本发明属于医药技术领域；具体涉及一类具有抗肿瘤活性的nampt/hdac双靶点抑制剂及其药用制剂在治疗恶性肿瘤及与分化增殖相关疾病药物方面的应用。
背景技术：
多靶点药物可以同时调节肿瘤疾病网络系统中的多个环节，不易产生耐药性，对各靶点作用的总效应大于单个效应之和，达到最佳的治疗效果。此外，单个分子拥有相对简单的吸收、分布、代谢和排泄过程，大大减少药物-药物相互作用(peters，j.，etal.j.med.chem.2013，56，8955-8971)。fda先后批准了多个多靶点酪氨酸激酶抑制剂上市，包括索拉非尼(sorafenib)、达沙替尼(dasatinib)和拉帕替尼(lapatinib)等，标志着多靶点药物已经成为肿瘤治疗和药物研发的新方向。
组蛋白的乙酰化/去乙酰化是染色体结构改变和基因表达的重要调节方式，在细胞凋亡、能量代谢、转录和翻译等生命过程中发挥重要作用。组蛋白的乙酰化和去乙酰化修饰过程主要由组蛋白乙酰化酶(histoneacetylases，hats)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases，hdacs)共同催化完成。在前列腺癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌和白血病等肿瘤细胞中，hdacs表达异常升高，针对hdac开展小分子药物研发，已经成为目前抗肿瘤靶向治疗的热点。按结构类型hdac抑制剂主要分为两类：异羟肟酸类和酰胺类。代表化合物分别为vorinostat(saha)和ci-994。saha经美国fda批准进入临床用于治疗血液癌症；ci-994目前正在进行临床ii期实验研究。此外，尚有多个hdac抑制剂正在开展临床实验。然而，单一靶向hdac的药物对实体瘤缺乏有效的治疗。hdac与多个肿瘤靶点具有协同抗肿瘤的功效，例如微观蛋白(tubulin)和热休克蛋白90(hsp90)等，发展基于hdac的多靶点药物成为提高抗肿瘤疗效、降低肿瘤耐药的有效手段。
近年来，针对代谢靶点开展药物研发已经成为抗肿瘤药物发现的重要手段和行之有效的策略。烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase，nampt)则是其中极具代表性的代谢类靶点。nampt催化烟酰胺(nicotinamide，nam)生成烟酰胺单核苷酸(nicotinamindemononucleotide，nmn)，调控哺乳动物细胞必需能量物质nad的水平，是nad生成途径的限速酶，在细胞生理活动中起着至关重要的作用。研究表明，nampt与肿瘤的发生和发展密切相关，已经成为抗肿瘤药物研究中一个非常重要的新靶点：1)肿瘤细胞具有很高的nad消耗和代谢速率，肿瘤细胞比正常细胞对nad的依赖性更强，更容易受到nampt抑制剂的影响；2)在肿瘤细胞中nad作为必需的辅酶参与多种肿瘤必需物质的合成，而且，nad能够显著降低环境中活性氧自由基(reactiveoxygenspecies，ros)水平，保护肿瘤细胞；3)nampt在血管新生、诱导血管内皮生长因子生成中起到重要的作用。目前有研究报道的nampt抑制剂有fk866和chs-828，两者均已进入临床研究。临床数据显示，两者存在着剂量依赖的血小板减少症和胃肠道副作用，尚需要进一步改善。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一类酰胺类高效低毒的hdac/nampt双靶点抑制剂及其药学上可接受的盐；本发明的另一目的是提供该类hdac/nampt双靶点抑制剂及其药学上可接受的盐的制备方法；本发明的第三目的是提供该类hdac/nampt双靶点抑制剂及其药学上可接受的盐在制备nampt抑制剂、hdac抑制剂和抗肿瘤药物中的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
本发明的第一方面，是提供一种酰胺类衍生物及其药学上可接受的盐，该化合物的结构通式如式(i)所示：
其中，a基团选自(1)～(4)中任意一种：
(1)苯基或取代苯基
取代苯基苯环上的取代基可位于苯环的邻位、间位和对位，可以是单取代，也可以是多取代，取代基选自以下任意一种或几种：
a、卤素原子(包括f、cl、br、i)，
b、1-6个碳原子的直链烷基或3-6个碳原子的支链烷基，(优选的，所述1-6个碳原子的直链烷基包括甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基；所述3-6个碳原子的支链烷基包括异丙基、异丁基、叔丁基、异戊基、叔戊基)，
c、羟基、氰基、氰基甲基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、乙酰基；
(2)吡啶基或取代吡啶基
取代吡啶上取代基可位于吡啶环任何可取代位置，可以是单取代，也可以是多取代，取代基选自以下任意一种或几种：
a、卤素原子(包括f、cl、br、i)，
b、1-6个碳原子的直链烷基或3-6个碳原子的支链烷基，(优选的，所述1-6个碳原子的直链烷基包括甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基；所述3-6个碳原子的支链烷基包括异丙基、异丁基、叔丁基、异戊基、叔戊基)，
c、羟基、氰基、氰基甲基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、乙酰基；
(3)五元杂环或取代五元杂环(五元杂环指呋喃、噻吩、吡咯基因)
五元杂环上的取代基可位于任何可取代位置，可以是单取代，也可以是多取代，取代基选自以下任意一种或几种：
a、卤素原子(包括f、cl、br、i)，
b、1-6个碳原子的直链烷基或3-6个碳原子的支链烷基，(优选的，所述1-6个碳原子的直链烷基包括甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基；所述3-6个碳原子的支链烷基包括异丙基、异丁基、叔丁基、异戊基、叔戊基)，
c、羟基、氰基、氰基甲基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、乙酰基；
(4)五元或六元环组成的骈基和二环杂环基；
e基团选自以下基团中的一种：
x基团选自以下基团中的一种：
其中，r1指的是单取代或多取代，选自以下任意一种或几种：
a.h，
b.卤素原子(f、cl、br、i)，
g.1-6个碳原子的直链烷基或3-6个碳原子的支链烷基，(优选的，所述1-6个碳原子的直链烷基包括甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基；所述3-6个碳原子的支链烷基包括异丙基、异丁基、叔丁基、异戊基、叔戊基)，
h.羟基、氰基、氰基甲基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、乙酰基；
y为碳原子或者氮原子；
z基团选自a～d中任意一种：
a.h
b.卤素原子(f、cl、br、i)
c.苯环或六元杂环
d.五元杂环(包括吡咯、呋喃、噻吩基团)
优选的，所述五元或六元环组成的骈基和二环杂环基，包含：
优选的，所述的药学上可接受的盐，较优的是：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、乙酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、鞣酸盐、枸橼酸盐、三氟醋酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、对甲苯磺酸盐或甲磺酸盐；
优选的，所述的药学上可接受的盐，不含结晶水，或含一个或一个以上分子的结晶水。
更优选的，所述的药学上可接受的盐含0.5-3.0分子的结晶水。
具有分化和抗增殖活性的hdac抑制剂与hdac/nampt双靶点抑制剂及其药用制剂，本发明部分优选化合物包括，但不限于以下：
