本发明涉及作为腺苷a3受体调节剂的1-(5-(噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸衍生物。本发明的其他方面是制备这些化合物的方法；包括有效量的这些化合物的药物组合物；该化合物在制造用于治疗可通过调节腺苷a3受体而改善的病理状况或疾病的药物中的用途。
背景技术：
腺苷的作用是通过至少四种特异性膜受体介导的，这些受体被分类为a1、a2a、a2b和a3受体，并且属于g蛋白偶联受体家族。a1和a3受体通过与抑制性g蛋白(gi)偶联以抑制酶腺苷酸环化酶而降低环一磷酸腺苷(camp)的细胞内水平。相反，a2a和a2b受体刺激g蛋白(gs)偶联以激活腺苷酸环化酶并增加细胞内camp水平。通过这些受体，腺苷调节广泛范围的生理功能。
腺苷a3受体在胃肠道疾病中的作用
溃疡性结肠炎和克罗恩病，统称为炎性肠病，是严重的和使人衰弱的疾病，其在发展中国家和发达国家的发病率都在增加(hanauer，s.b.；present，d.h.，thestateoftheartinthemanagementofinflammatoryboweldisease.rev.gastroenterol.disord.2003,3,81-92)。
这两种疾病的特征在于胃肠道不同水平的肠粘膜严重炎症，伴有胃肠运动、分泌和感觉功能的显著改变。(deschepper,h.u.；deman,j.g.；moreels,t.g.；pelckmans,p.a.；dewinter,b.y.reviewarticle:gastrointestinalsensoryandmotordisturbancesininflammatoryboweldisease:clinicalrelevanceandpathophysiologicalmechanisms.aliment.pharmacol.ther.2008,27,621-637)。
正在研究腺苷a3受体的调节剂作为肠炎症的新出现的治疗方法。
最近已经证实，与健康患者相比，腺苷a3(a3ar)受体在各种自身免疫疾病比如克罗恩病、类风湿性关节炎和牛皮癣中上调，由此所述受体被认为是治疗这种自身免疫炎症疾病的重要靶标。(ochaion,aetal.theanti-inflammatorytargeta(3)adenosinereceptorisover-expressedinrheumatoidarthritis,psoriasisandcrohn'sdisease.cellimmunol.2009；258(2):115-22.doi:10.1016/j.cellimm.2009.03.020.epub2009may7)。
已知的a3ar激动剂，ib-meca，用于小鼠以改善肠道炎症和自发性结肠炎。此外，a3ar刺激能够显著地降低促炎细胞因子比如il-1、il-6和il-12的结肠水平。(mabley,j.etal,theadenosinea3receptoragonist,n6-(3-iodobenzyl)-adenosine-5′-n-methyluronamide,isprotectiveintwomurinemodelsofcolitis.eur.j.pharmacol.2003,466,323-329)。
此外，最近的研究已经证明了a3ar在用葡聚糖硫酸钠(dss)诱导疾病的小鼠模型中的结肠运动和结肠炎的进展中的作用，显示a3ar敲除小鼠模型(a3-/-ar)比具有受体的那些(野生型)发展较少的症状或恢复更快。得到的数据表明，内源性腺苷激活a3ar减缓了小鼠的肠道运输、结肠排空和大规模运动，支持了这种受体的激活有助于结肠炎发展的假设。(tianhuaren,md,etal.impactofdisruptingadenosinea3receptors(a3-/-ar)oncolonicmotilityorprogressionofcolitisinthemouse.inflammboweldis.2011,august；17(8):1698–1713)。
随后其他研究表明，腺苷a3受体缺陷小鼠显示了减少的结肠病理学和降低的髓过氧化物酶水平，并证明了a3ar在中性粒细胞迁移中的作用，显示这种功能的改变有可能对先天免疫反应产生负面影响。(butler,metal.impairmentofadenosinea3receptoractivitydisruptsneutrophilmigratorycapacityandimpactsinnateimmunefunctioninvivo.europeanjournalofimmunology.september26,2012)。
腺苷a3受体在中枢神经系统中的作用
a3ar广泛分布在中枢神经系统中，但水平较低，且亲和力较低。尽管有迹象表明这些受体在神经传递中的重要作用，但是a3ar在几种病理生理状况下的作用常常引起争议。(boison,d.adenosineasamodulatorofbrainactivity.drugnewsperspect.2007,20,607-611；burnstock,g.etal,adenosineandatpreceptorsinthebrain.curr.top.med.chem.2011,11,973-1011)。
已经报道，a3ar激动剂对运动活动具有抑制作用，表明可能抑制皮质神经元中的兴奋性神经传递。(boison,d.adenosineasamodulatorofbrainactivity.drugnewsperspect.2007,20,607-611)。
此外，涉及中枢神经系统和外周组织中促炎作用的a3ar的伤害性作用备受关注。(yoon,m.h.etal,rolesofadenosinereceptorsubtypesintheantinociceptiveeffectofintrathecaladenosineinaratformalintest.pharmacology2006,78,21-26)。
a3ar在神经退行性现象中的作用来自在体内和体外缺氧/缺血模型中进行的研究。已经假设a3ar通过减少突触传递在缺血的第一阶段起保护作用。(pugliese,a.m.etal,brief,repeated,oxygen-glucosedeprivationepisodesprotectneurotransmissionfromalongerischemicepisodeintheinvitrohippocampus:roleofadenosinereceptors.br.j.pharmacol.2003,140,305-314)。
此外，已经报道了阿尔茨海默氏病的转基因小鼠模型的海马中的a3ar的上调，其中在淀粉样蛋白沉积之前检测到改变的氧化磷酸化。(vonarnim,c.a.etal,gga1actsasaspatialswitchalteringamyloidprecursorproteintraffickingandprocessing.j.neurosci.2006,26,9913-9922)。
最后，不同的研究评估了腺苷a3受体在疼痛阶段的作用。它们中的一些已经表现出伤害性和促炎症反应，由于该受体的激活而导致水肿的形成。然而，在后来的研究中观察到疼痛调节的相反活动；表明腺苷a3受体激动剂在治疗慢性神经性疼痛中的潜在应用，因为所述受体的激动剂阻断了机械诱导的神经性疼痛的进展并且以剂量依赖性方式的化学疗法显著增加了目前使用的各种镇痛药物的镇痛作用。(borea,paetal,thea3adenosinereceptor:historyandperspectives,pharmacolrev67:74–102,january2015,以及本文中的参考文献)。
腺苷a3受体在肾脏疾病中的作用
已公开的研究显示可能在肾缺血中发生a3ar活化的有害作用。在小鼠诱导性肾衰竭模型中进行的研究中，与使用ib-meca时得到的效果相比，a3ar拮抗剂显示了可改善血液参数，比如血尿素和肌酐，以及降低肾脏的形态学损伤，这被证明是有害的。(koscsó,betal.investigationala3adenosinereceptortargetingagents.expertopininvestigdrugs.2011june；20(6):757–768.doi:10.1517/13543784.2011.573785以及本文中的参考文献)。
在肾缺血小鼠模型中进行的另一研究中，得到了类似的结果，检查到了a3ar受体缺陷小鼠，以及先前用所述腺苷a3受体拮抗剂治疗的小鼠(野生型)的肾功能衰竭减弱。(thomaslee,hetal.a3adenosinereceptorknockoutmiceareprotectedagainstischemia-andmyoglobinuria-inducedrenalfailure.amjphysiolrenalphysiol.2003.284:f267–f273)。
腺苷a3受体在心血管系统中的作用
还报道了，通过涉及pkc、katp通道激活、p38mapk磷酸化和糖原合成酶激酶的机制，a3ar介导血管保护并导致梗塞面积和缺血后心肌的限制。(maddock,h.letal,adenosinea3receptoractivationprotectsthemyocardiumfromreperfusion/reoxygenationinjury.am.j.physiol.:heartcirc.physiol.2002,283,h1307-h1313)。
