm5.23(1H,d,J＝8.24Hz),4.29(1H,t,J＝7.48Hz),4.15-4.23(2H,m),3.68(3H,s),2.37(1H,宽单峰),2.02-2.10(1H,m),1.85-2.00(4H,m),1.75-1.84(1H,m),1.27(3H,t,J＝7.02Hz)。Cap-2外消旋混合物向Cap-2步骤g(150mg,0.541mmol)在2mLTHF和1mL水中的混合物中加入LiOH(0.811mL,1.623mmol)(2N水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。将混合物用1NHCl水溶液中和并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-2(133mg)，其为白色固体。LC(条件2)：RT＝1.07min；LC/MS：[M+H]+C10H14F2NO4分析计算值250.09；实测值250.13；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm5.18-5.36(1H,m),4.28-4.44(1H,m),3.70(3H,s),2.37-2.56(1H,m),1.74-2.31(6H,m)。Cap-3外消旋混合物按照针对Cap-2所述的程序由Cap-2步骤b(异构体1)合成Cap-3。LC(条件2)：RT＝1.08min；LC/MS：[M+H]+C10H14F2NO4分析计算值250.09，实测值249.86。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm5.15(1H,d,J＝8.24Hz),4.32(1H,t,J＝7.48Hz),3.69(3H,s),2.83-2.99(1H,m),1.96-2.26(4H,m),1.70(1H,t,J＝11.75Hz),1.59(1H,t,J＝12.05Hz)。Cap-4外消旋混合物Cap-4步骤a外消旋混合物将2-氨基-2-((1R,3r,5S)-二环[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯(使用与针对制备Cap-2所述相同的程序由市售(1R,3r,5S)-二环[3.1.0]己-3-醇制备；350mg,1.910mmol)、DiPEA(0.667mL,3.82mmol)和氯甲酸甲酯(0.296mL,3.82mmol)在5mLCH2Cl2中的混合物在室温搅拌1h。然后将混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-4步骤a(461mg)，其为黄色油状物。LC(条件1)：RT＝1.43min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO4分析计算值242.14；实测值242.2；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm5.04(1H,d,J＝7.63Hz),4.09-4.20(2H,m),4.05(1H,t,J＝8.39Hz),3.63(3H,s),2.55-2.70(1H,m),1.96-2.09(2H,m),1.37-1.60(4H,m),1.24(3H,t,J＝7.17Hz),0.66-0.76(1H,m),-0.03-0.06(1H,m)。Cap-4外消旋混合物向乙酯Cap-4步骤a(461mg,1.911mmol)在5mLTHF和2mL水中的混合物中加入LiOH(2.87mL,5.73mmol)(2N水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用1NHCl水溶液中和并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap-4(350mg)，其为澄清油状物。LC(条件1)：RT＝1.04min；LC/MS：[2M+Na]+C20H30N2NaO8分析计算值449.19；实测值449.3；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm5.07(1H,d,J＝8.85Hz),4.13(1H,t,J＝8.24Hz),3.68(3H,s),2.64-2.79(1H,m),2.04-2.21(2H,m),1.23-1.49(4H,m),0.71-0.81(1H,m),0.03-0.12(1H,m)。Cap5.1和Cap5.2Cap5步骤a将3,3-二甲氧基丙酸甲酯(10g,68mmol)和LiOH(8.08g,337mmol)在MeOH(40mL)、THF(40mL)和水(40mL)中的混合物在80℃加热2h。然后将混合物冷却下来至室温并用1NHCl水溶液酸化(pH>3)。然后将混合物用CH2Cl2(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap5步骤a，其为澄清油状物(6.3g)。将产物用于下一步而无需进一步纯化。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.82(t,J＝5.8Hz,1H),3.36(s,6H),2.69(d,J＝5.8Hz,2H)；13CNMR(125MHz,CDCl3)δ175.22,101.09,53.68,38.76。Cap5步骤b向Cap5步骤a(4.55g,33.9mmol)在THF(40mL)中的溶液中滴加N,N’-羰基二咪唑(6.60g,40.7mmol)在THF(40mL)中的混悬液。溶液变为黄色并观察到气体放出。将混合物在室温搅拌2h。与此同时将具有丙二酸单甲酯单钾盐(7.95g,50.9mmol)和氯化镁(3.55g,37.3mmol)在THF(80mL)中的溶液的另一个烧瓶在室温搅拌2h。然后通过注射器将咪唑叶利德(imidazolide)溶液转移到Mg(OOCCH2COOMe)2溶液中并将所得混合物在室温搅拌16h。然后将混合物用2MNaHSO4(60mL)酸化并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap5步骤b，其为浅紫色油状物(4.9g)。将油状物用于下一步而无需进一步纯化。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.75(t,J＝5.5Hz,1H),3.72(s,3H),3.50(s,2H),3.35(s,6H),2.84(d,J＝5.5Hz,2H)。Cap5步骤c向Cap5步骤b(4.9g,26mmol)在MeOH(70mL)中的溶液中缓慢加入硼氢化钠(1.07g,28.3mmol)。将所得混合物在室温搅拌3h，然后用1NHCl(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap5步骤c，其为浅黄色油状物(4.4g)。将产物用于下一步而无需进一步纯化。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.60(t,J＝5.5Hz,1H),4.25-4.16(m,1H),3.70(s,3H),3.38(s,3H),3.37(s,3H),2.52-2.48(m,2H),1.83-1.77(m,2H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.21,102.73,64.61,53.22,52.95,51.30,41.00,38.65。Cap5步骤d向Cap5步骤c(4.4g,22.89mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入咪唑(3.12g,45.8mmol)和TBS-Cl(5.52g,36.6mmol)。将所得混合物在室温搅拌3天。然后将反应混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-15％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap5步骤d，其为澄清油状物(5.0g)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.55-4.50(m,1H),4.30-4.21(m,1H),3.67(s,3H),3.32(s,3H),3.31(s,3H),2.51(d,J＝6.3Hz,2H),1.89-1.77(m,2H),0.88(s,9H),0.08(s,3H),0.06(s,3H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ171.41,101.24,65.85,52.35,52.09,51.04,42.40,39.92,25.37,25.27,17.55,-3.95,-5.15。Cap5步骤e在冰/水浴中向Cap5步骤d(5.0g,16mmol)在乙醚(50mL)中的溶液中加入钛酸四异丙酯(0.971mL,3.26mmol)在乙醚(10mL)中的溶液。然后历时1h通过注射泵滴加乙基溴化镁(48.9mL,48.9mmol)(1M在THF中)。然后将混合物在冰/水浴中搅拌2h。将混合物用乙醚稀释并缓慢用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得白色析出物滤出。将滤液用Et2O(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。然后将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-20％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap5步骤e，其为澄清油状物(4.02g)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.47(t,J＝5.6Hz,1H),4.21-4.14(m,1H),3.71(s,1H),3.32(s,3H),3.31(s,3H),2.05-1.88(m,3H),1.66-1.58(m,1H),0.90(s,9H),0.83-0.76(m,1H),0.71-0.65(m,1H),0.47(m,1H),0.40-0.34(m,1H),0.14(s,3H),0.11(s,3H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ102.09,69.97,54.44,52.97,52.84,43.27,40.00,25.92,17.96,14.04,12.06,-4.32,-4.61。Cap5步骤f将Cap5步骤e(4.02g,13.2mmol)和对甲苯磺酸一水合物(3.01g,15.8mmol)在MeOH(120mL)中的溶液在室温搅拌过夜。