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氟吡啶-3-基)甲基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(吡啶-3-基甲基)脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氯吡啶-3-基)甲基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氯吡啶-3-基)甲基)脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氟吡啶-3-基)甲基)脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氨基吡啶-3-基)甲基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氨基吡啶-3-基)甲基)脲基)苯甲酰胺
叔丁基(5-((3-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰)苯基)脲基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸酯
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(5-氟吡啶-3-基)甲基)脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-甲基吡啶-3-基)甲基)脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(4-氟苄基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(3-氟苄基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(2-氟苄基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(3-氯苄基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(3-溴苄基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)硫脲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(3-(3-氨基苄基)硫脲基)苯甲酰胺
4-(3-((1h-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)硫脲基)-n-(2-氨基苯基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(2，3-二氯-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)苯甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰基)苄基)噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰)苄基)-1h-吡咯[2，3-c]吡啶-2-甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰)苄基)-1h-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰)苄基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰基)苄基)咪唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰基)苄基)-1h-吡唑并[4，3-b]吡啶-6-甲酰胺
n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰基)苄基)咪唑[1，2-a]吡啶-7-甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-(2-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(吡啶-4-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(6-氯吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(3-氨基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(间甲苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
4-((4-(4-乙酰基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)-n-(2-氨基苯基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(噻吩-2-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(4-氨-[1，1′-联苯]-3-基)-4-((5-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(4-氨基-[1，1′-联苯]-3-基)-4-((5-(3-氨基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(4-氨基-[1，1′-联苯]-3-基)-4-((5-(3-羟基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
4-((5-(4-乙酰基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)-n-(4-氨基-[1，1′-联苯]-3-基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(4-(3-(吡啶-3-基甲基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-4-((4-(4-((吡啶-3-基甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺
n-(2-氨基苯基)-8-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺
n-(2-氨基苯基)-8-(4-(3-氨基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺
n-(4-氨基-[1，1′-联苯]-3-基)-8-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺
n-(4-氨基-[1，1′-联苯]-3-基)-8-(4-(3-氨基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺
n-(4-氨基-[1，1′-联苯]-3-基)-8-(4-(3-羟基苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺
上述本发明优选化合物的结构式和核磁质谱数据如表1所示：
表1、本发明优选化合物的结构式和核磁质谱数据
本发明的第二方面，是提供上述酰胺类衍生物及其药学上可接受的盐的制备方法；
反应流程通法一(包括化合物a1-20的合成：)
当结构通式为
(其中，r2为氢、卤素、氨基或叔丁氧羰基氨基)
试剂和条件：(a)兰尼镍，氢气，氨水甲醇溶液，室温，12小时，产率21-89％；(b)cdiortcdi，二氯甲烷，室温，2小时，产率85-95％；(c)四氢呋喃，室温，12小时，产率62-81％；(d)二氯甲烷，室温或70度，2小时，产率60％；(e)四氢呋喃，室温，12小时，产率70％；(f)邻苯二胺，hbtu，三乙胺，dmf，室温，3小时，收率43-75％.