动脉粥样硬化——大动脉的多因素疾病，是全世界心脏病和中风的主要原因。流行病学研究发现了与这种病理相关的几个相关的环境和遗传风险因素。最近，已经显示通过a3ar的活化腺苷刺激vegf分泌并刺激泡沫细胞形成，并且这种作用被a3ar拮抗剂大大降低。
所以，结果，可能有兴趣使用a3ar拮抗剂阻断动脉粥样硬化斑块进展的重要步骤。(gessi,s.；foetetal,adenosinemodulateshif-1{alpha},vegf,il-8,andfoamcellformationinahumanmodelofhypoxicfoamcells.arterioscler.,thromb.,vasc.biol.2010,30,90-97)。
腺苷a3受体在免疫系统中的作用
a3ar存在于免疫细胞中并参与炎症和免疫过程的病理生理学调节。来自体外和体内研究的若干结果表明，根据所检查的细胞类型或所考虑的动物物种，a3ar的活化可以是促炎症或抗炎症二者。(baraldipgetal,medicinalchemistryofa3adenosinereceptormodulators:pharmacologicalactivitiesandtherapeuticimplications,j.med.chem.2012,55,5676-5703,以及本文中的参考文献)。
研究显示了，人嗜中性粒细胞表达a3ar，介导氧化爆发的抑制作用。(vanderhoeven,d.etal,activationofthea3adenosinereceptorsuppressessuperoxideproductionandchemotaxisofmousebonemarrowneutrophils.mol.pharmacol.2008,74,685-696)。
有证据表明，人类嗜酸性粒细胞中存在a3ar，其与细胞活化的信号通路相结合，并且能够保护嗜酸性粒细胞免于凋亡并抑制趋化过程。在淋巴细胞和jurkat细胞——人白血病细胞系——中也检测到a3ar的过表达，这与腺苷酸环化酶和钙调节活性的抑制有关。在巨噬细胞中，a3ar的激活似乎指示其具有抗炎作用。(baraldipgetal,medicinalchemistryofa3adenosinereceptormodulators:pharmacologicalactivitiesandtherapeuticimplications,j.med.chem.2012,55,5676-5703,以及本文中的参考文献)。
此外，其他证据指出了a3ar在自身免疫性疾病中的意义，其中在这种类型的几种病理中，这些受体已经过度表达。这些疾病包括类风湿性关节炎、克罗恩病和牛皮癣等。(braselmanns.etal,r406,anorallyavailablespleentyrosinekinaseinhibitorblocksfcreceptorsignalingandreducesimmunecomplex-mediatedinflammation,thejournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics,vol.319,no.3)。
其他研究指出了a3ar在比如免疫性血小板减少症(itp)等疾病中的作用，因为已经证明，除了其他免疫信号传导途径的活性外，前药福斯马替尼——其是一种syk酪氨酸激酶抑制剂并且处于临床iii期用于治疗itp，对a3ar受体具有重要的亲和力(ic50＝81nm)，认为这种syk酪氨酸激酶抑制剂通过独立于syk酪氨酸激酶的其他信号传导途径发挥其临床作用的原因，就像a3ar受体途径一样。(mócsaia.etal,thesyktyrosinekinase:acrucialplayerindiversebiologicalfunctions,naturereviews-immunologyvolume10,june2010)。
腺苷a3受体在类风湿性关节炎中的作用
类风湿性关节炎(ra)患者的临床证据显示，用腺苷a3受体激动剂治疗可以导致疾病的体征和症状的改善。(silverman,m.h.etal,clinicalevidenceforutilizationofthea3adenosinereceptorasatargettotreatrheumatoidarthritis:datafromaphaseiiclinicaltrial.j.rheumatol.2008,35,41-48)。
ra中过度表达的a3ar与高水平的促炎细胞因子直接相关，通过nf-kb的上调起作用，nf-kb是关节炎疾病发病机制中的关键参与者。(bar-yehuda,s.etal,theanti-inflammatoryeffectofa3adenosinereceptoragonists:anoveltargetedtherapyforrheumatoidarthritis.expertopin.invest.drugs2007,16,1601-1613)。
在ra患者的ii期临床研究中，ib-meca(1-脱氧-1-[6-[((3-碘苯基)甲基)氨基]-9h-嘌呤-9-基]-n-甲基-β-d-呋喃核糖酰胺(ribofuranuronamide)口服给药，每日两次，持续12周，显示安全，耐受性良好，并且能够介导疾病体征和症状的改善，表明a3腺苷受体调节剂作为抗风湿剂的发展。
腺苷a3受体在呼吸道中的作用
腺苷在调节呼吸系统中的作用是众所周知的，并且在支气管肺泡灌洗液(bal)、哮喘患者的血液和呼出气冷凝物以及慢性阻塞性肺病(copd)中发现了高水平的腺苷。
a3ar与炎症过程有关，在促炎或抗炎反应中起重要作用，严格依赖于所涉及的不同细胞类型。(salvatore.c.a.etal.disruptionofthea3adenosinereceptorgeneinmiceanditseffectonstimulatedinflammatorycells.j.biol.chem.2000.275.4429-4434)。
特别地，肥大细胞激活中a3ar功能作用的最有力证据来自于使用基因敲除小鼠，其中在不存在或存在过敏原时肥大细胞脱粒似乎依赖于腺苷受体激活。(zhong,h.；etal,activationofmurinelungmastcellsbytheadenosinea3receptor.j.immunol.2003,171,338-345)。
在a3ar缺陷小鼠中气道高反应性减弱，因此用选择性a3ar拮抗剂治疗的小鼠显示出肺部炎症明显减弱，嗜酸性粒细胞向气道的浸润减少，以及气道粘液产生减少。(young,h.w.etal,a3adenosinereceptorsignallingcontributestoairwayinflammationandmucusproductioninadenosinedeaminase-deficientmice.j.immunol.2004,173,1380-1389)。
这些数据表明了腺苷a3受体的拮抗剂在与其中炎症是一个重要特征的肺病相关的病症中的潜在用途。
腺苷a3受体在眼病中的作用
已经报道，调节腺苷a3受体作为用于治疗各种眼病比如干眼症、青光眼或葡萄膜炎的潜在治疗靶点(y.zhong,etal.,adenosine,adenosinereceptorsandglaucoma:anupdatedoverview,biochim.biophys.acta,2013)。
早期研究表明，小鼠中腺苷a3受体的缺失显示眼内压降低，这表明a3ar拮抗剂可能代表了青光眼的新疗法。(yang,h.etal,thecross-speciesadenosine-receptorantagonistmrs1292inhibitsadenosine-triggeredhumannonpigmentedciliaryepithelialcellfluidreleaseandreducesmouseintraocularpressure.curr.eyeres.2005,30,747-754)。
此外，已发现与正常眼相比，在伴有青光眼的假性剥脱综合征中，未染色的睫状上皮细胞中的a3armrna和蛋白质持续增加。(schlotzer-schrehardt,u.etal,selectiveupregulationofthea3adenosinereceptorineyeswithpseudoexfoliationsyndromeandglaucoma.invest.ophthalmol.visualsci.2005,46,2023-2034)。
还报道了a3ar在视网膜神经节细胞中的过表达。(zhang,m.；etal,thea3adenosinereceptorattenuatesthecalciumrisetriggeredbynmdareceptorsinretinalganglioncells.neurochem.int.2010,56,35-41)。
通过a3ar介导的抗炎和保护作用促使检查ib-meca在代表具有自身免疫病因的人葡萄膜炎的实验性自身免疫性葡萄膜炎模型中的作用。在该模型中，ib-meca抑制葡萄膜炎的临床和病理表现。(bar-yehuda,s.；etal,inhibitionofexperimentalauto-immuneuveitisbythea3adenosinereceptoragonistcf101.int.j.mol.med.2011,28,727-731)。
腺苷a3受体在肿瘤疾病中的作用
