棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢发酵培养基及其培养方法和优化方法与流程

文档序号:12096990阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢发酵培养基,其特征在于:培养基组分及质量配比为:氮源:1%-2%,碳源:1%-2%,NaH2PO4·2H2O:0.2%,Na2HPO4·2H2O:0.4%,其他无机盐:0.02%-0.1%,其中其他无机盐为CaCO3、K2HPO4和MnSO4·H2O中的至少一种,其余为蒸馏水,pH为6.0-8.0。

2.根据权利要求1所述的棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢发酵培养基,其特征在于,所述的氮源为牛肉膏、大豆蛋白胨和豆饼粉中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢发酵培养基,其特征在于,所述的碳源为玉米粉、麦芽糖和葡萄糖中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢发酵培养基,其特征在于,所述的培养基组分及质量配比为:大豆蛋白胨:1.51%,玉米粉:1.31%,CaCO3:0.08%,NaH2PO4·2H2O:0.2%,Na2HPO4·2H2O:0.4%,其余为蒸馏水,pH为7.0。

5.一种棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)将斜面保存的棉花黄萎病生防芽孢杆菌菌株接种于NA培养基平板上,28-35℃培养14-20h,得到活化的菌株;

2)将所述活化的菌株接种于NB培养基中,28-35℃、180-220r·min-1振荡培养12-16h,得到种子液;

3)将所述的种子液接种于发酵培养基中培养,其中,所述的种子液和发酵培养基的体积比为3%-7%;所述的发酵培养基的组分及质量配比为:氮源:1%-2%,碳源:1%-2%,NaH2PO4·2H2O:0.2%,Na2HPO4·2H2O:0.4%,其他无机盐:0.02%-0.1%,其中其他无机盐为CaCO3、K2HPO4和MnSO4·H2O中的至少一种,其余为蒸馏水;其中,发酵培养条件为:转速为180-220r·min-1,培养温度为25-35℃,培养时间为60-96h,培养基初始pH为6.0-8.0,培养基的装液量为60-80mL/200mL。

6.根据权利要求5所述的棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢培养方法,其特征在于,所述的发酵培养基组分及质量配比为:大豆蛋白胨:1.51%,玉米粉:1.31%,CaCO3:0.08%,NaH2PO4·2H2O:0.2%,Na2HPO4·2H2O:0.4%,其余为蒸馏水。

7.根据权利要求5所述的棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢培养方法,其特征在于,所述的发酵培养条件为:转速为200r·min-1,培养温度为35℃,培养时间为84h,培养基初始pH为7.0,培养基的装液量为60mL/200mL。

8.根据权利要求5所述的棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢的培养方法,其特征在于,所述的种子液和发酵培养基的体积比为5%。

9.一种棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢发酵培养基的优化方法,其特征在于:包括以下步骤:通过单因素实验确定影响棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢培养基的碳源、氮源和无机盐的考察因素,采用Plackett-Burman实验设计确定影响棉花黄萎病生防芽孢杆菌产芽孢的主要因素为玉米粉、大豆蛋白胨、CaCO3;根据Plackett-Burman实验结果,采用Box-Behnken实验设计方法获得最佳制备花黄萎病生防芽孢杆菌产生芽孢培养基为:玉米粉:13.1g,大豆蛋白胨:15.1g,CaCO3:0.8g,NaH2PO4·2H2O:2g,Na2HPO4·2H2O:4g,蒸馏水定容至1000mL。

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