HPV检测试剂盒及检测方法与流程

文档序号:12609725阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种HPV检测试剂盒,其特征在于,包括微载体、检测探针及扩增引物;

所述微载体至少有一种,所述微载体具有编码信息,且针对不同HPV亚型的所述微载体的编码信息不同;

所述检测探针选自:针对HPV 6亚型的序列为SEQ ID No.1的寡核苷酸探针、针对HPV 11亚型的序列为SEQ ID No.2的寡核苷酸探针、针对HPV 16亚型的序列为SEQ ID No.3的寡核苷酸探针、针对HPV 18亚型的序列为SEQ ID No.4的寡核苷酸探针、针对HPV 26亚型的序列为SEQ ID No.5的寡核苷酸探针、针对HPV 31亚型的序列为SEQ ID No.6的寡核苷酸探针、针对HPV 33亚型的序列为SEQ ID No.7的寡核苷酸探针、针对HPV 35亚型的序列为SEQ ID No.8的寡核苷酸探针、针对HPV 39亚型的序列为SEQ ID No.9的寡核苷酸探针、针对HPV 40亚型的序列为SEQ ID No.10的寡核苷酸探针、针对HPV 42亚型的序列为SEQ ID No.11的寡核苷酸探针、针对HPV 43亚型的序列为SEQ ID No.12的寡核苷酸探针、针对HPV 44亚型的序列为SEQ ID No.13的寡核苷酸探针、针对HPV 45亚型的序列为SEQ ID No.14的寡核苷酸探针、针对HPV 51亚型的序列为SEQ ID No.15的寡核苷酸探针、针对HPV 52亚型的序列为SEQ ID No.16的寡核苷酸探针、针对HPV 53亚型的序列为SEQ ID No.17的寡核苷酸探针、针对HPV 54亚型的序列为SEQ ID No.18的寡核苷酸探针、针对HPV 55亚型的序列为SEQ ID No.19的寡核苷酸探针、针对HPV 56亚型的序列为SEQ ID No.20的寡核苷酸探针、针对HPV 58亚型的序列为SEQ ID No.21的寡核苷酸探针、针对HPV 59亚型的序列为SEQ ID No.22的寡核苷酸探针、针对HPV 61亚型的序列为SEQ ID No.23的寡核苷酸探针、针对HPV 66亚型的序列为SEQ ID No.24的寡核苷酸探针、针对HPV 68亚型的序列为SEQ ID No.25的寡核苷酸探针、针对HPV 70亚型的序列为SEQ ID No.26的寡核苷酸探针、针对HPV 73亚型的序列为SEQ ID No.27的寡核苷酸探针、针对HPV 81亚型的序列为SEQ ID No.28的寡核苷酸探针、针对HPV 82亚型的序列为SEQ ID No.29的寡核苷酸探针以及针对HPV 83亚型的序列为SEQ ID No.30的寡核苷酸探针中的至少一种;且 所述检测探针包覆对应的HPV亚型的微载体;

所述扩增引物与所述检测探针对应,所述扩增引物包括选自:针对HPV 6亚型、HPV 11亚型、HPV 16亚型、HPV 18亚型、HPV 26亚型、HPV 31亚型、HPV 33亚型、HPV 35亚型、HPV 39亚型、HPV 40亚型、HPV 42亚型、HPV 43亚型、HPV 44亚型、HPV 45亚型、HPV 51亚型、HPV 52亚型、HPV 53亚型、HPV 54亚型、HPV 55亚型、HPV 56亚型、HPV 58亚型、HPV 59亚型、HPV 61亚型、HPV 66亚型、HPV 68亚型、HPV 70亚型、HPV 73亚型、HPV 81亚型、HPV 82亚型以及HPV 83亚型中的至少一种HPV亚型的保守区序列设计的上游引物和下游引物,且所述下游引物的5’端连接有标记物。

2.如权利要求1所述的HPV检测试剂盒,其特征在于,所述检测探针包括序列为SEQ ID No.1~SEQ ID No.30的30种寡核苷酸探针,所述上游引物包括序列为SEQ ID No.33~SEQ ID No.50的18种上游引物,所述下游引物包括序列为SEQ ID No.51~SEQ ID No.61的11种下游引物。

3.如权利要求1或2所述的HPV检测试剂盒,其特征在于,所述微载体的表面经羧化作用处理,所述检测探针的5’端连接有氨基,所述微载体与所述检测探针通过活化羧基与氨基反应结合。

4.如权利要求1或2所述的HPV检测试剂盒,其特征在于,所述检测探针还包括序列为SEQ ID No.31的寡核苷酸探针和序列为SEQ ID No.32的寡核苷酸探针中的至少一种。

5.如权利要求4所述的HPV检测试剂盒,其特征在于,所述扩增引物还包括序列为SEQ ID No.62的上游引物和序列为SEQ ID No.63的下游引物。

6.如权利要求5所述的HPV检测试剂盒,其特征在于,所述扩增引物还包括序列为SEQ ID No.64的上游引物和序列为SEQ ID No.65的下游引物。

7.一种HPV检测方法,其特征在于,使用如权利要求1~6中任一项所述的HPV检测试剂盒,所述HPV检测方法包括如下步骤:

对待测样本使用所述扩增引物进行PCR扩增,得到扩增产物;

对所述扩增产物进行变性处理;

于多孔板的微孔中加入微载体及变性处理后的扩增产物进行杂交反应,所 述微载体的表面包覆有所述检测探针,且对应每种所述HPV亚型,所述微载体的编码信息与所述检测探针一一对应;

向所述微孔中加入能够与所述标记物相结合的荧光标记物,使扩增产物5’端的标记物与该荧光标记物反应结合;

清洗所述多孔板后,使用影像识别系统辨识所述微载体的编码信息,并检测对应的标记信号,经分析处理得到检测结果。

8.如权利要求7所述的HPV检测方法,其特征在于,还包括将HPV阳性标准品和阴性标准品加入至所述微孔中,进行与所述待测样本同样操作的阳性对照实验和阴性对照实验的步骤。

9.如权利要求7或8所述的HPV检测方法,其特征在于,所述标记物为生物素,所述荧光标记物为链霉亲和素标记的藻红荧光蛋白;所述检测对应的标记信号是使用荧光亮度检测组件检测并量化所述微载体上的荧光信号。

10.如权利要求7或8所述的HPV检测方法,其特征在于,所述影像识别系统为PlexBio100;所述分析处理是使用PlexBio100的软件系统DeXipher进行分析处理。

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