a3ar存在于不同类型的肿瘤细胞中，比如hl60和k562人白血病、淋巴瘤、人胶质母细胞瘤和人前列腺细胞。a3ar参与肿瘤生长和细胞周期调节。(gessi,s.；etal,adenosinereceptorsincoloncarcinomatissuesandcolontumoralcelllines:focusonthea3adenosinesubtype.j.cell.physiol.2007,211,826-836)。
特别地，已经报道了前列腺癌细胞中a3ar的活化减少了pka介导的erk1/2刺激并导致减少癌症。(jajoo,s.；etal,adenosinea3receptorsuppressesprostatecancermetastasisbyinhibitingnadphoxidaseactivity.neoplasia2009,11,1132-1145)。
这些数据表明，a3ar可以代表生物标志物，并且a3ar调节可以用于癌症治疗。
在专利文献中还描述了与腺苷a3受体的调节剂相关的不同应用。例如，us200320387公开了2,4-二取代噻唑的衍生物，其对促炎细胞因子的产生具有抑制特性并且抑制所述腺苷a3受体。
专利申请wo9921555公开了化合物1,3-唑衍生物作为腺苷a3受体的拮抗剂及其作为用于治疗哮喘、过敏和炎症等的预防剂或治疗剂的用途。
文件wo9964418公开了吡啶基芳基-噻唑作为腺苷a3受体的抑制剂及其作为抗炎剂的用途。
专利申请us2012134945公开了腺苷a3受体的拮抗剂在调节黑色素的产生、分泌和/或聚积中的用途，以及治疗比如皮肤色素沉着过度的病症的方法。
专利申请us201190324公开了腺苷a3受体的拮抗剂用于治疗动脉粥样硬化的用途以及这些拮抗剂与其它抗动脉粥样硬化剂的组合。
专利申请us20117113030公开了腺苷a3受体拮抗剂和/或部分激动剂在治疗包括癌症、炎性疾病、哮喘和青光眼等多种疾病中的用途。
此外，一般地，关于青光眼的治疗和眼内压的降低，几篇专利文献公开了不同类型的腺苷a3受体的拮抗剂，例如在wo0003741、wo2008045330和us2012053176中。
现有技术中包含的其他专利文件，比如wo2009052310、wo2008006369、ep1180518、es2360632和es2204262，公开了使用不同类型的腺苷a3受体拮抗剂来治疗诸如神经和心脏缺血、白细胞减少、中性粒细胞减少、类风湿性关节炎、多发性硬化症、胃肠道疾病、呼吸系统疾病比如哮喘和神经系统疾病比如阿尔茨海默病、亨廷顿氏病和帕金森病等病症。
特别地，在专利申请wo2005009969中，提到了文献中公开的许多腺苷a3受体拮抗剂属于类黄酮、1,4-二氢吡啶衍生物、三唑并喹唑啉、噻唑并嘧啶并噻唑并萘胺，并且具有强亲脂性，使得它们难溶于水。该特征阻碍了这些化合物的体内适用性。因此，需要可溶于水的腺苷a3受体的化合物调节剂。
本发明的作者发现了新的1-(5-(噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸衍生物作为a3腺苷受体有效且选择性的调节剂。因此，本专利申请公开了作为有效且选择性的腺苷a3受体调节剂的新型羧酸衍生物。
技术实现要素：
在其一个方面，本发明涉及式(i)的1-(5-(噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸衍生物。
其中:
-r1表示任选被选自卤素原子、c1-c6直链或支链卤代烷基、c1-c6直链或支链烷基，c1-c6直链或支链烷氧基和氰基的1、2或3个取代基取代的苯基或五元或六元杂芳基，
本发明的其他方面是：
a)其药学上可接受的盐，
b)包含有效量的所述化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，
c)所述化合物在制造用于治疗选自动脉粥样硬化、哮喘、前列腺癌、急性肾衰竭、类风湿性关节炎、牛皮癣、免疫性血小板减少症、克罗恩病、结肠炎、肠易激综合征、青光眼、干眼症、葡萄膜炎和神经性疼痛的疾病的药物中的用途，所述疾病可通过调节腺苷a3受体来改善。
d)可通过调节腺苷a3受体而改善的心血管疾病例如动脉粥样硬化、哮喘、前列腺癌、急性肾衰竭、类风湿性关节炎、牛皮癣、免疫性血小板减少症、克罗恩病、结肠炎、肠易激综合征、青光眼、干眼综合征、葡萄膜炎和神经性疼痛的治疗方法，其包括将本发明化合物施用至需要治疗的对象的步骤，和
e)包括根据本发明的式(i)化合物和其他治疗剂的组合，其中所述治疗剂选自用于治疗动脉粥样硬化、哮喘、前列腺癌、急性肾衰竭、类风湿性关节炎、牛皮癣、免疫性血小板减少症、克罗恩病、结肠炎、肠易激综合征、青光眼、干眼症、葡萄膜炎和神经性疼痛的药剂。治疗剂选自3-羟基-3-甲基-戊二酰-coa还原酶(hmg-coa还原酶)的抑制剂——也称为他汀类，其包括阿托伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀，白三烯受体拮抗剂比如孟鲁司特，促性腺激素释放激素(gnrh)激动剂比如比卡鲁胺，抗雄激素药物比如氟他胺，janus-激酶1和3(jak1和3)酶的抑制剂，比如托法替尼，利尿剂比如氢氯噻嗪和肠液分泌激活剂如鲁比前列酮。优选地，另外的治疗剂选自阿托伐他汀、罗苏伐他汀、辛伐他汀、孟鲁司特、比卡鲁胺、氟他胺、托法替尼、氢氯噻嗪和鲁比前列酮。
如本专利申请中所使用，术语c1-c6烷基用于设计具有1至6个碳原子的任选取代的直链或支链(cnh2n+1)烃基。在本发明的实施方式中，烷基优选含有1-4个碳原子。实例包括以下基团：甲基、乙基、正丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、异戊基、1-乙基丙基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、正己基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-甲基戊基和异己基。
如本专利申请中所使用，术语c1-c6烷氧基用于设计具有1至6个碳原子的任选取代的直链或支链的含有与氧原子连接的c1-c6烷基的基团(c2h2n+1-o-)。在本发明的实施方式中，烷氧基优选含有1-4个碳原子。优选的烷氧基是：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、羟甲氧基、2-羟基乙氧基或2-羟基丙氧基。
如本文所使用，术语杂芳基用于设计具有一个、两个或三个选自o、s和n的杂原子的五元或六元环。本发明中的杂芳基可任选被取代。在本发明的实施方式中，优选的杂芳基是噻吩基、呋喃基、吡啶基和噻唑基。当杂芳基具有两个或更多个取代基时，它们可以相同或不同。其它优选的任选取代的杂芳基，包括吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、噁二唑基、噁唑基、咪唑基、1,3-噻唑基、噻二唑基和吡唑基。
如本文所用，术语c1-c6卤代烷基是附连至1、2或3个卤素原子例如氯、氟、溴或碘的如上定义的烷基。优选的卤素原子是氯和氟。
如本文所使用，存在于本发明的一般结构中的一些原子、基团、链或环是“任选取代的”。这意味着这些原子、基团、链或环可以是未取代的或在任何位置被一个或多个例如1、2、3或4个取代基取代，由此与未取代的原子、基团、链或环结合的氢原子被卤素原子、c3-c12环烷基、羟基、直链或支链c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、氨基、单或二烷基氨基、c1-c6烷氧基烷基、羟基羰基和c2-c6烷氧基羰基取代。当存在两个或多个取代基时，每个取代基可以相同或不同。
如本文所使用，术语药学上可接受的盐包括与药学上可接受的酸或碱的盐。药学上可接受的酸包括无机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸、氢碘酸和硝酸，以及有机酸，例如柠檬酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、抗坏血酸、草酸、琥珀酸、酒石酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。药学上可接受的碱包括碱金属(例如钠或钾)和碱土金属(例如钙或镁)氢氧化物和有机碱，例如烷基胺/芳基烷基胺和杂环胺。
根据本发明的其它优选的盐是季铵化合物，其中阴离子(x-)与n原子正电荷等价。x-可以是各种无机酸的阴离子，例如氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根，或有机酸的阴离子，例如乙酸根、马来酸根、富马酸根、柠檬酸根、草酸根、琥珀酸根、酒石酸根、苹果酸根、扁桃酸根、三氟乙酸根、甲磺酸根和对甲苯磺酸根。x-优选为选自氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、乙酸根、马来酸根、草酸根、琥珀酸根或三氟乙酸根的阴离子。更优选x-是氯离子、溴离子、三氟乙酸根或甲磺酸根。
根据本发明在式(i)化合物中的一个实施方式，r1表示任选被选自卤原子、直链或支链c1-c6卤代烷基、直链或支链c1-c6烷基、直链或支链c1-c6烷氧基和氰基的1、2或3个取代基任选取代的五元或六元杂芳基。在本发明的优选实施方式中，r1表示被选自卤原子、直链或支链c1-c6烷基、直链或支链c1-c6烷氧基和氰基的1、2或3个取代基任选取代的选自噻吩基、呋喃基、吡啶基和噻唑基的基团。在本发明的优选实施方式中，r1表示被选自卤素原子和直链或支链c1-c6烷氧基的1、2或3个取代基任选取代的噻吩基。
