1.一种采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于,其包括以下步骤:
(1)提取待测样品DNA:向待测样品中加入CTAB抽提缓冲液,按照常规CTAB法提取DNA;
(2)建立LAMP反应体系:在PCR管中制备25μl反应体系,其包括5pmol/μl的外引物F31μl、5pmol/μl的外引物B31μl、40pmol/μl的内引物FIP 1μl、40pmol/μl的内引物BIP 1μl、反应缓冲液2.5μl、8U/μl的Bst DNA聚合酶1μl、模板DNA 2μl,加水补充至25μl,并以阴道加德纳菌基因组DNA作为阳性对照,以100mM Tris-HCl pH 8.0和50mM EDTA作为阴性对照;
(3)LAMP反应:将步骤(2)中的PCR管于63℃恒温反应60min;
(4)分析判断反应产物结果:在(3)中所得反应产物中加入1μl核酸染料,如反应液颜色为橙色,表示结果为阴性,如反应液颜色为绿色,表示结果为阳性;
所述检测试剂盒包括针对阴道加德纳菌保守区域设计的引物、反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和核酸染料,其中所述引物的核苷酸序列如下所示:
外引物F3:ATAGCTCTTGGAAACGGGTG(SEQ ID NO:1)
外引物B3:CGCAATATTCCCCACTGCTG(SEQ ID NO:2)
内引物FIP:ACCCCATCCCATGCCACTAAAC-AATGCTGGATGCTCCAACTT(SEQ ID NO:3)
内引物BIP:ACCTAGGCTTCGACGGGTAGC-TGGGCCGTATCTCAGTCC(SEQ ID NO:4)。
2.根据权利要求1所述的采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于:
所述外引物F3和所述外引物B3的浓度均为5pmol/μl,所述内引物FIP和所述内引物BIP的浓度均为40pmol/μl。
3.根据权利要求1所述的采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于:
所述反应缓冲液由10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、50mM MgSO4和5mM甜菜碱组成。
4.根据权利要求1所述的采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于:
所述Bst DNA聚合酶的浓度为8U/μl。
5.根据权利要求1所述的采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于:
所述核酸染料为1000×SYBR Green I。
6.根据权利要求1所述的采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于:
所述试剂盒包括DNA提取试剂以及阳性对照和阴性对照。
7.根据权利要求6所述的采用检测试剂盒对细菌性阴道炎进行检测的方法,其特征在于:
所述DNA提取试剂是CTAB抽提缓冲液,其由100mM Tris-HCl pH8.0、50mM EDTA、1M NaCl、1%(v/v)β-巯基乙醇、2%CTAB组成,pH 7.0-7.5。