检测CHO核酸残留的引物、探针、试剂盒及检测方法与流程

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，涉及核酸分子生物学检测方法，特别是指一种中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测所用的引物、探针及相应试剂盒，以及利用该试剂盒检测cho核酸残留的实时荧光定量pcr检测方法。

背景技术：

cho细胞即中国仓鼠卵巢细胞(chinesehamsterovary)，该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛使用的细胞。全世界批准正式应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中cho表达系统能准确的转录后修饰表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能，使它最接近于天然蛋白分子；其次，cho细胞既可贴壁生长，又可以悬浮培养，有较高的耐受剪切力和渗透压能力，培养体积能达到1000l以上；再次，cho细胞具有重组基因的高效扩增和表达能力；而且cho具有产物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的内源蛋白，便于下游产物分离纯化。因此cho成为表达复杂生物大分子的理想宿主。

cho细胞表达疫苗的种类不多，多数处于研究阶段。目前只有cho表达乙肝疫苗已投入生产，cho细胞表达的蛋白更接近人体来源的表面抗原，这是除酵母表达乙肝疫苗以外，唯一已用于人类使用的基因工程亚单位疫苗。1991年中国预防医学科学院病毒学研究所联合长春生物制品研究所等单位研制成功了由cho细胞表达的基因工程乙肝疫苗，并于1992年批量上市。在美国以酵母表达的乙肝疫苗为主的同时，cho表达的乙肝疫苗占据了欧洲市场。除乙肝疫苗以外，目前epstein-barr病毒(ebv)、epo、艾滋病病毒、丙肝病毒、水痘-带状疱疹病毒亚单位疫苗等领域在cho细胞中的表达在国内外均有研究。

随着基因工程技术的飞速发展，越来越多的哺乳动物细胞，尤其是连续传代细胞系用于生产疫苗和治疗性生物制品，其用量随着临床治疗效果的需求越来越大，需要长期反复用药的生物制品也越来越多。同时疫苗的使用者为健康人群，这使得药品监管部门更加重视生物技术产品的安全性，其中dna残留量的质量控制一直是人们关注的热点。由于cho细胞等传代细胞调控生长的基因失调，使其具有无限的寿命，因此一般认为传代细胞系的dna具有使其他细胞生长失控和产生致瘤活性的潜能，需要对其dna残留量进行严格的质量控制。目前，国内主要使用dna探针杂交法和荧光染料法作为残余dna的检测方法。以地高辛标记斑点杂交法为代表的dna杂交法实验周期长，操作复杂，干扰因素多，重复性差，仅能半定量分析，且存在非特异性显色，有时也会出现假阳性。荧光染料法测定对象为所有双链dna，不能检出单链dna，且没有序列特异性。国外对于宿主细胞dna残留的检测，一般采用定量pcr技术、sybrgreen染料法或者探针标记法。1997年，食品药品监督管理局(foodanddrugadministration，fda)规定，在美国使用的细胞系疫苗dna残留量不能超过10pg/剂；《中国药店》三部(2015版)对于cho细胞表达制品一般要求宿主dna残留量不超过100pg/剂。而2009年美国药典(unitedstatespharmacopoeia，usp)收录了杂交法、阈值法和q-pcr法，至2015年底usp仅收录高灵敏度、高特异性的q-pcr法作为残留dna检测的推荐方法。2018年国家质量监督检验检疫总局发布了cho细胞表达产品残留dna检测q-pcr方法。由此可见q-pcr法将成为国际公认的残留dna检测方法。

近年来，实时荧光定量pcr(real-timefluorescentquantitativepcr，fq-pcr)技术将核酸的扩增和杂交技术、光谱分析技术和实时检测技术融合在一起，具有灵敏高、特异性强、高通量、高自动化、重复性好和定量准确等特点在基因表达水平分析、突变和多态性研究、病原体的定性和定量检测等方面得到广泛应用。实时荧光定量pcr技术，是在pcr普通反应体系中加入荧光标记基团，利用收集荧光信号的累积来实时监控整个pcr的扩增进程，最后得到扩增荧光信号阈值循环数，通过对比标准曲线可对未知模板进行定量分析的方法。在pcr扩增的指数时期，模板的扩增荧光信号阈值循环数(ct值)与模板的起始拷贝数是线性关系，所以所得检测结果称为定量的数据。