根据本发明在式(i)化合物中的一个实施方式，r1表示被选自卤素原子、直链或支链c1-c6卤代烷基、直链或支链c1-c6烷基、直链或支链c1-c6烷氧基和氰基的1、2或3个取代基任选取代的苯基。在本发明的优选实施方式中，r1表示被选自卤素原子和直链或支链c1-c6烷氧基的1、2或3个取代基任选取代的苯基。
本发明的具体化合物包括：
1-(5-(5-氰基-4-苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(2-甲氧基苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(2-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(3-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((4-(2-氯苯基)-5-氰基噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(吡啶-2-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((5-氰基-4-(吡啶-3-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(呋喃-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(噻吩-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(噻吩-3-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-((4-(4-氯噻吩-2-基)-5-氰基噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1-(5-(5-氰基-4-(噻唑-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
由本发明的式(i)定义的化合物可以通过使用以下描述的步骤合成。
方案1
a)吡啶，40-100℃，5-12h。
根据方案1所显示，式(iii)的2-氨基-4-氰基-1,3-噻唑可以通过使市售的式(ii)的氰基酮与碘和硫脲在40℃至100℃之间的温度下以吡啶作为溶剂反应得到。
在氰基酮是非市售的情况下，它们可以按照方案2中所显示的反应合成。
方案2
b)nah，dmso，0°-25℃，4-8h
非商业氰基酮(ii)可以按照现有技术中已知的方法，在氢化钠存在下，由相应的酯(iv)与乙腈在dmso中的反应合成。随后使用得到的式(ii)衍生物而无需进一步纯化。
方案3
c)cs2co3，dmf，60℃，24-48h；
d)dmso，80℃，8h
2-氨基-4-氰基-1,3-噻唑(iii)与式(v)的市售酯反应，以得到式(vi)的酰胺，当与式(vii)的相应的市售胺比如甲基异哌啶甲酸酯在dmso中在60℃至100℃的温度下，在4至12小时的时间段内反应时其又转化为式(viii)的衍生物。
方案4
e)thf/naoh1m，室温
最后，在室温下，在thf和1m氢氧化钠的混合物中水解式(viii)的衍生物，以得到对应于更具本发明的化合物式(i)的酸。
药理活性
用于重组腺苷受体的人膜购自receptorbiology,inc.(usa)。
a3腺苷受体竞争放射性配体结合试验
通过在25℃下在0.2ml的总体积中将来自转染至cho细胞的人a3受体的膜、[3h]-neca、缓冲液(20mmhepes(ph7.4)、100mmnacl、10mmmgcl2、2单位/ml腺苷脱氨酶)和未标记的配体培养60分钟，进行竞争性测定。r-pia用于确定非特异性结合。在brandel细胞收集器中通过schleicher&schuellgf/52(用0.5％聚乙烯亚胺预浸)过滤。用3×250μl的20mmhepes(ph7.4)、100mmnacl、10mmmgcl2除去未结合的放射性配体。
a2a腺苷受体竞争放射性配体结合试验
通过在25℃下在0.2ml的总体积中将转染至hela细胞的人a2a受体的膜、[3h]-zm241385、缓冲液(tris-hcl50mm(ph＝7.4)、10mmmgcl2、edta1mm和2单位/ml腺苷脱氨酶)和未标记的配体培养60分钟，进行竞争性测定。neca用于确定非特异性结合。在brandel细胞收集器中通过schleicher&schuellgf/52(用0.5％聚乙烯亚胺预浸)过滤。用3×250μl的20mmtris-hcl50mm(ph＝7.4)，10mmmgcl2，edta1mm除去未结合的放射性配体。
a2b腺苷受体竞争放射性配体结合试验
根据fredholm等人(internationalunionofpharmacology.xxv.nomenclatureandclassificationofadenosinereceptors，pharmacolrev.2001dec；53(4):527-52)公开的测定，对人重组来源(hek-293细胞)和作为放射性配体的[3h]dpcpx进行腺苷a2b受体亚型的结合测定。
腺苷a1受体亚型竞争放射性配体结合试验
通过在25℃下在0.2ml的总体积中将来自转染至cho细胞的ha1受体的腺苷受体(receptorbiology，inc.)的人重组膜、作为放射性配体的[3h]dpcpx、缓冲液(hepes20mm(ph＝7,4)、10mmmgcl2、100mmnacl、2u/ml的腺苷脱氨酶)和未标记配体培养90min，进行竞争测定。r-pia用于确定非特异性结合。在brandel细胞收集器中通过schleicher&schuellgf/52(用0.5％聚乙烯亚胺预浸)过滤。用hepes30mm(3×250μl)、nacl(100mm)和mgcl2(10mm)除去未结合的放射性配体。
表1显示了一些示例化合物的腺苷受体中的ki值。
从以上结果可以得出结论，本发明中要求保护的式(i)化合物是有效的和选择性的腺苷a3受体调节剂。
本发明的另一方面涉及根据本发明的式(i)化合物在制备用于治疗易于通过调节a3腺苷受体而改善的病理疾病或病症的药物中的用途。
本发明的化合物可用于治疗或预防已知通过调节a3腺苷受体而改善的疾病，例如心血管疾病如动脉粥样硬化，呼吸系统疾病比如哮喘，癌症疾病如前列腺癌，肾病比如急性肾衰竭，自身免疫性疾病比如关节炎类风湿病，胃肠系统疾病比如克罗恩病，结肠炎或肠易激综合征或眼科疾病或病症比如青光眼、干眼症或葡萄膜炎。
因此，本发明的衍生物及其药学上可接受的盐和包含这些化合物和/或其盐的药物组合物可用于治疗人体疾病的方法中，该方法包括给需要这种治疗的对象施用有效量的本发明的式(i)的2-氨基-1,3-甲唑衍生物或其药学上可接受的盐。
本发明还提供了药物组合物，其至少包括作为活性成分的式(i)的酰胺基噻唑衍生物或其药学上可接受的盐，以及其它治疗剂，药学上可接受的赋形剂比如载体或稀释剂。根据制剂的性质和在施用前是否进一步稀释，活性成分可占组合物的按重量计0.001％至99％，优选0.01％至90％。优选地，组合物以适于口、局部、鼻、直肠、经皮或注射施用的形式制成。
与活性化合物或这种化合物的盐混合形成本发明组合物的药学上可接受的赋形剂本身是公知的，并且所用的实际赋形剂尤其取决于施用组合物的预期方法。
本发明的组合物优选适用于注射和口服施用。在这种情况下，用于口服施用的组合物可以采取片剂、长效片剂、舌下片剂、胶囊、吸入气雾剂、吸入溶液、干粉吸入或液体制剂的形式，例如所有含有本发明化合物的混合物、酏剂、糖浆或悬浮液；这些制剂可以通过本领域已知的方法制备。
可用于制备组合物的稀释剂包括那些与活性成分相容的液体和固体稀释剂，如果需要，还含有着色剂或调味剂。片剂或胶囊可以方便地含有2-500mg活性成分或其等量的盐。
适于口服使用的液体组合物可以是溶液或悬浮液的形式。溶液可以是活性化合物的可溶性盐或其它衍生物以及例如蔗糖的水溶液以形成糖浆。悬浮液可包括本发明的不溶性活性化合物或其药学上可接受的盐以及水和悬浮剂或调味剂。
用于肠胃外注射的组合物可以由可溶性盐制备，其可以被冻干或不冻干，并且可以溶解在无热原的含水介质或其他合适的肠胃外注射液中。
有效剂量通常为每天2-2000mg范围内的活性成分。每日剂量可以每天一次或多次施用，优选1至4次施用。
本发明的另一方面涉及组合产品，其包含根据先前已定义的式(i)化合物和可用于治疗中枢神经系统疾病比如阿尔茨海默病、心血管疾病比如动脉粥样硬化、呼吸道疾病比如哮喘、肾脏疾病比如急性肾衰竭、肿瘤疾病比如前列腺癌、自身免疫性疾病比如类风湿性关节炎或肠胃系统疾病比如肠易激综合症的其他药物。
本发明的另一方面涉及包含根据先前已定义的式(i)化合物和其他药物的组合产品，其中其他药物选自3-羟基-3-甲基-戊二酰-coa还原酶(hmg-coa还原酶)的抑制剂，也称为他汀类药物，其包括阿托伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀，白三烯受体拮抗剂比如孟鲁司特，促性腺激素释放激素(gnrh)激动剂如比卡鲁胺，抗雄激素药物比如氟他胺，janus-激酶1和3(jak1和3)酶的抑制剂比如托法替尼，利尿剂比如氢氯噻嗪和肠液分泌激活剂比如鲁比前列酮。