向混合物中加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)并将混合物用CH2Cl2(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物如下纯化：使其通过用70％EtOAc/Hex洗脱的硅胶床，得到Cap5步骤f，其为非对映异构体的混合物(1.7g；澄清油状物)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.79(t,J＝3.7Hz,1H),4.59(dd,J＝5.3,2.9Hz,1H),4.30-4.22(m,1H),4.03(宽单峰,1H),3.37(s,3H),3.31(s,3H),2.09-2.03(m,1H),2.00(dtd,J＝13.1,4.0,1.5Hz,1H),1.86(dd,J＝13.1,3.7Hz,1H),1.81-1.61(m,7H),0.94-0.87(m,1H),0.83-0.77(m,1H),0.74-0.69(m,1H),0.65-0.56(m,2H),0.48-0.40(m,2H),0.37-0.30(m,1H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ100.86,100.27,65.75,64.35,56.24,55.92,53.80,52.35,40.86,39.92,39.28,38.05,12.10,12.06,9.91,9.37。Cap5步骤g向Cap5步骤f(1.7g,11mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入二(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(2.14mL,8.06mmol)。将混合物在室温搅拌2h。然后将混合物冷却至-10℃且先后滴加三乙基甲硅烷(6.87mL,43.0mmol)和三氟化硼乙醚络合物(3.40mL,26.9mmol)。然后将混合物缓慢温热至0℃并在0℃搅拌30min。然后将反应混合物用水淬灭并用EtOAc(3×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物如下纯化：使其通过用70％EtOAc/Hex洗脱的硅胶床，得到Cap5步骤g，其为澄清油状物(1.5g)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.43(宽单峰,1H),3.96(tt,J＝9.5,4.7Hz,1H),3.86(dt,J＝11.5,4.0Hz,1H),3.51(td,J＝11.1,2.7Hz,1H),1.98-1.84(m,2H),1.66-1.50(m,2H),0.86-0.79(m,1H),0.66-0.59(m,1H),0.53-0.46(m,1H),0.34(m,1H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ67.41,64.37,57.99,41.28,35.22,11.74,11.32。Cap5步骤h在78℃向草酰氯(1.090mL,12.45mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中滴加DMSO(1.767mL,24.90mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液。将混合物搅拌20min且滴加Cap5步骤g(1.33g,10.4mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌20min。然后加入Et3N(7.52mL,54.0mmol)并历时30min将混合物缓慢温热至室温。然后将混合物用水淬灭并用CH2Cl2(3×)萃取。将有机层合并且用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap5步骤h，其为澄清油状物(1.3g)。将粗产物用于下一步而无需纯化。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ3.95(t,J＝6.0Hz,2H),2.55-2.50(m,2H),2.46(s,2H),0.84(m,2H),0.50(m,2H)。Cap5步骤i在-20℃向2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(3.41g,10.3mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入1,1,3,3-四甲基胍(2.85mL,22.7mmol)。将所得混合物在-20℃搅拌1h。然后加入Cap5步骤h(1.3g,10.30mmol)在THF(10mL)中的溶液。将所得棕色混合物在室温搅拌6天。然后将反应混合物浓缩并将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-25％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap5步骤i(异构体的混合物)，其为白色固体(850mg)。LC(条件2)：RT＝1.88min；LC/MS：[M+H]+C18H22NO5分析计算值332.15；实测值332.14；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.45-7.29(m,5H),6.09-5.81(m,1H),5.18-5.08(m,2H),3.88-3.49(m,5H),3.06-2.82(m,2H),2.52-2.36(m,2H),0.82-0.64(m,2H),0.58-0.32(m,2H)。Cap5.1和Cap5.2步骤j在500mL氢化压力瓶中将Cap5步骤i(异构体的混合物)(730mg,2.20mmol)在MeOH(5mL)中的溶液用N2鼓泡30min。向混合物中加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(24.5mg,0.044mmol)，然后将瓶置于帕尔(Parr)振摇器上并在60psi氢化3天。将混合物浓缩并将粗产物通过手性HPLC(ChiralpakAD柱,21×250mm,10μm,用85％0.1％二乙胺/庚烷-15％EtOH以15mL/min洗脱)来分离，得到Cap5.1步骤j(220mg)(第一洗脱级份)和Cap5.2步骤j(290mg)(第二洗脱级份)，其为澄清油状物。未确定异构体的绝对立体化学。Cap5.1步骤j：LC(条件2)：RT＝1.89min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.16；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.41-7.28(m,5H),5.34(d,J＝8.9Hz,1H),5.10(s,2H),4.37(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),3.89-3.82(m,1H),3.75(s,3H),3.48(td,J＝11.1,3.1Hz,1H),2.29-2.17(m,1H),1.96(t,J＝12.7Hz,1H),1.57-1.43(m,2H),1.07-0.98(m,1H),0.87-0.78(m,1H),0.66-0.56(m,1H),0.56-0.47(m,1H),0.37-0.27(m,1H)。Cap5.2步骤j：LC(条件2)：RT＝1.90min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.17；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.40-7.28(m,5H),5.33(d,J＝8.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.36(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),3.86(dd,J＝11.0,3.1Hz,1H),3.74(s,3H),3.53-3.43(m,1H),2.25-2.14(m,1H),1.94(t,J＝12.5Hz,1H),1.67-1.44(m,2H),0.97-0.90(m,1H),0.86-0.79(m,1H),0.66-0.57(m,1H),0.53-0.44(m,1H),0.33-0.24(m,1H)。[注：绝对立体化学归属参见下文]Cap5.1步骤k在氢化烧瓶中向Cap5.1步骤j(210mg,0.630mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入一缩二碳酸二甲酯(0.135mL,1.26mmol)和10％Pd/C(33.5mg,0.031mmol)。将烧瓶置于帕尔振摇器上并将混合物在50psi氢化4h。然后将混合物用硅藻土过滤并将滤液浓缩，得到Cap5.1步骤k，其为澄清油状物(165mg)。LC(条件2)：RT＝1.56min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO5分析计算值258.13；实测值258.16；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ5.39(d,J＝8.5Hz,1H),4.30(dd,J＝8.9,5.2Hz,1H),3.84-3.78(m,1H),3.70(s,3H),3.63(s,3H),3.47-3.39(m,1H),2.23-2.12(m,1H),1.91(t,J＝12.5Hz,1H),1.49-1.39(m,2H),0.97(dd,J＝13.1,2.4Hz,1H),0.81-0.74(m,1H),0.61-0.52(m,1H),0.46(dt,J＝10.1,6.0Hz,1H),0.32-0.24(m,1H)。Cap5.1向Cap5.1步骤k(165mg,0.641mmol)在THF(2mL)和水(1mL)中的混合物中加入2MLiOH(1mL,2.0mmol)(水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物用乙醚(1mL)洗涤。将水相用1NHCl水溶液酸化并用乙醚萃取(6×)。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap5.1，其为白色固体(150mg)。