综上所述，为了实现cho细胞dna的定量检测，分析cho细胞表达产品中dna残留状况，提高检测的灵敏度，建立中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸残留检测的实时荧光定量pcr检测方法，以及研制相应的检测试剂变的十分迫切，对于cho宿主细胞dna的残留检测和cho细胞系疫苗等相关生物制品质量检测保证用药安全具有深远意义。

技术实现要素：

本发明的主要目的就是针对以上现状，提供一种检测cho核酸残留的引物、探针，以克服现有技术中的不足。

本发明的另一主要目的在于提供一种检测cho核酸残留的试剂盒。

本发明的另一目的还在于提供前述试剂盒在检测cho核酸残留中的用途。

本发明的另一目的还在于提供一种cho核酸残留的检测方法。

本发明的另一目的还在于提供一种包含前述的检测cho核酸残留的试剂盒的产品，所述产品应用于cho核酸残留的检测方法。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种检测cho核酸残留的引物对，其包括：

第一引物，其序列如seqidno.1所示；

第二引物，其序列如seqidno.2所示。

本发明实施例还提供了一种检测cho核酸残留的探针，所述探针的序列如seqidno.3所示。

进一步地，所述探针为经过荧光标记的，所述探针的5’端标记有报告荧光基团，3’端标记有淬灭荧光基团。

本发明实施例还提供了一种检测cho核酸残留的试剂盒，其包括至少一引物对和至少一探针，其中一引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如seqidno.1所示，所述第二引物的序列如seqidno.2所示，其中一探针为前述的探针。

本发明实施例还提供了前述的检测cho核酸残留的试剂盒于检测cho核酸残留或制备检测cho核酸残留的产品中的用途。

本发明实施例还提供了一种cho核酸残留的检测方法，其包括：

提供待检测的dna样本；

使所述待检测的dna样本与前述的检测cho核酸残留的试剂盒的pcr扩增检测的常规组件混合，形成混合液；

之后利用所述试剂盒所包含的引物对与探针对所述混合液进行pcr扩增；

对pcr扩增产物进行检测，判断dna样本中cho核酸的残留情况。

本发明实施例还提供了一种包含前述试剂盒的产品，所述产品应用于cho核酸残留的检测方法。

与现有技术相比，本发明的优点包括：

1)本发明设计了中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸检测的特异性引物和taqman探针，令人惊喜的，藉由这些特殊的特殊引物及探针对cho核酸检测时的灵敏度极强(最低检测限可达到0.01pg)，扩增效率高，可对相关生物制品中超微量的cho核酸残留进行检测；

2)本发明建立了中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸残留检测的探针法荧光定量pcr检测方法，利用此检测方法可以对相关生物制品进行批量检测；

3)本发明提供的cho核酸残留的检测方法以待检样品中的核酸为检测对象，与cho核酸残留的其它常规检测方法如dna探针杂交法、荧光染料法相比，灵敏度较高，特异性更强，没有交叉反应，检测准确性和和灵敏度得到了很大的提高，其操作程序化，并可进一步制成检测试剂盒；

4)本发明提供的cho核酸残留的检测方法能够能准确的检测出中国仓鼠源性有关生物制品如乙型肝炎疫苗、实验室常用中国仓鼠源性细胞中的核酸残留情况，从而评价相关生物制品的质量。

综上所述，本发明能准确的检测出中国仓鼠源性生物制品中cho核酸的残留情况，对控制中国仓鼠源性有关生物制品的质量具有重要意义，对于人民用药安全意义重大。本发明的检测方法及试剂盒可用于中国仓鼠源性生物制品的核酸残留检测，应用前景广阔。