将通过以下实施例进一步说明本发明，并且它们不以任何方式限制本发明的范围。
实施例
本文使用的本发明的化合物和中间体的合成通过以下实施例(1至52)说明，包括中间体的制备，其不以任何方式限制本发明的范围。
一般内容.试剂、溶剂和起始材料购自商业供应商。浓缩是指使用büchi旋转蒸发器在真空下蒸发。必要时，通过使用指示的溶剂系统的硅胶(40-63μm)上的快速色谱法纯化反应产物。在variangemeni300光谱仪上记录光谱数据。在büchi535仪器上记录熔点。hplc-ms在配备有gilson活塞泵321、gilson864真空脱气机、gilson189注射模块、1/1000分离器、gilson307补充泵、gilson170二极管阵列检测器和thermoquestfenniganaqa检测器的gilson仪器上进行。
中间体1：3-(4-氯噻吩-2-基)-3-氧代-丙腈
向25ml烧瓶中的1.2mldmso的0.5ml(2.83mmol)的4-氯噻吩-2-羧酸甲酯溶液中加入0.22ml(4.24mmol)乙腈。将混合物在0℃下搅拌并加入0.147g(3.68mmol)nah(60％在矿物油中)。将反应在室温下在氮气下搅拌8小时。该中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤(一锅反应)。
使用对于中间体1描述的步骤，使用相应的酯合成以下中间体。
中间体2：3-氧代-3-(噻唑-2-基)丙腈
该中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤(一锅反应)。
中间体3：2-氨基-4-(2-氟苯基)噻唑-5-腈
将1.0g(6.13mmol)的3-(2-氟苯基)-3-氧代丙腈溶于5ml吡啶中，并且加入0.61g(7.97mmol)硫脲和1.56g(6.13mmol)碘。将溶液在90℃下加热6小时。然后将其冷却至室温并倒入50ml冰水中。过滤所得沉淀物，用水洗涤数次，得到1.12g(83.15％)浅棕色固体。
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.26(s,2h),7.64(m,1h),7.54(d,1h),7.32(m,2h)。
hplc-ms:rt2.950,m/z219.4(mh+)。
使用对于中间体3所描述的步骤由相应的乙腈合成以下中间体。
中间体4：2-氨基-4-(3-氟苯基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.28(s,2h),7.77(m,1h),7.64(ddd,1h),7.57(m,1h),7.34(td,1h)。
hplc-ms:rt3.373,m/z220.0(mh+)。
中间体5：2-氨基-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.25(s,2h),7.97(dd,2h),7.36(t,2h)。
hplc-ms:rt3.316,m/z220.0(mh+)。
中间体6：2-氨基-4-苯基噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.39(d,2h),8.09(d,2h)7.55(t,2h),7.47(t,1h)。
hplc-ms:rt3.351m/z202.0(mh+)。
中间体7：2-氨基-4-(2-甲氧基苯基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.12(s,2h),7.44(t,2h),7.15(d,1h),7.02(t,1h),3.82(s,3h)。
hplc-ms:rt3.199,m/z332.0(mh+)。
中间体8：2-氨基-4-(3-甲氧基苯基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.26(s,2h),7.51(ddd,1h),7.45(dd,1h),7.42(d,1h),7.06(ddd,1h),3.80(s,3h)。
hplc-ms:rt3.530,m/z232.0(mh+)。
中间体9：2-氨基-4-(4-甲氧基苯基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.38(d,2h),8.08(d,2h)7.09(d,2h),3.84(s,3h)。
hplc-ms:rt3.894,m/z231.9(mh+)。
中间体10：2-氨基-4-(2-氯苯基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.27(s,1h),7.60(dd,1h),7.52(m,2h),7.45(td,1h)。
hplc-ms:rt3.798,m/z235.9(mh+)。
中间体11：2-氨基-4-(吡啶-2-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.66(d,1h),8.21(s,2h),7.93(m,2h),7.46(m,1h)。
hplc-ms:rt2.909m/z203.0(mh+)。
中间体12：2-氨基-4-(吡啶-3-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.07(d,1h),8.67(dd,1h),8.33(s,2h),8.25(d,1h),7.56(dd,1h)。
hplc-ms:rt2,249,m/z203,0(mh+)。
中间体13：2-氨基-4-(吡啶-4-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.74(d,2h),8.35(s,2h),7.83(d,2h)。
hplc-ms:rt2.224m/z203.0(mh+)。
中间体14：2-氨基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.71(d,1h),8.27(s,2h)8.17(dd,1h),6.97(d,1h),3.91(s,3h)。
hplc-ms:rt2.949,m/z233.0(mh+)。
中间体15：2-氨基-4-(呋喃-2-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.22(s,2h),7.89(d,1h),6.93(d,1h),6.68(dd,1h)。
hplc-ms:rt2.615,m/z192.0(mh+)。
中间体16：2-氨基-4-(噻吩-2-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.29(s,2h),7.78(d,1h),7.74(d,1h),7.21(dd,1h)。
hplc-ms:rt3.141,m/z208.0(mh+)。
中间体17：2-氨基-4-(噻吩-3-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.21(s,2h),8.06(dd,1h),7.70(dd,1h),7.63(dd,1h)。
hplc-ms:rt3.320,m/z208.0(mh+)。
中间体18：2-氨基-4-(4-氯噻吩-2-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.36(s,2h),7.79(d,1h),7.63(d,1h)。
hplc-ms:rt3.639,m/z241.9(mh+)。
中间体19：2-氨基-4-(噻唑-2-基)噻唑-5-腈
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.39(s,2h),8.04(d,1h),7.94(d,1h)。
hplc-ms:rt2.528,m/z209.0(mh+)。
中间体20：6-氯-n-(5-氰基-4-苯基噻唑-2-基)烟酰胺
将0.300g(1.50mmol)2-氨基-4-苯基噻唑-5-腈、0.281g(0.64mmol)6-氯烟酸甲酯和0.583g(1.79mmol)碳酸铯在0.8mldmf中的溶液在60℃下搅拌持续两天。然后，将反应混合物倒入冷水中，在真空下过滤形成的沉淀物。所得固体用水洗涤两次并干燥，以得到0.485g(95.50％)所需的烟酰胺衍生物。
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.84(s,1h),9.10(d,j＝2,5hz,1h),8.50(dd,j＝8.4,2.6hz,1h),8.04(dd,j＝8.2,1.4hz,2h),7.76(d,j＝8.4hz,1h),7.58(m,3h)。
hplc-ms:rt3.173,m/z341.0(mh+)。
使用对于中间体20所描述的步骤由相应的2-氨基噻唑合成以下中间体。
中间体21：6-氯-n-(5-氰基-4-(2-氟苯基)噻唑-2-基)烟酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.92(s,1h),9.09(d,1h),8.50(dd,1h),7.76(m,2h),7.62(m,1h),7.44(m,2h)。
hplc-ms:rt3.297,m/z359.0(mh+)。