氰基化合物1经兰尼镍催化，在氨水甲醇溶液中氢气还原得到氨基化合物2a。对氨基苯甲酸3与cdi或tcdi室温下反应得到中间体4。化合物2a或2c和4在四氢呋喃中室温反应12小时得到中间体5。化合物2b与3在二氯甲烷中缩合得到中间体5。中间体5在dmf中与邻苯二胺室温反应4小时，经柱层析得到目标化合物a1-20。
反应流程通法二(含化合物b1-7的合成)：
当结构通式为
试剂和条件：(a)r-cooh，edc，dmap，dmf，室温，3小时，产率31-69％；(b)氢氧化锂，四氢呋喃/甲醇/水，室温，24小时，产率82-97％；(c)邻苯二胺，hbtu，三乙胺，dmf，室温，4小时，收率37-75％.
4-胺甲基苯甲酸甲酯7与各种羧酸经edc/dmap催化缩合，得到中间体8。在四氢呋喃/甲醇/水混合溶剂体系中，中间体8经氢氧化锂水解得到相应的羧酸化合物9。化合物9在dmf中与邻苯二胺在室温条件下反应3小时，柱层析得到目标化合物b1-7。
反应流程通法三(含化合物c1-14的合成)：
当结构通式为
试剂和条件：(a)三甲基硅基乙炔，三苯基磷钯，碘化铜，三乙胺，室温，1小时；(b)碳酸钾，甲醇，室温，0.5小时，两步产率32-81％；(c)叠氮化钠，室温，8小时，产率64-85％；(d)中间体13或rcn，硫酸铜，抗坏血酸钠，氮气保护，室温，过夜，产率64-87％；(e)氢氧化锂，四氢呋喃/甲醇/水，室温，24小时，产率71-92％；(f)邻苯二胺或[1，1′-联苯]-3，4-二胺，hbtu，三乙胺，室温，3小时，产率27-72％.
化合物11与三甲基硅基乙炔反应得化合物12，在碱性条件下室温脱三甲基硅基制得化合物13。溴化物14经叠氮化钠取代得到中间体15。中间体15与13或其他炔基化合物发生click反应得到产物16。中间体16在碱性条件下水解，与邻苯二胺或4-苯基邻苯二胺缩合最终获得目标化和物c1-14。
反应流程通法四(含化合物d1-5的合成)：
当通式结构为
试剂和条件：(a)叠氮化钠，dmf，85度，6小时；(b)邻苯二胺或[1，1′-联苯]-3，4-二胺，hbtu，三乙胺，室温，3小时；(c)硫酸铜，抗坏血酸钠，叔丁醇∶水＝5∶1，室温，氮气，24小时。
化合物18与叠氮化钠反应得到中间体19，19与邻苯二胺或4-苯基邻苯二胺在hbtu和三乙胺催化下发生缩合反应得到中间体20。中间体20用含有不同取代基的芳基乙炔发生click反应得到化合物d1-5。
本发明的第三方面，是提供上述的酰胺类衍生物及其药学上可接受的盐在制备烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂或hdac/nampt双靶点抑制剂中的用途。
本发明的化合物经nampt和hdac1活性抑制实验，证明大部分化合物具有较好的nampt和hdac1抑制活性，a2、a3、c1、c2、c9、c13、c14、d1、d2、d3对nampt和hdac1具有平衡抑制活性。
本发明还提供了上述的酰胺类衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
优选的，所述的肿瘤为肝癌、肺癌、肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、淋巴癌等。
本发明的化合物经抗肿瘤活性实验，证明大部分化合物具有较好体外抗肿瘤活性，优选化合物具有优秀的体内肿瘤生长抑制活性。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明通过药效团融合策略合理构建酰胺类hdac/nampt双靶点抑制剂，获得对nampt和hdac1具有平衡抑制活性的高效小分子，实现体内药效的显著提高；为深入研究和开发新结构类型抗肿瘤药物开辟了新的途径，提供了新的策略。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为人体肠癌hct116裸鼠瘤体积变化示意图；其中，(a)肿瘤体积折线图；(b)给药结束后肿瘤解剖图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。本发明所述的百分比出特别说明外，均为重量百分比。
实施例1、n-(2-氨基苯基)-4-(3-(6-氟吡啶-3-基)甲基)硫脲基)苯甲酰胺制备(a1)
1.1制备中间体2：6-氟-3-氨甲基吡啶
将6-氟-3-氰基吡啶(300mg，2.46mmol)溶于的2mol/l氨/甲醇溶液中(30ml)，加入兰尼镍(0.5g)，h2氛围下室温反应12小时。反应完后反应液硅藻土过滤，甲醇冲洗(5ml×2)，滤液蒸干，残留物经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶4)分离纯化，得到黄色油状固体262mg，收率为85％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：8.11-6.84(m，3h)，3.86(s，2h)，1.47(s，2h).