LC(条件2)：RT＝1.10min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.09；1HNMR(500MHz,CDCl3-d)δ5.27(d,J＝8.9Hz,1H),4.39(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),3.94-3.86(m,1H),3.70(s,3H),3.56-3.46(m,1H),2.36-2.24(m,1H),2.01(t,J＝12.7Hz,1H),1.63-1.48(m,2H),1.14-1.05(m,1H),0.92-0.80(m,1H),0.69-0.60(m,1H),0.58-0.49(m,1H),0.40-0.31(m,1H)。注：将Cap5.1与(S)-1-(萘-2-基)乙胺经由HATU偶联进行偶联并使所得酰胺结晶。对该类似物进行的X射线晶体分析确定了所示Cap5.1的相对和绝对立体化学。Cap5.2按照针对Cap5.1所述的程序由Cap5.2步骤j制备Cap5.2。LC(条件2)：RT＝1.12min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.09；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ5.27(d,J＝8.9Hz,1H),4.38(dd,J＝8.2,4.9Hz,1H),3.91(dd,J＝11.1,3.2Hz,1H),3.69(s,3H),3.52(t,J＝11.0Hz,1H),2.34-2.23(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.72-1.61(m,1H),1.54(qd,J＝12.6,4.7Hz,1H),1.04-0.96(m,1H),0.90-0.82(m,1H),0.68-0.61(m,1H),0.56-0.49(m,1H),0.39-0.30(m,1H)。Cap-6Cap-6步骤a将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(15g,96mmol)在EtOAc(150mL)中的溶液加到2-(苄基氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(21.21g,64.0mmol)在1,1,3,3-四甲基胍(10.45mL,83mmol)和EtOAc(150mL)中的溶液中。将所得溶液在环境温度搅拌72h，然后将其用EtOAc(25mL)稀释。将有机层用1NHCl(75mL)、H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物经由Biotage(5％-25％EtOAc/己烷；300g柱)来纯化。然后将含有产物的合并级份真空浓缩并将残余物从己烷/EtOAc中重结晶，得到白色晶体，其对应于2-(苄基氧基羰基氨基)-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-亚基)乙酸甲酯(6.2g)。1HNMR(400MHz,CDCl3-d)δppm7.30-7.44(5H,m),6.02(1H,宽单峰),5.15(2H,s),3.97(4H,s),3.76(3H,宽单峰),2.84-2.92(2H,m),2.47(2H,t,J＝6.40Hz),1.74-1.83(4H,m).LC(条件OL1)：Rt＝2.89min。LC/MS:[M+Na]+C19H23NNaO6分析计算值745.21；实测值745.47。Cap-6步骤b按照Burk,M.J.、Gross,M.F.和MartinezJ.P.(J.Am.Chem.Soc.,1995,117,9375-9376及其中参考文献)的方法由烯Cap-176步骤a制备酯Cap-176步骤b：在N2气氛下向500mL高压瓶中加入烯Cap-176步骤a(3.5g,9.68mmol)在脱气的MeOH(200mL)中的溶液。然后向溶液中加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(0.108g,0.194mmol)并将所得混合物用N2(3×)冲洗并充入H2(3×)。将溶液在70psiH2下在环境温度剧烈振摇72h。减压除去溶剂并将剩余残余物吸收在EtOAc中。然后将淡棕色溶液用硅胶垫过滤并用EtOAc洗脱。将溶剂真空浓缩，得到澄清油状物，其对应于酯Cap-176步骤b(3.4g)。1HNMR(500MHz,CDCl3-d)δppm7.28-7.43(5H,m),5.32(1H,d,J＝9.16Hz),5.06-5.16(2H,m),4.37(1H,dd,J＝9.00,5.04Hz),3.92(4H,t,J＝3.05Hz),3.75(3H,s),1.64-1.92(4H,m),1.37-1.60(5H,m).LC(条件OL1)：Rt＝1.95min。LC/MS:[M+H]+C19H26NO6分析计算值364.18；实测值364.27。Cap-6步骤c将Cap-6步骤b(6.68g,18.38mmol)溶解在MeOH(150mL)中且加入Pd/C(0.039g,0.368mmol)并将混悬液置于1大气压H2下。将反应混合物在室温搅拌6h且经由硅藻土垫过滤并将挥发物减压除去。将对应于Cap-6步骤c的琥珀色油状物(3.8g,16.57mmol,90％产率)回收并使用而无需进一步纯化。1HNMR(400MHz,CDCl3-d)δ3.92(宽单峰,4H),3.71(s,3H),3.31(d,J＝4.0Hz,1H),1.87-1.44(m,9H).13CNMR(101MHz,CDCl3-d)δ176.1,108.7,64.5(2C),59.1,52.0,41.1,34.7,34.6,27.2,25.4。Cap-6步骤d将氯甲酸甲酯(2.57mL,33.1mmol)加到Cap6步骤c(3.8g,16.57mmol)和DIEA(23.16mL,133mmol)在CH2Cl2(200mL)中的溶液中。将所得溶液在室温搅拌3h并将挥发物减压除去。将残余物经由Biotage(30％EtOAc/Hex；160g柱)来纯化。将对应于Cap-6步骤d的琥珀色油状物(3g,10.44mmol,63.0％产率)回收。1HNMR(500MHz,CDCl3-d)δ5.24(d,J＝8.5Hz,1H),4.34(dd,J＝8.9,4.9Hz,1H),3.92(s,4H),3.74(s,3H),3.67(s,3H),1.89-1.73(m,3H),1.67(d,J＝12.5Hz,1H),1.62-1.33(m,5H).13CNMR(126MHz,CDCl3-d)172.4,156.7,108.1,64.2,64.2,57.7,52.3,52.2,39.6,34.2(2C),26.5,25.0。Cap-6步骤e将Cap-6步骤d(1.15g,4.00mmol)溶解在THF(50mL)中，然后按序加入水(30mL)、冰醋酸(8.02mL,140mmol)和二氯乙酸(1.985mL,24.02mmol)。将混合物在室温搅拌过夜并如下淬灭反应混合物：在剧烈搅拌下缓慢加入固体碳酸钠直到不再观察到气体释放。将粗产物萃取到10％乙酸乙酯/二氯甲烷中并将有机层合并，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物经由Biotage(0-30％EtOAc/Hex；40g柱)来纯化并将对应于Cap-6步骤e的澄清油状物(0.72g,2.96mmol,73.9％产率)回收。1HNMR(500MHz,CDCl3-d)δ5.36(d,J＝8.2Hz,1H),4.46(dd,J＝8.4,5.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.68(s,3H),2.46-2.39(m,2H),2.38-2.29(m,2H),2.09-2.03(m,1H),1.96-1.88(m,1H),1.64-1.51(m,2H).13CNMR(126MHz,CDCl3-d)δ210.1,171.9,156.7,57.2,52.5(2C),40.2,40.2,39.4,28.7,27.6。Cap-6将Cap-6步骤e(0.68g,2.80mmol)在THF(7.5mL)和MeOH(7.50mL)中的溶液冷却至0℃。滴加2NNaOH水溶液(1.9mL,3.80mmol)并将所得溶液在室温搅拌2h。加入己烷:Et2O的1:1混合物(20mL)并将有机层弃去。然后将水层用10％KHSO4水溶液酸化至pH～1并将混合物用EtOAc(2×)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将对应于Cap-6的白色泡沫状物(0.55g)回收并使用而无需进一步纯化。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.70(宽单峰,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),4.01(dd,J＝8.2,6.7Hz,1H),3.54(s,3H),2.45-2.30(m,2H),2.23-2.13(m,3H),1.94-1.79(m,3H),1.57(qd,J＝12.7,4.1Hz,1H),1.47(qd,J＝12.7,4.4Hz,1H).13CNMR(126MHz,DMSO-d6)δ210.2,173.0,156.8,57.6,51.5,39.7(2C),36.9,28.6,27.5。Cap-7在0℃向(S)-2-氨基-2-(3-(三氟甲基)二环[1.1.1]戊-1-基)乙酸(由市售来源得到；0.5151g,2.463mmol)和碳酸钠(0.131g,1.231mmol)在1M氢氧化钠水溶液(2.4ml,2.400mmol)中的混合物中滴加氯甲酸甲酯(0.2ml,2.59mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌4小时。然后将其在冰/水浴中冷却且加入乙醚(25mL)并搅拌且分离各层。将水层用乙醚(2×25mL)洗涤。将水层用冰/水浴冷却并用12NHCl酸化至pH范围为1-2。将其用CH2Cl2(3×50mL)萃取，用MgSO4干燥并真空浓缩，得到Cap-7，其为灰白色固体(480.7mg)且无需进一步纯化即使用。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(宽单峰,1H),7.61(宽二重峰,J＝8.0Hz,1H),4.16(d,J＝8.0Hz,1H),3.57(s,3H),2.00(d,J＝8.3Hz,3H),1.93(d,J＝9.3,3H)。Cap8.1和Cap8.2(两种立体异构体)Cap8步骤a将4-氧代缬草酸甲酯(6g,46.1mmol)、二苯基二硒醚(14.39g,46.1mmol)和过硫酸铵(15.92mL,138mmol)在MeOH(200mL)中的混合物在回流温度搅拌3h。