附图说明

图1a是本发明实施例1中10倍系列稀释cho核酸标准品以18s1为引物进行实时荧光定量pcr的扩增曲线图。

图1b是本发明实施例1中10倍系列稀释cho核酸标准品以18s2为引物进行实时荧光定量pcr的扩增曲线图。

图1c是本发明实施例1中10倍系列稀释cho核酸标准品以nd1为引物进行实时荧光定量pcr的扩增曲线图。

图1d是本发明实施例1中10倍系列稀释cho核酸标准品以actb为引物进行实时荧光定量pcr的扩增曲线图。

图2是本发明实施例2中以18s1为引物，国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测的标准曲线图。

图3是本发明实施例2中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测的特异性试验结果示意图。

图4a是本发明实施例2中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测的敏感性试验实验室内重复测定结果示意图。

图4b是本发明实施例2中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测的敏感性试验实验室间重复测定结果示意图。

具体实施方式

鉴于当前cho核酸残留的其它常规检测方法存在的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案，其所用引物和taqman探针是根据中国仓鼠核糖体18s基因的保守区域设计的，用以定量检测有关生物制品中的cho核酸拷贝数，经过多次引物灵敏度筛选，得到该对引物和taqman探针灵敏度极强、pcr扩增效率高，用以定量检测相关生物制品中中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸残留量。所述检测方法是以上述引物和taqman探针进行的实时荧光定量pcr检测方法。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。

下文将对本发明的技术方案作更为详尽的解释说明。但是，应当理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

本发明将根据具体事例做进一步的描述，但其仅为例证性的目的而不起到限制性作用。

在对实例描述前，有必要提供一些备注说明：

采用不同厂家、不同批次的试剂会造成实验结果的差异，属于正常现象。

在进行小规模实验时，为保证平行实验间的重复性，建议配置试剂后，充分混匀并分装，以保证每次实验试剂的均一性。

本发明实施例的一个方面提供了一种检测cho核酸残留的引物对，其包括：

第一引物，其序列如seqidno.1所示；

第二引物，其序列如seqidno.2所示。

进一步地，所述引物对所含引物序列如下表：

本发明实施例的另一个方面还提供了一种检测cho核酸残留的探针，所述探针的序列如seqidno.3所示。

进一步地，所述探针的序列如下表：

本发明所提供的引物和taqman探针，是根据中国仓鼠核糖体18s基因的保守区域设计的。经过多次引物灵敏度筛选，得到该对引物和taqman探针灵敏度极强、pcr扩增效率高，用以定量检测相关生物制品中中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸残留量。

具体来讲，所述引物的上游引物具有序列表中cho-18s-f的核苷酸序列，下游引物具有序列表中cho-18s-r的核苷酸序列；所述taqman探针具有序列表中cho-18s-p的核苷酸序列。

进一步地，所述探针为经过荧光标记的，所述探针的5’端标记有报告荧光基团，3’端标记有淬灭荧光基团。

进一步地，所述报告荧光基团为fam，荧光淬灭基团为tamra。

本发明实施例的另一个方面还提供了一种检测cho核酸残留的试剂盒，其包括至少一引物对和至少一探针，其中一引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如seqidno.1所示，所述第二引物的序列如seqidno.2所示，其中一探针为前述的探针。

在一些实施例中，所述试剂盒还包括pcr扩增检测的常规组件。

进一步地，所述pcr扩增检测的常规组件包括pcr反应用缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合液、dna聚合酶。

本发明实施例的另一个方面还提供了前述的检测cho核酸残留的试剂盒于检测cho核酸残留或制备检测cho核酸残留的产品中的用途。

本发明实施例的另一个方面还提供了一种超高灵敏度且可准确定量中国仓鼠卵巢细胞核酸的实时荧光定量pcr检测方法，本发明所提供检测方法，是以本发明的引物和taqman探针进行的实时荧光定量pcr检测方法，其包括：

提供待检测的dna样本；

使所述待检测的dna样本与前述的检测cho核酸残留的试剂盒的pcr扩增检测的常规组件混合，形成混合液；

之后利用所述试剂盒所包含的引物对与探针对所述混合液进行pcr扩增；

对pcr扩增产物进行检测，判断dna样本中cho核酸的残留情况。

在一些实施例中，所述检测方法包括：

利用前述的试剂盒所包含的引物对与探针对所述混合液进行荧光定量pcr扩增；

对pcr扩增产物的荧光强度进行实时检测，根据该荧光强度判断dna样本中cho核酸的残留情况。

进一步地，所述30μl实时荧光定量pcr反应体系包括：上游引物0.75μl(10μm)，下游引物0.75μl(10μm)，taqman探针0.5μl(10μl)，样品dna1μl，无rna酶水12μl，taqmanmix15μl。

