一种基于耐热核酸酶HII的单核苷酸多态性检测方法与流程

文档序号:12412833阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于耐热核酸酶HII的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,具体步骤如下:

第一步,制备中间带一个核糖核苷酸的分子信标;

制备的分子信标的中间带一个核糖核苷酸,中间的核苷酸和检测样本DNA配对,两侧的6个核苷酸彼此配对,两侧分别用荧光发射基团和荧光淬灭基团标记,整个分子信标形成茎环结构;

第二步,检测反应体系的建立

将扩增检测样本DNA的引物序列、dNTP、Taq DNA聚合酶,Tth核酸酶HII、中间带一个核糖核苷酸的分子信标、检测样本DNA加入Taq酶催化的反应体系中,配制反应混合物;

第三步,荧光信号放大反应

将第二步中的反应混合物,放入荧光定量PCR仪中,定量荧光信号,进行PCR扩增和基因分型检测;

第四步,确定基因多态性

根据不同样本间荧光信号的差异,确定检测样本待测位点的单核苷酸多态性。

2.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第一步中,荧光发射基团为FAM或者TET;荧光淬灭基团为DACBYL或BHQ。

3.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第一步中,制备的分子信标长31-41个核苷酸。

4.根据权利要求1或3所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第一步中,制备的分子信标长33-35个核苷酸。

5.根据权利要求1所述的单核苷酸多态性检测方法,其特征在于,第二步中,核酸酶HII为Tth核酸酶HII、Ape核酸酶HII或Pfu核酸酶中任一种。

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