然后将混合物倒入水中并用CH2Cl2(3×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-15％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap8步骤a(7.1g)，其为黄色油状物。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.53(s,1H),3.67(s,3H),3.42(s,6H),2.89(t,J＝6.6Hz,2H),2.60(t,J＝6.6Hz,2H)。Cap8步骤b向Cap8步骤a(7.1g,37.3mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中缓慢加入硼氢化钠(1.554g,41.1mmol)。将所得混合物在室温搅拌2h。向混合物中加入1NHCl水溶液直到酸性，然后用CH2Cl2(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap8步骤b，其为橙色油状物(7.1g)且以1:1.7的比例掺杂有对应的环化副产物5-(二甲氧基甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮。混合物无需纯化即使用。Cap8步骤c向Cap8步骤b(7.1g,36.9mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入咪唑(5.03g,73.9mmol)和TBS-Cl(8.91g,59.1mmol)。将所得混合物在室温搅拌16h。然后将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％然后10％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap8步骤c，其为澄清油状物。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.07(d,J＝5.5Hz,1H),3.72-3.67(m,1H),3.66(s,3H),3.40(s,3H),3.39(s,3H),2.48-2.35(m,2H),1.92(dddd,J＝13.8,9.3,6.9,4.1Hz,1H),1.82-1.71(m,1H),0.88(s,9H),0.07(s,3H),0.05(s,3H)。Cap8步骤d在水浴中向Cap8步骤c(4.4g,14.36mmol)在Et2O(50mL)中的溶液中加入钛酸四异丙酯(0.855mL,2.87mmol)在乙醚(10mL)中的溶液且溶液变为黄色。然后历时1h通过注射泵滴加乙基溴化镁(14.36mL,43.1mmol,1M在THF中)。溶液变为深棕色伴有一些析出物。然后将混合物在水浴中搅拌2h。将混合物用乙醚稀释并通过缓慢加入饱和NH4Cl水溶液来淬灭。将混合物过滤以除去所形成的白色析出物。分离两层并将水层用Et2O(3×50mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。然后将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-20％EtOAc/Hex)来纯化，得到Cap8步骤d，其为澄清油状物(2.9g)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.26(d,J＝6.1Hz,1H),3.81-3.72(m,1H),3.46(s,3H),3.43(s,3H),1.90-1.75(m,3H),1.52-1.43(m,1H),0.90(s,9H),0.82-0.74(m,1H),0.73-0.67(m,1H),0.47-0.40(m,2H),0.11-0.10(m,6H)。Cap8步骤e将Cap8步骤d(2.9g,9.52mmol)和p-TsOH·H2O(2.174g,11.43mmol)在MeOH(40mL)中的溶液在室温搅拌16h。向混合物中加入200mL饱和NaHCO3溶液并将混合物用CH2Cl2(3×50mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物用硅胶垫过滤(用70％EtOAc/Hex洗脱)，得到Cap8步骤e(1g)，其为澄清油状物且由非对映异构体的混合物构成且不进行分离。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.16(d,J＝7.3Hz,1H),3.55-3.46(m,1H),3.44-3.38(m,2H),2.50-2.22(m,1H),2.13-2.00(m,1H),1.71-1.59(m,1H),1.22-1.14(m,1H),0.99-0.77(m,1H),0.70-0.59(m,1H),0.57-0.46(m,1H),0.45-0.30(m,1H)。Cap8步骤f向Cap8步骤e(1g,6.32mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入二(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(1.26mL,4.74mmol)。将混合物在室温搅拌2h，在此期间其变为橙色。然后将混合物冷却下来至-10℃并滴加三乙基甲硅烷(4.04mL,25.3mmol)，然后加入三氟化硼乙醚络合物(2.00mL,15.80mmol)。加入三氟化硼乙醚络合物后，混合物立即变为浅紫色。然后将混合物缓慢温热至0℃并在0℃搅拌30min。然后将反应混合物用水淬灭并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物用硅胶垫过滤(用70％EtOAc/Hex洗脱)并将滤液浓缩，得到Cap8步骤f(0.8g)，其为澄清油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.19(d,J＝6.8Hz,1H),3.77(dd,J＝11.3,2.5Hz,1H),3.55(d,J＝6.0Hz,1H),2.14-2.06(m,2H),1.75-1.62(m,1H),1.44(dd,J＝12.4,7.2Hz,1H),0.97-0.88(m,2H),0.65(dddd,J＝10.8,6.2,4.8,1.5Hz,1H),0.59-0.51(m,1H),0.48-0.40(m,2H)。Cap8步骤g在-78℃向草酰氯(0.664mL,7.58mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中滴加DMSO(1.076mL,15.17mmol)在CH2Cl2(7mL)中的溶液。将混合物搅拌20min并滴加Cap8步骤f(810mg,6.32mmol)在CH2Cl2(7mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌20min。然后加入Et3N(4.58mL,32.9mmol)并历时30min将混合物缓慢温热至室温。然后将混合物用水淬灭并用CH2Cl2(3×10mL)萃取。将有机层合并且用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap8步骤g(0.8g)，其为澄清油状物。产物无需进一步纯化即使用。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.56(s,1H),4.00(s,1H),2.53-2.46(m,1H),2.40-2.32(m,1H),2.08(t,J＝6.9Hz,1H),1.82(dt,J＝13.5,5.8Hz,1H),1.09-0.99(m,1H),0.89-0.82(m,1H),0.70(ddd,J＝10.2,6.9,5.8Hz,1H),0.54(ddd,J＝10.2,6.7,5.6Hz,1H)。Cap8步骤h在-20℃向2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(3.19g,9.63mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入1,1,3,3-四甲基胍(2.42mL,19.26mmol)。将所得混合物在-20℃搅拌1h且混合物变为乳白色。加入Cap8步骤g(810mg,6.42mmol)在THF(5mL)中的溶液，然后将所得棕色混合物在室温搅拌2天。然后将反应混合物浓缩并将粗产物通过快速色谱(硅胶,0-5％EtOAc/CH2Cl2)来纯化，得到Cap8步骤h(顺式/反式异构体的混合物)，其为澄清油状物(400mg)。LC(条件3)：RT＝1.74min；LC/MS：[M+Na]+C18H21NNaO5分析计算值354.13；实测值354.04。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.42-7.31(m,10H),5.19-5.10(m,4H),4.66(宽单峰,1H),4.23(s,1H),3.84-3.70(m,5H),3.39(s,3H),2.68-2.53(m,2H),1.81-1.74(m,2H),1.30-1.21(m,2H),0.96-0.80(m,4H),0.76(dt,J＝11.1,5.7Hz,1H),0.56-0.39(m,4H)。Cap8步骤i在500mL氢化压力管中将Cap8步骤h(异构体的混合物)(400mg,1.207mmol)在MeOH(10mL)中的溶液用N2鼓泡30min。向混合物中加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(13.43mg,0.024mmol)，然后将混合物置于帕尔振摇器上并在60psi氢化3天。然后将混合物浓缩。然后粗产物通过手性HPLC(ChiralpakOJ柱,21×250mm,10μm)来分离(用90％0.1％二乙胺/庚烷-10％EtOH以15mL/min洗脱)，得到Cap8步骤i.1(55mg；第一洗脱级份)和Cap8步骤i.2(65mg；第二洗脱级份)，其为澄清油状物。未确定异构体的绝对立体化学。Cap8步骤i.1：LC(条件3)：RT＝1.93min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.04；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.45-7.30(m,5H),5.38-5.30(m,1H),5.18-5.06(m,2H),4.41(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),3.83(d,J＝11.