1.2制备中间体4：4-异硫氰基苯甲酸
三乙胺(1.4ml，194mmol)溶于二氯甲烷(12ml)，冰浴下加入硫代羰基二咪唑(2.11g，11.85mmol)和4-氨基苯甲酸(1.25g，11.57mmol)，冰浴下搅拌1小时。浓盐酸(3ml，33.60mmol)滴加至正己烷(12ml)中制得混合溶液，将该混合溶液缓慢滴加至反应液中，室温搅拌3小时。反应完后将反应液置于冰浴中，过滤，滤饼水洗(5ml×2)，得到灰白色固体1.93g，收率为93％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：13.20(brs，1h)，7.52(d，j＝8.7hz，2h)，7.97(d，j＝8.7hz，2h).
1.3制备中间体5：4-(3-((6-氟吡啶-3-基)甲基)硫脲基)苯甲酸
6-氟-3-氨甲基吡啶(133mg，1.06mmol)和4-异硫氰基苯甲酸(189mg，1.06mmol)溶于干燥thf(10ml)，室温条件下反应12小时，反应完后蒸干溶剂得到黄色固体0.26g，收率81％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：10.24(s，1h)，8.75(s，1h)，8.36-8.34(m，2h)，7.87(d，j＝8.5hz，2h)，7.63-7.58(m，3h)，4.80(d，j＝5.4hz，2h).esi-ms(m/s)：287.12[m+1].
1.4制备目标产物a1
4-(3-((6-氟吡啶-3-基)甲基)硫脲基)苯甲酸(90mg，0.30mmol)溶于干燥dmf(5ml)，加入邻苯二胺(32mg，0.30mmol)、hbtu(114mg，0.30mmol)，三乙胺(41μl，0.30mmol)，室温反应4小时。反应后将反应液倒入水中(40ml)，过滤得到粗品。粗品经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶3)得到白色粉末59mg，收率51％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：9.95(s，1h)，9.56(s，1h)，8.46(s，1h)，8.22(s，1h)，8.04-7.88(m，3h)，7.58(d，j＝8.3hz，2h)，7.24-7.10(m，2h)，6.96(t，j＝7.1hz，1h)，6.85-6.72(m，1h)，6.58(t，j＝7.3hz，1h)，4.99-4.72(m，4h).esi-ms(m/s)：396.38[m+1]，394.17[m-1].
其他a系列化合物a2-20制备方法参照实施例1。
实施例2、n-(4-((2-氨基苯基)氨基甲酰基)苯基)味唑[1，2-a]吡啶-7-甲酰胺制备(b7)
2.1制备中间体8：4-((咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲酰胺)甲基)苯甲酸甲酯
将咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸(200mg，1.00mmol)，edc(230mg，1.20mmol)和dmap(146mg，1.20mmol)溶于干燥的dmf(5ml)，室温条件下搅拌0.5小时。再加入4-氨甲基苯甲酸甲酯(165mg，1.00mmol)，继续搅拌2小时。反应完后将反应液倒入十倍量的水中，有固体析出。将固体过滤，滤饼烘干后柱层析获得中间体120mg，收率是37％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：9.21(t，j＝5.7hz，1h)，9.16(s，1h)，8.08(s，1h)，7.90(d，j＝8.3hz，2h)，7.73-7.60(m，3h)，7.44(d，j＝8.4hz，2h)，4.57(d，j＝5.8hz，2h)，3.84(s，3h).esi-ms(m/s)：310.51[m+1]，300.23[m-1].
