一种半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法与流程

本发明涉及假脯氨酸二肽的合成方法，特别涉及一种半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法。

背景技术：

半胱氨酸假脯氨酸二肽（fmoc-x-cys[psi(me,me)pro]-oh）结构式为：

假脯氨酸二肽可以用作ser，thr，和cys的可逆保护基，并且因此在化学中是万能工具。传统方法（参考专利公开号cn101472939a）由二肽fmoc-x-cys-oh(x:gly,phe,val,ile,leu,pro,ala,met等其它氨基酸)直接环化获得fmoc-x-cys[psi(me,me)pro]-oh，该文献方法在实际合成过程中存在以下几个技术问题：

1.在合成二肽fmoc-x-cys-oh过程中，二肽的收率较低，纯度不易提高;

2.在成环反应过程中反应不完全，导致后处理步骤非常繁琐;

3.在合成不同的fmoc-x-cys[psi(me,me)pro]-oh时，需要合成不同的相对应

二肽fmoc-x-cys-oh，导致生产周期冗长，成本高。

综合以上因素，开发一种新的半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法显得意义重大。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法，主要解决上面述及的几个技术问题。

本发明的思路为：1)先合成一个通用的中间体cys[psi(me,me)pro]-oh；2）用不同的fmoc-x-f(x:gly,phe,val,ile,leu,pro,ala,met等其它氨基酸）与中间体cys[psi(me,me)pro]-oh缩合得到目标产物。不仅仅解决现有合成方法收率低，提纯繁琐且不易，以及后处理麻烦的技术问题；更解决了在合成不同fmoc-x-cys[psi(me,me)pro]-oh时，（x:gly,phe,val,ile,leu,pro,ala,met等其它氨基酸）需要重复生产工艺去合成不同的fmoc-x-cys-oh的麻烦，使得生产更加高效简便。

本发明的技术方案为：一种半胱氨酸假脯氨酸二肽的合成方法，包括以下步骤：

第一步：h-cys-oh.hcl在丙酮中，加入2,2-二甲氧基丙烷，回流制得公用中间体cys[psi(me,me)pro]-oh；

第二步：fmoc-x-oh和dast在thf的溶液中反应制得fmoc-x-f；

第三步：将cys[psi(me,me)pro]-oh和fmoc-x-f在dmf中加入有机碱进行缩合，处理得到最终产品fmoc-x-cys[psi(me,me)pro]-oh；x选自gly、phe、val、ile、leu、pro、ala或met中的一种。

所述第三步反应中，用到的有机碱选自diea、三乙胺或n-甲基吗啡啉中的一种。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义：

h-cys-oh.hcl:半胱氨酸盐酸盐

fmoc-gly-oh:n-芴甲氧羰基-甘氨酸

dast:二乙胺基三氟化硫

thf：四氢呋喃

diea：n,n-二异丙基乙胺

dmf：n，n-二甲基甲酰胺

x:gly,phe,val,ile,leu,pro,ala,met等其它氨基酸

本发明的有益效果：本发明与已公开的cn101472939a相比而言，具有以下技术进步：反应步骤由原来的5步反应减少为3步，简化了反应步骤，对于收率的提高有显著的效果。三步反应都能通过结晶得到固体，使得最终的产品纯度有了保证，不需要通过层析柱或者纯化。后处理都是浓缩，萃取产品，洗涤，结晶；更为简单方便。cys[psi(me,me)pro]-oh作为公用中间体，无需再生产对应的二肽中间体。总之本次发明减少了反应步骤，简化了后处理程序，通过控制中间体的纯度和得率，从而提高最终产品的得率，达到降低合成难度和合成成本的目的。另外cys[psi(me,me)pro]-oh公用中间体的存在，使得不同的半胱氨酸假脯氨酸二肽的生产过程更加方便，不同的产品只需要两步即可。

附图说明

图1为本发明产品核磁氢谱图。

图2为本发明产品质谱图。

具体实施方式

实施例1：

步骤1合成路线：

5l三口瓶中，加入cys-oh.hcl94.6g(0.6mol),加入2,2-二甲氧基丙烷624g(6.0mol)，加入3.5l丙酮搅拌,加热回流1hr,冷却至室温，抽滤，滤饼用丙酮洗涤2次，

烘干得cys[psi(me,me)pro]-oh84.1g。（理论得96.6g），得率87.0%，hplc纯度96.8%。

步骤二合成路线：

2l三口瓶中，加入fmoc-gly-oh59g(0.2mol)加入800mlthf搅拌溶清，降温到

0℃下加入dast40.7g（0.24mol），15min加完，升至室温反应1hr，倒入800ml冰水中，用乙酸乙酯萃取产品，有机相用水洗涤2次，盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，

滤液脱溶至有固体析出，过滤，烘干得fmoc-gly-f49.7g。（理论得59g），得率84.1%，hplc纯度97.08%。

步骤三合成路线：

1l三口瓶中，加入cys[psi(me,me)pro]-oh18.8g(0.1mol)，用132mldmf搅拌,

降温到-5℃，加入diea25.85g(0.2mol)搅拌均匀，降温到-5℃，加入fmoc-gly-f

29.8g（0.1mol）的dmf溶液132ml,加完后，室温反应4hr；倒入1.05l冰水中，加入400ml乙酸乙酯，用柠檬酸调节ph-2萃取产品，分层，有机相用水洗涤2次，盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥。过滤，脱溶至小体积，加入适量p.e结晶，过滤，烘干得fmoc-gly-cys[psi(me,me)pro]-oh）32.2g。（理论得44.0g），得率73.2%，hplc纯度97.11%。

产品经过核磁和mass检测，参照图1、图2，验证正确。

实施例2：

步骤二中的fmoc-gly-oh也可以拓展为其他fmoc保护的氨基酸，进行同样的反应。

gly可以取代为phe,val,ile,leu,pro,ala,met等其它氨基酸；其余参照实施例1。

实施例3：

步骤三中所用的有机碱diea可以用三乙胺替代，进行反应得到最终产品fmoc-gly-cys[psi(me,me)pro]-oh）；其余参照实施例1。

实施例4：步骤三中所用的有机碱diea可以用n-甲基吗啡啉替代，进行反应得到最终产品fmoc-gly-cys[psi(me,me)pro]-oh）；其余参照实施例1。