中间体22：6-氯-n-(5-氰基-4-(3-氟苯基)噻唑-2-基)烟酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.90(s,1h),9.10(d,1h),8.50(dd,1h),7.90(m,1h),7.79(m,2h),7.66(m,1h),7.43(td,1h)。
hplc-ms:rt3.536,m/z359.0(mh+)。
中间体23：6-氯-n-(5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)烟酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.07(d,1h),8.46(dd,1h),8.08(dd,2h),7.63(d,1h),7.39(t,3h)。
hplc-ms:rt3.495,m/z359.0(mh+)。
中间体24：6-氯-n-(4-(2-氯苯基)-5-氰基噻唑-2-基)烟酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.07(d,1h),8.47(dd,1h),7.60(m,6h)。
hplc-ms:rt3.409,m/z374.9(mh+)。
中间体25：6-氯-n-(5-氰基-4-(2-甲氧基苯基)噻唑-2-基)烟酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.83(s,1h),9.10(s,1h),8.50(d,1h),7.76(d,1h),7.64(m,2h),7.23(d,1h),7.11(t,1h),3.86(s,3h)。
hplc-ms:rt3.193,m/z371.0(mh+)。
中间体26：6-氯-n-(5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基)烟酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.81(s,1h),9.09(dd,1h),8.48(dd,1h),7,70(d,1h),7,63(dd,1h),7,63(m,1h),7,48(t,1h),7,09(dd,1h),3,83(s,3h)。hplc-ms:rt3,488,m/z371,0(mh+)。
中间体27：6-氯-n-(5-氰基-4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.76(s,1h),9.08(s,1h),8.48(d,1h),8.01(d,2h),7.73(d,1h),7.13(d,2h),3.84(s,3h)。
hplc-ms:rt3.481,m/z371.0(mh+)。
中间体28：6-氯-n-(5-氰基-4-(吡啶-2-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.86(s,1h),9.10(d,1h),8.75(m,1h),8.50(dd,1h),8.09(d,1h),8.03(td,1h),7.77(d,1h),7.54(ddd,1h)。
hplc-ms:rt2.990,m/z342.0(mh+)。
中间体29：6-氯-n-(5-氰基-4-(吡啶-3-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.91(s,1h),9.19(d,1h),9.10(d,1h),8.73(dd,1h),8.50(dd,1h),8.36(m,1h),7.77(d,1h),7.64(dd,1h)。
hplc-ms:rt2.963,m/z341.9(mh+)。
中间体30：6-氯-n-(5-氰基-4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.91(s,1h),9.10(d,1h),8.82(d,2h),8.50(dd,1h),7.95(d,2h),7.76(d,1h)。
hplc-ms:rt2.890,m/z342.0(mh+)。
中间体31：6-氯-n-(5-氰基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.07(d,1h),8.82(d,1h),8.46(dd,1h),8.29(dd,1h),7.60(d,1h),6.99(d,1h),3.93(s,3h)。
hplc-ms:rt2.970,m/z372.0(mh+)。
中间体32：6-氯-n-(5-氰基-4-(呋喃-2-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝12.87(s,1h),9.06(d,1h),8.44(d,1h),7.87(s,1h),7.59(d,1h),7.00(d,1h),6.68(dd,1h)。
hplc-ms:rt2.834,m/z331.0(mh+)。
中间体33：6-氯-n-(5-氰基-4-(噻吩-2-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.85(s,1h),9.09(d,1h),8.49(dd,1h),7.91(dd,1h),7.84(dd,1h),7.76(d,1h),7.28(dd,1h)。
hplc-ms:rt3.123,m/z347.0(mh+)。
中间体34：6-氯-n-(5-氰基-4-(噻吩-3-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.05(dd,1h),8.44(ddd,1h),8.11(dd,1h),7.75(dt,1h),7.68(ddd,1h),7.56(dd,1h)。
hplc-ms:rt3.348,m/z347.0(mh+)。
中间体35：6-氯-n-(4-(4-氯噻吩-2-基)5-氰基噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.06(d,1h),8.44(dd,1h),7.74(d,1h),7.66(d,1h),7.58(d,1h)。
hplc-ms:rt3.822,m/z380.9(mh+)。
中间体36：6-氯-n-(5-氰基-4-(噻唑-2-基)噻唑-2-基)吡啶-3-甲酰胺
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.07(d,1h),8.45(dd,1h),8.00(d,1h),7.87(d,1h),7.57(d,1h)。
hplc-ms:rt2.939,m/z348.0(mh+)。
中间体37：1-(5-(5-氰基-(4-苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
向0.51g(1.5mmol)的6-氯-n-(5-氰基-4-苯基噻唑-2-基)烟酰胺在1mldmso中的溶液中加入1.01ml(7.5mmol)哌啶-4-羧酸甲酯并在90℃下搅拌12小时。将反应混合物倒入冷的饱和碳酸氢钠溶液中。过滤形成的沉淀，用水洗涤数次并通过正相色谱法纯化。得到0.454g(67.48％)。
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.86(s,1h),8.19(dd,1h),8.03(d,1h),7.51(m,1h),6.88(d,1h),4.33(d,1h),3.62(s,2h),3.06(t,1h),1.91(d,1h),1.55(dd,1h)。
hplc-ms:rt4.507,m/z448.1(mh+)。
使用对于中间体37所描述的步骤由相应的烟酰胺和哌啶-4-羧酸甲酯合成以下中间体。
中间体38：1-(5-((5-氰基-4-(2-甲氧基苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.25(s,1h),8.89(d,1h),8.20(dd,1h),7.57(dd,1h),7.51(m,1h),7.21(d,1h),7.09(t,1h),6.95(d,1h),4.37(d,2h),3.86(s,3h),3.62(s,3h),3.12(t,2h),2.71(m,1h),1.91(d,2h),1.53(td,2h)。hplc-ms:rt4.410,m/z378.1(mh+)。
中间体39：1-(5-((5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.27(s,1h),8.89(d,1h),8.21(dd,1h),7.62(d,1h),7.57(m,1h),7.50(t,1h),7.12(m,1h),6.96(d,1h),4.37(d,2h),3.83(s,3h),3.62(s,3h),3.12(m,2h),2.71(m,1h),1.92(m,2h),1.54(m,2h)。hplc-ms:rt4.678,m/z478.1(mh+)。
中间体40：1-(5-(5-氰基-4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.24(s,1h),8.88(d,1h),8.20(dd,1h),8.01(d,2h),7.14(d,2h),6.95(d,1h),4.37(d,2h),3.84(s,3h),3.62(s,3h),3.12(t,2h),2.71(m,1h),1.91(d,2h),1.53(dd,2h)。