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.35(t,J＝10.8Hz,1H),2.21-2.09(m,1H),2.07-1.98(m,1H),1.70(d,J＝11.0Hz,2H),1.54(qd,J＝12.1,4.1Hz,1H),1.19(dt,J＝13.6,3.4Hz,1H),0.83(dt,J＝11.1,5.7Hz,1H),0.63(dt,J＝10.5,5.1Hz,1H),0.49(dt,J＝10.1,6.0Hz,1H),0.36-0.29(m,1H)。Cap8步骤i.2：LC(条件5)：RT＝1.55min；LC/MS：[M+Na]+C18H23NNaO5分析计算值356.15；实测值356.06；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.40-7.32(m,5H),5.31(d,J＝8.5Hz,1H),5.12(s,2H),4.39-4.33(m,1H),3.77(s,3H),3.74(d,J＝2.1Hz,1H),3.39(t,J＝10.5Hz,1H),2.07(d,J＝4.0Hz,1H),2.04-1.95(m,1H),1.82(d,J＝10.7Hz,1H),1.34-1.21(m,2H),0.82(dt,J＝11.0,5.8Hz,1H),0.68-0.61(m,1H),0.49(dt,J＝9.9,5.9Hz,1H),0.34(ddd,J＝10.1,6.4,4.9Hz,1H)。Cap8步骤j.1在氢化烧瓶中向Cap8步骤i.1(55mg,0.165mmol)在10mLMeOH中的溶液中加入一缩二碳酸二甲酯(0.035mL,0.33mmol)和Pd/C(8.78mg,08.25μmol)。将烧瓶置于帕尔振摇器上并将混合物在50psi氢化4h。然后将混合物用硅藻土过滤并将滤液浓缩，得到Cap8步骤j.1，其为澄清油状物(50mg)。LC(条件1)：RT＝1.09min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO5分析计算值258.13；实测值258.05；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ4.39(dd,J＝8.7,6.0Hz,1H),3.85-3.80(m,1H),3.79-3.76(m,3H),3.71(s,3H),3.36(t,J＝10.8Hz,1H),2.14(d,J＝4.9Hz,1H),2.03(t,J＝13.0Hz,1H),1.71(ddd,J＝12.7,3.7,2.0Hz,1H),1.55(td,J＝12.1,4.1Hz,1H),1.20(d,J＝13.4Hz,1H),0.83(dt,J＝11.0,5.8Hz,1H),0.67-0.60(m,1H),0.49(dt,J＝9.9,6.0Hz,1H),0.37-0.29(m,1H)。将氨基甲酸苄酯Cap8步骤i.2类似地加工成其氨基甲酸甲酯Cap8步骤j.2。Cap8.1和Cap8.2向Cap8步骤j.1(50mg,0.194mmol)在THF(1mL)和水(0.5mL)中的混合物中加入LiOH(0.292mL,0.583mmol)(2M水溶液)。将所得混合物在室温搅拌过夜。将混合物用Et2O(5mL)萃取。将水相用1NHCl水溶液酸化并用Et2O(6×)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到Cap8.1，其为白色固体(35mg)。LC(条件1)：RT＝0.95min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.02；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.24(d,J＝7.5Hz,1H),4.43(宽单峰,1H),3.89(d,J＝12.0Hz,1H),3.73(s,3H),3.41(t,J＝10.8Hz,1H),2.22(d,J＝4.3Hz,1H),2.11-2.00(m,1H),1.78(dt,J＝12.6,1.9Hz,1H),1.65-1.54(m,1H),1.30-1.18(m,2H),0.85(dt,J＝11.1,5.9Hz,1H),0.70-0.61(m,1H),0.50(dt,J＝10.0,5.9Hz,1H),0.40-0.31(m,1H)。按照针对Cap-8.1所述的程序由Cap8步骤j.2合成Cap8.2。LC(条件1)：RT＝0.96min；LC/MS：[M+H]+C11H18NO5分析计算值244.12；实测值244.02；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ5.44(d,J＝8.5Hz,1H),4.35(t,J＝7.6Hz,1H),3.81(d,J＝8.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.49-3.41(m,1H),2.14(宽单峰,1H),2.04-1.86(m,2H),1.69-1.55(m,1H),1.34-1.25(m,2H),0.83(dt,J＝11.0,5.8Hz,1H),0.67(dt,J＝10.5,5.1Hz,1H),0.54-0.45(m,1H),0.40-0.34(m,1H)。Cap9.1-Cap9.4(四种立体异构体)Cap9步骤a将甲磺酸(3.89mL,59.9mmol)加到丁-3-烯-1-醇(2.06g,28.5mmol)和环丁酮(2.00g,28.5mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用饱和NaHCO3(水溶液)缓慢淬灭(直到碱性)，分离各层并将水相用DCM(20mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗黄色油状物。将粗油状物用BiotageHorizon(90gSiO2,0-40％EtOAc/己烷)纯化，得到Cap9步骤a(5.3g)，其为橙色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.93-4.81(m,1H),3.84(dt,J＝12.1,4.1Hz,1H),3.50(ddd,J＝12.1,10.9,2.6Hz,1H),3.05(s,3H),2.28(ddd,J＝12.7,4.4,1.8Hz,1H),2.22-2.12(m,1H),2.09-1.96(m,4H),1.90-1.64(m,4H)。Cap9步骤b在35mL压力容器中将2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸苄酯(972mg,2.95mmol)和Cap9步骤a(500mg,2.270mmol)溶解在甲苯(10mL)和THF(2mL)中并将澄清无色溶液在氮气下搅拌5min。然后加入1MLiHMDS/THF(2.95mL,2.95mmol)且将容器密封，然后在100℃加热9h。将反应混合物冷却且倒入1/2饱和NH4Cl(水溶液)(～40mL)中，然后用EtOAc(～40mL)萃取。将有机相用盐水(～40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗橙色油状物用BiotageHorizon(0-30％EtOAc/Hex,40gSiO2)纯化，得到Cap9步骤b(四种立体异构体的混合物)(350mg)，其为橙黄色油状物。LC-MS保留时间1.920min；m/z454.32(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。Cap9步骤c将Cap9步骤b(345mg,0.761mmol)在THF(8mL)中的溶液用1.5MHCl(3.04mL,4.56mmol)(水溶液)处理并搅拌1.5h。然后将反应混合物在高真空下浓缩。将残余物溶解在DCM(4mL)中，用DIPEA(0.531mL,3.04mmol)和氯甲酸甲酯(0.088mL,1.14mmol)处理并在室温搅拌过夜。将反应混合物用水(～10mL)和DCM(10mL)稀释，分离并将水层用DCM(10mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的水/ACN)来纯化，得到Cap9步骤c(四种立体异构体的混合物；108mg)，其为橙色玻璃状物。LC-MS保留时间2.833min；m/z348.3(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。将立体异构体的混合物通过手性制备型SFC纯化来分离：ChiralpakAD-H制备型柱,30×250mm,5μm流动相：15％2:1庚烷:EtOH在150巴CO2中温度：35℃流速：70.0mL/min且保持14min在220nm进行UV监测注射量：0.35mL～27mg/mL在EtOH中(经由叠加注射总计～108mg)得到：Cap9步骤c.1：第一洗脱峰：22.3mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.47-7.32(m,5H),5.37-5.21(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.42(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.79-3.65(m,4H),3.38(td,J＝11.5,3.3Hz,1H),2.15-2.01(m,2H),1.98-1.65(m,4H),1.56-1.14(m,5H)。Cap9步骤c.2：第二洗脱峰：20.6mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.32(m,5H),5.26(d,J＝9.0Hz,1H),5.20(s,2H),4.37(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),3.77-3.67(m,4H),3.41-3.29(m,1H),2.16-1.99(m,2H),1.96-1.68(m,4H),1.58-1.19(m,5H)。Cap9步骤c.3：第三洗脱峰：25.0mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.31(m,5H),5.27(d,J＝8.8Hz,1H),5.20(s,2H),4.37(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),3.77-3.66(m,4H),3.40-3.28(m,1H),2.14-2.00(m,2H),1.97-1.69(m,4H),1.62-1.23(m,5H)。