2.2制备中间体9：4-((咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲酰胺)甲基)苯甲酸
4-((咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(120mg.0.387mmol)溶于thf∶meoh∶h2o为3∶2∶1(6ml)的混合溶剂中。加入lioh(28mg，1.16mmol)，室温条件下反应24小时。反应完后蒸干溶剂，残余物加水(10ml)，用稀盐酸调ph值到3-4，有白色固体析出，过滤后滤饼烘干，得到白色固体产物111mg，收率为97％。1h-nmr(dmso-d6，300hz)δ：12.92(sbr，1h)，9.22(t，j＝5.7hz，1h)，9.17(s，1h)，8.08(s，1h)，7.91(d，j＝8.3hz，2h)，7.72-7.60(m，3h)，7.45(d，j＝8.3hz，2h)，4.57(d，j＝5.7hz，2h).esi-ms(m/s)：296.42[m+1]，294.19[m-1].
2.3制备目标产物b7
4-((咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲酰胺)甲基)苯甲酸(111mg，0.38mmol)、邻苯二胺(45mg，0.41mmol)、hbtu(157mg，0.41mmol)溶于干燥的dmf(3ml)中，滴加三乙胺(60μl，0.41mmol)，然后室温搅拌反应4小时。待反应完全后，将反应液倒入的水中(30ml)，乙酸乙酯萃取(30ml×3)，无水硫酸钠干燥。萃取液蒸干，残余物柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶3)得到白色粉末状固体56mg，收率39％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：9.62(s，1h)，9.22(t，j＝6.1hz，1h)，9.17(s，1h)，8.08(s，1h)，7.94(d，j＝8.4hz，2h)，7.77-7.57(m，3h)，7.45(d，j＝8.2hz，2h)，7.15(d，j＝7.6hz，1h)，6.95(t，j＝6.9hz，1h)，6.76(d，j＝7.1hz，1h)，6.58(t，j＝7.4hz，1h)，4.57(d，j＝4.6hz，2h).13c-nmr(dmso-d6，150mhz)δ：165.57，164.76，144.84，143.55，143.38，143.26，134.37，133.68，129.15，128.27，127.80，127.63，127.15，126.94，124.97，123.79，123.66，120.24，119.59，116.74，116.60，116.40，114.92，110.07，49.06，42.96.esi-ms(m/s)：386.38[m+1]，384.30[m-1].
其他b系列化合物b1-6制备方法参照实施例2。
实施例3、n-(2-氨基苯基)-4-((4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺制备(c1)
3.1制备中间体15：4-叠氮甲基苯甲酸甲酯
4-溴甲基苯甲酸甲酯(342mg，1.5mmol)溶于干燥dmf(5ml)，室温搅拌下缓慢加入nan3(195mg，3mmol)。然后，将反应液置于80℃的油浴中反应8小时。反应结束后将反应液倒入水中(50ml)，乙酸乙酯萃取(50ml×3)，无水硫酸镁干燥。溶剂蒸干即获得中间体4-叠氮甲基苯甲酸甲酯310mg，收率85％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：7.90(d，j＝8.3hz，2h)，7.43(d，j＝8.3hz，2h)，3.83(s，3h)，3.77(t，j＝7.0hz，2h)，3.20(t，j＝7.0hz，2h).esi-ms(m/s)：206.35[m+1].
3.2制备中间体16：4-((4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酸甲酯
3-乙炔基吡啶(154mg，1.5mmol)、4-叠氮甲基苯甲酸甲(287mg，1.5mmol)、vcna(30mg，0.15mmol)和cuso4.5h2o(3.8mg，0.015mmol)溶于叔丁醇/水(1∶1，6ml)混合溶剂中，n2保护条件下室温反应12小时。待反应结束后，将反应液倒入水中(30ml)，有白色固体析出。将混合液过滤，得到滤饼。滤饼经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)得到白色粉末状固体360mg，收率为82％。1h-nmr(dmso-d6，300hz)δ：9.04(d，j＝1.7hz，1h)，8.79(s，1h)，8.53(dd，j＝1.5，4.7hz，1h)，8.21(tt，j＝1.8，7.9hz，1h)，7.97(d，j＝8.2hz，2h)，7.49-7.43(m，3h)，5.78(s，2h)，3.83(s，3h).esi-ms(m/s)：295.35[m+1]，589.39[2m+1].
3.3制备中间体17：4-((4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酸
将中间体16(303mg，1.03mmol)溶于thf∶meoh∶h2o为3∶2∶1的混合溶剂中(12ml)。加入lioh(74mg，3.09mmol)，室温条件下反应24小时。反应完后蒸干溶剂，加入15ml的水溶液，用稀盐酸调ph值至3-4，有白色固体析出，过滤后滤饼烘干，即为产物260mg，收率为90％。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)δ：13.05(s，1h)，9.06(s，1h)，8.80(s，1h)，8.55-8.53(m，1h)，8.23(d，j＝8.0hz，1h)，7.96(d，j＝8.4hz，2h)，7.50-7.43(m，3h)，5.79(s，2h).esi-ms(m/s)：295.35[m+1].