在一些实施例中，所述检测方法具体包括：

使前述的检测cho核酸残留的引物对、探针与前述的检测cho的试剂盒的pcr扩增检测的常规组件混合，形成混合液；

用含有目的片段的cho细胞株提取dna作为标准品，并制备形成一系列不同浓度标准溶液，加入所述混合液中，将不同浓度标准dna溶液作为模板进行实时荧光定量pcr检测，得到用于cho核酸检测的标准曲线；

在所述混合液中加入待检测的dna样本或阳性样本，进行荧光定量pcr扩增；

对pcr扩增产物的荧光强度进行实时检测，并于所述标准曲线对照，从而测得待检测的dna样本中cho核酸的残留量。

进一步地，所述检测方法中标准曲线的建立，具体方法为：用含有目的片段的cho细胞株提取dna作为标准品，将其10倍系列稀释成①：1000pg/μl；②：100pg/μl；③：10pg/μl；④：1pg/μl；⑤：0.1pg/μl；⑥：0.01pg/μl。将质粒作为模板进行实时荧光定量pcr检测，得到用于中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸检测的标准曲线。

进一步地，所述标准溶液的浓度为0.01pg/μl～1000pg/μl。

更进一步地，所述标准曲线的30μl实时荧光定量pcr反应体系包括：上游引物0.75μl(10μm)，下游引物0.75μl(10μm)，taqman探针0.5μl(10μl)，cho细胞dna1μl，无rna酶水12μl，taqmanmix15μl。

在一些实施例中，所述荧光定量pcr扩增的条件为：

预热，其包括在50～60℃下保温2～5min；

预变性，其包括在92～95℃下保温5～10min；

pcr循环，包括40个循环，每个循环包括：依次在92～95℃下变性保温15s～30s，55～60℃退火保温30s～1min，在每个循环的延伸结束时进行荧光信号检测。

本发明实施例的另一个方面还提供了一种包含前述检测cho核酸残留的试剂盒的产品，所述产品应用于cho核酸残留的检测方法。

以下结合附图和若干较佳实施例对本发明的技术方案作进一步的解释说明，但其中的实验条件和设定参数不应视为对本发明基本技术方案的局限。并且本发明的保护范围不限于下述的实施例。

下述实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如sambrook等人所编《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商建议的条件。所用引物及taqman探针由takara公司合成。

实施例1用于对中国仓鼠卵巢细胞(cho)进行实时荧光定量pcr检测的引物及taqman探针的设计

参照genbank收录的中国仓鼠基因组序列(genomeid：2791)，选择中国仓鼠核糖体18s基因、nd1基因、actb基因的保守区域，采用abiprimerexpress3.0实时荧光定量pcr引物设计软件，设计合成引物及taqman探针。探针的荧光标记选择fam(5’端)作为报告发光基团，tamra(3’端)为淬灭基团。

其中的典型的引物对及探针序列如下表1：

如图1a-图1d所示，10倍系列稀释cho核酸标准品实时荧光定量pcr扩增曲线，结果则说明了cho-18s1引物对和探针扩增曲线梯度明显，各10倍系列浓度梯度之间差异较均一，本实验选用的cho-18s1-f、cho-18s1-r引物和cho-18s1-p探针灵敏度强，扩增效率高，其序列分别如seqidno.1、seqidno.2和seqidno.3所示。

其中图1a-图1d中，编号a为标准品浓度1000pg/μl；b为标准品浓度100pg/μl；c为标准品浓度10pg/μl；d为标准品浓度1pg/μl；e为标准品浓度0.1pg/μl；f为标准品浓度0.01pg/μl；g为阴性对照。