Cap9步骤c.4：第四洗脱峰：22.4mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.32(m,5H),5.37-5.21(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.42(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.38(td,J＝11.5,3.3Hz,1H),2.06(q,J＝10.1Hz,2H),1.96-1.67(m,4H),1.56-1.14(m,5H)。基于1HNMR分析，Cap9步骤c.1和Cap9步骤c.4为对映异构体且Cap9步骤c.2和Cap9步骤c.3为对映异构体。对每种立体异构体独立进行加工。Cap9.1-Cap9.4将Cap9步骤c.1(22.3mg,0.064mmol)溶解在MeOH(3mL)中并加到10％Pd/C(5.46mg,5.14μmol)中。将反应混合物先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗并在氢气气囊下搅拌过夜。将反应混合物用硅藻土处理，然后用硅藻土过滤并浓缩，得到Cap9.1(16.8mg)，其为无色玻璃状物。LC-MS保留时间1.008min；m/z258.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。使用上述程序独立对其它相关立体异构体Cap9步骤c.2-c.4都进行脱苄基。Cap9.2:LC-MS保留时间1.011min；m/z258.15(MH+)。Cap9.3:LC-MS保留时间1.054min；m/z258.2(MH+)。Cap9.4:LC-MS保留时间1.045min；m/z258.2(MH+)。Cap10.1-10.4(四种立体异构体)Cap10步骤a将甲磺酸(3.89mL,59.9mmol)加到丁-3-烯-1-醇(2.058g,28.5mmol)和环戊酮(2.40g,28.5mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中并将反应混合物搅拌过夜(ON)。将反应混合物用饱和NaHCO3(水溶液)缓慢淬灭(直到碱性)，分离各层并将水层用DCM(20mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗橙色油状物。将粗油状物用BiotageHorizon(90gSiO2,0-40％EtOAc/己烷)纯化，得到Cap10步骤a(4.68g)，其为橙色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.02-4.82(m,1H),3.85(dt,J＝12.4,4.2Hz,1H),3.60(ddd,J＝12.4,10.7,3.0Hz,1H),3.04(s,3H),2.11-1.97(m,2H),1.95-1.54(m,9H),1.52-1.40(m,1H)。Cap10步骤b在48mL压力容器中将2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸苄酯(1.46g,4.44mmol)和Cap10步骤a(800mg,3.41mmol)溶解在甲苯(15mL)和THF(3mL)中并将澄清无色溶液在氮气下搅拌5min。然后加入1MLiHMDS(4.44mL,4.44mmol)在THF中的溶液且将容器密封，然后在100℃加热9h。将反应混合物冷却，然后倒入1/2饱和NH4Cl(水溶液)(～60mL)中并用EtOAc(～60mL)萃取。将有机相用盐水(～40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗橙色油状物用BiotageHorizon(0-40％EtOAc/Hex,90gSiO2)纯化，得到Cap10步骤b(四种立体异构体的混合物)(480mg)，其为粘性橙色油状物。LC-MS保留时间1.991min；m/z468.4(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。Cap10步骤c将Cap10步骤b(475mg,1.02mmol)溶解在THF(12mL)中，然后用1.5MHCl(4.06mL,6.09mmol)(水溶液)处理并搅拌1.5h。将反应混合物在高真空下浓缩。然后将残余物溶解在DCM(6mL)中且用DIPEA(0.710mL,4.06mmol)和氯甲酸甲酯(0.118mL,1.52mmol)处理并在室温搅拌1.5天。将反应混合物用水(～10mL)和DCM(10mL)稀释，分离并将水层再用DCM(10mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物用BiotageHorizon(12gSiO2,0-25％EtOAc/Hex)纯化，得到284mg橙色油状物。将该物质通过制备型HPLC(具有TFA缓冲剂的水/ACN)来进一步纯化，得到Cap10步骤c(四种立体异构体的混合物)(200mg)，其为几乎无色的澄清玻璃状物。LC-MS保留时间3.025min；m/z362.3(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。将立体异构体的混合物通过手性半制备型纯化来分离：ChiralpakAD-H制备型柱,30×250mm,5μm流动相：具有0.1％Et2NH的8％EtOH/庚烷在220nm进行UV监测注射量：0.5mL～30mg/mL在EtOH中的溶液(总计～200mg)得到：Cap10步骤c.1：第一洗脱峰：30.5mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.31(m,5H),5.34-5.19(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.39(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.51(td,J＝12.0,2.6Hz,1H),2.20-2.06(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.76-1.11(m,11H)。Cap10步骤c.2：第二洗脱峰：29.6mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.31(m,5H),5.28-5.15(m,3H),4.34(dd,J＝9.0,5.3Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.53-3.40(m,1H),2.10(td,J＝10.6,5.4Hz,1H),1.94-1.82(m,1H),1.76-1.62(m,3H),1.59-1.24(m,8H)。Cap10步骤c.3：第三洗脱峰：27.8mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.31(m,5H),5.30-5.14(m,3H),4.34(dd,J＝8.9,5.1Hz,1H),3.79-3.63(m,4H),3.53-3.40(m,1H),2.10(td,J＝10.4,5.5Hz,1H),1.95-1.82(m,1H),1.76-1.63(m,3H),1.60-1.22(m,8H)。Cap10步骤c.4：第四洗脱峰：21.7mg；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.32(m,5H),5.36-5.18(m,2H),5.10(d,J＝12.0Hz,1H),4.39(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.79-3.67(m,4H),3.51(td,J＝12.0,2.6Hz,1H),2.19-2.06(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.77-1.10(m,11H)。通过1HNMR，Cap10步骤c.1和Cap10步骤c.4为对映异构体对且Cap10步骤c.2和Cap10步骤c.3为对映异构体对。每种立体异构体独立使用。Cap10.1-10.4将Cap10步骤c.1(24.4mg,0.068mmol)溶解在MeOH(3mL)中并加到10％Pd/C(5.8mg,5.40μmol)中。将反应混合物先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗并在氢气气囊下搅拌过夜。将反应混合物用硅藻土处理，然后用硅藻土过滤并浓缩，得到Cap10.1(16.3mg)，其为无色玻璃状物。LC-MS保留时间1.139min；m/z272.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.11-4.03(m,1H),3.77-3.70(m,1H),3.66(s,3H),3.65-3.56(m,1H),3.37-3.34(m,1H),2.22-2.08(m,1H),2.02-1.93(m,1H),1.77-1.28(m,11H)。使用上述程序独立对其它三种立体异构体Cap10步骤c.2-c.4都进行脱苄基。Cap10.2(无色玻璃状物):LC-MS保留时间1.018min；m/z272.2(MH+)。1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.10-4.03(m,1H),3.78-3.71(m,1H),3.66(s,3H),3.59(td,J＝12.1,2.4Hz,1H),3.38-3.34(m,1H),2.22-2.09(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.79-1.27(m,11H)。Cap10.3(无色玻璃状物):1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.10-4.03(m,1H),3.78-3.70(m,1H),3.66(s,3H),3.59(td,J＝12.1,2.4Hz,1H),3.38-3.35(m,1H),2.23-2.09(m,1H),2.05-1.94(m,1H),1.79-1.26(m,11H)。Cap10.4(无色玻璃状物):1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ4.06(d,J＝6.0Hz,1H),3.77-3.70(m,1H),3.69-3.57(m,4H),3.36(s,1H),2.22-2.06(m,1H),2.02-1.92(m,1H),1.79-1.26(m,11H)。