3.4制备目标产物c1
4-((4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酸(250mg，0.89mmol)、邻苯二胺(106mg，0.98mmol)、hbtu(372mg，0.98mmol)溶于dmf(5ml)中，滴加三乙胺(136μl，0.98mmol)，室温搅拌反应4小时。待反应完全后，将反应液倒入水中(40ml)，乙酸乙酯萃取(40ml×3)，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶液，残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶2)得到淡黄色粉末固体88mg，收率27％。1h-nmr(dmso-d6，300hz)δ：9.64(s，1h)，9.06-9.05(d，j＝1.9hz，1h)，8.79(s，1h)，8.53(dd，j＝1.4，4.7hz，1h)，8.21(dt，j＝1.7，7.9hz，1h)，7.98(d，j＝8.1hz，2h)，7.49-7.45(m，3h)，7.14(d，j＝7.8hz，1h)，6.98-6.92(m，1h)，6.77-6.74(m，1h)，6.58(t，j＝7.6hz，1h)，5.77(s，2h)，4.88(s，2h).esi-ms(m/s)：371.29[m+1].
其他c系列化合物c2-14制备方法参照实施例3。
实施例4、n-(2-氨基苯基)-8-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺(d1)
4.1制备中间体20：n-(2-氨基苯基)-8-叠氮基辛酰胺
8-叠氮基辛酸(0.43g，2.32mmol)与邻苯二胺(0.28g，2.55mmol)溶于5mldmf中，依次加入hbtu(1.06g，2.79mmol)与三乙胺1.30ml，室温下搅拌30分钟，待反应完全后，将反应液倾入水中(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机层，干燥，减压旋干，残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶1)得白色固体0.07g，收率92.1％。1h-nmr(dmso-d6，600mhz)δ：1.29-1.33(m，6h)，1.50-1.55(m，2h)，1.55-1.59(m，2h)，2.29(t，j＝7.78hz，2h)，3.31(t，j＝6.91hz，2h)，4.80(s，2h)，6.50-6.55(m，1h)，6.70(dd，j＝7.96hz，1.38hz，1h)，6.85-6.89(m，1h)，7.13(dd，j＝7.83hz，1.51hz，1h)，9.08(s，1h).ms(esi，positive)m/z：276.17[m+h].
4.2制备目标产物d1
化合物20(0.2g，0.726mmol)溶于叔丁醇和水(5∶1)的混合溶剂中(10ml)，n2保护，依次注入cuso4水溶液(1.45ml)和vcna水溶液(7.26ml)，室温下搅拌过夜。待反应完全后，将反应液减压旋干，剩余水层用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机层，溶液蒸干，残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶2)得到白色固体0.16g，收率62％。1h-nmr(dmso-d6，600mhz)δ：1.28-1.35(m，6h)，1.55-1.59(m，2h)，1.85-1.88(m，2h)，2.29(t，j＝7.78hz，2h)，4.41(t，j＝7.08hz，2h)，4.78(s，2h)，6.49-6.53(m，1h)，6.69(dd，j＝7.91hz，1.23hz，1h)，6.85-6.88(m，1h)，7.12(d，j＝6.74hz，1h)，7.46(dd，j＝7.97hz，4.81hz，1h)，8.18-8.20(m，1h)，8.52(dd，j＝4.91hz，1.35hz，1h)，8.70(s，1h)，9.03(d，j＝1.44hz，1h)，9.06(s，1h).ms(esi，positive)m/z：379.22[m+h].