hplc-ms:rt4.739,m/z478.1(mh+)。
中间体41：1-(5-((5-氰基-4-(2-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.35(s,1h),8.89(d,1h),8.27(s,1h),8.20(dd,1h),7.76(td,1h),7.58(m,2h),7.40(m,3h),6.96(d,1h),4.37(d,j＝13.3hz,2h),3.61(s,3h),3.12(m,2h),2.71(m,1h),1.91(dd,2h),1.53(m,2h)。
hplc-ms:rt4.419,m/z466.1(mh+)。
中间体42：1-(5-((5-氰基-4-(3-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.31(s,1h),8.88(d,1h),8.20(dd,1h),7.89(dd,1h),7.77(m,1h),7.65(m,1h),7.41(td,1h),6.95(d,1h),4.37(d,2h),3.61(s,3h),3.12(m,2h),2.71(m,1h),1.91(dd,2h),1.53(m,2h)。
hplc-ms:rt4.710,m/z466.1(mh+)。
中间体43：1-(5-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.29(s,1h),8.89(d,1h),8.20(dd,1h),8.08(m,2h),7.44(t,2h),6.96(d,1h),4.38(d,2h),3.62(s,3h),3.11(m,2h),2.72(m,1h),1.92(dd,2h),1.54(m,2h)。
hplc-ms:rt4.734,m/z466.1(mh+)。
中间体44：1-(5-((4-(2-氯苯基)-5-氰基噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.33(s,1h),8.88(d,1h),8.20(dd,1h),7.59(d,4h),6.96(d,1h),4.37(d,2h),3.62(s,3h),3.12(m,2h),2.69(d,1h),1.91(dd,2h),1.53(td,2h)。
hplc-ms:rt4.818m/z481.9(mh+)。
中间体45：1-(5-((5-氰基-4-(吡啶-2-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.17(s,1h),8.89(s,1h),8.72(s,1h),8.20(d,1h),8.10(d,1h),8.01(t,1h),7.51(m,1h),6.95(d,1h),4.37(d,2h),3.62(s,3h),3.11(t,2h),2.71(m,1h),1.91(d,2h),1.54(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.924,m/z449.1(mh+)。
中间体46：1-(5-((5-氰基-4-(吡啶-3-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.36(s,1h),9.18(s,1h),8.88(s,1h),8.72(d,1h),8.35(d,1h),8.20(d,1h),7.63(dd,1h),6.95(d,1h),4.37(d,2h),3.62(s,3h),3.12(t,2h),2.71(m,1h),1.91(d,2h),1.53(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.682,m/z449.1(mh+)。
中间体47：1-(5-(5-氰基-4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.34(s,1h),8.88(d,1h),8.80(d,2h),8.20(dd,1h),7.95(d,2h),6.94(d,1h),4.37(d,2h),3.62(s,3h),3.10(t,2h),2.71(m,1h),1.91(d,2h),1.53(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.616,m/z449.1(mh+)。
中间体48：1-(5-(5-氰基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.87(d,1h),8.82(d,1h),8.28(dd,1h),8.19(dd,1h),7.03(d,1h),6.93(d,1h),4.36(d,2h),3.94(s,3h),3.62(s,3h),3.10(t,2h),2.70(m,1h),1.91(d,2h),1.54(dd,2h)。
hplc-ms:rt4.033,m/z479.0(mh+)。
中间体49：1-(5-(5-氰基-4-(呋喃-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.85(d,1h),8.16(dd,1h),7.86(d,1h),7.01(d,1h),6.88(dd,1h),6.70(d,1h),4.33(d,2h),3.62(s,3h),3.07(t,2h),2.67(m,1h),1.89(d,2h),1.54(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.520,m/z438.1(mh+)。
中间体50：1-(5-(5-氰基-4-(噻吩-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.27(s,1h),8.87(d,1h),8.19(dd,1h),7.90(dd,1h),7.81(dd,1h),7.27(dd,1h),6.94(d,1h),4.37(d,2h),3.61(s,3h),3.11(t,2h),2.71(m,1h),1.91(d,2h),1.53(dd,2h)。
hplc-ms:rt4.828m/z453.9(mh+)。
中间体51：1-(5-((5-氰基-4-(噻吩-3-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.29(s,1h),8.89(d,1h),8.24–8.16(m,2h),7.76(m,2h),6.96(d,1h),4.38(d,2h),3.62(s,3h),3.12(m,2h),2.71(dtd,1h),1.91(dd,2h),1.54(m,2h)。
hplc-ms:rt4.548,m/z454.1(mh+)。
中间体52：1-(5-(4-(4-氯噻吩-2-基)-5-氰基噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.28(s,1h),8.87(d,1h),8.19(dd,1h),7.86(d,1h),7.73(d,1h),6.94(d,1h),4.36(d,2h),3.62(s,3h),3.12(t,2h),2.71(m,1h),1.92(d,2h),154(dd,2h)。
hplc-ms:rt4.746,m/z488.0(mh+)。
中间体53：1-(5-(5-氰基-4-(噻唑-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.86(d,1h),8.19(dd,1h),8.05(d,1h),7.93(d,1h),6.89(d,1h),4.34(d,2h),3.62(s,3h),3.08(t,2h),2.69(m,1h),1.91(d,2h),1.55(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.764,m/z355.1(mh+)。
实施例
实施例1：1-(5-(5-氰基-4-苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
将0.08g(0.178mmol)的1-(5-(4-苯基噻唑-2-基氨基甲酰基-5-氰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯溶于1.2mlthf中。向该溶液中加入0.9ml(0.9mmol)1mnaoh。将反应混合物在室温下搅拌直至反应完成。随后，将其用0.1mnaoh(8ml)稀释，并用二氯甲烷(3×10ml)洗涤。将水相用4mhcl酸化至ph3-5，得到浅棕色沉淀，将其过滤并用冷水洗涤，并且随后用戊烷洗涤，得到所需产物0.066g(85％)。
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.28(s,1h),12.28(s,1h),8.89(s,1h),8.21(d,1h),8.03(d,2h),7.58(dd,3h),6.95(d,1h),4.36(d,1h),3.12(t,1h),1.91(d,1h),1.52(dd,1h)。
hplc-ms:rt2.830,m/z434.0(mh+)。