Cap-11(外消旋混合物)Cap-11步骤a在0℃在氮气下向3-(苄基氧基)环丁酮(5g,28.4mmol)在CH2Cl2(200ml)中的溶液中先后加入2-(二甲氧基磷酰基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸甲酯(14.48g,56.7mmol)和1,1,3,3-四甲基胍(7.33ml,62.4mmol)。将反应混合物从冷却浴中取出并在～25℃在氮气下搅拌24.5h。将反应混合物用饱和NH4Cl(水溶液,100mL)处理。分离各层并将水层用CH2Cl2(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将粘性油状物用氯仿(5mL)稀释并加载到Thomson硅胶柱(用25％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤a(6.84g)，其为浅黄色粘性油状物。LC/MS:[M+Na]+C16H19NNaO5分析计算值328.12；实测值328.00。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(宽单峰,1H),7.41-7.26(m,5H),4.43(s,2H),4.20-4.10(m,1H),3.65(s,3H),3.56(s,3H),3.35-3.24(m,1H),3.01(ddt,J＝17.4,6.8,3.5Hz,1H),2.96-2.84(m,1H),2.72-2.62(m,1H)。Cap-11步骤b在氮气下向Cap-11步骤a(6.84g,22.40mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中加入10％钯/碳(2.384g,2.240mmol)在MeOH(20mL)中的混悬液。然后将混合物在气囊下暴露于氢气26h。将反应混合物用硅藻土过滤并真空浓缩，得到Cap-11步骤b(4.84g)，其为浅黄色粘性油状物。LC/MS:[M+Na]+C9H15NNaO5分析计算值240.08；实测值240.01。1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ7.40-7.25(m,1H),4.91(s,2H),4.19-3.99(m,2H),3.72(s,3H),3.67(s,3H),2.42-2.25(m,2H),2.24-2.02(m,1H),1.91-1.61(m,1H)。Cap-11步骤c在-78℃在氮气下向DMSO(4.0ml,56.4mmol)在CH2Cl2(70ml)中的溶液中滴加2M草酰氯在CH2Cl2中的溶液(15.3ml,30.6mmol)。将反应混合物搅拌1h。将Cap-11步骤b(4.814g,22.16mmol)在CH2Cl2(35.0ml)中的溶液加到反应混合物中且在-78℃在氮气下保持搅拌。将反应混合物搅拌1.5h。将三乙胺(15.5ml,111mmol)滴加到反应混合物中且将反应混合物在-78℃在氮气下保持搅拌。将反应混合物搅拌16h。将反应混合物用冷的20％K2HPO4(水溶液)(50mL)和水(50mL)淬灭。将混合物在～25℃搅拌15min。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并分离各层。将水层用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加载到Thomson硅胶柱(用40％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤c(3.71g)，其为浅黄色粘性油状物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(d,J＝8.0Hz,1H),4.27(t,J＝8.4Hz,1H),3.65(s,3H),3.57(s,3H),3.16,2.86(m,4H),2.82-2.61(m,1H)。Cap-11步骤d将甲基三苯基溴化鏻(3g,8.40mmol)和叔丁醇钾(1g,8.91mmol)在1,4-二噁烷(35mL)中的混合物在40℃在氮气下加热3h。将反应混合物从热环境中取出并在冷却浴中冷却至10℃。滴加Cap-11步骤c(1.48g,6.88mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的溶液并将反应混合物继续在10℃在氮气下搅拌45h。真空除去所有溶剂。将残余物吸收在乙酸乙酯(50mL)和饱和NH4Cl(水溶液,50mL)中。分离各层并将水层再用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用饱和NaCl(水溶液,50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物吸收在CHCl3(1mL)中并加载到Thomson硅胶柱(用～4L5％至15％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤d(533mg)，其为无色粘性油状物且在静置后固化成白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.21(d,J＝7.8Hz,1H),4.83-4.74(m,2H),4.41(t,J＝7.7Hz,1H),3.74(s,3H),3.70(s,3H),2.82-2.52(m,5H)。Cap-11步骤e在0℃在氮气下向CH2Cl2(2.5ml)中加入1M二乙基锌在己烷中的溶液(6.69ml,6.69mmol)，然后历时10min滴加三氟乙酸(在1mLCH2Cl2中)(0.516ml,6.69mmol)。1h后，历时10min滴加二碘甲烷(在1mLCH2Cl2中)(0.540ml,6.69mmol)，然后滴加Cap-11步骤d(在1mLCH2Cl2中)(0.2378g,1.115mmol)。加入后，将反应混合物从冷却浴中取出并在～25℃在氮气下搅拌12.5h。将反应混合物用0.1NHCl(水溶液,50mL)淬灭。将产物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加载到Thomson硅胶柱(用15％乙酸乙酯/己烷洗脱)上，得到Cap-11步骤e(206.1mg,81％产率)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(d,J＝7.8Hz,1H),4.08(dd,J＝9.5,8.0Hz,1H),3.62(s,3H),3.56(s,3H),2.76-2.57(m,1H),2.11-2.00(m,3H),2.00-1.90(m,1H),0.48-0.28(m,4H)。Cap-11(外消旋混合物)在～25℃向Cap-11步骤e(0.2804g,1.234mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中加入氢氧化锂(0.035g,1.481mmol)在水(2mL)中的溶液。将反应混合物搅拌4h，真空除去所有挥发物组分。将残余物用水(25mL)稀释并用6NHCl酸化至pH～1-2。将产物用乙酸乙酯(3×25mL)萃取，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap-11(258.1mg)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),7.48(d,J＝8.3Hz,1H),3.99(dd,J＝9.3,8.3Hz,1H),3.55(s,3H),2.74-2.57(m,1H),2.17-1.89(m,4H),0.49-0.25(m,4H)。Cap-12(外消旋混合物)向Cap-11步骤d(0.200g,0.938mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中滴加氢氧化锂(0.027g,1.126mmol)在水(1.5mL)中的溶液。将反应混合物在～25℃搅拌6h。真空除去所有挥发物组分。将残余物用水(10mL)稀释并用6NHCl酸化至pH～1-2。将产物用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到Cap-12(178mg)，其为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),4.75(宽单峰,2H),3.95(t,J＝8.2Hz,1H),3.55(s,3H),2.76-2.51(m,4H),2.51-2.42(m,1H)。Cap13.1和13.2Cap13步骤a在氮气下将三氟硼酸(二乙基)[(diethyloxonio)trifluoroborate](3.64mL,29.0mmol)滴加(历时10min)到环丙烷甲醛(4.25mL,56.9mmol)和(E)-((4-甲氧基丁-1,3-二烯-2-基)氧基)三甲基甲硅烷(4.90g,28.4mmol)在Et2O(100mL)中的溶液(所述溶液已被冷却至-78℃)中。将反应混合物在-78℃搅拌2.5h，然后加入饱和NaHCO3(水溶液)(50mL)且使反应混合物缓慢达到室温并搅拌过夜。分离各层，将水层用Et2O(100mL)萃取并将合并的有机层用盐水(～50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗橙色油状物。将粗油状物用BiotageHorizon(80gSiO2,0-30％EtOAC/己烷)纯化，得到Cap13步骤a(2.826g)，其为黄色油状物。物质无需进一步纯化即使用。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.37(d,J＝6.0Hz,1H),5.40(dd,J＝6.0,1.0Hz,1H),3.70(ddd,J＝13.1,8.8,3.8Hz,1H),2.74-2.63(m,1H),2.60-2.52(m,1H),1.24-1.14(m,1H),0.75-0.61(m,2H),0.54-0.46(m,1H),0.35-0.28(m,1H)。Cap13步骤b将Cap13步骤a(800mg,5.79mmol)溶解在甲醇(50mL)中，然后用10％Pd/C(185mg,0.174mmol)处理。将反应混合物搅拌并先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗。然后将反应混合物在氢气气囊下搅拌2h。将硅藻土加到反应混合物中并搅拌，然后将反应混合物用硅藻土过滤并浓缩，得到粗油状物。