其他d系列化合物d2-5制备方法参照实施例4。
实施例5、n-(2-氨基苯基)-(4-(4-(4-((吡啶-3-撑甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺盐酸盐制备(化合物c14盐酸盐)
将0.1g的n-(2-氨基苯基)-(4-(4-(4-((吡啶-3-撑甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺溶于5ml的热乙醇中，持续通入干燥氯化氢气体。反应搅拌2小时，有白色固体析出，冷却后抽滤、洗涤、干燥得到n-(2-氨基苯基)-(4-(4-(4-((吡啶-3-撑甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺盐酸盐0.05g。
实施例6、n-(2-氨基苯基)-4-(3-(吡啶-3-甲撑基)脲基)苯甲酰胺琥珀酸盐制备(化合物a2琥珀酸盐)
将0.5g的n-(2-氨基苯基)-4-(3-(吡啶-3-甲撑基)脲基)苯甲酰胺琥珀酸盐溶于10ml的热乙醇中，加入热的琥珀酸乙醇溶液，室温反应3小时，反应完后抽滤、洗涤、干燥得到n-(2-氨基苯基)-4-(3-(吡啶-3-甲撑基)脲基)苯甲酰胺琥珀酸盐0.1g。
实施例7、n-(2-氨基苯基)-(4-(4-(4-((吡啶-3-撑甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺马来酸盐制备(化合物c14马来酸盐)
在50ml圆底烧瓶中，加入0.3gn-(2-氨基苯基)-(4-(4-(4-((吡啶-3-撑甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺，乙醇溶解，加入热的马来酸乙醇溶液，室温反应3小时，反应完后抽滤、洗涤、干燥得到n-(2-氨基苯基)-(4-(4-(4-((吡啶-3-撑甲基)氨甲酰基)苯基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯甲酰胺马来酸盐0.15g。
实施例8、n-(2-氨基苯基)-4-(2-(4-(吡啶-3-基))-1h-1，2，3-三唑-1-基)苯甲酰胺苹果酸盐制备(化合物c1苹果酸盐)
在50ml圆底烧瓶中，加入0.5gn-(2-氨基苯基)-4-(2-(4-(吡啶-3-基))-1h-1，2，3-三唑-1-基)苯甲酰胺，乙醇溶解，加入热的苹果酸乙醇溶液，室温反应3小时，反应完后抽滤、洗涤、干燥得到n-(2-氨基苯基)-4-(2-(4-(吡啶-3-基))-1h-1，2，3-三唑-1-基)苯甲酰胺苹果酸盐0.09g。
实施例9、n-(2-氨基苯基)-8-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺酒石酸盐制备(化合物d1酒石酸盐)
在50ml圆底烧瓶中，加入0.5gn-(2-氨基苯基)-8-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺，乙醇溶解，加入热的酒石酸乙醇溶液，室温反应3小时，反应完后抽滤、洗涤、干燥得到n-(2-氨基苯基)-8-(4-(吡啶-3-基)-1h-1，2，3-三唑-1-基)辛酰胺酒石酸盐0.23g。
实施例10、目标化合物酶抑制活性和体外抗肿瘤活性
(1)目标化合物nampt酶抑制测试
以下的酶是指烟酰胺磷酸核糖转移酶，可购自康肽生物科技有限公司，也可自行制备。
1)酶的制备：
将转化有重组质粒nampt-pet28a+的bl21(de3)plyss细胞接种于2×yt培养基(37μg/ml氯霉素和100μg/ml卡那霉素)中，37℃振摇过夜，收集菌体后用20倍于原体积的新鲜培养基重悬，37℃培养至od600约0.6-0.8，在0.5mmiptg、28℃条件下诱导8小时。离心收集菌体，并重悬于裂解缓冲液(20mmtris-hclph8.0，300mmnacl)中，加入0.1％tritonx-100，1％pmsf，200w超声裂解细胞，超声1s间隙9s，共进行30min。将裂解液于12000rpm、4℃离心50min吸取上清液。该上清液与ni-nta柱(购自qiagen公司)在冰上振摇孵育2小时，再依次用结合缓冲液(5mm咪唑，0.5mnacl，20mmtris-hcl，ph＝7.5)、缓冲液(10mm/20mm/40mm/60mm咪唑，0.5mnacl，20mmtris-hcl，ph＝7.5)依次洗去杂蛋白，最后用洗脱缓冲液(200mm咪唑，0.5mnacl，20mmtris-hcl，ph＝7.5)洗脱目的蛋白，并进行sds-page检测，用bca方法测定蛋白浓度。
2)酶反应体系为25μl，其中各种组分的终浓度为：50mmtris-hcl(ph7.5)、0.02％bsa，12mmmgcl2、2mmatp、0.4mmprpp、2mmdtt、2μg/mlnampt、0.2μmnam、dmso和倍比稀释的本发明的化合物。先将0.5μl本发明的化合物的不同浓度溶液加于96孔板，再加入20μl酶反应混合溶液(除底物之外的酶反应组分)，于室温孵育5分钟后，加入4.5μl底物nam溶液以启动反应，37℃反应15分钟后，于95℃加热1分钟终止酶反应。