实施例2中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测

一、cho阳性质控dna提取

以下操作必须严格按照要求在p2实验室负压生物安全柜内进行。

(1)无菌条件下取中国仓鼠卵巢细胞100mg置入1.5ml洁净离心管，加入500μl抽提缓冲液(50mmtrisph8.0，25mmedta，100mmnacl，1％tritonx-100)和20μl(20mg/ml)蛋白酶k，56℃水浴30min。

(2)经水浴裂解完毕，加入10μl磁珠(40mg/ml，用前需摇匀)，再加入250μl的30％peg&2mnacl混合液，涡旋混匀。

(3)将离心管于混合仪旋转混合10min(转速0.83-0.85转/s)。

(4)混合完毕，于磁力架固定吸附，肉眼观察，磁珠完全被吸附至磁铁一侧即可(约需要10s)，用移液器吸去离心管内清液，加入500μl漂洗液(70％乙醇)漂洗磁珠，每次注入漂洗液后摇匀5s，再次固定于磁力架，10s后再次完全吸去清液，重复漂洗三次。

(5)将离心管从磁力架上取下，开盖放置15min使乙醇完全挥发。

(6)加入100μl洗脱缓冲液(1×te)，超声分散附着在离心管壁的磁珠，期间不断取出摇匀并用肉眼观察分散情况(超声时间大约45s，时间不宜过长以免dna断裂)。

(7)65℃水浴10min，磁力架分离磁珠，用移液器吸取清液即得到dna溶液。

(8)用紫外分光光度计测定所得cho提取的dna浓度，置于-20℃保存备用。

二、标准品梯度稀释

将提取的chodna作为pcr扩增标准品，进行梯度稀释。

具体操作如下：将chodna进行10倍系列稀释成浓度①1000pg/μl；②100pg/μl；③10pg/μl；④1pg/μl；⑤0.1pg/μl；⑥0.01pg/μl六个梯度，作为pcr扩增的模板。

三、特异性引物和taqman探针的筛选

针对中国仓鼠卵巢细胞(cho)基因保守片段设计的四对特异性引物和taqman探针，用于标准品pcr扩增实验，筛选出扩增效率最高的一对引物。

pcr反应体系为30μl，依次加入下列成分：上游引物0.75μl(10μm)，下游引物0.75μl(10μm)，taqman探针0.5μl(10μm)，模板dna1μl，无rna酶水12μl，taqmanmix15μl。

标准品检测反应条件为：先50℃2min；然后95℃10min；最后95℃15s，60℃1min，共40个循环，在每个循环的延伸结束时进行荧光信号检测。每个稀释度重复平行试验2次。

标准品探针法实时荧光定量pcr扩增曲线如图1a～图1d所示。real-timepcr扩增结果显示，引物18s1在标准品六个梯度均有明显s形扩增荧光曲线，且ct值均小于35，灵敏度强，扩增效率高，适用于相关生物制品中超微量的cho核酸残留检测。

四、标准曲线的绘制

chodna的标准曲线选用18s1引物扩增结果，根据所得ct值与其对应的标准品的对数值绘制标准曲线(图2)，标准曲线的r²为0.9994，实时荧光定量pcr反应的扩增效率为108.328％。标准曲线显示：本发明建立的中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸检测的探针法实时荧光定量pcr检测方法最低检测限可达到0.01pg，进一步说明该方法具有非常高灵敏度。

五、中国仓鼠卵巢细胞(cho)实时荧光定量pcr检测方法引物的特异性

为验证cho细胞核酸残留real-timepcr引物和taqman探针的特异性，选取多种生物制品中可能混入的外源物种dna作对照，进行real-timepcr检测。取vero细胞、巴斯德毕赤酵母、大肠杆菌dh5a、大肠杆菌bl21作为对照组，提取dna然后将dna浓度稀释至1pg，进行real-timepcr特异性试验。

中国仓鼠卵巢细胞(cho)实时荧光定量pcr检测方法引物的特异性试验结果如图3所示，反应模板添加量均为1pg，其中编号a为cho细胞核酸dna标准品。cho细胞在16个循环左右开始出现明显扩增荧光信号曲线，而其它几组对照样品则仅有vero细胞在38个循环才显现出扩增荧光信号曲线。vero细胞、巴斯德毕赤酵母、大肠杆菌dh5a、大肠杆菌bl21该四组对照样品的ct值均明显大于35，判定为未检出。进一步说明本发明引物和taqman探针特异性好，无交叉反应。