将粗油状物用BiotageHorizon(25gSiO2,0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到Cap13步骤b(650mg,掺杂有25％w/wEtOAc)，其为无色非粘性油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.92(ddd,J＝11.5,5.1,1.8Hz,1H),3.56-3.45(m,1H),3.23(s,3H),3.16(s,3H),2.70(ddd,J＝11.2,8.7,2.1Hz,1H),2.10(dt,J＝13.4,2.6Hz,1H),1.93-1.84(m,1H),1.68-1.57(m,1H),1.46(dd,J＝13.3,11.5Hz,1H),0.96-0.85(m,1H),0.63-0.45(m,2H),0.37(dq,J＝9.4,4.8Hz,1H),0.19(dq,J＝9.5,4.8Hz,1H)。Cap13步骤c将Cap13步骤b(650mg,2.65mmol,掺杂有25％w/wEtOAc)溶解在THF(7mL)中，然后用1.5MHCl(水溶液)(7.07mL,10.61mmol)处理并搅拌30min。将反应混合物用盐水(～30mL)稀释，用DCM(3×25mL)萃取并将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到Cap13步骤c(543mg,掺杂有12％w/wTHF及其它次要杂质)，其为澄清无色油状物。物质无需进一步纯化即使用。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.31(ddd,J＝11.5,7.4,1.6Hz,1H),3.67-3.57(m,1H),2.98-2.88(m,1H),2.68-2.42(m,3H),2.37-2.28(m,1H),1.03(qt,J＝8.1,4.8Hz,1H),0.69-0.52(m,2H),0.49-0.40(m,1H),0.30-0.21(m,1H)。Cap13步骤d.1和d.2将2-异氰基乙酸乙酯(390mg,3.45mmol)用Et2O(15mL)稀释，然后用氧化亚铜(76mg,0.530mmol)处理。将浆液搅拌10min，然后加入Cap13步骤c(371mg,2.65mmol)在Et2O(10mL)中的溶液并将反应混合物在室温搅拌3h。然后将反应混合物冷却至0℃，用1M叔丁醇钾(3.45mL,3.45mmol)在THF中的溶液逐滴处理并在0℃搅拌1h。加入乙酸(0.197mL,3.45mmol)在DCM(2mL)中的溶液且将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将粗反应混合物用水(～20mL)稀释并用EtOAc(3×25mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到深红色油状物。将油状物用BiotageHorizon(25gSiO2,50-75％EtOAc/己烷)纯化，得到外消旋的Cap13步骤d.1((Z)-异构体；250mg)和Cap13步骤d.2((E)-异构体；243mg)，其各自为灰白色固体。基于NOE研究来进行E/Z归属。Cap13步骤d.1：LC-MS保留时间1.007min；m/z254.2(MH+)。1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.10(s,1H),4.20(q,J＝7.0Hz,2H),4.08(ddd,J＝11.2,5.6,1.8Hz,1H),3.45-3.36(m,1H),3.35-3.29(m,1H),2.75-2.67(m,2H),2.30(ddd,J＝13.9,12.4,5.5Hz,1H),2.07(dd,J＝14.1,11.0Hz,1H),1.34-1.22(m,3H),0.95(qt,J＝8.1,4.8Hz,1H),0.57-0.47(m,2H),0.40-0.23(m,2H)。Cap13步骤d.2：LC-MS保留时间1.067min；m/z254.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为2min，保持时间为1min，分析时间为3min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.08(s,1H),4.21(q,J＝7.0Hz,2H),4.08(ddd,J＝11.1,5.6,1.9Hz,1H),3.51(dt,J＝14.0,2.0Hz,1H),3.42(td,J＝11.5,2.5Hz,1H),2.70(ddd,J＝10.6,8.2,2.3Hz,1H),2.49(dq,J＝14.1,2.2Hz,1H),2.26-2.12(m,2H),1.34-1.24(m,3H),0.96(qt,J＝8.1,4.9Hz,1H),0.58-0.49(m,2H),0.37(dddd,J＝7.8,6.3,3.0,1.3Hz,1H),0.26(dddd,J＝5.2,4.0,2.9,1.4Hz,1H)。Cap13步骤e.1和e.2将外消旋的Cap13步骤d.1(625mg)溶解在16mLEtOH中并以多次注射的形式通过制备型手性HPLC(ChiralPakAS柱,10％EtOH/庚烷/0.1％二乙胺)来分离，得到Cap13步骤e.1(450mg,第一洗脱峰)和Cap13步骤e.2(360mg,第二洗脱峰)，其各自为灰白色固体。对映异构体清楚地分开且虽然每种样品如LC/MS和手性分析型HPLC所示是洁净的，但是根据1HNMR仍存在未鉴定的杂质。每种物质无需进一步纯化即使用。1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.08(s,1H),4.21(q,J＝7.0Hz,2H),4.08(ddd,J＝11.1,5.6,1.9Hz,1H),3.51(dt,J＝13.9,2.1Hz,1H),3.46-3.38(m,1H),2.70(ddd,J＝10.7,8.2,2.3Hz,1H),2.49(dq,J＝14.1,2.2Hz,1H),2.26-2.12(m,2H),1.34-1.22(m,3H),0.96(qt,J＝8.2,5.0Hz,1H),0.58-0.48(m,2H),0.37(dddd,J＝7.7,6.3,2.9,1.4Hz,1H),0.28-0.22(m,1H)。Cap13步骤f.1和f.2在帕尔振摇器500mL反应容器中将Cap13步骤e.1(310mg,掺杂有未知的杂质)溶解在MeOH(20mL)中，然后加入(-)-1,2-二((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊烷-1-基)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(17.0mg,0.031mmol)。将氮气鼓泡通过反应混合物10min，然后将反应混合物先后用氮气(4×)和氢气(4×)抽空冲洗。然后将反应混合物在60psi氢气下振摇2.5天。将反应混合物浓缩，得到棕黄色油状物，然后用BiotageHorizon(12gSiO2,60-80％EtOAc/Hex)纯化，得到Cap13步骤f.1(201mg)，其为澄清无色油状物。LC-MS保留时间1.681min；m/z256.25(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。通过1HNMR，物质以酰胺旋转异构体的12:1混合物形式存在。主要旋转异构体：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),6.09(d,J＝7.8Hz,1H),4.88(t,J＝8.7Hz,1H),4.25(q,J＝7.0Hz,2H),3.89-3.72(m,2H),2.89(ddd,J＝9.5,6.2,3.9Hz,1H),2.32-2.20(m,1H),1.80-1.70(m,1H),1.69-1.58(m,2H),1.50(dt,J＝6.8,3.4Hz,1H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H),1.13-1.03(m,1H),0.63-0.49(m,2H),0.44-0.35(m,1H),0.18-0.10(m,1H)。按照上述程序由Cap13步骤e.2制备Cap13步骤f.2(无色油状物)。LC-MS保留时间1.753min；m/z256.25(MH+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H),6.16(d,J＝8.8Hz,1H),4.72(dd,J＝8.9,4.6Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),4.09-4.02(m,1H),3.41-3.29(m,1H),2.54(ddd,J＝10.9,8.5,2.0Hz,1H),2.15-2.04(m,1H),1.80(dd,J＝13.2,1.9Hz,1H),1.49-1.42(m,2H),1.32(t,J＝7.2Hz,3H),0.94-0.82(m,1H),0.60-0.45(m,2H),0.39-0.31(m,1H),0.21-0.13(m,1H)。基于所选THP质子的NMR偶合级数对反式立体异构体(Cap13步骤f.1)和顺式立体异构体(Cap13步骤f.2)进行试验性归属。Cap13步骤g将Cap13步骤f.1(213mg,0.834mmol)溶解在MeOH(5mL)中，然后加入1.5MHCl(1.11mL,1.67mmol)并将反应混合物用隔膜密封，然后将隔膜用针刺穿并开放于空气。然后将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物浓缩，溶解在DCM(5mL)中，然后用DIPEA(0.583mL,3.34mmol)和氯甲酸甲酯(0.13mL,1.7mmol)处理并在室温搅拌3h。将反应混合物用水(～5mL)淬灭，搅拌，分离并将水层再用DCM(3×5mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗浅棕色油状物用BiotageHorizon(12gSiO2,25-25％EtOAc/己烷)化，得到Cap13步骤g.1(131mg)。LC-MS保留时间2.020min；m/z286.2(MH+)。在配备有Phenomenex-Luna3μC182.0×50mm柱且使用检测波长为220nm的SPD-10AVUV-Vis检测器的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4min，保持时间为1min，分析时间为5min，其中溶剂A为10％乙腈/90％H2O/0.1％三氟乙酸且溶剂B为10％H2O/90％乙腈/0.1％三氟乙酸。使用针对LC的MicromassPlatform(电喷雾模式)来确定MS数据。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.17(d,J＝9.3Hz,1H),4.49(t,J＝8.7...