3)将反应液在冰上冷却后，依次加入10μl20％苯乙酮和2mkoh，涡旋混合仪上混匀后于0℃作用2分钟，加入45μl88％甲酸，37℃孵育10分钟。
4)使用酶标仪测定激发波长382nm、发射波长445nm处的荧光值。
5)根据公式：e＝r/(1+(c/ic50)s)+b(其中e为酶活性，c为化合物浓度，r、ic50、s、b为待拟合的参数)，在origin软件中将酶活性对化合物浓度的曲线进行拟合，求出化合物的ic50。
(2)目标化合物hdac1酶抑制测试
1)实验材料：
hdac1酶，缓冲液(137mm氯化钠，2.7mm氯化钾，1mm氯化镁，0.1mg/mlbsa，ph＝8的tris-hcl25mm)，hdac底物3，胰蛋白酶，96孔黑色板。
2)实验方法：
(a)96孔黑色板平衡至室温。
(b)用含有10％的dmso的缓冲液稀释待测化合物，化合物的浓度依次为100μm，30μm，10μm，3μm，1μm，0.3μm，0.1μm，0.03μm，0.01μm，0.003μm。
(c)将11μl的hdac1加入到400μl的缓冲液中，摇匀；
(d)向96孔板上第2-11孔加入35μl刚刚配好的含有hdac1酶的缓冲液，并依次加入5μl稀释好的不同浓度的化合物到对应的反应孔中，对于阴性对照(第一个孔)和空白对照孔(第十一个孔)，分别加入40μl和5μl缓冲液。
(e)向所有反应孔中加入100μm的hdac底物35μl和0.5mg/ml的胰蛋白酶5μl，37度孵化30min后读数。
(f)依据公式计算抑制率：抑制率＝(100％活性孔-样品孔)/100％活性孔*100，在orgin软件中将酶活性对化合物浓度的曲线进行拟合，求出化合物的ic50值。
(3)目标化合物体外抗肿瘤活性测试
1)样品配制：用dmso(merck)溶解成后，加入pbs(-)配成1000μm的溶液或均匀的混悬液，然后用含dmso的pbs(-)稀释。样品终浓度100、10、1、0.1、0.01、0.001μm。
2)细胞株
hct116(人肠癌细胞)、mda-mb-231(人乳腺癌细胞)、hepg2(人肝癌细胞)，均由本实验室冻存和传代。
3)培养液
dmem+10％fbs+双抗
4)试验方法
mtt法。96孔板每孔加入浓度为4-5×104个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5％co2培养箱内。24小时后，加入样品液，10μl/孔，设三复孔，37℃，5％co2作用72小时。每孔加入5mg/ml的mtt溶液20μl，作用4小时后加入溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用全波长多功能酶标仪测570nmod值
(4)目标化合物酶抑制活性和体外抗肿瘤活性测试结果(表2)
表2.目标化合物酶抑制活性和体外活性结果(μm)
药理实验表明本发明所诉的化合物或其盐，对与肿瘤密切的相关组蛋白去乙酰化酶1亚型(hdac1)的具有强抑制活性。
药理实验表明本发明所诉的化合物或其盐，对和肿瘤相关的烟酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)具有强抑制活性。
药理实验表明部分本发明所诉的化合物或其盐，对hdac1和nampt均有较好的抑制活性。尤其是化合物c14对hdac1的抑制活性为55nm，对nampt的抑制活性为31nm，对双靶点的抑制活性达到较好的平衡；化合物d1对hdac1的抑制活性是15nm，对nampt的抑制活性为18nm，表现出较好的体外活性。化合物d2体外对hdac1和nampt的抑制活性分别31nm和36nm，体外活性较好。化合物d3体外对hdacl和nampt的抑制活性分别40nm和41nm，体外活性较好。
体外抗肿瘤活性测试采用mtt法，大部分化合物对肠癌(hct116)、乳腺癌(mda-mb-231)和肝癌(hepg2)肿瘤株均表现出较强的生长抑制活性。a2、a4、a5、a8、a13-18、a20、b1-3、b5、b7、c1-5、c7-10、c14、d3对肠癌活性优于阳性药物ci-994。a1-3、a5、a8、a12-18、a20、b1-5、b7、c1-10、c12-14、d1-3、d5对肝癌活性优于阳性药ci-994。
实施例11、目标化合物hdac选择性测试
药理实验结果(表3)表明化合物c14对hdac1和hdac2具有选择性抑制作用。
表3.化合物c14对hdac各亚型抑制结果
实施例12、目标化合物体内抗肿瘤效果
根据体外抗肿瘤实验结果及化合物的结构特点，我们选择人结肠癌hct116作为裸鼠移植瘤模型，以化合物c14作为研究对象，saha和fk866作为阳性对照药。
设计动物实验的给药剂量为25mg/kg，一天两次，连续腹腔注射21天。结果表明裸鼠生存状态良好，未观察到明显的小鼠体重明显变化。化合物对肿瘤生长抑制率为68.88％(图1，表4)，显著高于阳性药saha(33.05％)和fk866(39.35％)。由此可见，hdac/nampt双靶点抑制剂较单靶点抑制剂具有明显的优势，表现出高效低毒的优点，值得进一步研究。
表4目标化合物对人体肠癌hct116裸鼠移植瘤的疗效
与control比较：*p＜0.05，**p＜0.01。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。