六、中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测方法的回收率

为了模拟以cho为宿主细胞的生物制品中核酸残留情况，将dna模板量1000pg、100pg、10pg、1pg、0.1pg、0.01pg、blank为标准曲线，用bsa代替蛋白药物制成样品代替液，验证实时荧光定量pcr检测方法的回收率。在10mg/ml的bsa中分别加入100pg、10pg、1pg、0.1pg四个梯度的dna标准品，每个梯度做3个平行实验。回收率测定的结果如附表2所示，生物制品药物中cho样品回收能达到86％以上，变异系数最高仅为13.32％，本实验体现出了生物制品药物产品中cho核酸实时荧光定量pcr检测方法的高特异性和敏感度。

表2回收率测定结果

七、中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测方法的稳定性

本实施例的方法稳定性试验分为实验室重复性测定和实验室间重复性测定两个阶段。标准曲线dna模板量分别为①1000pg，②100pg，③10pg，④1pg，⑤0.1pg，⑥0.01pg。待测样品6个依次10倍浓度稀释dna浓度为：2000pg/μl、200pg/μl、20pg/μl、2pg/μl、0.2pg/μl、0.02pg/μl，以ddh2o作为阴性对照，每个样品做2个重复。实验室内重复测定实时荧光定量pcr扩增曲线如图4a，其中编号a为标准品浓度1000pg/μl；b为标准品浓度100pg/μl；c为标准品浓度10pg/μl；d为标准品浓度1pg/μl；e为标准品浓度0.1pg/μl；f为标准品浓度0.01pg/μl；g为阴性对照。测定结果如附表3所示，结果显示，各个浓度的检测结果标准偏差在0.001～0.260之间，精密度均符合实验室内重复性要求。实验室间重复测定实时荧光定量pcr扩增曲线如图4b，其中编号a为标准品浓度1000pg/μl；b为标准品浓度100pg/μl；c为标准品浓度10pg/μl；d为标准品浓度1pg/μl；e为标准品浓度0.1pg/μl；f为标准品浓度0.01pg/μl；g为阴性对照。测定结果如附表4所示，结果显示，各个浓度的检测结果标准偏差在0.063～1.023之间，精密度均符合实验室间重复性要求。本实验体验出了中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸残留实时荧光定量pcr检测方法具有良好的稳定性。

表3实验室内重复性试验结果

表4实验室间再现性试验结果

实施例3中国仓鼠卵巢细胞(cho)的实时荧光定量pcr检测试剂盒

将用于对中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸进行实时荧光定量pcr检测的引物cho-18s-f(10μm)100μl，cho-18s-r(10μm)100μl和taqman探针(10μm)70μl以及taqmanmix1.5ml、chodna(30ng/μl)50μl、灭菌双蒸水1.5ml共同包装，得到中国仓鼠卵巢细胞(cho)核酸的实时荧光定量pcr检测试剂盒。

综上所述，藉由上述技术方案，本发明实施例能非常精确的检测出中国仓鼠源性生物制品中cho核酸的残留情况，对控制中国仓鼠源性有关生物制品的质量具有重要意义，对于人民用药安全意义重大。本发明的检测方法及试剂盒可用于中国仓鼠源性生物制品的核酸残留检测，应用前景广阔。

应当理解，上述实施例仅为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

序列表

<110>苏州蝌蚪生物技术有限公司

<120>检测cho核酸残留的引物、探针、试剂盒及检测方法

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<211>21

<212>dna

<213>人工序列(人工序列)

<400>10

ttcaacaccccagccatgtac21

<210>11

<211>21

<212>dna

<213>人工序列(人工序列)

<400>11

tccatcacaatgccagtggta21

<210>12

<211>26

<212>dna

<213>人工序列(人工序列)

<400>12

ttcaggctgtgctgtccctgtatgcc26