1.一种基于耐热核酸酶HII的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,具体步骤如下:
第一步,制备中间带一个核糖核苷酸的分子信标;
制备的分子信标的中间带一个核糖核苷酸,中间的核苷酸和检测样本DNA配对,两侧的6个核苷酸彼此配对,两侧分别用荧光发射基团和荧光淬灭基团标记,整个分子信标形成茎环结构;
第二步,检测反应体系的建立
将扩增检测样本DNA的引物序列、dNTP、Taq DNA聚合酶,Tth核酸酶HII、中间带一个核糖核苷酸的分子信标、检测样本DNA加入Taq酶催化的反应体系中,配制反应混合物;
第三步,荧光信号放大反应
将第二步中的反应混合物,放入荧光定量PCR仪中,定量荧光信号,进行PCR扩增和基因分型检测;
第四步,确定基因多态性
根据不同样本间荧光信号的差异,确定检测样本待测位点的单核苷酸多态性。
2.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第一步中,荧光发射基团为FAM或者TET;荧光淬灭基团为DACBYL或BHQ。
3.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第一步中,制备的分子信标长31-41个核苷酸。
4.根据权利要求1或3所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第一步中,制备的分子信标长33-35个核苷酸。
5.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第二步中,核酸酶HII为Tth核酸酶HII、Ape核酸酶HII或Pfu核酸酶中任一种。