实施例2：1-(5-((5-氰基-4-(2-甲氧基苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.24(s,1h),12.28(s,1h),8.89(d,1h),8.20(dd,1h),7.57(dd,1h),7.51(m,1h),7.21(d,1h),7.10(t,1h),6.95(d,1h),4.36(d,2h),3.86(s,3h),3.12(t,2h),2.57(m,1h),1.90(d,2h),1.51(dd,2h)。hplc-ms:rt2.378,m/z464.1(mh+)。
实施例3：1-(5-((5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.32(s,1h),8.88(d,1h),8.23(m,1h),7.62(dd,1h),7.57(d,1h),7.50(t,1h),7.12(dd,1h),7.02(d,1h),4.36(d,2h),3.83(s,3h),3.16(t,2h),2.60(t,1h),1.91(d,2h),1.54(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.474m/z464.0(mh+)。
实施例4：1-(5-(5-氰基-4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.24(s,1h),12.31(s,1h),8.88(d,1h),8.20(dd,1h),8.01(d,2h),7.14(d,2h),6.95(d,1h),4.36(d,2h),3.84(s,3h),3.11(t,2h),2.58(m,1h),1.90(d,2h),1.51(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.028,m/z364.1(mh+)。
实施例5：1-(5-((5-氰基-4-(2-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.34(s,1h),8.89(d,1h),8.20(dd,1h),7.76(td,1h),7.62(m,1h),7.43(m,2h),6.96(d,1h),4.36(d,2h),3.12(m,2h),2.59(m,1h),1.90(dd,2h),1.51(m,2h)。
hplc-ms:rt2.998,m/z452.1(mh+)。
实施例6：1-(5-((5-氰基-4-(3-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.41(s,1h),8.88(d,1h),8.25(dd,1h),7.89(m,1h),7.78(m,1h),7.65(m,1h),7.41(td,1h),7.07(d,1h),4.36(d,2h),3.19(m,2h),2.62(m,1h),1.92(dd,2h),1.55(m,2h)。
hplc-ms:rt3.209,m/z452.1(mh+)。
实施例7：1-(5-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.41(s,1h),8.88(d,1h),8.25(dd,1h),8.08(m,2h),7.44(t,2h),7.08(d,1h),4.36(d,2h),3.19(t,2h),2.62(m,1h),1.92(dd,2h),1.55(m,2h)。
hplc-ms:rt3.221,m/z452.1(mh+)。
实施例8：1-(5-((4-(2-氯苯基)-5-氰基噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.33(s,1h),12.30(s,1h),8.88(d,1h),8.20(dd,1h),7.66(m,2h),7.55(d,2h),6.96(d,1h),4.36(d,2h),3.12(t,2h),2.59(d,1h),1.90(d,2h),1.51(m,2h)。
hplc-ms:rt2.755；m/z469.1(mh+)。
实施例9：1-(5-((5-氰基-4-(吡啶-2-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.31(s,1h),12.34(s,1h),8.89(s,1h),8.74(d,1h),8.20(d,1h),8.10(d,1h),8.02(m,1h),7.53(s,1h),6.96(d,1h),4.37(d,2h),3.11(t,2h),2.62(m,1h),1.90(d,2h),1.51(dd,2h)。
hplc-ms:rt2.657,m/z435.1(mh+)。
实施例10：1-(5-((5-氰基-4-(吡啶-3-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.35(s,1h),12.31(s,1h),9.18(s,1h),8.88(s,1h),8.72(d,1h),8.35(d,1h),8.20(d,1h),7.63(dd,1h),6.95(d,1h),4.36(d,2h),3.11(t,2h),2.59(m,1h),1.90(d,2h),1.51(dd,2h)。
hplc-ms:rt2,648,m/z435,0(mh+)。
实施例11：1-(5-(5-氰基-4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.36(s,1h),12.29(s,1h),8,88(s,1h),8,81(d,1h),8,19(d,1h),7,94(d,1h),6,94(d,1h),4,36(d,2h),3,12(t,2h),2,58(m,1h),1,90(d,2h),1,52(dd,2h)。
hplc-ms:rt2,556,m/z435,1(mh+)。
实施例12：1-(5-(5-氰基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.27(s,1h),12.28(s,1h),8.83(d,1h),8.82(d,1h),8.27(dd,1h),8.19(dd,1h),7.04(d,1h),6.99(d,1h),4.36(d,2h),3.94(s,3h),3.12(t,2h),2.57(m,1h),1.90(d,2h),1.52(dd,2h)。
hplc-ms:rt2.705,m/z465.1(mh+)。
实施例13：1-(5-(5-氰基-4-(呋喃-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.30(s,1h),12.28(s,1h),8.88(d,1h),8.19(dd,1h),7.98(s,1h),7.09(d,1h),6.94(d,1h),6.74(d,1h),4.36(d,2h),3.12(t,2h),2.59(m,1h),1.90(d,2h),1.52(dd,2h)。
hplc-ms:rt2.277,m/z424.0(mh+)。
实施例14：1-(5-(5-氰基-4-(噻吩-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.27(s,1h),12.28(s,1h),8.88(d,1h),8.20(dd,1h),7.91(dd,1h),7.82(dd,1h),7.28(dd,1h),6.94(d,2h),4.36(d,2h),3.12(t,2h),2.57(m,1h),1.90(d,2h),1.52(dd,2h)。
hplc-ms:rt2.483,m/z440.0(mh+)。
实施例15：1-(5-(5-氰基-4-(噻吩-3-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.40(s,1h),8.87(d,1h),8.25(dd,1h),8.21(dd,1h),7.77(m,2h),7.09(d,1h),4.36(d,2h),3.19(ddd,2h),2.63(m,1h),1.92(dd,2h),1.56(m,2h)。
hplc-ms:rt3.043,m/z440.0(mh+)。
实施例16：1-(5-((4-(4-氯噻吩-2-基)-5-氰基噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.29(s,1h),12.27(s,1h),8.87(s,1h),8.18(d,1h),7.86(s,1h),7.73(s,1h),6.93(d,1h),4.36(d,2h),3.12(t,2h),2.59(m,1h),1.90(d,2h),1.52(dd,2h)。
hplc-ms:rt3.221,m/z474.0(mh+)。
实施例17：1-(5-(5-氰基-4-(噻唑-2-基)噻唑-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸
1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝13.36(s,1h),12.28(s,1h),8.89(d,1h),8.20(dd,1h),8.12(d,1h),8.02(d,1h),6.95(d,1h),4.36(d,2h),3.12(t,2h),2.59(m,1h),1.90(d,2h),1.52(dd,2h)。
hplc-ms：rt2.474,m/z441.0(mh+)。